專利名稱：一種酶促合成阿魏酸甘油磷脂的方法
技術領域：
本發明屬于阿魏酸甘油磷脂的制備領域，涉及到一種酶促合成阿魏酸甘油磷脂的方法。
背景技術：
阿魏酸學名4-羥基-3-甲氧基肉桂酸、又稱為4-羥基-3-甲氧基-2-苯丙烯酸，是植物界富含的一種物質，在食品、化妝品、醫藥中作為抗氧化劑、紫外吸收劑、抗菌消炎、抗癌、抗誘變等成分。然而，由于阿魏酸在疏水性和親水性的環境中溶解性都較差，最終導致了阿魏酸的低活性。阿魏酸甘油磷脂具有良好的抗氧化效果，且阿魏酸甘油磷脂大大地改善了阿魏酸的水溶性，利于其在親水性環境中的應用，增加其活性。由于阿魏酸有熱敏性和易氧化性，因此化學法合成帶有阿魏酸的結構酯就需對功能性基團進行保護和脫保護的步驟，步驟繁瑣且條件苛刻，而酶法合成則可以克服這些缺點。

發明內容
本發明提供了一種酶促合成阿魏酸甘油磷脂的方法。本發明的技術方案如下
HO~i \~CH=CH-COOCH-CH3/~\I]
\ /-HO~f J~HC=HC-C-O-CH2
H3CO/=^HO—CH OCH3
阿魏酸乙酯H3CoI IlL
機Hx HH3H-C—O—P—O—CH--CH^-N+-CH3
+I- - Ii
脂肪酶 O—CH3
CHoOOR]-J
^HOOR.阿魏酰甘油磷脂
I'
CH2PO4CH2CH2N(CH3)3 磷脂酰膽堿 &與&為不同碳鏈長度的脂肪酸以脂肪酶Novozym 435作為催化劑，將阿魏酸乙酯和磷脂按質量摩爾比為8:1 1:8加入到有機溶劑中，然后加入酶和活化后的分子篩，在40°C -70V震蕩反應10 240 h，反應結束后過濾，取澄清的濾液旋轉蒸發除去有機溶劑；有機溶劑為甲苯和三氯甲烷、甲苯和丙酮、甲苯和叔丁醇的混合溶劑，甲苯和其他溶劑的體積比為95:5 80:20。本發明所述的磷脂為磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇及磷脂酰絲氨酸中一種或其混合。本發明所述的有機溶劑為甲苯和三氯甲烷的混合溶劑，或甲苯和丙酮的混合溶齊IJ，或甲苯和叔丁醇的混合溶劑。本發明所述的分子篩為3A或4A分子篩。
本發明所述的反應器為氣浴震蕩反應器或磁力攪拌反應器。本發明所述的反應所使用的溫度為40°C -70°C。本發明所述反應器的震蕩速率或磁力攪拌速率為150-250 r/min。本發明所述方法中其它沒有具體描述的部分均采用本技術領域公知的或已經公開報道的方法。本發明的制備方法生產阿魏酸甘油磷脂的轉化率可達40 %以上，操作簡單，對環境友好，并且催化劑酶可以重復利用，得的產物結構單一性好。
具體實施例方式下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發明講授的內容之后，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。實施例I :不同脂肪酶催化的阿魏酸甘油磷脂的合成，具體步驟如下(I)將4A分子篩活化之后，添加到待用的反應溶劑中，進行溶劑的干燥，24h震蕩過夜后得到脫水的有機溶劑，分子篩的用量為200 mg/mL。(2)酶促轉酯化反應按質量摩爾比3 I將阿魏酸乙酯和磷脂酰膽堿加入到上述脫水有機溶劑甲苯若干毫升中超聲溶解后，加入40mg/mL的各種酶類，Novozym 435 (丹麥),Lipozyme RM IM (丹麥),Lipozyme TL IM (丹麥)。加入分子篩 80mg/mL,于 55°C下，200r/min震蕩96h。反應結束后，取樣，用膜過濾除去分子篩和酶，得到的濾液經氮氣吹干儀除去有機溶劑，之后進液相進行分析。結果顯示Novozym 435是唯一一種對磷脂和阿魏酸乙酯底物有活性的脂肪酶。轉化率達到20%-40%。實施例2不同雙有機溶劑催化阿魏酸甘油磷脂的酶促合成反應，具體步驟如下(I)將4人分子篩活化之后，添加到待用的各種反應溶劑中，進行溶劑的干燥，24h震蕩過夜后得到脫水的有機溶劑，分子篩的用量為200 mg/mL。(2)酶促轉酯化反應按質量摩爾比3 I將阿魏酸乙酯和磷脂酰膽堿加入到上述脫水有機溶劑中超聲溶解，其包括甲苯/正丁醇(90 10, v/v)、甲苯/三氯甲烷(90 10,v/v)、甲苯 / 異丙醇(90 :10,v/v)、甲苯 / 叔丁醇(90 :10,v/v)、甲苯 / 丙酮(90 :10,v/v)和甲苯/DMSO (90 :10, v/v)。加入 40mg/mL 的脂肪酶 Novozym 435。加入分子篩 80mg/mL,于55°C下，200r/min震蕩96h。反應結束后，取樣，用膜過濾除去分子篩和酶，得到的濾液經氮氣吹干儀除去有機溶劑，之后進液相進行分析。結果顯示甲苯/三氯甲烷、甲苯/叔丁醇與甲苯/丙酮作為雙溶劑反應體系合成阿魏酸磷脂的轉化率均有所提高，其中甲苯/三氯甲烷作為溶劑的轉化率最高，其為40%以上。實施例3 不同底物摩爾比的阿魏酸甘油磷脂的合成，具體步驟如下
(I)將4人分子篩活化之后，添加到待用的反應溶劑中，進行溶劑的干燥，24h震蕩過夜后得到脫水的有機溶劑，分子篩的用量為200 mg/mL。(2)酶促轉酯化反應按質量摩爾比分別為8 1,6 1,5 1,3 1,2 I和I : I將阿魏酸乙酯和磷脂酰膽堿加入到上述脫水有機溶劑甲苯/三氯甲烷(90 :10，V/V)若干毫升中超聲溶解后，加入40mg/mL的各種酶類，Novozym 435 (丹麥)，加入分子篩80mg/mL，于55°C下，200r/min震蕩96h。反應結束后，取樣，用膜過濾除去分子篩和酶，得到的濾液經氮氣吹干儀除去有機溶劑，之后進液相進行分析。其中，當阿魏酸乙酯與磷脂酰膽堿的質量摩爾比為5 I時，其轉化率最高，可達到35 %。實施例4 不同底物摩爾比的阿魏酸甘油磷脂的合成，具體步驟如下 (I)將4A分子篩活化之后，添加到待用的反應溶劑中，進行溶劑的干燥，24h震蕩過夜后得到脫水的有機溶劑，分子篩的用量為200 mg/mL。(2)酶促轉酯化反應按質量摩爾比I : 1，1 : 2，1 : 3，1 : 5，1 : 6和I : 8將阿魏酸乙酯和磷脂酰膽堿加入到上述脫水有機溶劑甲苯/三氯甲烷(90 :10，v/v)若干毫升中超聲溶解后，加入40mg/mL的各種酶類，Novozym 435 (丹麥)，加入分子篩80mg/mL,于55°C下，200r/min震蕩96h。反應結束后，取樣，用膜過濾除去分子篩和酶，得到的濾液經氮氣吹干儀除去有機溶劑，之后進液相進行分析。其中，當阿魏酸乙酯與磷脂酰膽堿的質量摩爾比為I : 5時，其轉化率最高，可達到40 %以上。
權利要求
1.一種酶促合成阿魏酸甘油磷脂的方法，其特征在于，以脂肪酶Novozym 435作為催化劑，將阿魏酸乙酯和磷脂按質量摩爾比為8:1 1:8加入到有機溶劑中，然后加入酶和活化后的分子篩，在40°C _70°C震蕩反應10 240 h，反應結束后過濾，取澄清的濾液旋轉蒸發除去有機溶劑；有機溶劑為甲苯和三氯甲烷、甲苯和丙酮、甲苯和叔丁醇的混合溶劑，甲苯和其他溶劑的體積比為95:5 80:20。
2.根據權利要求I所述的方法，其特征在于所述的磷脂為磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸中一種或其混合。
3.根據權利要求I或2所述的方法，其特征在于所述的分子篩為3A或4人分子篩。
4.根據權利要求I或2所述的方法，其特征在于所述的反應器為氣浴震蕩反應器或者磁力攪拌反應器。
5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于所述的反應器為氣浴震蕩反應器或者磁力攪拌反應器。
6.根據權利要求1、2或5所述的方法，其特征在于震蕩速率為150-250r/min。
7.根據權利要求3所述的方法，其特征在于震蕩速率為150-250r/min。
8.根據權利要求4所述的方法，其特征在于震蕩速率為150-250r/min。
全文摘要
本發明涉及一種酶促合成阿魏酸甘油磷脂的方法，其特征是將活化后的分子篩加入到有機溶劑中，進行脫水處理24-96h，得到脫水后的有機溶劑；(2)酶促酯化反應按摩爾比8∶1到1∶8將水解后的磷脂和阿魏酸乙酯加入到上述脫水后的有機溶劑，然后加入酶和活化后的分子篩，與40-70℃下震蕩10到240h；反應結束后過濾，取澄清的濾液旋轉蒸發除去有機溶劑，得到阿魏酸甘油磷脂，其轉化率最高達到40%。本發明的制備方法操作簡單，對環境友好，并且催化劑酶可以重復利用，得的產物結構單一性好。
文檔編號C12P9/00GK102943095SQ20121048771
公開日2013年2月27日 申請日期2012年11月26日 優先權日2012年11月26日
發明者楊天奎, 楊宏黎, 牟英 申請人:大連理工大學