專利名稱：胎盤干細胞群的制作方法
胎盤干細胞群本申請是申請日為2006年12月28日、申請號為200680053575. 3、名稱為“胎盤
干細胞群”的發明申請的分案。本申請要求2005年12月29日提交的美國臨時申請號60/754，968的利益；以及2006年12月22日提交的美國臨時申請號60/846，641的利益。
1.發明領域本發明提供了分離的胎盤干細胞，胎盤干細胞群，包含該干細胞的組合物，以及獲得該干細胞的方法。2.
背景技術：
人類干細胞是全能或多能前體細胞，其能產生多種成熟人類細胞系。有證據證明，干細胞可用于恢復許多，如果不是全部的，組織，以及恢復生理和解剖功能。許多不同類型的哺乳動物干細胞已經被表征。參見，例如，Caplan等，美國專利號5，486，359 (人類間充質干細胞)；BoySe等，美國專利號5，004，681 (胎兒和新生兒造血干細胞和祖細胞)；Boyse等，US 5，192，553 (相同的)；Beltrami等，Cell114(6) :763-766(2003)(心臟干細胞);Forbes 等，J. Pathol. 197(4) :510-518(2002)(肝干細胞)。臍帶血和來源于臍帶血的全部有核細胞已被用于移植，以部分或完全地恢復已經進行消融治療(ablative therapy)的患者的造血功能。3.發明概述
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本發明提供了分離的胎盤干細胞，胎盤干細胞群，包含該干細胞的組合物，以及獲得該干細胞的方法。本發明首先提供了分離的干細胞，包含這種干細胞的細胞群，其中該干細胞存在于并可分離自胎盤組織(例如，羊膜、絨毛膜、胎盤小葉等等)。胎盤干細胞顯示干細胞的一種或多種特性(例如，顯示與干細胞相關的標記，在未分化狀態培養時復制至少10-20倍，分化成三個胚層的成熟細胞，等等)，并能附著于組織培養基質(例如，組織培養塑料如組織培養皿或多孔板的表面)。在一實施方案中，本發明提供了一種分離的胎盤干細胞，其是⑶200+或HLA-G+。在特定的實施方案中，所述細胞是CD200+和HLA-G+。在特定的實施方案中，所述細胞是CD73+和⑶105+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34—、⑶38—或⑶45—。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是CD34_、CD38_和CD45_。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34—、⑶38—、⑶45—、⑶73+和⑶105+。在另一特定的實施方案中，當在允許擬胚體形成的條件下培養所述群時，所述干細胞促進包含胎盤干細胞的分離的胎盤細胞群中一種或多種擬胚體的形成。在另一實施方案中，本發明提供了一種分離的胎盤細胞群，其包括，例如，被富集的⑶200+、HLA-G+干細胞。在不同的實施方案中，至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、或者至少95%或以上的所述分離的胎盤細胞是CD200+、HLA-G+干細胞。在上述群體的特定的實施方案中，所述干細胞是CD73+和⑶105+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34—、⑶38—或⑶45—。在更特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34—、⑶38_、⑶45_、⑶73+和⑶105+。在其它的特定實施方案中，所述群體被擴增，例如，傳代至少I次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。在另一特定的實施方案中，當在允許形成擬胚體的條件下培養該群體時，所述群體形成一種或多種擬胚體。在另一實施方案中，本發明提供了一種分離的干細胞，其是⑶73+、⑶105+和CD200+。在特定的實施方案中，所述干細胞是HLA-G+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34-、⑶38-或⑶45'在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34-、⑶38-和⑶45'在更特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_和HLA-G+。在另一特定的實施方案中，當在允許擬胚體形成的條件下培養所述群體時，所述干細胞促進包含干細胞的分離的胎盤細胞群形成一種或多種擬胚體。在另一實施方案中，本發明提供了一種分離的胎盤細胞群，其包括，例如，被富集的CD73+、CD105+、CD200+干細胞。在不同的實施方案中，至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、或者至少95%的所述分離的胎盤細胞是⑶73+、⑶105+、⑶200+干細胞。在所述群體的特定的實施方案中，所述干細胞是HLA-G+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是CD34_、CD38_或CD45_。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34_、⑶38—和⑶45_。在更特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34_、⑶38_、CD45—和HLA-G+。在其它的特定實施方案中，所述群體被擴增，例如，傳代至少I次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。在另一特定的實施方案中，在允許形成擬胚體的條件下培養該群體時，所述群體形成一種或多種擬胚體。本發明還提供了一種分離的干細胞，其是⑶200+和0CT-4+。在特定的實施方案中，干細胞是CD73+和CD105+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是HLA-G+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是CD34_、CD38_或CD45_。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是CD34-、CD38-和CD45-。在更特定的實施方案中，所述干細胞是0)34' 0)38' 0)45' CD73+、CD105+和HLA-G+。在另一 特定的實施方案中，當在允許形成擬胚體的條件下培養所述群體時，所述干細胞促進在包含胎盤干細胞的分離的胎盤細胞群中形成一種或多種擬胚體。在另一實施方案中，本發明提供了一種分離的細胞群，其包括，例如，富集的CD200+、0CT-4+干細胞。在不同的實施方案中，至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、或至少95%的所述分離的胎盤細胞是CD200+、0CT-4+干細胞。在上述群體的特定的實施方案中，所述干細胞是⑶73+和⑶105+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是HLA-G+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是CD34—、⑶38-或⑶45'在更特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+、⑶105+和HLA-G+。在其它的特定實施方案中，所述群體被擴增，例如，已經傳代至少I次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。在另一特定實施方案中，當在允許形成擬胚體的條件下培養該群體時，所述群體形成一種或多種擬胚體。在另一實施方案中，本發明提供了一種分離的干細胞，其是⑶73+和⑶105+，而且當在允許形成擬胚體的條件下培養所述群體時，其促進在包含所述干細胞的分離的胎盤細胞群中形成一種或多種擬胚體。在特定的實施方案中，所述干細胞是CD34_、CD38_或CD45_。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是0CT-4+。在更特定的實施方案中，所述干細胞是0CT_4+、CD34_、CD381P CD45_。本發明進一步提供了一種分離的胎盤細胞群，其包括，例如富集的⑶73+、⑶105+干細胞，其中在允許形成擬胚體的條件下培養所述群體時，形成一種或多種擬胚體。在不同的實施方案中，至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、或至少95%的所述分離的胎盤細胞是⑶73+、⑶105+干細胞。在上述群體的特定的實施方案中，所述干細胞是CD34_、CD38_或CD45_。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是0CT-4+。在更特定的實施方案中，所述干細胞是0CT-4+、⑶34_、⑶38_和⑶45_。在其它的特定實施方案中，所述群體被擴增，例如，已經傳代至少I次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。本發明進一步提供了一種分離的干細胞，其是⑶73+、⑶105+和HLA-G+。在特定的實施方案中，所述干細胞是CD34_、CD38_或CD45_。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是0CT-4+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶200+。在更特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_、0CT-4+和CD200+。在另一特定的實施方案中，當在允許形成擬胚體的條件下培養所述群體時，所述干細胞促進在包含胎盤干細胞的分離的胎盤細胞群中形成一種或多種擬胚體。本發明進一步提供了一種分離的細胞群，其包括，例如，富集的⑶73+、⑶105+和HLA-G+干細胞。在不同的實施方案中，至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、或至少95%的所述分離的胎盤細胞是CD73+、CD105+和HLA-G+干細胞。在上述群 體的特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34_、⑶38_或⑶45_。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是CD34_、CD38_和CD45_。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是0CT-4+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是CD200+。在更特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_、0CT-4+和⑶200+。在另一特定實施方案中，所述群體被擴增，例如，已經傳代至少I次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。在另一特定實施方案中，當在允許形成擬胚體的條件下培養該群體時，所述群體形成擬胚體。本發明進一步提供了一種分離的干細胞，其是0CT-4+，而且當在允許形成擬胚體的條件下培養所述群體時，該細胞促進在包含所述干細胞的分離的胎盤細胞群中形成一種或多種擬胚體。在特定的實施方案中，所述干細胞是CD73+和CD105+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34—、⑶38—或⑶45—。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶200+。在更特定的實施方案中，所述干細胞是⑶73+、⑶105 +、⑶200+、⑶34'⑶38—和⑶45'本發明還提供了一種分離的細胞群，其包括，例如富集的0CT-4+的胎盤干細胞，其中在允許形成擬胚體的條件下培養所述群體時，形成一種或多種擬胚體。在不同的實施方案中，至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、或至少95%的所述分離的胎盤細胞是0CT-4+胎盤干細胞。在上述群體的特定的實施方案中，所述干細胞是CD73 +和CD105 +。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是CD34—、CD38_*CD45_。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是CD200+。在更特定的實施方案中，所述干細胞是⑶73+、⑶105 +、⑶200+、⑶34'⑶38—和⑶45'在另一特定實施方案中，所述群體被擴增，例如，已經傳代至少I次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。本發明進一步提供了一種在此描述的分離的胎盤干細胞群，其根據以下方法生成，包括灌注哺乳動物胎盤，該胎盤已經被排出臍帶血而且被灌注以除去殘余血液；用灌注溶液灌注所述胎盤；收集所述灌注溶液，其中灌注后的所述灌注溶液中含有包括胎盤干細胞的胎盤細胞群；和從所述細胞群分離大量所述胎盤干細胞。在特定的實施方案中，灌注溶液通過臍靜脈和臍動脈，并在它從胎盤流出以后進行收集。在另一特定的實施方案中，灌注溶液通過臍靜脈，并從臍動脈收集，或者通過臍動脈并從臍靜脈收集。本發明進一步提供了一種在此描述的分離的胎盤干細胞群，其根據以下方法生成，包括用組織裂解酶消化胎盤組織以獲得包含胎盤干細胞的胎盤細胞群，并從所述胎盤細胞的剩余物中分離大量胎盤干細胞。在特定的實施方案中，所述胎盤組織是全部胎盤、羊膜、絨毛膜、羊膜 和絨毛膜的組合，或任何上述的組合。在其它的特定實施方案中，組織裂解酶是胰蛋白酶或膠原酶。在更特定的實施方案中，本發明提供了任何上述的分離的干細胞，其中所述干細胞以可檢測地高于骨髓來源的間充質干細胞的水平表達一種或多種基因，其中所述一種或多種基因選自 ACTG2、ADARBl、AMIG02、ARTS-U B4GALT6、BCHE, Cllorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、HLA-G,ICAMU IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP, MATN2、MEST, NFE2L3、NUAKl、PCDH7、PDLIM3, PJP2, RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN和ZC3H12A，而且其中所述骨髓來源的干細胞已經進行了多次傳代培養，以等于所述胎盤干細胞已經進行的傳代數。在AffymetrixGhNLCiUP81陣列上找到相應于這些基因的序列。這些基因也可以下列GenBank登錄號找到NM_001615 (ACTG2)、BC065545 (ADARBI)，(NM_181847 (AMIG02)、AY358590 (ARTS-1)、BC074884 (B4GALT6)、BC008396 (BCHE)、BC020196(Cllorf9)、BC031103 (CD200)、NM_001845 (⑶L4A1)、NM_001846 (C0L4A2)、BC052289(CPA4)、BC094758(DMD)、AF293359(DSC3)、NM_001943(DSG2)、AF338241(EL0VL2)、AY336105 (F2RL1)、NM_018215 (FUJ10781)、AY416799 (GATA6)、BC075798 (GPR126)、NM_016235 (GPRC5B)、AF340038 (ICAMl)、BC000844 (IER3)、BC066339 (IGFBP7)、BC013142 (ILIA)、BT019749 (IL6)、BC007461 (IL18)、BC072017 (KRT18)、BC075839 (KRT8)、BC060825 (LIPG)、BC065240 (LRAP)、BCO10444 (MATN2)、BCO 1 1908 (MEST)、BC068455 (NFE2L3)、NM_014840 (NUAKl)、AB006755 (PCDH7)、NM_014476 (PDLIM3)、BC126199 (PKP-2)、BC090862 (RTNl)、BC002538 (SERPINB9)、BC023312 (ST3GAL6)、BC001201 (ST6GALNAC5)、BC126160 或 BC065328 (SLC12A8)、BC025697 (TCF21)、BC096235 (TGFB2)、BC005046 (VTN)和 BC005001 (ZC3H12A)，自 2006 年 12 月起。在更特定的實施方案中，所述干細胞以可檢測地高于骨髓來源的間充質干細胞的水平表達 ACTG2、ADARB1、AMIG02、ARTS-1、B4GALT6、BCHE、Cl Iorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、HLA-G, ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAKUPCDH7、PDLIM3, PKP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN和 ZC3H12A。在更特定的實施方案中，本發明還提供了上述的任何分離的干細胞群，其中所述干細胞以可檢測地高于骨髓來源的間充質干細胞的水平表達一種或多種基因，其中所述一種或多種基因選自 ACTG2、ADARBl、AMIG02、ARTS-l、B4GALT6、BCHE、Cllorf9、CD200、C0L4Al、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、HLA-G,ICAM1、IER3、IGFBP7、IL1A、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAK1、PCDH7、PDLIM3、PKP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN 和ZC3H12A，其中所述的骨髓來源的干細胞群已經進行多次傳代培養，以等于所述胎盤干細胞進行的傳代數，其中所述的骨髓來源的間充質干細胞群的細胞數等于所述分離的干細胞群的細胞數。在更特定的實施方案中，分離的干細胞群以可檢測地高于骨髓來源的間充質干細胞的水平表達 ACTG2、ADARBl、AMIG02、ARTS-1、B4GALT6、BCHE、Cl Iorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、HLA-G,ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAK1、PCDH7、PDLIM3, PKP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN和 ZC3H12A。在選擇細胞群的方法的更特定的實施方案中，本發明還提供了選擇一種上述的細胞群的方法，包括選擇以可檢測地高于骨髓來源的間充質干細胞的水平表達一種或多種基因的細胞，其中所述的一種或多種基因選自ACTG2、ADARB1、AMIG02、ARTS-1、B4GALT6、BCHE、C11orf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FU10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、HLA-G, ICAM l、IER3、IGFBP7、IL1A5、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP,MATN2、MEST、NFE2L3、NUAKl、PCDH7、PDLIM3, PKP2、RTN1、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN和ZC3H12A，而且其中所述骨髓來源的干細胞已經進行了多次傳代培養，以等于所述胎盤干細胞已經進行的傳代數。在更特定的實施方案中，所述選擇包括選擇以可檢測地高于骨髓來源的間充質干細胞的水平表達ACTG2、ADARBU AMIG02、ARTS-1、B4GALT6、BCHE、Cllorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FLJ1078U GATA6、GPR126、GPRC5B、HLA-G, ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAK1、PCDH7、PDUM3、PKP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN 和 ZC3H12A 的細胞。本發明還提供了包含一種或多種本發明干細胞的組合物，其中所述干細胞已經從胎盤中分離。因此，本發明進一步提供了包含干細胞的組合物，其中所述干細胞是CD200+和HLA-G+。在特定的實施方案中，所述干細胞是⑶73+和⑶105+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34_、⑶38_或⑶45_。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34_、CD38-和CD45'在更特定的實施方案中，所述干細胞是0)34' CD38' CD45' CD73+、CD105+、CD200+ 和 HLA-G+。在另一實施方案中，本發明提供了包含干細胞的組合物，其中所述干細胞是⑶73+、⑶105+和⑶200+。在特定的實施方案中，所述干細胞是HLA-G+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34_、⑶38_或⑶45_。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34_、⑶38-和⑶45'在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34'⑶38'⑶45—和HLA-G+。在另一實施方案中，本發明提供了一種包含干細胞的組合物，其中所述干細胞是⑶200+和0CT-4 +。在特定的實施方案中，所述干細胞是⑶73+和⑶105 +。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是HLA-G+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是CD34_、CD38_或⑶45_。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34' CD38' CD45' CD73+、CD105+和HLA-G+。在另一實施方案中，本發明提供了一種包含干細胞的組合物，該干細胞是⑶73+和CD105+，其中在允許形成擬胚體的條件下，所述干細胞促進在分離的胎盤細胞群中形成擬胚體，該分離的胎盤細胞群包含所述干細胞。在特定的實施方案中，所述干細胞是CD34_、⑶38—或⑶45—。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是0CT-4+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶200+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是0CT-4+、⑶200+、⑶34_、CD38-和 CD45'在另一實施方案中，本發明提供了一種包含干細胞的組合物，該干細胞是⑶73+、⑶105+和HLA-G+。在特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34—、⑶38—或⑶45—。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是0CT-4+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是CD200+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是OCT-4+、CD200+、CD34' CD38-和CD45'在另一實施方案中，本發明提供了一種包含干細胞的組合物，該干細胞是0CT-4 +，其中在允許形成擬胚體的條件下，所述干細胞促進在分離的胎盤細胞群中形成擬胚體，該分離的胎盤細胞群包含所述干細胞。在特定的實施方案中，所述干細胞是CD73+和⑶105 +。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是CD200 +。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是CD73 +、CD105 +、CD200 +、CD34' CD38-和 CD45'在上述組合物的更特定的實施方案中，所述干細胞以可檢測地高于骨髓來源的間充質干細胞的水平表達一種或多種基因，其中所述一種或多種基因選自ACTG2、ADARBUAMIG02、ARTS-1、B4GALT6、BCHE, Cllorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FU10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、HLA-G、ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP`, MATN2、MEST、NFE2L3、NUAKl、PCDH7、PDLIM3, PKP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN 和 ZC3H12A，而且其中所述骨髓來源的干細胞已經進行了多次傳代培養，以等于所述胎盤干細胞已經進行的傳代數。在上述組合物的一個更特定的實施方案中，所述干細胞以可檢測高于分離的骨髓來源的間充質干細胞群的水平表達 ACTG2、ADARBl、AMIG02、ARTS-U B4GALT6、BCHE, Cllorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPRl26、GPRC5B、HLA-G、ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAKl、PCDH7、PDLIM3、PKP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN和ZC3H12A，其中所述的干細胞群和所述的骨髓來源的間充質細胞群具有相等的細胞數。在另一特定的實施方案中，任何上述的組合物包括基質。在更特定的實施方案中，所述基質是三維支架。在另一個更特定的實施方案中，所述基質包括膠原蛋白、明膠、層粘連蛋白、纖粘連蛋白、果膠、鳥氨酸或玻連蛋白。在另一個更特定的實施方案中，所述基質是羊膜或羊膜來源的生物材料。在另一個更特定的實施方案中，所述基質包括胞外膜蛋白。在另一個更特定的實施方案中，所述基質包括合成的化合物。在另一個更特定的實施方案中，所述基質包括生物活性化合物。在另一個更特定的實施方案中，所述的生物活性化合物是生長因子、細胞因子、抗體、或小于5，000道爾頓的有機分子。
在另一實施方案中，本發明進一步提供了一種組合物，其包括任何上述干細胞或任何上述干細胞群調節的培養基。在特定的實施方案中，任何這種組合物包括不來源于胎盤的干細胞。在更特定的實施方案中，所述干細胞是胚胎干細胞。在另一個更特定的實施方案中，所述干細胞是間充質干細胞。在另一個更特定的實施方案中，所述干細胞是骨髓-來源的干細胞。在另一個更特定的實施方案中，所述干細胞是造血祖細胞。在另一個更特定的實施方案中，所述干細胞是體干細胞。在一個更加特定的實施方案中，所述體干細胞是神經干細胞、肝干細胞、胰腺干細胞、內皮干細胞、心臟干細胞或肌肉干細胞。本發明還提供了生產來源于哺乳動物胎盤的干細胞群的方法。在一實施方案中，例如，本發明提供了一種生產細胞群的方法，包括選擇(a)附著于基質，和(b)表達CD200和HLA-G的細胞；和從其它細胞中分離所述的細胞以形成細胞群。在另一實施方案中，本發明提供了一種生產細胞群的方法，包括選擇(a)附著于基質，和(b)表達CD73、CD105和CD200的細胞；和從其它的細胞分離所述的細胞以形成細胞群。在另一實施方案中，本發明提供了一種生產細胞群的方法，包括選擇(a)附著于基質，和(b)表達CD200和0CT-4的細胞；和從其它的細胞分離所述的細胞以形成細胞群。仍然在另一特定的實施方案中，本發明提供了一種生產細胞群的方法，包括選擇(a)附著于基質，(b)表達CD73和CD105，和(c)當在允許形成擬胚體的條件下用胎盤細胞群培養時，促進形成一種或多種擬胚體的細胞；和從其它的細胞中分離所述細胞以形成細胞群。在另一實施方案中，本發明提供了一種生產細胞群的方法，包括選擇(a)附著于基質，和(b)表達CD73、CD105和HLA-G的細胞；和從其它的細胞中分離所述的細胞以形成細胞群。本發明還提供了一種生產細胞群的方法，包括選擇(a)附著于基質，(b)表達0CT-4，和(c)當在允許形成擬胚體的條件下用胎盤細胞群培養時，促進形成一種或多種擬胚體的細胞；和從其它的細胞中分離所述細胞以形成細胞群。在任何上述方法的特定的實施方案中，所述基質包括纖粘連蛋白。在另一特定的實施方案中，該方法包括選擇表達ABC-p的細胞。在另一特定的實施方案中，該方法包括選擇顯示出至少一種特異于間充質干細胞的特性的細胞。在更特定的實施方案中，所述特異于間充質干細胞的特性是表達⑶29、表達⑶44、表達⑶90、或表達上述的組合。在該方法的另一特定的實施方案中，使用抗體完成所述選擇。在另一特定的實施方案中，使用流式細胞儀完成所述選擇。在另一特定的實施方案中，使用磁珠完成所述選擇。在另一特定的實施方案中，所述選擇由熒光激活細胞分類術來完成。在上述方法的另一特定的實施方案中，所述細胞群被擴增。本發明還提供了一種生產干細胞系的方法，包括用編碼生長促進蛋白的DNA序列轉化干細胞；和把所述干細胞暴露于促進所述生長促進蛋白生產的條件下。在特定的實施方案中，所述生長促進蛋白是v-myc、N-myc、c-myc、p53、SV40大T抗原、多瘤大T抗原、Ela腺病毒或人乳頭瘤病毒E7蛋白。在更特定的實施方案中，所述DNA序列是可調控的。在更特定的實施方案中，所述DNA序列是四環素可調控的。在另一特定的實施方案中，所述生長促進蛋白具有可調控活性。在另一特定的實施方案中，所述生長促進蛋白是溫度敏感突變體。本發明進一步提供了低溫貯藏的干細胞群。例如，本發明提供一種⑶200+、HLA-G+干細胞群，其中所述細胞 已經被低溫貯藏，而且其中所述群體被包含在容器中。本發明還提供一種⑶73+、⑶105+、⑶200+干細胞群，其中所述干細胞已經被低溫貯藏，而且其中所述群體被包含在容器中。本發明還提供一種⑶200+、0CT-4+干細胞群，其中所述干細胞已經被低溫貯藏，而且其中所述群體被包含在容器中。本發明還提供了一種⑶73+、⑶105+干細胞群，其中所述細胞已經被低溫貯藏，其中所述群體被包含在容器中，而且當在允許形成擬胚體的條件下，用胎盤細胞群進行培養時，其中所述干細胞促進形成一種或多種擬胚體。本發明進一步提供了一種⑶73+、⑶105+、HLA-G+干細胞群，其中所述細胞已經被低溫貯藏，而且其中所述群體被包含在容器中。本發明還提供了一種0CT-4+干細胞群，其中所述細胞已經被低溫貯藏，其中所述群體被包含在容器中，而且當在允許形成擬胚體的條件下，用胎盤細胞群培養時，其中所述干細胞促進形成一種或多種擬胚體。在任一上述低溫貯藏的群體的特定實施方案中，所述容器是袋子。在不同的特定實施方案中，所述群體包括大約、至少、或最多I X IO6個所述干細胞、5 X IO6個所述干細胞、I X IO7個所述干細胞、5 X IO7個所述干細胞、I X IO8個所述干細胞、5 X IO8個所述干細胞、I X IO9個所述干細胞、5 X IO9個所述干細胞、或I X IOltl個所述干細胞。在任何上述低溫貯藏的群體的其它特定實施方案中，所述干細胞已經傳代大約、至少、或至多5次、至多10次、至多15次或至多20次。在任何上述低溫貯藏的群體的另一特定實施方案中，所述干細胞已經在所述容器中被擴增。3.1 定義如這里使用的，術語“SH2”指結合標記⑶105上的抗原表位的抗體。因此，被稱為SH2+的細胞是CD105+。如這里使用的，術語“SH3”和“SH4”指結合標記CD73上的抗原表位的抗體。因此，被稱為SH3+和/或SH4+的細胞是CD73+。如這里使用的，術語“分離的 干細胞”指基本上與從中獲取該干細胞的組織例如胎盤中的其它的、非干細胞分離的干細胞。干細胞是“分離的”，如果至少50%、60%、70%、80%、90%,95%或至少99%的與該干細胞天然締合的非干細胞，或顯示不同的標記模式的干細胞，被從該干細胞中除去，例如，在收集和/或培養干細胞期間。如這里使用的，術語“分離的細胞群”指基本上與從中獲取該細胞群的組織例如胎盤的其它細胞分離的細胞群。干細胞是“分離的”，如果至少50%、60%、70%、80%、90%、95%或至少99%的與該細胞群、或獲得該細胞群的細胞天然締合的細胞，也即顯示不同的標記模式的干細胞，被從該干細胞中除去，例如，在收集和/或培養干細胞期間。如這里使用的，術語“胎盤干細胞”指來源于哺乳動物胎盤的干細胞或祖細胞，無論其形態，細胞表面標記，或原代培養以后的傳代數。然而，如這里使用的術語“胎盤干細胞”不指滋養層。細胞被認為是“干細胞”，如果該細胞保留干細胞的至少一種特性，例如，與一種或多種干細胞類型相關的標記或基因表達模式；在培養中復制至少10-40次的能力；分化成具有所有3胚層的細胞的能力；缺乏成熟(也即，分化的)細胞特性，等等。術語“胎盤干細胞”和“胎盤來源的干細胞”可以互換使用。如這里使用的，當該標記是高于背景可檢測的時，干細胞對于特定的標記是“陽性的”。例如，胎盤干細胞對于例如CD73是陽性的，因為CD73在胎盤干細胞中是可檢測的，其呈現可檢測地高于背景的量(例如，與同種型對照相比較)。當該標記可用于從至少一種其它的細胞類型中區別該細胞時，或當通過該細胞呈遞或表達時，該標記可用于選擇或分離該細胞時，細胞對于該標記也是陽性的。在例如，抗體介導的檢測的上下文中，“陽性”，作為特定的細胞表面標記存在的指示，是指當使用特異于該標記的抗體，例如熒光標記抗體時，該標記是可檢測的；“陽性”還指細胞其以產生信號的量帶有該標記，例如，在細胞計數器中，該信號可檢測地高于背景。例如，細胞是“CD200+”，其中細胞用特異于CD200的抗體可檢測地標記，而且來自抗體的信號可檢測地高于對照(例如，背景)。相反地，在同樣的上下文中，“陰性”指當使用標記特異性的抗體時，細胞表面標記與背景相比不能檢測到。例如，細胞是“⑶34_”，其中細胞不能用⑶34特異性的抗體可檢測地標記。除非這里另有說明，分化(“⑶”)標記簇使用抗體進行檢測。如果使用RT-PCR，0CT-4是可檢測的，那么認為0CT-4存在，而且細胞是“0CT-4+”。4.附圖簡述

圖1:來自灌注液(A)、羊膜(B)、絨毛膜(C)、羊膜-絨毛膜板⑶或臍帶(E)的胎盤干細胞的活力。X軸上的數字表示從中獲得干細胞的胎盤。圖2:通過FACSCalibur確定的來自灌注液(A)、羊膜⑶、絨毛膜(C)、羊膜-絨毛膜板(D)或臍帶(E)的HLA ABC7⑶457⑶347⑶133+細胞的百分數。X軸上的數字表示從中獲得干細胞的胎盤。圖3:通過FACS Aria確定的來自灌注液(A)、羊膜⑶、絨毛膜(C)、羊膜-絨毛膜板⑶或臍帶(E)的HLA ABC7⑶45_/⑶347⑶133+細胞的百分數。X軸上的數字表示從中獲得干細胞的胎盤。圖4:在來源于胎盤灌注液的干細胞中HLA-G、⑶10、⑶13、⑶33、⑶38、⑶44、⑶90、CD105、CD117、CD200 的表達。圖5:在來源于羊膜的干細胞中 HLA-G、CD10、CD13、CD33、CD38、CD44、CD90、CD105、CD117、CD200 的表達。圖6:在來源于絨 毛膜的干細胞中HLA-G、⑶10、⑶13、⑶33、⑶38、⑶44、⑶90、CD105、CD117、CD200 的表達。圖7:在來源于羊膜-絨毛膜板的干細胞中HLA-G、⑶10、⑶13、⑶33、⑶38、⑶44、CD90、CD105、CD117、CD200 的表達。圖8:在來源于臍帶的干細胞中 HLA-G、CD10、CD13、CD33、CD38、CD44、CD90、CD105、CD117、CD200 的表達。圖9:在來源于灌注液(A)、羊膜(B)、絨毛膜(C)、羊膜-絨毛膜板(D)或臍帶(E)的干細胞中表達的 HLA-G、CD10、CD13、CD33、CD38、CD44、CD90、CD105、CD117、CD200 的平均表達。圖10:本研究中使用的羊膜/絨毛膜(AC)、臍帶(UC)、骨髓來源的干細胞(BM-MSC)和人皮膚成纖維細胞(NHDF)細胞系的培養時間進程。所有的培養物都使用相同的接種和傳代密度進行生長和繁殖。圓圈表示用于RNA分離的培養物。正好在衰老之前收獲晚期培養物。在38次倍增時收獲兩個UC培養物(UC-38)，以比較胰蛋白酶消化對基因表達的作用。所有的其它培養物在RNA分離之前直接在它們的培養瓶中進行裂解。圖11:在羊膜/絨毛膜(AC)、臍帶(UC)、骨髓來源的干細胞(BM-MSC)和人皮膚成纖維(DF)細胞中的8215個基因相對表達水平的線條圖。X軸上標明的與每個細胞系相關的數字表示，在評價基因表達水平之前，細胞系被培養的天數。通過GeneSpring軟件分析的RNA表達數據產生該圖表。AC-03作為選定條件。圖12:顯示在羊膜/絨毛膜(AC)、臍帶(UC)、骨髓來源的干細胞(BM-MSC)和人皮膚成纖維細胞(DF)細胞的AC-03中過表達>6倍的基因的所有基因列表的子集。X軸上標明的與每個細胞系相關的數字表示，在評價基因表達水平之前，細胞系被培養的天數。通過GeneSpring軟件分析的RNA表達數據產生該圖表。AC-03作為選定條件。圖13:通過倍率變化過濾發現羊膜/絨毛膜(AC)、臍帶(UC)、骨髓來源的干細胞(BM-MSC)和人皮膚成纖維細胞(DF)細胞胎盤干細胞特異性或臍帶干細胞特異性基因。X軸上標明的與每個細胞系相關的數字表示，在評價基因表達水平之前，細胞系被培養的天數。通過GeneSpring軟件分析的RNA表達數據產生該圖表。AC-03作為選定條件。5.發明詳述5.1胎盤干細胞和胎盤干細胞群胎盤干細胞是這樣的干細胞，可獲自胎盤或其部分，其附著于組織培養基質并具有分化成非胎盤細胞類型的能力。胎盤干細胞可以是胎兒或母親來源的(也即，可以分別具有胎兒或者母親的基因型)。優選地，本發明的胎盤干細胞和胎盤干細胞群是胎兒來源的。胎盤干細胞群，或包含胎盤干細胞的細胞群，可包括單獨胎兒或母親來源的胎盤干細胞，或者可包括胎兒與母親來源的胎盤干細胞的混合群體。胎盤干細胞，和包括胎盤干細胞的細胞群，可通過下面所述的形態學、標記和培養特性進行鑒定和選擇。

5.1.1物理學和形杰學特征本發明的胎盤干細胞，當在原代培養或細胞培養中培養時，附著于組織培養基質，例如，組織培養容器表面(例如，組織培養塑料)。培養中的胎盤干細胞呈現一般的成纖維樣、星形形態，帶有許多從中央細胞體伸出的細胞質突。但是，胎盤干細胞是與在相同條件下培養的成纖維細胞相比形態學可區分的，因為胎盤干細胞顯示比成纖維細胞更大數量的這種突出。胎盤干細胞也與造血干細胞是形態學可區分的，造血干細胞在培養中一般呈現更圓，或鵝卵石的形態。5.1. 2細朐表面，分子和遺傳標記本發明的胎盤干細胞和胎盤干細胞群表達大量的標記，其可用于鑒定和/或分離干細胞，或包含該干細胞的細胞群。本發明的胎盤干細胞和干細胞群(也即，兩個或更多個胎盤干細胞)，包括直接從胎盤或其任何部分(例如，羊膜、絨毛膜、胎盤子葉等等)獲得的干細胞和包含干細胞的細胞群。胎盤干細胞群也包括培養中的胎盤干細胞群(也即，兩個或更多個)，和容器例如袋子中的群體。但是，胎盤干細胞不是滋養層。本發明的胎盤干細胞一般表達標記CD73、CD105、CD200、HLA-G和/或0CT-4，而不表達CD34、CD38或CD45。胎盤干細胞也可以表達HLA-ABC (MHC-1)和HLA-DR。這些標記可用于鑒定胎盤干細胞，和區別其它的干細胞類型與胎盤干細胞。因為胎盤干細胞能表達⑶73和⑶105，它們具有間充質干細胞樣特性。然而，由于胎盤干細胞能表達CD200和HLA-G，一種胎兒特異性標記，它們可以與間充質干細胞，例如，骨髓來源的間充質干細胞區分開，骨髓來源的間充質干細胞既不表達⑶200也不表達HLA-G。同樣，缺乏⑶34、⑶38和/或CD45的表達可鑒定胎盤干細胞為非造血干細胞。因此，在一實施方案中，本發明提供了分離的干細胞，其是⑶200+或HLA-G+。在特定的實施方案中，所述干細胞是胚胎干細胞。在特定的實施方案中，所述干細胞是CD200+和HLA-G+.在特定的實施方案中，所述干細胞是CD73+和CD105+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34—、⑶38—或⑶45_。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34—、⑶38—和⑶45'在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+和⑶105+。在另一特定的實施方案中，在允許形成擬胚體的條件下，所述CD200+或HLA-G+干細胞促進在包含該干細胞的胎盤細胞群中形成擬胚體。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞與不是干細胞的胎盤細胞分離開。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞與不顯示這些標記的胎盤干細胞分離開。在另一實施方案中，本發明還提供了一種從大量胎盤細胞中選擇胎盤干細胞的方法，包括選擇CD200+或HLA-G+胎盤細胞，其中所述細胞是胎盤干細胞。在特定的實施方案中，所述選擇包括選擇為CD200+與HLA-G+的胎盤細胞。在特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為CD73+與CD105+的胎盤細胞。在另一特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_或⑶45_的胎盤細胞。在另一特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_和⑶45_的胎盤細胞。在另一特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_、⑶45_、⑶73+和⑶105+的胎盤細胞。在另一特定的實施方案中，所述選擇包括選擇在允許形成擬胚體的條件下，促進在包含該干細胞的胎盤細胞群中形成擬胚體的胎盤細胞。在另一實施方案中，本發明提供了一種分離的細胞群包括，例如，富集的⑶200+、HLA-G+干細胞。在特定的實施方案中，所述群是胎盤細胞群。在不同的實施方案中，至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、或至少大約60%的所述細胞是CD200+、HLA-G+干細胞。優選地，至少大約70%的所述細胞是CD200+、HLA-G+干細胞。更優選地，至少大約90%、95%或99%的所述細胞是⑶200+、HLA-G+干細胞。在分離的群的特定的實施方案中，所述干細胞還是CD73+和CD105+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞還是⑶34'⑶38-或⑶45'在更特定的實施方案中，所述干細胞還是⑶34'⑶38'⑶45'CD73+和CD105+。在另一特定實施方案中，當在允許形成擬胚體的條件下培養該群體時，所述分離的群產生一種或多 種擬胚體。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞群與不是干細胞的胎盤細胞分離開。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞群與不顯示這些標記的胎盤干細胞分離開。在另一實施方案中，本發明還提供了一種從大量胎盤細胞中選擇胎盤干細胞群的方法,包括選擇這樣的胎盤細胞群,其中至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、至少大約60%、至少大約70%、至少大約80%、至少大約90%、或至少大約95%的所述細胞是CD200+、HLA-G+干細胞。在特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶73+與⑶105+的干細胞。在另一特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_，⑶38_或⑶45_的干細胞。在另一特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_、⑶45_、⑶73+和⑶105+的干細胞。在另一特定的實施方案中，所述選擇還包括選擇當在允許形成擬胚體的條件下培養時，形成一種或多種擬胚體的胎盤干細胞群。在另一實施方案中，本發明提供了一種分離的干細胞，其是⑶73+、⑶105+和CD200+。在特定的實施方案中，所述分離的干細胞是分離的胎盤干細胞。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是HLA-G+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是CD34_、CD38_或⑶45_。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_。在更特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_和HLA-G+。在另一特定的實施方案中，當在允許形成擬胚體的條件下培養所述群體時，分離的CD73+、CD105+和CD200+干細胞促進在包含該干細胞的胎盤細胞群中形成一種或多種擬胚體。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞與不是干細胞的胎盤細胞分離開。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞與不顯示這些標記的胎盤干細胞分離開。在另一實施方案中，本發明還提供了一種從大量胎盤細胞中選擇胎盤干細胞的方法，包括選擇⑶73+、⑶105+和⑶200+胎盤細胞，其中所述細胞是胎盤干細胞。在特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為HLA-G+的胎盤細胞。在另一特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_或⑶45_的胎盤細胞。在另一特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_和⑶45_的胎盤細胞。在另一特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_、⑶45_和HLA-G+的胎盤細胞。在另一特定的實施方案中，所述選擇另外包括選擇⑶73+、⑶105+和⑶200+的干細胞，且當在允許促進形成擬胚體的條件下培養所述群體時，其促進在胎盤細胞群中形成一種或多種擬胚體，該胎盤細胞群包含該干細胞。在另一實施方案中，本發明提供了一種分離的細胞群包括，例如，富集的⑶73+、CD105+、CD200+干細胞。在特定的實施方案中，所述干細胞是胚胎干細胞。在不同的實施方案中，至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、或至少大約60%的所述細胞是⑶73+、⑶105+、⑶200+干細胞。在另一實施方案中，所述細胞群中至少大約70%的所述細胞是⑶73+、⑶105+、⑶200+干細胞。在另一實施方案中，所述細胞群中至少大約90%、95%或99%的所述細胞是⑶73+、⑶105+、⑶200+干細胞。在所述群體的特定的實施方案中，所述干細胞是HLA-G+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是CD34—、CD38—或⑶45_。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_。在更特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_和HLA-G+。在另一特定的實施方案中，當在允許形成擬胚體的條件下培養時，所述細胞群產生一種或多種擬胚體。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞群與不是干細胞的胎盤細胞分離開。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞群與不顯示這些特性的胎盤干細胞分離開。在另一實施方案中，本發明還提供了一種從大量胎盤細胞中選擇胎盤干細胞群的方法,包括選擇這樣的胎盤細胞群,其中至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、至少大約`60%、至少大約70%、至少大約80%、至少大約90%、或至少大約95%的所述細胞是⑶73+、⑶105+、⑶200+干細胞。在特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為HLA-G+的干細胞。在另一特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_或⑶45_的干細胞。在另一特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_和⑶45_的干細胞。在另一特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_工045_和HLA-G+的干細胞。在另一特定的實施方案中，所述選擇另外包括選擇當在允許生產擬胚體的條件下培養時，產生一種或多種擬胚體的胎盤細胞群。本發明還提供了一種分離的干細胞，其是⑶200+和0CT-4+。在特定的實施方案中，所述干細胞是CD73+和CD105+。在特定的實施方案中，干細胞是胚胎干細胞。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是HLA-G+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是CD34—、⑶38—或⑶45—。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34—、⑶38—和⑶45—。在更特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+、⑶105+和HLA-G+。在另一特定的實施方案中，當在允許生產擬胚體的條件下培養所述群體時，干細胞促進通過胎盤細胞群生產一種或多種擬胚體，該胎盤細胞群包含該干細胞。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞與不是干細胞的胎盤細胞分離開。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞與不顯示這些標記的胎盤干細胞分離開。在另一實施方案中，本發明還提供了一種從大量胎盤細胞中選擇胎盤干細胞的方法，包括選擇CD200+和0CT-4+胎盤細胞，其中所述細胞是胎盤干細胞。在特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為HLA-G+的胎盤細胞。在另一特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_或⑶45_的胎盤細胞。在另一特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_和⑶45_的胎盤細胞。在另一特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_、⑶45_、⑶73+、⑶105+和HLA-G+的胎盤細胞。在另一特定的實施方案中，所述選擇包括選擇當在允許形成擬胚體的條件下培養該群體時，還促進在包含該干細胞的胎盤細胞群中產生一種或多種擬胚體的胎盤干細胞。本發明還提供了一種分離的細胞群包括，例如，富集⑶200+、0CT-4+的干細胞。在不同的實施方案中，至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、或至少大約60%的所述細胞是⑶200+、0CT-4+干細胞。在另一實施方案中，至少大約70%的所述細胞是所述的⑶200+、0CT-4+干細胞。在另一實施方案中，至少大約90%、95%或99%的所述細胞是CD200+、0CT-4+干細胞。在分離的群體的特定的實施方案中，所述干細胞是⑶73+和⑶105+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是HLA-G+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_。在更特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_、⑶73+、⑶105+和HLA-G+。在另一特定的實施方案中，當在允許形成擬胚體的條件下培養時，該群體產生一種或多種擬胚體。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞群與不是干細胞的胎盤細胞分離開。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞群與不顯示這些特性的胎盤干細胞分離開。 在另一實施方案中，本發明還提供了一種從大量胎盤細胞中選擇胎盤干細胞群的方法,包括選擇這樣的胎盤細胞群,其中至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、至少大約60%、至少大約70%、至少大約80%、至少大約90%、或至少大約95%的所述細胞是CD200+、0CT-4+干細胞。在特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶73+與⑶105+的干細胞。在另一特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為HLA-G+的干細胞。在另一特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_和⑶45_的干細胞。在另一特定的實施方案中，所述干細胞還是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+、⑶105+和HLA-G+的干細胞。本發明進一步提供了一種分離的干細胞，其是⑶73+、⑶105+和HLA-G+。在特定的實施方案中，所述干細胞是胚胎干細胞。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是CD34—、⑶38—或⑶45—。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34—、⑶38—和⑶45—。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是0CT-4+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是CD200+。在更特定的實施方案中，所述干細胞是CD34—、CD38—、CD45—、0CT-4+和CD200+。在另一特定的實施方案中，當在允許形成擬胚體的條件下培養該群體時，所述干細胞促進在包含所述干細胞的胎盤細胞群中形成擬胚體。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞與不是干細胞的胎盤細胞分離開。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞與不顯示這些特性的胎盤干細胞分離開。在另一實施方案中，本發明還提供了一種從大量胎盤細胞中選擇胎盤干細胞的方法，包括選擇CD73+、CD105+和HLA-G+胎盤細胞，其中所述細胞是胎盤干細胞。在特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_或⑶45_的胎盤細胞。在另一特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_和⑶45_的胎盤細胞。在另一特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為0CT-4+的胎盤細胞。在另一特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶200+的胎盤細胞。在另一特定的實施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_、⑶45_、0CT-4+和⑶200+的胎盤細胞。在另一特定的實施方案中，所述選擇包括選擇當在允許形成擬胚體的條件下培養所述群體時，還促進在包含所述干細胞的胎盤細胞群中形成一種或多種擬胚體的胎盤細胞。本發明還提供了一種分離的細胞群，其包括，例如，富集的⑶73+、⑶105+和HLA-G+干細胞。在特定的實施方案中，所述干細胞是胎盤干細胞。在不同的實施方案中，至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、或至少大約60%的所述細胞是⑶73+、⑶105+和HLA-G+干細胞。在另一實施方案中，至少大約70%的所述細胞是⑶73+、⑶105+和HLA-G+。在另一實施方案中，至少大約90%、95%或99%的所述細胞是⑶73+、⑶105+和HLA-G+干細胞。在上述群體的特定實施方案中，所述干細胞是⑶34_、⑶38_或⑶45_。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是CD34_、CD38_和CD45_。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是0CT-4+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是CD200+。在更特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_、0CT-4+和⑶200+。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞群與不是干細胞的胎盤細胞分離開。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞群與不顯示這些特性的胎盤干細胞分離開。在另一實施方案中，本發明還提供了一種從大量胎盤細胞中選擇胎盤干細胞群的方法，包括選擇胎盤細胞群，其中大多數所述細胞是⑶73+、⑶105+和HLA-G+。在特定的實施方案中，所述多數細胞還是CD34_、0038_和/或CD45_。在另一特定的實施方案中，所述多數細胞還是⑶200+。在另一特定的實施方案中，所述多數細胞還是⑶34_、⑶38_、⑶45_、0CT-4+和 CD200+。在另一實施方案中，本發明提供了一種分離的干細胞，其是⑶73+和⑶105+，而且當在允許形成擬胚體的條件 下培養所述群體時，其促進在包含所述干細胞的分離的胎盤細胞群中形成一種或多種擬胚體。在特定的實施方案中，所述干細胞是CD34_、CD38_或CD45_。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是0CT-4+。在更特定的實施方案中，所述干細胞是0CT_4+、CD34_、CD381P CD45_。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞與不是干細胞的胎盤細胞分離開。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞與不顯示這些特性的胎盤干細胞分離開。本發明進一步提供了一種分離的胎盤細胞群，其包括，例如富集的⑶73+、⑶105+干細胞，其中在允許形成擬胚體的條件下培養所述群體時，形成一種或多種擬胚體。在不同的實施方案中，至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、至少大約60%、至少大約70%、至少大約80%、至少大約90%、或至少大約95%的所述分離的胎盤細胞是⑶73+、⑶105+干細胞。在上述群體的特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34_、⑶38—或⑶45—。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34—、⑶38—和⑶45—。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是0CT-4+。在更特定的實施方案中，所述干細胞是0CT-4+、⑶34_、⑶38_和⑶45_。在其它的特定實施方案中，所述群體被擴增，例如，已經傳代至少I次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞群與不是干細胞的胎盤細胞分離開。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞群與不顯示這些特性的胎盤干細胞分離開。本發明進一步提供了一種分離的干細胞，其是0CT-4+，而且當在允許形成擬胚體的條件下培養所述群體時，其促進在包含所述干細胞的分離的胎盤細胞群中形成一種或多種擬胚體。在特定的實施方案中，所述干細胞是CD73+和CD105+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶34_、⑶38—或⑶45_。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶200+。在更特定的實施方案中，所述干細胞是⑶73+、⑶105+、⑶200+、⑶34'⑶38-和⑶45'在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞與不是干細胞的胎盤細胞分離開。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞與不顯示這些特性的胎盤干細胞分離開。本發明還提供了一種分離的細胞群，其包括，例如富集的0CT-4+干細胞，其中在允許形成擬胚體的條件下培養時，所述群體形成一種或多種擬胚體。在不同的實施方案中，至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、至少大約60%、至少大約70%、至少大約80%、至少大約90%、或至少大約95%的所述分離的胎盤細胞是0CT-4+干細胞。在上述群體的特定的實施方案中，所述干細胞是CD73+和CD105+。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是CD34_、CD38_*CD45_。在另一特定的實施方案中，所述干細胞是⑶200+。在更特定的實施方案中，所述干細胞是⑶73+、⑶105+、⑶200+、⑶34'⑶38—和CD45_。在另一特定實施方案中，所述群體被擴增，例如，已經傳代至少I次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞群與不是干細胞的胎盤細胞分離開。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞群與不顯示這些特性的胎盤干細胞分離開。在另一實施方案中，本發明還提供了一種分離的胎盤干細胞，其是⑶10+、⑶34_、⑶105+和⑶200+。本發明進一步提供了一種分離的胎盤干細胞群，其中至少大約70%、至少大約80%、至少大約90%、至少大約95%或至少大約99%的所述胎盤干細胞是⑶10+、⑶34'⑶105+、⑶200+。在上述實施方案的特定的實施方案中，所述干細胞另外是⑶90+和⑶45_。在特定的實施方案中，所述干 細胞或胎盤干細胞群與不是干細胞的胎盤細胞分離開。在另一特定的實施方案中，所述干細胞或胎盤干細胞群與不顯示這些特性的胎盤干細胞分離開。在另一特定的實施方案中，所述分離的胎盤干細胞是非母親來源的。在另一特定的實施方案中，在所述分離的胎盤干細胞群中至少大約90%、至少大約95%或至少大約99%的所述細胞是非母親來源的。在另一實施方案中，本發明提供了一種分離的胎盤干細胞，其HLA-A，B，C_、⑶45_、⑶133_和⑶34_。本發明進一步提供了一種分離的胎盤干細胞群，其中至少大約70%、至少大約80%、至少大約90%、至少大約95%或至少大約99%的所述胎盤干細胞是HLA-A，B，C—、〇045_、00133_和CD34_。在特定的實施方案中，所述干細胞或胎盤干細胞群與不是干細胞的胎盤細胞分離開。在另一特定的實施方案中，所述胎盤干細胞群與不顯示這些特性的胎盤干細胞分離開。在另一特定的實施方案中，所述分離的胎盤干細胞是非母親來源的。在另一特定的實施方案中，在所述分離的胎盤干細胞群中至少大約90%、至少大約95%、或至少大約99%的所述細胞是非母親來源的。在另一實施方案中，本發明提供了一種獲得胎盤干細胞的方法，該胎盤干細胞是HLA-A，B，C_、⑶45_、⑶133_和⑶34_，其包括從胎盤灌注液中分離所述細胞。
在另一實施方案中，本發明提供了一種分離的胎盤干細胞，其是⑶10+、⑶13+、⑶33+、⑶45_、⑶117_和⑶133_。本發明進一步提供了一種分離的胎盤干細胞群，其中至少大約70%、至少大約80%、至少大約90%、至少大約95%或至少大約99%的所述胎盤干細胞是⑶10+、⑶13+、⑶33+、⑶45_、⑶117_和⑶133_。在特定的實施方案中，所述干細胞或胎盤干細胞群與不是干細胞的胎盤細胞分離開。在另一特定的實施方案中，所述分離的胎盤干細胞是非母親來源的。在另一特定的實施方案中，在所述分離的胎盤干細胞群中至少大約90%、至少大約95%、或至少大約99%的所述細胞是非母親來源的。在另一特定的實施方案中，所述干細胞或胎盤干細胞群與不顯示這些特性的胎盤干細胞分離開。在另一實施方案中，本發明提供了一種獲得胎盤干細胞的方法，所述胎盤干細胞是⑶10+、⑶13+、⑶33+、⑶45_、⑶117—和⑶133_，該方法包括從胎盤灌注液中分離所述細胞。在另一實施方案中，本發明提供了一種分離的胎盤干細胞，其是⑶10_、⑶33_、⑶44+、⑶45_和⑶117_。本發明進一步提供了一種分離的胎盤干細胞群，其中至少大約70%、至少大約80%、至少大約90%、至少大約95%或至少大約99%的所述胎盤干細胞是OTlO'⑶33_、OT44+、⑶45_和⑶117_。在特定的實施方案中，所述干細胞或胎盤干細胞群與不是干細胞的胎盤細胞分離開。在另一特定的實施方案中，所述分離的胎盤干細胞是非母親來源的。在另一特定的實施方案中，在所述分離的胎盤干細胞群中至少大約90%、至少大約95%、或至少大約99%的所述細胞是非母親來源的。在另一特定的實施方案中，所述干細胞或胎盤干細胞群與不顯示這些特性的胎盤干細胞分離開。在另一實施方案中，本發明提供了一種獲得胎盤干細胞的方法，該胎盤干細胞是⑶10_、⑶33_、⑶44+、⑶45_、⑶117_，該方法包括從胎盤灌注液中分離所述細胞。在另一實施方案中，本發明 提供了一種分離的胎盤干細胞，其是⑶10_、⑶13_、⑶33_、⑶45_和⑶117_。本發明進一步提供了一種分離的胎盤干細胞群，其中至少大約70%、至少大約80%、至少大約90%、至少大約95%或至少大約99%的所述胎盤干細胞是OTlO'⑶13_、⑶33_、⑶45_和⑶117_。在特定的實施方案中，所述干細胞或胎盤干細胞群與不是干細胞的胎盤細胞分離開。在另一特定的實施方案中，所述分離的胎盤干細胞是非母親來源的。在另一特定的實施方案中，在所述分離的胎盤干細胞群中至少大約90%、至少大約95%、或至少大約99%的所述細胞是非母親來源的。在另一特定的實施方案中，所述干細胞或胎盤干細胞群與不顯示這些特性的胎盤干細胞分離開。在另一實施方案中，本發明提供了一種獲得胎盤干細胞的方法，該胎盤干細胞是⑶10_、⑶13_、⑶33_、⑶45_和⑶117_，該方法包括從胎盤灌注液中分離所述細胞。在另一實施方案中，本發明提供了一種分離的胎盤干細胞，其是HLAA，B，C_、⑶45_、CD34' CD133、其對 CD10、CD13、CD38、CD44、CD90、CD105、CD200 和 / 或 HLA-G 呈陽性，和 /或CD117呈陰性。本發明進一步提供了一種分離的胎盤干細胞群，其中所述干細胞是HLA
A,B，C\ CD45' CD34' CD133、而且該群體中至少大約 20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98% 或大約 99% 的干細胞對 CD10、CD13、CD38、CD44、⑶90、⑶105、⑶200和/或HLA-G呈陽性，和/或對⑶117呈陰性。在特定的實施方案中，所述干細胞或胎盤干細胞群與不是干細胞的胎盤細胞分離開。在另一特定的實施方案中，所述分離的胎盤干細胞是非母親來源的。在另一特定的實施方案中，在所述分離的胎盤干細胞群中至少大約90%、至少大約95%、或至少大約99%的所述細胞是非母親來源的。在另一特定的實施方案中，所述干細胞或胎盤干細胞群與不顯示這些特性的胎盤干細胞分離開。在另一實施方案中，本發明提供了一種獲得胎盤干細胞的方法，所述細胞是HLA A，B，C_、CD45_、CD34' CD133_ 和對 CD10、CD13、CD38、CD44、CD90、CD105、CD200 和 / 或 HLA-G 呈陽性，和 /或對CD117呈陰性，該方法包括從胎盤灌注液中分離所述細胞。在另一實施方案中，本發明提供了一種胎盤干細胞，其是如通過抗體結合確定的⑶200+和⑶10+，和如通過抗體結合和RT-PCR確定的⑶117_。在另一實施方案中，本發明提供了一種胎盤干細胞，其是⑶10+、⑶29'⑶54+、⑶200+、HLA-G+、HLA I類-和P _2_小球蛋白 ' 在另一實施方案中，本發明提供了胎盤干細胞，其中至少一種標記的表達比間充質干細胞(例如，骨髓來源的間充質干細胞)至少高2倍。在另一特定的實施方案中，所述分離的胎盤干細胞是非母親來源的。在另一特定的實施方案中，在所述分離的胎盤干細胞群中至少大約90%、至少大約95%、或至少大約99%的所述細胞是非母親來源的。在另一實施方案中，本發明提供了一種分離的胎盤干細胞群，其中大量所述的胎盤干細胞是醛脫氫酶(ALDH)陽性，如通過醛脫氫酶活性分析確定的。這種分析是本領域已知的(參見，例如，Bostian&Berts, Biochem. J.，173，787，(1978))。在特定的實施方案中，所述的ALDH分析使用ALDLI __U1；作為醛脫氫酶活性的標記(Aldagen, Inc.，Ashland, Oregon)。在特定的實施方案中，所述的大量為所述細胞群中大約3%到大約25%的細胞。在另一實施方案中，本發明提供了一種分離的臍帶干細胞群，其中大量所述的臍帶干細胞是醛脫氫酶(ALDH)陽性，如通過醛脫氫酶活性分析確定的，其使用ALUm丄UOiV作為醛脫氫酶活性的指示物。在特定的實施方案中，所述的大量為所述細胞群中大約3%到大約25%的細胞。在另一實施方案中，所述胎盤干細胞或臍帶干細胞群，顯示比具有相同的細胞數和在相同條件下培養的骨髓來源的間充質群高至少3倍，或至少5倍的ALDH活性。本發明提供了任何上述的胎盤干細胞或胎盤干細胞群，其中所述干細胞或胎盤干細胞群已經傳代至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18或20次、或更多，或擴增了 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、 12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38 或 40 群體倍增，或更多。在任何上述胎盤細胞或細胞群的特定的實施方案中，所述群中細胞，或至少大約95%或大約99%的細胞的染色體組型是正常的。在任何上述胎盤細胞或細胞群的另一特定的實施方案中，細胞，或細胞群中的細胞，是非母親來源的。帶有任何的上述標記組合的分離的胎盤干細胞或分離的胎盤干細胞群可以任何比例組合。本發明還提供了任何兩種或多種上述胎盤干細胞群的分離或富集，以形成胎盤干細胞群。例如，本發明提供了一種分離的胎盤干細胞群，其包括由如上所述的標記組合中的一個來限定的第一胎盤干細胞群，和由如上所述的另一個標記組合限定的第二胎盤干細胞群，其中所述的第一和第二群體以大約1:99、2:98、3:97、4:96、5:95、10:90、20:80、30:70、40:60、50:50、60:40、70:30、80:20、90:10、95:5、96:4、97:3、98:2 或大約 99:1 的比例組合。以同樣的方式，任何的3、4、5或多種上述的胎盤干細胞或胎盤干細胞群可以進行組合。本發明進一步提供了胎盤干細胞，其通過使用或不使用酶消化來破壞胎盤組織，接著進行培養(參見5. 2. 3節)或灌注(參見5. 2. 4節)來獲得。例如，本發明提供了一種分離的胎盤干細胞群，其根據以下方法生產包括灌注哺乳動物胎盤，該胎盤已經被排出臍帶血而且被灌注以除去殘余血液；用灌注溶液灌注所述胎盤；收集所述灌注溶液，其中灌注后的所述灌注溶液含有包括胎盤干細胞的胎盤細胞群；和從所述細胞群中分離大量所述胎盤干細胞。在特定的實施方案中，灌注溶液通過臍靜脈和臍動脈，并在它從胎盤中流出后進行收集。通過這種方法生產的胎盤干細胞群一般包含胎兒和母親的細胞的混合物。在另一特定的實施方案中，灌注溶液通過臍靜脈并從臍動脈收集，或者通過臍動脈并從臍靜脈收集。通過這種方法產生的胎盤干細胞群一般基本上是專門胎兒來源的；也即，例如，該群體中大于90%、95%、99%或99. 5%的胎盤干細胞是胎兒來源的。在不同的實施方案中，包含在從胎盤的灌注液中獲得的細胞群內的胎盤干細胞是所述胎盤細胞群的至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或至少99. 5%。在另一特定的實施方案中，通過灌注收集的胎盤干細胞包含胎兒的細胞和母親的細胞。在另一特定的實施方案中，通過灌注收集的胎盤干細胞是至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或至少99. 5%的胎兒的細胞。在另一特定的實施方案中，本發明提供了一種包括通過灌注收集的分離的胎盤干細胞群組合物，其中所述的組合物包括用于收集胎盤干細胞的至少一部分灌注溶液。

本發明進一步提供了一種在此描述的分離的胎盤干細胞群，其根據以下方法生成，包括用組織裂解酶消化胎盤組織以獲得包含胎盤干細胞的胎盤細胞群，并從所述胎盤細胞的剩余物中分離大量的胎盤干細胞。全部胎盤，或胎盤的任何部分均可消化以獲得胎盤干細胞。在特定的實施方案中，例如，所述胎盤組織是全部胎盤、羊膜、絨毛膜、羊膜和絨毛膜的組合，或任何上述的組合。在其它的特定實施方案中，組織裂解酶是胰蛋白酶或膠原酶。在不同的實施方案中，包含在從消化胎盤中獲得的細胞群內的胎盤干細胞，是所述胎盤細胞群的至少 50%、60%、70%、80%、90%、95%、99% 或至少 99. 5%。基因分布圖證實了分離的胎盤干細胞和分離的胎盤干細胞群可和其它的細胞，例如間充質干細胞，例如骨髓來源的干細胞區別開。這里描述的胎盤干細胞，可根據一種或多種基因的表達與間充質干細胞區別開，相較于骨髓來源的間充質干細胞，該表達是胎盤干細胞或臍帶干細胞特異性的。特別地，胎盤干細胞可根據一種或多種基因的表達與間充質干細胞區分開，該表達在胎盤干細胞中顯著高于(也即，至少高兩倍)在間充質干細胞中，其中一種或多種基因是ACTG2、ADARBl、AMIG02、ARTS-1, B4GALT6、BCHE, Cllorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FU10781、GATA6、GPRl26、GPRC5B、HLA-G,ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAKl、PCDH7、PDLIM3、PKP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN、ZC3H12A，或任何上述的組合，其中當干細胞在相同條件下生長時，這些基因在胎盤干細胞或臍帶干細胞中的表達高于在骨髓來源的干細胞中。在特定的實施方案中，胎盤干細胞特異性基因或臍帶干細胞特異性基因是CD200。這些基因的表達水平可用于確認胎盤細胞群的身份，確定包含至少大量胎盤干細胞的細胞群，等等。其身份被確認的胎盤干細胞群，可以是純系的，例如，從單個胎盤干細胞擴增的胎盤干細胞群，或混合的干細胞群，例如，僅含有從多個胎盤干細胞擴增的胎盤干細胞的細胞群，或含有胎盤干細胞和至少一種其它類型的細胞的細胞群。這些基因的表達水平可被用于選擇胎盤干細胞群。例如，如果一種或多種這些基因的表達在來自細胞群的樣本中顯著高于等同的間充質干細胞群，可以選擇該細胞群，如純系擴增的細胞。這種選擇可以是從大量胎盤干細胞群中選擇群體，從身份未知的大量細胞群中選擇群體等。可以相較于間充質干細胞對照中所述一種或多種基因的表達水平，根據一種或多種這種基因的表達水平來選擇胎盤干細胞。在一實施方案中，含有等量間充質干細胞的樣本中所述一種或多種基因的表達水平被作為對照。在另一實施方案中，用于在一定條件下測試胎盤干細胞的對照，是表示在所述條件下間充質干細胞中所述一種或多種基因的表達水平的數值。本發明的胎盤干細胞，在原代培養中，或在包含60%DMEM_LG (Gibco)、40%MCDB-201 (Sigma)、2% 胎牛血清(FCS) (Hyclone Laboratories)、I X 胰島素-轉鐵蛋白-硒(ITS)、1X亞油酸牛血清白蛋白(LA-BSA)、10_9M地塞米松(Sigma)、10_4M抗壞血酸2_磷酸酯(Sigma)、10ng/ml表皮生長因子(EGF) (R&D Systems)、10ng/ml血小板來源的生長因子(I3DGF-BB) (R&DSystems)和IOOU青霉素/1000U鏈霉素的培養基中增殖期間，顯示上面的特性(例如，細胞表面標記和/或基因表達分布圖的組合)。如上所述分離的胎盤干細胞群和胎盤干細胞群一般可包含大約、至少、或至多IX 105、5X 105、1X 106、5X 106、1X 107、5X 107、1X 108、5X 108、1X 109、5X109、1X 1010、5X1010UX10n或更多的胎盤干細胞。5.1. 3培養中的牛長這里描述的胎盤干細胞的生長，對于任何哺乳動物細胞，部分地取決于選擇用于生長的特定培養基。在適宜條件下，胎盤干細胞在3-5天內一般會數量倍增。在培養期間，本發明的胎盤干細胞附著于培養中的基質，例如組織培養容器的表面(例如，組織培養皿塑料、纖粘連蛋白涂層的塑料等等)，而且形成單細胞層。

當在合適的條件下培養時，包含本發明的胎盤干細胞的分離的胎盤細胞群形成擬胚體，也即細胞的三維簇生長在附著的干細胞層的頂上。擬胚體內的細胞表達與極早期干細胞相關的標記，例如，0CT-4、Nanog、SSEA3和SSEA4。擬胚體內的細胞一般不附著于培養基質，如這里描述的胎盤干細胞那樣，但是在培養期間仍然附著于粘附細胞。擬胚體細胞的活力依賴于附著的胎盤干細胞，因為在缺乏附著的干細胞時不能形成擬胚體細胞。附著的胎盤干細胞因此促進胎盤細胞群中一種或多種擬胚體的生長，該胎盤細胞群包含附著的胎盤干細胞。不希望受理論的約束，擬胚體的細胞被認為在附著的胎盤干細胞上生長，很像胚胎干細胞生長于細胞的滋養層。間充質干細胞，例如，骨髓來源的間充質干細胞，在培養中不生長擬胚體。5. 2獲得胎盤干細胞的方法5. 2.1干細胞收集組合物本發明進一步提供了收集和分離胎盤干細胞的方法。通常，使用生理學可接受的溶液，例如，干細胞收集組合物，可從哺乳動物胎盤中獲得干細胞。干細胞收集組合物詳細描述于 2005 年 12 月 29 日提交的，題目為 “Improved Medium for Collecting PlacentalStem Cells and Preserving Organs” 的相關美國臨時申請號 60/754，969 中。干細胞收集組合物可包含適于收集和/或培養的干細胞的任何生理學可接受的溶液，例如，鹽溶液(例如、磷酸緩沖鹽溶液、Kreb’ s溶液、改良的Kreb’ s溶液、Eagle’ s溶液、0. 9%NaCl等等)，培養基(例如，DMEM、H. DMEM等等)，等等。干細胞收集組合物可包含一種或多種組分，其有助于保藏胎盤干細胞，也即，從收集的時間到培養的時間內，防止胎盤干細胞死亡，或延遲胎盤干細胞的死亡，降低細胞群中死亡的胎盤干細胞的數目等等。這種組分可以是，例如，凋亡抑制劑(例如，半胱氨酸蛋白酶抑制劑或JNK抑制劑)；血管擴張劑(例如，硫酸鎂、抗高血壓藥物、心鈉素(ANP)、促腎上腺皮質激素、促腎上腺皮質激素釋放激素、硝普酸鈉、肼苯噠嗪、腺苷三磷酸、腺嘌呤核苷、硫酸吲哚氯甲酰或硫酸鎂、磷酸二酯酶抑制劑，等等)；壞死抑制劑(例如，2-(lH-吲哚_3_基)-3-戍燒基氨基-順丁烯二酰亞胺、二硫代氨基甲酸批咯燒，或氯硝安定)；TNF-a抑制劑；和/或攜帶氧的全氟化碳(例如，全氟代辛基溴、全氟代癸基溴，等等)。干細胞收集組合物可包含一種或多種組織降解酶，例如，金屬蛋白酶、絲氨酸蛋白酶、中性蛋白酶、RNA酶、或DNA酶，等等。這些酶包括但不限于,膠原酶(例如,膠原酶1、I1、III或IV、來自溶組織梭狀芽胞桿菌的膠原酶，等等)；中性蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶、彈性蛋白酶、胰蛋白酶、LIBERASE、透明質酸酶，等等。干細胞收集組合物可包含殺菌的或細菌抑制有效量的抗生素。在某些非限制性實施方案中，抗生素是大環內酯(例如，托普霉素)、頭孢菌素(例如，頭孢氨芐、頭孢拉定、頭孢氨呋肟、頭孢丙烯、氯頭孢菌素、頭孢克肟或頭孢羥氨芐)、克拉霉素、紅霉素、青霉素(例如，青霉素V)或喹諾酮(例如，氧氟沙星、環丙沙星或諾氟沙星)、四環素、鏈霉素，等等。在特定的實施方案中，抗生素對革蘭氏(+)和/或革蘭氏(_)細菌，例如，銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌，等等有效。干細胞收集組合物還可以含有一種或多種下列化合物腺嘌呤核苷(大約ImM到大約50mM) ；D-葡萄糖(大約20mM到大約IOOmM);鎂離子(大約ImM到大約50mM);分子量大于20，000道爾頓的大分子，在一實施方案中，以足以保持內皮完整性和細胞活力的量存在(例如，合成的或天然存在的膠`體，多糖如右旋糖酐或聚乙二醇，以大約25g/l到大約100g/l,或大約40g/l到大約60g/l存在)；抗氧化劑(例如,丁基輕基苯甲醚、2，6-二叔丁基對甲酚、谷胱甘肽、維生素C或維生素E、以大約25 ii M到大約IOOii M存在)；還原劑(例如，N-乙酰半胱氨酸，以大約0.1mM到大約5mM存在)；防止鈣進入到細胞中的試劑(例如，維拉帕米，以大約2 u M到大約25 ii M存在)；硝化甘油(例如，大約0. 05g/L到大約0. 2g/L);抗凝血藥，在一實施方案中，以足以幫助防止殘余血液凝固的量存在(例如，肝素或水蛭素，以大約1000單位/I到大約100，000單位/I的濃度存在)；或含有阿米洛利的化合物(例如，阿米洛利、乙基異丙基阿米洛利、環六亞甲基阿米洛利、二甲基阿米洛利或異丁基阿米洛利，以大約1. 0 ii M到大約5 ii M存在)。5. 2. 2胎盤的收集和處理一般，人胎盤在出生后胎盤排出后不久回收。在優選的實施方案中，在告知同意以后，而且在取得患者的完整病史且將其與胎盤相關聯以后，從患者中回收胎盤。優選地，病史在產后繼續。這種病史可用于協調胎盤或從其收獲的干細胞的隨后的應用。例如，根據病史，人胎盤干細胞可用作與該胎盤相關的嬰兒或嬰兒的雙親、同胞或其它的親屬的個性化藥物。回收胎盤干細胞之前，除去臍帶血和胎盤血。在某些實施方案中，在產后回收胎盤中臍帶血。胎盤可以進行常規的臍帶血回收程序。一般，使用針或套管，借助于重力，給胎盤放血(參見，例如，Anderson,美國專利號5, 372, 581 ；Hessel等，美國專利號5，415，665)。針或套管通常放入臍靜脈中，而且可以輕輕地按摩胎盤以幫助從胎盤中排出臍帶血。這種臍帶血回收可以商業化地進行，例如，LifeBank USA, Cedar Knolls, N.J. , ViaCord, CordBlood Registry and Cryocell。優選地,胎盤通過重力排空而不進行進一步操作，以便在臍帶血回收期間將組織破壞最小化。一般，胎盤從分娩或出生房間被轉移到另一個位置，例如，實驗室，用于回收臍帶血和通過，例如，灌注或組織解離來收集干細胞。胎盤優選在無菌的，隔熱的轉運裝置中進行轉運(保持胎盤的溫度為20-28°C )，例如，通過把近端臍帶夾緊的胎盤放在無菌的拉鏈-鎖塑料袋中，然后放入保溫容器中。在另一實施方案中，基本上如未決美國專利號7，147，626所述，把胎盤放在臍帶血收集試劑盒中轉運。優選地，在分娩之后4至24小時內把胎盤轉運到實驗室。在某些實施方案中，在臍帶血回收之前，近端臍帶被夾緊，優選在插入到胎盤圓盤的4-5cm(厘米)內。在其它的實施方案中，在臍帶血回收以后，但是在胎盤的進一步處理之前，夾緊近端臍帶。在干細胞收集之前，胎盤可以儲存在無菌條件下，而且是室溫或者5到25°C (攝氏度)的溫度。在灌注胎盤以除去任何殘余的臍帶血之前，胎盤可以儲存4到24小時、高達48小時、或長于48小時。在一實施方案中，從娩出后大約0小時到大約2小時收獲胎盤。胎盤優選于5到25°C (攝氏度)儲存在抗凝血溶液中。適合的抗凝血溶液是本領域公知的。例如，可以使用肝素或華法林鈉的溶液。在一優選實施方案中，抗凝血溶液包括肝素溶液(例如，l%w/w,在1: 1000溶液中)。在收集胎盤干細胞之前，被放血的胎盤優選儲存至多36小時。哺乳動物胎盤或其部分，一旦通常如同上述收集和制備，可采用本領域已知的任何方式處理，例如，可以灌注或裂解，例如，用一種或多種組織裂解酶消化，以獲得干細胞。5. 2. 3胎盤組織的物理裂解和酶消化在一實施方案中 ，通過物理裂解完整器官的部分，從哺乳動物胎盤中收集干細胞。例如，胎盤或其部分可以被例如壓碎、剪切、切碎、切割成小片、斬碎、浸潰等等。然后可以培養組織以獲得干細胞群。一般地，使用例如干細胞收集組合物來裂解胎盤組織(參見5. 2.1節和下文)。在物理裂解和/或酶消化以及干細胞回收之前，可以把胎盤解剖成很多部分。胎盤干細胞可以從羊膜、絨毛膜、臍帶、胎盤子葉，或其任何組合的全部或部分，包括從全部胎盤中獲得。優選地，胎盤干細胞可從包括羊膜和絨毛膜的胎盤組織中獲得。一般地，通過裂解一小塊胎盤組織，例如，大約 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900或大約1000立方毫米體積的一塊胎盤組織，來獲得胎盤干細胞。可以使用任何物理裂解方法，只要該裂解方法能保持所述器官中大量，更優選大多數，更優選至少60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%的細胞存活，如通過例如臺盼藍排除法所確定的。干細胞通常在胎盤娩出后的大約第一個3天內的任何時間內從胎盤或其部分中收集，但是優選娩出后的大約8小時到大約18小時。在特定的實施方案中，裂解的組織在適于胎盤干細胞增殖的組織培養基中培養(參見，例如以下5. 3節，描述了胎盤干細胞的培養)。
在另一特定的實施方案中，通過胎盤組織的物理裂解來收集干細胞，其中物理裂解包括酶消化，其可能使用一種或多種組織消化酶來實現。胎盤或其部分，也可被物理裂解和用一種或多種酶消化，得到的物質然后浸于，或混合到干細胞收集組合物中。優選的干細胞收集組合物包括一種或多種組織裂解酶。酶消化優選使用酶的組合，例如，基質金屬蛋白酶和中性蛋白酶的組合，如膠原酶和分散酶的組合。在一實施方案中，胎盤組織的酶消化使用基質金屬蛋白酶、中性蛋白酶和用于消化透明質酸的粘液分解酶的組合，如膠原酶、分散酶和透明質酸酶的組合，或LIBERASE(Boehringer MannheimCorp.，Indianapolis, Ind.)和透明質酸酶的組合。可用于裂解胎盤組織的其它酶包括木瓜蛋白酶、脫氧核糖核酸酶、絲氨酸蛋白酶，如胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶或彈性蛋白酶。絲氨酸蛋白酶可以被血清中的a 2微小球蛋白抑制，因此用于消化的培養基通常是無血清的。EDTA和DNA酶通常用于酶消化，以增加細胞回收的效率。消化物優選地進行稀釋，以便避免截留粘性消化液內的干細胞。可以使用組織消化酶的任何組合。組織消化酶的典型濃度包括，例如，膠原酶I和膠原酶IV為50-200U/mL，分散酶為l_10U/mL，彈性蛋白酶為10_100U/mL。蛋白酶可以組合使用，也即，兩種或多種蛋白酶處于相同的消化反應中，或可以連續使用以便釋放胎盤干細胞。例如，在一實施方案中，胎盤或其部分，在37°C下，首先用大約I到大約2mg/ml的合適量的膠原酶I消化例如30分鐘，接著用濃度為大約0. 25%的胰蛋白酶消化例如10分鐘。絲氨酸蛋白酶優選在使用其它酶之后接連應用。在另一實施方案中，在用干細胞收集組合物分離干細胞之前，可通過將螯合劑，例如乙二醇雙(2-氨乙基醚)-N，N，N，N，-四乙酸(EGTA)或乙二胺四乙酸(EDTA)，添加到包含干細胞的干細胞收集組合物中，或添加到組織在其中被裂解和/或消化的溶液中，來進
一步裂解組織。 在一實施方案中，消化可以如下進行。獲得大約I克胎盤組織，并切碎。在含有大約lmg/mL膠原酶IA和大約0. 25%胰蛋白酶的IOmL溶液中，在振蕩器中以大約100RPM在37°C下消化組織。消化物用培養基洗滌3次，將洗滌過的細胞接種到2個T-75培養瓶中。然后通過差異性貼壁來分離細胞，并表征例如活力、細胞表面標記、分化等等。應當理解，當整個胎盤，或胎盤的部分包含胎兒和母親的細胞時(例如，胎盤的部分包含絨毛膜或子葉)，收集的胎盤干細胞將包括來源于胎兒和母親來源的胎盤干細胞的混合物。當胎盤的部分不含有，或含有可以忽略數量的母親的細胞(例如，羊膜)時，收集的胎盤干細胞幾乎只包括胎兒胎盤干細胞。干細胞可通過差速胰蛋白酶消化(參見以下5. 2. 5節)，接著在新鮮的增殖培養基中，在一個或多個新的培養容器中培養，可選地接著進行第二次差速胰蛋白酶消化步驟，從裂解的組織中分離。5. 2. 4胎盤灌注胎盤干細胞也可以通過哺乳動物胎盤的灌注來獲得。灌注哺乳動物胎盤以獲得干細胞的方法公開于，例如，Hariri，美國申請
發明者薩沙·道恩·阿布拉門遜, 詹姆士·W·愛丁格, 赫伯特·費萊克, 羅伯特·J·哈黎里, 克利斯登·S·拉巴左, 馬里安·佩雷拉, 王佳倫, 葉倩 申請人:人類起源公司