專利名稱：山螞蝗提取物及從中分離的總黃酮和山萘苷及其醫藥用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥技術領域，是圓菱葉山螞蝗提取物以及從中分離到的圓菱葉山螞蝗總黃酮和山萘苷單體化合物在制備防治骨質疏松藥物或食品中的應用。
背景技術：
骨質疏松癥(Osteoporosis, 0P)是ー種常見病多發病。目前,全世界約有2億人患骨質疏松癥，其發病率已經躍居世界各種常見癥的第7位。目前，治療骨質疏松癥的化學藥主要使用雌激素類骨吸收抑制劑或雄性激素類等骨形成刺激剤，長期服用具有較大的副作用。從天然的植物中尋找治療骨質疏松疾病且副作用小的有效提取物、有效部位及単體化合物成為研究熱點。圓菱葉山螞幢Podocarpium podocarpum(DC. ) Yang et Huang 或 Desmodium podocarpum DC.是豆科蝶形花亞科(Papilionaceae, Leguminosae)山螞幢屬或長柄山螞蝗屬植物，生于海拔700 1000米山谷密林中或溪邊，我國東部和西南部地區有分布。圓菱葉山螞蝗以根、葉及全草入藥，具有發表散寒，止血功能，主治急性風濕痹痛、跌打損傷，刀傷等(國家中醫藥管理局《中華本草》編委會.中華本草[M].上海科學技術出版社，3341-3343.)。現代藥理學研究表明，圓菱葉山螞蝗具有鎮痛、解熱和抗炎作用(Zhu, Z. Z. , Ma, K. J. , Ran, X. , Zhang, H. , Zheng, C. J. , Han, T. , Zhang, Q. Y. , Qin, L. P. , 2010.Analgesic, ant1-1nflammatory and antipyretic activities of the petroleumether fraction from the ethanol extract of Desmodium podocarpum. Journal ofethnopharmacologyl33, 1126-1131.)。目前，僅有文獻報道從長柄山螞幢的變種尖葉
木丙山蟲馬蟲皇(Podocarpium podocarpum(DC.) Yang et Huang var. oxyphylIum(DC.)Yang et Huang)分離得到5個化合物P -谷留醇、正三十燒醇、木栓酮、齊墩果酸和脫鎂葉綠素甲酯(Ma, X. Q.，Zheng, C. J.，Hu, C. L.，Rahman, K.，Qin, L. P. , 2011. The genusDesmodium (Fabaceae)-traditional uses in Cmnese medicine, phytochemistry andpharmacology. J. Ethnopharmaco1. 138, 314-332.)。至今未見有關圓菱葉山螞幢提取物、圓菱葉山螞蝗總黃酮或山萘苷單體化合物具有防治骨質疏松癥的報道。

發明內容
本發明提供一種圓菱葉山螞蝗提取物以及從中分離到的圓菱葉山螞蝗總黃酮和山萘苷單體化合物，以及圓菱葉山螞蝗提取物、圓菱葉山螞蝗總黃酮或山萘苷單體化合物在制備防治骨質疏松藥物或食品中的應用。本發明以圓菱葉山螞蝗干燥全草為原料進行了提取分離，得到了圓菱葉山螞蝗提取物，由圓菱葉山螞蝗提取物制備圓菱葉山螞蝗總黃酮并分離到山萘苷單體化合物。制備方法如下1、制備圓菱葉山螞蝗提取物將干燥圓菱葉山螞蝗全草用水或體積百分比不超過95%的こ醇水溶液按常規水煎煮或回流提取，優選為60 80%こ醇，最佳為80%こ醇，將提取液減壓濃縮至無醇味的浸膏，得圓菱葉山螞蝗提取物。2、制備圓菱葉山螞蝗總黃酮將上述制得的圓菱葉山螞蝗提取物采用大孔吸附樹脂或聚酰胺柱層析純化，優選大孔吸附樹脂，先用水和20%こ醇水溶液洗脫，棄洗脫液，再用30 80%こ醇洗脫，收集洗脫液，優選收集30 60%こ醇的洗脫液，減壓濃縮干燥，得圓菱葉山螞蝗總黃酮。以山萘苷為對照采用紫外分光光度法(341nm)測定其中總黃酮含量在52 65%。3、制備山萘苷單體化合物將上述制備的圓菱葉山螞蝗提取物用水溶解成混懸液后，依次用石油醚、ニ氯甲烷、こ酸こ酯和正丁醇萃取，將正丁醇萃取液減壓濃縮成流浸膏狀，用硅膠(100 200目)拌樣，干法上柱，以ニ氯甲烷甲醇為10 :1 1:1的不同比例進行洗脫，收集ニ氯甲烷甲醇為10 :1 5 :1的洗脫液，減壓濃縮，用少量甲醇溶解后即析出黃色晶體，用甲醇清洗后得黃色粉末，即山萘苷單體化合物，HPLC測定含量為95 99%。山萘苷單體化合物的
化學結構式如下
權利要求
1.一種圓菱葉山螞蝗提取物，制備方法如下將干燥圓菱葉山螞蝗全草用水或體積百分比不超過95%的乙醇水溶液按常規水煎煮或回流提取，將提取液減壓濃縮至無醇味的浸膏，得圓菱葉山螞蝗提取物。
2.按權利要求1所述的圓菱葉山螞蝗提取物，其特征在于制備方法中所用的乙醇水溶液為60 80%乙醇。
3.按權利要求1所述的圓菱葉山螞蝗提取物，其特征在于制備方法中所用的乙醇水溶液為80%乙醇。
4.一種圓菱葉山螞蝗總黃酮，制備方法如下1)將干燥圓菱葉山螞蝗全草用水或體積百分比不超過95%的乙醇水溶液按常規水煎煮或回流提取，將提取液減壓濃縮至無醇味的浸膏，得圓菱葉山螞蝗提取物；2)將上述制得的圓菱葉山螞蝗提取物采用大孔吸附樹脂或聚酰胺柱層析純化，先用水和20%乙醇水溶液洗脫，棄洗脫液，再用30 80%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮干燥，得圓菱葉山螞蝗總黃酮。
5.按權利要求4所述的圓菱葉山螞蝗總黃酮，其特征在于制備方法中所用的乙醇水溶液為60 80%乙醇，采用大孔吸附樹脂純化，用水和20%乙醇水溶液洗脫，棄洗脫液，再用 30 60%乙醇洗脫。
6.按權利要求4或5所述的圓菱葉山螞蝗總黃酮，其特征在于制備方法中所用的乙醇水溶液為80%乙醇，采用AB-8大孔吸附樹脂純化，用水和20%乙醇水溶液洗脫棄洗脫液后， 再用30 60%乙醇洗脫。
7.山萘苷單體化合物，制備方法如下1)將干燥圓菱葉山螞蝗全草用水或體積百分比不超過95%的乙醇水溶液按常規水煎煮或回流提取，將提取液減壓濃縮至無醇味的浸膏，得圓菱葉山螞蝗提取物；2)將上述提取物用水溶解成混懸液后，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取，將正丁醇萃取液減壓濃縮成流浸膏狀，用硅膠(100 200目)拌樣，干法上柱，以二氯甲烷甲醇為10 :1 1:1的不同比例進行洗脫，收集二氯甲烷甲醇為10 :1 5 :1 的洗脫液，減壓濃縮，用少量甲醇溶解后即析出黃色晶體，用甲醇清洗后得黃色粉末，即山萘苷單體化合物，其化學結構式如下
8.權利要求1 7中任何一項所述的圓菱葉山螞蝗提取物或圓菱葉山螞蝗總黃酮或山萘苷單體化合物在制備防治骨質疏松藥物或食品中的應用。
全文摘要
本發明涉及醫藥技術領域，是圓菱葉山螞蝗提取物以及從中分離到的圓菱葉山螞蝗總黃酮和山萘苷單體化合物在制備防治骨質疏松藥物或食品中的應用。本發明以圓菱葉山螞蝗干燥全草為原料進行了提取分離，得到了圓菱葉山螞蝗提取物，由圓菱葉山螞蝗提取物制備圓菱葉山螞蝗總黃酮并分離到山萘苷單體化合物。經體內外實驗，表明圓菱葉山螞蝗提取物、圓菱葉山螞蝗總黃酮或山萘苷單體化合物都具有良好的抗骨質疏松的生物活性，因此可用于制備防治骨質疏松的藥物或食品。本發明制備方法簡單，為抗骨質疏松提供了新的藥物來源。
文檔編號A23L1/29GK103006755SQ201210587958
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月30日 優先權日2012年12月30日
發明者鄭承劍, 秦路平, 馬學琴, 張巧艷, 韓婷, 張宏 申請人:中國人民解放軍第二軍醫大學