專利名稱：定量檢測(cè)肌氨酸的肌氨酸氧化酶方法及檢測(cè)試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種定量檢測(cè)肌氨酸的肌氨酸氧化酶方法及檢測(cè)試劑盒。
背景技術(shù)：
目前用于檢測(cè)肌氨酸的方法主要有液相色譜或氣象色譜與質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)法、肌氨酸氧化酶熒光檢測(cè)法、毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)法、肌氨酸氧化酶分光光度檢測(cè)法。色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)法雖然檢測(cè)靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度均較高，但由于色譜-質(zhì)譜設(shè)備昂貴，檢測(cè)成本較高，檢測(cè)速度慢，很難大批量檢測(cè)，且操作復(fù)雜一般人很難掌握。因此，常應(yīng)用于科研，很難應(yīng)用臨床大樣本量診斷檢測(cè)。 肌氨酸氧化酶熒光檢測(cè)法、毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)法其檢測(cè)靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度略低于色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)法，但也可滿足臨床的需求。此兩種方法的檢測(cè)成本較色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)法已大大降低，但在檢測(cè)時(shí)仍需購(gòu)置專門的檢測(cè)裝置，如熒光檢測(cè)器、毛細(xì)光電泳儀等專門設(shè)備。并且人工操作的部分很高，對(duì)應(yīng)用于常規(guī)臨床檢測(cè)來講仍有一定的難度。肌氨酸氧化酶分光光度檢測(cè)法，其檢測(cè)成本低、可應(yīng)用于目前任何一種全自動(dòng)生化分析儀，可應(yīng)用于臨床高速大樣本量的檢測(cè)需要。但由于以往的色原靈敏度低，造成該方法的靈敏度很難滿足臨床的需求。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種成本低、靈敏度高的定量檢測(cè)肌氨酸的肌氨酸氧化酶方法，本發(fā)明的另一目的是提供一種肌氨酸檢測(cè)試劑盒。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明定量檢測(cè)肌氨酸的肌氨酸氧化酶方法，具體為D肌氨酸+Η2θ+θ2議乂化》^甘氨酸+甲酸+H2O2;2)Η202+4-氨基安替比林+色原——— 醌亞胺類有色物質(zhì)+H2O;反應(yīng)結(jié)束后有醌亞胺類有色物質(zhì)生成造成吸光度的變化，并且該吸光度的變化與肌氨酸的濃度成正比，以檢測(cè)得到的樣本吸光度值與校準(zhǔn)曲線對(duì)比，得到相應(yīng)的樣本濃度數(shù)值；其中，一試劑Rl濃度為緩沖液50-100mmol/L，4-氨基安替比林2-4mmol/L，過氧化物酶>20KU/L ;二試劑R2濃度為緩沖液50-1OOmmoI/L，色原3-5mmol/L，肌氨酸氧化酶5-10KU/L ;R1/R2試劑比例為3/1-4/1，肌氨酸樣本與總體試劑量的比例為1/25 1/20。進(jìn)一步，所述緩沖液包括Tris-HCL緩沖液、磷酸鹽緩沖液或N-三羥基代甲基-3-氨基丙磺酸緩沖液，緩沖液PH值為7. (T9. O。進(jìn)一步，所述色原包括N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3_甲基苯胺鈉鹽(TOOS)或N，N-雙(4-磺丁基)-3-甲基苯胺二鈉鹽(TODB)或N- (2-羥基-3-磺丙基)-3’ 5- 二甲氧基苯胺鈉鹽(HDAOS)。進(jìn)一步，不同所述色原所采用的檢測(cè)主波長(zhǎng)不同，副波長(zhǎng)均使用相同的700nm波長(zhǎng)。進(jìn)一步，所述TOOS所采用的檢測(cè)主波長(zhǎng)為550-570nm，所述TODB所采用的檢測(cè)主波長(zhǎng)為530-540nm，所述HDAOS所采用的檢測(cè)主波長(zhǎng)為580_590nm。進(jìn)一步，所述步驟I)、2)反應(yīng)溫度為3(T40°C，反應(yīng)時(shí)間控制在8-10分鐘，吸光度監(jiān)測(cè)點(diǎn)控制在加入R2試劑后3(Γ66秒開始監(jiān)測(cè)反應(yīng)吸光度值直至反應(yīng)結(jié)束。一種用于實(shí)施上述非診斷性方法的肌氨酸檢測(cè)試劑盒，包括的試劑及其濃度為一試劑 Rl 緩沖液50_100mmol/L ；4-氨基安替比林2_4mmol/L ;
過氧化物酶>20KU/L;二試劑 R2 緩沖液50-1OOmmo I/L ；色原3_5mmol/L ；肌氨酸氧化酶5-10KU/L。進(jìn)一步，所述緩沖液包括Tr i s-HCL緩沖液、磷酸鹽緩沖液或N-三羥基代甲基-3-氨基丙磺酸緩沖液，緩沖液PH值為7. (T9. O。進(jìn)一步，所述色原包括N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3_甲基苯胺鈉鹽(TOOS)或N，N-雙(4-磺丁基)-3-甲基苯胺二鈉鹽(TODB)或N- (2-羥基-3-磺丙基)-3’ 5- 二甲氧基苯胺鈉鹽(HDAOS)。本方法在原有肌氨酸氧化酶分光光度檢測(cè)法的基礎(chǔ)上，著重改善原有方法靈敏度不足以滿足臨床檢測(cè)的缺點(diǎn)，使得本檢測(cè)方法既保留了以往分光光度檢測(cè)法成本低、可在全自動(dòng)生化儀上使用的優(yōu)點(diǎn)外，也改善其檢測(cè)靈敏度低的缺點(diǎn)，使目前的檢測(cè)靈敏度提升到10tl0_6mol/L，已能滿足臨床檢測(cè)的需求(目前研究表明正常人肌氨酸水平10_6mol/L水平)。


圖I為實(shí)施例I中的校準(zhǔn)曲線；圖2為實(shí)施例I中的樣本反應(yīng)曲線；圖3為實(shí)施例2中的校準(zhǔn)曲線；圖4為實(shí)施例3中的樣本反應(yīng)曲線。
具體實(shí)施例方式下面，參考附圖，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更全面的說明，附圖中示出了本發(fā)明的示例性實(shí)施例。然而，本發(fā)明可以體現(xiàn)為多種不同形式，并不應(yīng)理解為局限于這里敘述的示例性實(shí)施例。而是，提供這些實(shí)施例，從而使本發(fā)明全面和完整，并將本發(fā)明的范圍完全地傳達(dá)給本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員。檢測(cè)原理
肌氨酸+H20+02 ■g—- 甘氨酸+甲酸+H2O2
H202+4-氨基安替比林+色原■■■■■■■■■■ 醌亞胺類有色物質(zhì)+H2O反應(yīng)結(jié)束后有醌亞胺類有色物質(zhì)生成造成吸光度的變化，并且該吸光度的變化與肌氨酸的濃度成正比。反應(yīng)體系中各反應(yīng)物質(zhì)濃度試劑濃度Rl (一試劑)緩沖液50-100mmol/L
4-氨基安替比林2_4mmol/L過氧化物酶>20KU/LR2 (二試劑)緩沖液SOmmoI /I,色原3_5mmol/L肌氨酸氧化酶 5-10KU/L樣本試劑反應(yīng)體積比例R1/R2試劑比例為3/1，樣本與總體試劑量的比例為1/5 1/20。緩沖液反應(yīng)體系用緩沖液可以使Tris-HCL緩沖液、磷酸鹽緩沖液、N-三羥基代甲基-3-氨基丙磺酸緩沖液。緩沖液PH值調(diào)整在7. O 9. O左右。5. 4色原，色原可選用目前的新型色原(N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽(TOOS)或N，N-雙(4-磺丁基)-3-甲基苯胺二鈉鹽(TODB)或N-(2-羥基-3-磺丙基)_3’ 5- 二甲氧基苯胺鈉鹽(HDA0S))。檢測(cè)波長(zhǎng)不同色原所采用的檢測(cè)主波長(zhǎng)不同，副波長(zhǎng)相同均使用700nm波長(zhǎng)，TOOS 550-570nm ；TODB530_540nm ；HDAOS 580_590nm。反應(yīng)溫度最佳反應(yīng)溫度為30 40°C。反應(yīng)時(shí)間與吸光度監(jiān)測(cè)時(shí)間反應(yīng)時(shí)間控制在8-10分鐘，吸光度監(jiān)測(cè)點(diǎn)控制在加入R2試劑后30 66秒開始監(jiān)測(cè)反應(yīng)吸光度值直至反應(yīng)結(jié)束。實(shí)驗(yàn)步驟I、校準(zhǔn)品配置使用肌氨酸純品配制濃度為6. 25umol/L> 12. 5umol/L、25umol/L、50umol/L、100umol/L的溶液最為校準(zhǔn)品溶液。2、空白吸光度值檢測(cè)(AO ):I)吸取純水溶液加入Rl試劑溶液,將兩溶液混勻反應(yīng),開始監(jiān)測(cè)反應(yīng)時(shí)間，反應(yīng)溫度37 °C。2)待上述溶液反應(yīng)3分鐘后，加入R2試劑溶液，將溶液混勻反應(yīng)，繼續(xù)監(jiān)測(cè)反應(yīng)時(shí)間，反應(yīng)溫度37 C。3)待整體反應(yīng)時(shí)間到達(dá)30 66秒后，以不同色原物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)為主波長(zhǎng)，以700nm波長(zhǎng)為副波長(zhǎng)，開始監(jiān)測(cè)吸光度值記為A1=A1 ±-A1 ^繼續(xù)監(jiān)測(cè)反應(yīng)時(shí)間，待整體反應(yīng)結(jié)束后(8-10分鐘)再次監(jiān)測(cè)吸光度值記為A2=A2±-A2ffl。4)吸光度值計(jì)算=Aq=A2-Aiq3、校準(zhǔn)品吸光度值檢測(cè)(Asn):I)吸取校準(zhǔn)品溶液加入Rl試劑溶液，將兩溶液混勻反應(yīng)，開始監(jiān)測(cè)反應(yīng)時(shí)間，反應(yīng)溫度37 °C。2)待上述溶液反應(yīng)3分鐘后，加入R2試劑溶液，將溶液混勻反應(yīng)，繼續(xù)監(jiān)測(cè)反應(yīng)時(shí)間，反應(yīng)溫度37 C。3)待整體反應(yīng)時(shí)間到達(dá)30 66秒后，以不同色原物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)為主波長(zhǎng)，以700nm波長(zhǎng)為副波長(zhǎng)，開始監(jiān)測(cè)吸光度值記為A1=A1 ±-A1 ^繼續(xù)監(jiān)測(cè)反應(yīng)時(shí)間，待整體反應(yīng)結(jié)束后(8-10分鐘)再次監(jiān)測(cè)吸光度值記為A2=A2±-A2ffl。
4)吸光度值計(jì)算=Asn=A2-A1-Ac^4、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制以五個(gè)校準(zhǔn)品溶液的配置濃度為橫坐標(biāo)，以檢測(cè)得到的五個(gè)校準(zhǔn)品溶液的吸光度值(Asn)為縱坐標(biāo)，繪制校準(zhǔn)曲線。5、樣本檢測(cè)I)吸取樣本溶液加入U(xiǎn)lRl試劑溶液，將兩溶液混勻反應(yīng)，開始監(jiān)測(cè)反應(yīng)時(shí)間，反應(yīng)溫度37 °C。2)待上述溶液反應(yīng)3分鐘后，加入R2試劑溶液，將溶液混勻反應(yīng)，繼續(xù)監(jiān)測(cè)反應(yīng)時(shí)間，反應(yīng)溫度37 C。3)待整體反應(yīng)時(shí)間到達(dá)30 66秒后，以不同色原物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)為主波長(zhǎng)，以600nm波長(zhǎng)為副波長(zhǎng)，開始監(jiān)測(cè)吸光度值記為A1=A1 ±-A1 ^繼續(xù)監(jiān)測(cè)反應(yīng)時(shí)間，待整體反應(yīng)結(jié)束后(8-10分鐘)再次監(jiān)測(cè)吸光度值記為A2=A2±-A2ffl。4)吸光度值計(jì)算-A樣本=k2-k「k0O6、樣本濃度計(jì)算以檢測(cè)得到的樣本吸光度值在校準(zhǔn)曲線上查找相應(yīng)的位置，得到相應(yīng)的濃度數(shù)值。本發(fā)明方法特性I)使用了目前較為優(yōu)秀的色原，不同的色原其檢測(cè)靈敏度有著很大的差異，使用高靈敏色原后可以有效的提升檢測(cè)的靈敏度，以滿足臨床檢測(cè)的需求。2)反應(yīng)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的選取，使用規(guī)定時(shí)間檢測(cè)法，選取整個(gè)反應(yīng)中最穩(wěn)定、線性程度最高的一段時(shí)間用于吸光度值的讀取，避免了由于反應(yīng)波動(dòng)造成的誤差，也從一方面提高了檢測(cè)的靈敏度。 3)雙試劑的選用，使用液體雙試劑反應(yīng)體系，可有效的特高試劑的整體穩(wěn)定性，減少試劑之間的非特異反應(yīng)，避免自發(fā)反應(yīng)的出現(xiàn)。4)本發(fā)明只涉及到檢測(cè)肌氨酸水平，并不涉及關(guān)于肌氨酸在疾病診斷中應(yīng)用的問題，因此不涉及疾病的診斷和治療方法。本發(fā)明的有益效果本方法在原有肌氨酸氧化酶分光光度檢測(cè)法的基礎(chǔ)上，著重改善原有方法靈敏度不足以滿足臨床檢測(cè)的缺點(diǎn)。選用目前檢測(cè)靈敏度較高、穩(wěn)定性較好的色原物質(zhì)，使用雙試劑檢測(cè)法，合理分配各反應(yīng)物質(zhì)在整體反應(yīng)體系中的濃度，檢測(cè)吸光度數(shù)據(jù)讀取時(shí)采用固定時(shí)間點(diǎn)讀取法。使檢測(cè)靈敏度較以往分光光度檢測(cè)法大大提升。因此，使得本檢測(cè)方法既保留了以往分光光度檢測(cè)法成本低、可在全自動(dòng)生化儀上使用的優(yōu)點(diǎn)外，也改善其檢測(cè)靈敏度低的缺點(diǎn)，使目前的檢測(cè)靈敏度提升到10_7 10_6mol/L，已能滿足臨床檢測(cè)的需求(目前研究表明正常人肌氨酸水平10_6mol/L水平)。實(shí)施例I :本實(shí)施例試劑盒組成Rl (一試劑)緩沖液SOmmoI /I,4-氨基安替比林2.08mmol/L 過氧化物酶>20KU/LR2 (二試劑)緩沖液SOmmoI /I,TOOS4. Immol/I,肌氨酸氧化酶8KU/L在全自動(dòng)生化儀上設(shè)定反應(yīng)參數(shù)，加樣量8ul，Rl試劑150ul，R2試劑50ul，檢測(cè)主波長(zhǎng)570nm,副波長(zhǎng)700nm。反應(yīng)方向向上正反應(yīng),吸光度讀數(shù)計(jì)算方式，固定時(shí)間法，讀數(shù)點(diǎn) 12 點(diǎn)和 27 點(diǎn)。校準(zhǔn)品濃度 6. 25umol/L、12. 5umol/L、25umol/L、50umol/L、100umol/L，校準(zhǔn)曲線計(jì)算方式LOGISTIC。校準(zhǔn)曲線見圖I。使用上述檢測(cè)試劑檢測(cè)I例尿標(biāo)本，檢測(cè)結(jié)果I. 563umol/L。反應(yīng)曲線見圖2。實(shí)施例2 本施實(shí)施例試劑盒組成Rl (一試齊[J)緩沖液SOmmoI /I,4-氨基安替比林2. 78mmol/L過氧化物酶>20KU/LR2 (二試劑)緩沖液SOmmoI /I,TODB4. Bmmol /I,肌氨酸氧化酶10KU/L在全自動(dòng)生化儀上設(shè)定反應(yīng)參數(shù)，加樣量IOul，Rl試劑150ul，R2試劑50ul，檢測(cè)主波長(zhǎng)540nm,副波長(zhǎng)700nm。反應(yīng)方向向上正反應(yīng),吸光度讀數(shù)計(jì)算方式，固定時(shí)間法，讀數(shù)點(diǎn) 12 點(diǎn)和 27 點(diǎn)。校準(zhǔn)品濃度 6. 25umol/L、12. 5umol/L、25umol/L、50umol/L、100umol/L，校準(zhǔn)曲線計(jì)算方式LOGISTIC。校準(zhǔn)曲線見圖3。實(shí)施例3 本施實(shí)施例實(shí)施例試劑盒組成Rl (一試劑)緩沖液SOmmoI /I,4-氨基安替比林2. 08mmol/L
過氧化物酶>20KU/LR2 (二試劑)緩沖液SOmmoI /I,TOOS4. Immol/I,肌氨酸氧化酶10KU/L在全自動(dòng)生化儀上設(shè)定反應(yīng)參數(shù)，加樣量IOul，Rl試劑150ul，R2試劑50ul，檢測(cè)主波長(zhǎng)570nm,副波長(zhǎng)700nm。反應(yīng)方向向上正反應(yīng),吸光度讀數(shù)計(jì)算方式，固定時(shí)間法，讀數(shù)點(diǎn) 12 點(diǎn)和 27 點(diǎn)。校準(zhǔn)品濃度 6. 25umol/L、12. 5umol/L、25umol/L、50umol/L、100umol/L，校準(zhǔn)曲線計(jì)算方式LOGISTIC。檢測(cè)一例尿標(biāo)本，結(jié)果6.985um/L。反應(yīng)曲線見圖4.
實(shí)施例4:I.試劑成分及濃度Rl (一試劑)緩沖液(Tris-HCl)PH8. O 50-100mmol/L4-氨基安替比林3mmol/L過氧化物酶>20KU/LR2 (二試劑)緩沖液(Tris-HCl)PH8. O 50-100mmol/L色原(TOOS)4mmol/L肌氨酸氧化酶8KU/L其中，(I)TOOS N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽(2)緩沖液的替代品磷酸鹽緩沖液、N-三羥基代甲基-3-氨基丙磺酸緩沖液。緩沖液PH值調(diào)整在7. O 9. O左右。(3)色原的替代品N，N-雙(4-磺丁基)-3_甲基苯胺二鈉鹽(TODB)或N-(2_羥基-3-磺丙基)-3' 5- 二甲氧基苯胺鈉鹽(HDAOS)。2.手工檢測(cè)肌氨酸方法(色原選擇T00S)2. I樣本試劑使用量加入樣本量20ul加入Rl試劑量300ul加入R2試劑量IOOul2. 2實(shí)驗(yàn)步驟2. 2. I將樣本20ul和Rl試劑300ul加入反應(yīng)杯，混勻置于37°C孵育反應(yīng)5分鐘。2. 2. 2將R2試劑IOOul加入反應(yīng)杯中，混勻置于37°C孵育反應(yīng)3分鐘，在主波長(zhǎng)540nm和副波長(zhǎng)700nm下讀取吸光度值為Al主和Al副。2. 2. 3繼續(xù)在37 °C孵育反應(yīng)2分鐘，在主波長(zhǎng)540nm和副波長(zhǎng)700nm下讀取吸光度值為A2王和A2副。計(jì)算Δ A= (A2王-A2副)-Al王-Al )。3.全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)方法(以貝克曼AU5400生化儀為例，色原選擇T00S)，樣本量10ulRl 試劑量150ulR2 試劑量50ul主波長(zhǎng)540nm
副波長(zhǎng)700nm反應(yīng)方向( + )正方向吸光度讀數(shù)計(jì)算方式fixed吸光度讀取點(diǎn)12，27。4.不同色原最大吸收波長(zhǎng)范圍TOOS 550_570nm,TODB 530_540nm,
HDAOS 580_590nm。5.校準(zhǔn)程序5. I校準(zhǔn)品使用肌氨酸純品配制濃度為6. 25umol/L、12. 5umol/L、25umol/L、50umol/L、IOOumoI/L的溶液最為校準(zhǔn)品溶液。5. 2檢測(cè)校準(zhǔn)品，手工法繪制以濃度為橫坐標(biāo)、相應(yīng)吸光度值為縱坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。儀器分析(以以貝克曼AU5400生化儀為例)，校準(zhǔn)方式為5AB，校準(zhǔn)曲線計(jì)算方式選擇LOGISTIC。6.樣本濃度計(jì)算以檢測(cè)得到的樣本吸光度值ΛΑ樣本在校準(zhǔn)曲線上查找相應(yīng)的位置，得到相應(yīng)的濃度數(shù)值。
權(quán)利要求
1.定量檢測(cè)肌氨酸的肌氨酸氧化酶方法，其特征在于，該方法具體為 1)肌氨酸+H20+02-aa8M··__ 甘氨酸 + 甲酸+H2O2; 2)H202+4-氨基安替比林+色原-獲·- 醌亞胺類有色物質(zhì)+H2O; 反應(yīng)結(jié)束后有醌亞胺類有色物質(zhì)生成造成吸光度的變化，并且該吸光度的變化與肌氨酸的濃度成正比，以檢測(cè)得到的樣本吸光度值與校準(zhǔn)曲線對(duì)比，得到相應(yīng)的樣本濃度數(shù)值； 其中，一試劑Rl濃度為緩沖液50-100mmol/L，4-氨基安替比林2-4mmol/L，過氧化物酶>20KU/L ;二試劑R2濃度為緩沖液50-1OOmmoI/L，色原3-5mmol/L，肌氨酸氧化酶5-10KU/L ;R1/R2試劑比例為3/1-4/1，肌氨酸樣本與總體試劑量的比例為1/25 1/20。
2.如權(quán)利要求I所述的非診斷性方法，其特征在于，所述緩沖液包括Tris-HCL緩沖液、磷酸鹽緩沖液或N-三羥基代甲基-3-氨基丙磺酸緩沖液，緩沖液PH值為7. (T9. O。
3.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述色原包括N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽(TOOS)或N，N-雙(4-磺丁基)-3-甲基苯胺二鈉鹽(TODB)或N-(2-羥基-3-磺丙基)_3’ 5- 二甲氧基苯胺鈉鹽(HDAOS)。
4.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，不同所述色原所采用的檢測(cè)主波長(zhǎng)不同，副波長(zhǎng)均使用相同的700nm波長(zhǎng)。
5.如權(quán)利要求4所述的非診斷性方法，其特征在于，所述TOOS所采用的檢測(cè)主波長(zhǎng)為550-570nm,所述TODB所采用的檢測(cè)主波長(zhǎng)為530_540nm，所述HDAOS所采用的檢測(cè)主波長(zhǎng)為 580_590nm。
6.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述步驟1)、2)反應(yīng)溫度為3(T40°C，反應(yīng)時(shí)間控制在8-10分鐘，吸光度監(jiān)測(cè)點(diǎn)控制在加入R2試劑后3(Γ66秒開始監(jiān)測(cè)反應(yīng)吸光度值直至反應(yīng)結(jié)束。
7.一種用于實(shí)施上述方法的肌氨酸檢測(cè)試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括的試劑及其濃度為 一試劑Rl 緩沖液50-1OOmmo I/L ； 4-氨基安替比林 2-4mmol/L; 過氧化物酶>20KU/L ； 二試劑R2 緩沖液50mmol/L ； 色原3_5mmol/L ； 肌氨酸氧化酶 5-10KU/L。
8.如權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述緩沖液包括Tris-HCL緩沖液、磷酸鹽緩沖液或N-三羥基代甲基-3-氨基丙磺酸緩沖液，緩沖液PH值為7. (T9. O。
9.如權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述色原包括N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽(TOOS)或N，N-雙(4-磺丁基)-3-甲基苯胺二鈉鹽(TODB)或N- (2-羥基-3-磺丙基)-3' 5- 二甲氧基苯胺鈉鹽(HDAOS)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種定量檢測(cè)肌氨酸的肌氨酸氧化酶方法及檢測(cè)試劑盒，本發(fā)明在原有肌氨酸氧化酶分光光度檢測(cè)法的基礎(chǔ)上，著重改善原有方法靈敏度不足以滿足臨床檢測(cè)的缺點(diǎn)。選用目前檢測(cè)靈敏度較高、穩(wěn)定性較好的色原物質(zhì)，使用雙試劑檢測(cè)法，合理分配各反應(yīng)物質(zhì)在整體反應(yīng)體系中的濃度，檢測(cè)吸光度數(shù)據(jù)讀取時(shí)采用固定時(shí)間點(diǎn)讀取法。使檢測(cè)靈敏度較以往分光光度檢測(cè)法大大提升。因此，使得本檢測(cè)方法既保留了以往分光光度檢測(cè)法成本低、可在全自動(dòng)生化儀上使用的優(yōu)點(diǎn)外，也改善其檢測(cè)靈敏度低的缺點(diǎn)，使目前的檢測(cè)靈敏度提升到10-7～10-6mol/L，已能滿足臨床檢測(cè)的需求。
文檔編號(hào)C12Q1/28GK102901711SQ20121042988
公開日2013年1月30日 申請(qǐng)日期2012年10月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月31日
發(fā)明者肖飛, 劉明, 王萌, 王大光, 許宏濤, 鄒麗輝, 黃薇 申請(qǐng)人:衛(wèi)生部北京醫(yī)院