去除免疫性的活體脂肪材料及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種去除免疫性的活體脂肪材料及其制備方法，更詳細說，本發(fā)明的去除免疫性的活體脂肪組織制備方法，其包括：采集脂肪組織的步驟；將所述脂肪組織以20～500kGy的伽瑪(γ)射線進行照射的步驟；以及，將所述被伽馬射線照射的脂肪組織進行離心分離的步驟。
【專利說明】去除免疫性的活體脂肪材料及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種去除免疫性的活體脂肪材料及其制備方法，更詳細說是涉及一種從采集的脂肪組織去除免疫性并移植給他人的活體脂肪材料及其制備方法。
【背景技術】
[0002]作為用于人體的體積置換(volume replacement)的注射用材料,在200年來用多種物質和方法去嘗試過。例如，過去使用了硅、石蠟等，但目前是因可能會引發(fā)肉芽腫、免疫問題而幾乎不使用。
[0003]最近，通過加工從人體或動物取得的真皮組織(allogenic dermis)或骨組織(allogenic bone)等作為移植用材料，但是其加工步驟復雜，并在加工步驟中為了消除免疫蛋白(immune protein)、細胞等抗原性(antigenicity)而添加多種化學方法,因此,如果花費較多的用于許可的時間，則無法100%去除抗原性而可能會產(chǎn)生副作用。并且，加工費較多，作為原材料的尸體(cadaver)的供需有限，作為每Icc超過50萬韓元的高價耗材，存在較大的費用問題。
[0004]關注國內外的相關技術，可知正在開發(fā)多種人造皮膚商品，從去細胞人造皮膚至培養(yǎng)本人的表皮細胞及真皮細胞的階層化的細胞性活人造皮膚(living skinequivalent ；LSE),開發(fā)有多個種類并處于商品化階段。這些產(chǎn)品是利用他組織進行去細胞處理，或是由膠原等活體物質制備，因此是相當高價的產(chǎn)品。細胞性活體源性人造皮膚能夠迅速地治愈傷口，并在減少傷痕等質的方面也取得有良好的傷口恢復效果，同時根據(jù)報告來說，自細胞或他組織 不存在免疫排斥反應。
[0005]在韓國國內，利用了殼聚糖、膠原、殼質(chitin)等的基質型人造皮膚得以商用化，開發(fā)出在基質培養(yǎng)皮膚細胞的培養(yǎng)皮膚并處于臨床試驗階段，但是尚未得到量產(chǎn)。
[0006]韓國授權專利第10-0469661號中開發(fā)了移植用去細胞真皮層的制備方法，并以SureDerm的產(chǎn)品名稱制備供應，從而在進口的一部分組織修復用活體材料的國產(chǎn)化上取得了成功。但是，在國內獲取人體皮膚方面存在有諸多限制，因此，當前所處的狀況是將材料進口并生產(chǎn)產(chǎn)品。一般周知為“填充劑(Filler)”的這些產(chǎn)品是以動物源性物質和人造合成物質、人體源性組織等為原料制備，在使用的便利性、持續(xù)性及價格上存在有較多的缺點。
[0007]作為另一產(chǎn)品可舉例有由牛的膠原制備的注射用膠原蛋白ZydeiV、作為聚甲基丙烯酸甲酯微球(Polymethyl-methacrylate bead)和膠原的混合液的ArtecollK、作為利用變形透明質酸的產(chǎn)品的RestyleneK、將人造真皮(AlloDerm)進行粉末加工的CymetraK等。美國LifeCell公司的AlloDermK將從尸體饋贈的皮膚加工、處理為去細胞異體真皮(human allogenic acellular dermis),并作為移植片或嵌入物的用途銷售。就上述產(chǎn)品來說，通過去除所有的細胞來完全地阻斷了免疫排斥反應的可能性，并由于利用了原有的人體組織，與其它任何人造皮膚相比具有優(yōu)越的活體適配性的優(yōu)點，因此，在韓國國內也開發(fā)出了類似的產(chǎn)品，只是由于未能找到饋贈者，當前所處的狀況是將原料從國外進口。
[0008]并且，脂肪組織從肥胖患者去除而廢棄或保存一部分并使用，但是由于組織內特別多的脂肪小滴(lipid droplet)內部的諸如三酰甘油(triacylglycerol)、固醇酯(sterol esters)的中性脂質(neutral lipids)等會被氧化或部分地被氧化、水解而變質，較難保存兩個月以上并再使用。在脂質氧化中，除了基于高度不飽和脂肪酸的氧化的反應生成物與蛋白質等氨基化合物反應而引起變色、損失等以外，還將生成氫過氧化物(hydroperoxide)、不飽和醒(aldehyde)等毒性物質。并且，豬或牛等人體以外的動物脂肪組織與人相比，其液體脂質的比率少(50~70%)且混合有一部分肌肉(paniculusmuscularis)，而人體的脂肪組織與真皮組織或肌層明確地區(qū)分，其液體脂質的量極多，因此，目前來說通過加工人體的脂肪組織來開發(fā)活體移植材料的情況較少。
[0009]脂肪組織由全部體積的98%為液體狀態(tài)的脂質構成，因此，在保存上或移植時存在有困難，并且包含有培養(yǎng)細胞時的所有變數(shù)，因此，幾乎沒有嘗試過利用脂肪組織來開發(fā)移植用材料。但是，如果脂肪組織也能夠在去除脂質的同時保持某種程度的微細結構，并且其體積的一部分得以保存并可實現(xiàn)滅菌及去除免疫性等的話，則實際上也能起到移植材料的作用。
[0010]最近發(fā)表有在如海綿的結構上生長并分化有更多的細胞的事實，因此，可推測出實際上在活體內效果或細胞培養(yǎng)中，與移植于活體的物質的重量相比，更重要的是體積。因此，如果脂肪組織能夠保持微細結構，并且實現(xiàn)滅菌及去除免疫性等，將能夠成為相比其它活體組織更加有利的材料。
[0011]因此，希望開發(fā)出利用脂肪組織的移植用活體脂肪材料，其中，所要開發(fā)的活體脂肪材料能夠保存一部分的體積的同時可實現(xiàn)長期的保存及長途的移動，并且去除了免疫性而還可移植給他人。

【發(fā)明內容】

[0012]技術問題
[0013]為了解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種可作為移植材料使用于人體，并且可實現(xiàn)長期保存及長途移送的活體脂肪材料。
[0014]并且，本發(fā)明的目的在于提供一種通過在脂肪組織去除脂質等，具有能夠使細胞附著的表面積，從而能夠起到細胞培養(yǎng)用支撐體的作用的活體脂肪材料。
[0015]技術方案
[0016]為了達到上述目的，本發(fā)明提供一種去除免疫性的活體脂肪組織制備方法，其包括:采集脂肪組織的步驟；將所述脂肪組織以20~500kGy的伽瑪(Y )射線進行照射的步驟；以及，將所述被伽馬射線照射的脂肪組織進行離心分離的步驟。
[0017]并且，本發(fā)明提供一種去除免疫性的活體脂肪組織制備方法，其特點在于，伽馬射線照射以-60°C~10°C的低溫進行處理。
[0018]并且，本發(fā)明提供一種去除免疫性的活體脂肪組織制備方法，其特點在于，在低溫處理時，將干冰、低溫的異丙醇(isoprophyl alchol)、冰、低溫的水凝膠及低溫金屬塊的冷能儲存材料中的一種以上材料放置于伽馬射線照射空間內，以保持低溫。
[0019]并且，本發(fā)明提供一種去除免疫性的活體脂肪組織制備方法，其特點在于，所述采集脂肪組織的步驟中，利用可進 行伽馬射線處理的注射器容器進行采集。
[0020]并且，本發(fā)明提供一種去除免疫性的活體脂肪組織制備方法，其特點在于，在所述采集脂肪組織的步驟后，還包括進行包裝以密閉的步驟，所述包裝直接利用采集脂肪組織并盛放的容器，其可進行伽馬射線處理，在所述容器包括可進行開閉及連接的連接蓋。
[0021]并且，本發(fā)明提供一種去除免疫性的活體脂肪組織制備方法，其特點在于，包裝容器是使用聚碳酸酯PC、聚丙烯PP、聚氯乙烯PVC、聚乙烯對苯二甲酯PET及玻璃中的一種以上的可進行伽馬射線處理的材料。
[0022]并且，本發(fā)明提供一種去除免疫性的活體脂肪組織制備方法，其特征在于，所述容器為雙重以上的包裝，可進行密閉。
[0023]并且，本發(fā)明提供一種去除免疫性的活體脂肪組織制備方法，其特點在于，在所述雙重以上的包裝時，其中一層以上的包裝由可防止自然光透射的材料構成。
[0024]并且，本發(fā)明提供一種去除免疫性的活體脂肪組織制備方法，其特點在于，還包括:在所述伽馬射線照射之前或伽馬射線照射之后進行粉碎，或是在伽馬射線照射之前及照射之后進行粉碎的步驟。
[0025]并且，本發(fā)明提供一種去除免疫性的活體脂肪組織制備方法，其特點在于，在所述采集步驟后進行冷凍，并在伽馬射線照射后進行解凍。
[0026]并且，本發(fā)明提供一種去除免疫性的活體脂肪組織制備方法，其特點在于，在伽馬射線照射后還包括脂質去除步驟。
[0027]并且，本發(fā)明 提供一種去除免疫性的活體脂肪材料，其通過將采集的脂肪組織以20~500kGy的伽瑪(Y )射線照射及離心分離而取得。
[0028]并且，本發(fā)明提供一種去除免疫性的活體脂肪材料，其特點在于，伽馬射線照射以-60°C~10°C的低溫進行處理。
[0029]并且，本發(fā)明提供一種去除免疫性的活體脂肪材料，其特點在于，在低溫處理時，將干冰、低溫的異丙醇(isoprophyI alchoI)、冰、低溫的水凝膠及低溫金屬塊的冷能儲存材料中的一種以上材料放置于伽馬射線照射空間內，以保持低溫。
[0030]并且，本發(fā)明提供一種去除免疫性的活體脂肪材料，其特點在于，利用可進行伽馬射線處理的注射器容器來采集脂肪組織。
[0031]并且，本發(fā)明提供一種去除免疫性的活體脂肪材料，其特點在于，在采集所述脂肪組織后進行包裝以密閉，所述包裝直接利用采集脂肪組織并盛放的容器，其可進行伽馬射線處理，在所述容器包括可進行開閉及連接的連接蓋。
[0032]并且，本發(fā)明提供一種去除免疫性的活體脂肪材料，其特點在于，包裝容器是使用聚碳酸酯PC、聚丙烯PP、聚氯乙烯PVC、聚乙烯對苯二甲酯PET及玻璃中的一種以上的可進行伽馬射線處理的材料。
[0033]并且，本發(fā)明提供一種去除免疫性的活體脂肪材料，其特點在于，所述容器以雙重以上的包裝可進行密閉。
[0034]并且，本發(fā)明提供一種去除免疫性的活體脂肪材料，其特點在于，在所述雙重以上的包裝時，一層以上的包裝由可防止自然光透射的材料構成。
[0035]并且，本發(fā)明提供一種去除免疫性的活體脂肪材料，其特點在于，還包括:在所述伽馬射線照射之前或伽馬射線照射之后進行粉碎，或是在伽馬射線照射之前及照射之后進行粉碎。
[0036]并且，本發(fā)明提供一種去除免疫性的活體脂肪材料，其特點在于，在所述采集后進行冷凍，并在伽馬射線照射后進行解凍。
[0037]并且，本發(fā)明提供一種去除免疫性的活體脂肪材料，其特點在于，在伽馬射線照射后還包括脂質去除。
[0038]有益效果
[0039] 根據(jù)本發(fā)明的活體脂肪材料及其制備方法，可將從哺乳類動物及人體等采集的不必要的脂肪組織作為移植材料使用于人體。
[0040]并且，根據(jù)本發(fā)明的活體脂肪材料及其制備方法，通過照射伽馬射線去除免疫性，可作為移植材料移植于他人的人體等。
[0041]并且，根據(jù)本發(fā)明的活體脂肪材料及其制備方法，利用可進行伽馬射線處理的容器采集脂肪組織或保存采集的脂肪組織，因此，具有伽馬射線處理簡單，可實現(xiàn)長期保存及長途移動的效果。
[0042]并且，根據(jù)本發(fā)明的活體脂肪材料及其制備方法，脂肪組織內的細胞膜等微細結構得以完好地保持，因此，可作為移植用材料使用。
[0043]并且，根據(jù)本發(fā)明的活體脂肪材料及其制備方法，通過粉碎、離心分離等去除脂質而具有能夠使細胞附著的表面積，因此，可起到細胞培養(yǎng)用支撐體的作用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0044]圖1是制備本發(fā)明的一實施例中的活體脂肪組織的流程圖；
[0045]圖2及圖3是將本發(fā)明的實施例1及實施例2中的活體脂肪材料移植于實驗用小鼠后按日期觀察的照片；
[0046]圖4是將本發(fā)明的實施例1及實施例2的活體脂肪材料移植于實驗用小鼠的4周后切除移植的部位的照片；
[0047]圖5及圖6是將比較例I及比較例2的活體脂肪材料移植于實驗用小鼠后按日期觀察的照片；
[0048]圖7是本發(fā)明的比較例I及比較例2的活體脂肪材料移植于實驗用小鼠的4周后切除移植的部位的照片。
[0049]用于實施發(fā)明的最優(yōu)選的方式
[0050]以下，參照本發(fā)明所附的附圖對本發(fā)明進行詳細的說明。首先，應當留意的是，附圖中對于相同的結構要素或元件盡可能用相同的附圖標記表示。在對本發(fā)明進行說明時，對于相關的公知功能或結構，為了明確本發(fā)明的技術思想而省去具體的說明。
[0051]本說明書中使用的與程度有關的用語“約”、“實質上”等，其在提示有所提及的含義上固有的制造及物質允許誤差時，以該數(shù)值或接近該數(shù)值的含義來使用，并且為了防止不道德的侵權者不當利用，為了有助于本發(fā)明的理解而提及到準確或絕對的數(shù)值的揭示內容。
[0052]本發(fā)明涉及一種去除免疫性的活體脂肪材料，并且是涉及一種從人體等采集的脂肪組織對細菌等進行滅菌并去除免疫性后，可移植于他人等的活體脂肪移植材料。
[0053]根據(jù)本發(fā)明的一實施例中的去除免疫性的活體脂肪材料，通過向采集的脂肪組織照射伽馬射線來去除組織內存在的固有的免疫性，破壞識別為自細胞的抗原性(antigenicity)及生物學活性(biological reactivity),從而可作為移植材料使用于他人等。
[0054]本發(fā)明采集人體或哺乳類動物的脂肪組織，滅除細菌且去除免疫性，作為移植材料使用。上述脂肪組織的采集方法并沒有特別的限定，可利用注射器等直接進行采集。
[0055]可通過伽馬射線照射采集的脂肪組織。上述伽馬射線是從放射線物質射出的放射線的一種，它是波長短的電磁波。
[0056]當向脂肪組織照射伽馬射線時，可使脂肪組織中的引起免疫反應的物質失活。 [0057]如果不是自細胞的物質移植于身體，將會引起免疫反應。
[0058]在身體內具有抗原性(antigenicity)及生物學活性(biological reactivity),因此具有將其破壞的特性。因此，當移植給他人等時，通過去除抗原性(antigenicity)及生物學活性(biological reactivity)以避免引起免疫反應尤為重要。
[0059]引起免疫反應的原因有細胞外基質物質(Extra Cellular Matrix (ECM))自身誘發(fā)免疫反應的部分，并且在細胞、DNA等也引起免疫反應。上述細胞外基質物質的主要成分為膠原，在膠原末端部兩側具有誘發(fā)免疫反應的部分。并且，在細胞表面及內器官包含有很多免疫反應物質。
[0060]本發(fā)明中為了抑制這些免疫反應，即，為了去除免疫性，通過向脂肪組織照射伽馬射線來去除了免疫性。
[0061]當照射伽馬射線時，細胞將直接被破壞，DNA被切斷，導致細胞被消滅。并且，作為在脂肪組織的細胞外基質物質的h fatECM在照射伽馬射線時，誘發(fā)免疫反應的部分將被失活，從而能夠抑制免疫性。
[0062]本發(fā)明通過以20~500千戈瑞(kGy)照射伽馬射線來使脂肪組織內的核酸(nucleic acid, DNA, RNA)等被失活，能夠去除細胞外基質物質ECM的免疫性，并能夠有效地破壞細菌等而進行滅菌。
[0063]優(yōu)選的伽馬射線的照射范圍是20~500kGy。更優(yōu)選為是40~150kGy。當上述伽馬射線為20~500kGy的范圍時，具有無脂肪組織的變性地使核酸等被失活，從而抑制免疫性并去除細菌的效果。并且，本發(fā)明可根據(jù)上述伽馬射線照射時間的照射量而不同，例如，當以80kGy照射時，實施90~100小時的照射，當以120kGy照射時，實施110~120小時的照射。
[0064]上述伽馬射線照射可以低溫狀態(tài)進行處理，優(yōu)選為是保持_60°C~10°C并進行處理。
[0065]在以低溫狀態(tài)處理時，可利用冷能儲存材料，作為此例，在進行低溫處理時，將選自低溫的干冰、異丙醇(isoprophyl alchol)、冰、低溫的水凝膠及低溫金屬塊等冷能儲存材料中的一種以上的材料放置于伽馬射線照射空間內，以保持低溫。如果為干冰，溫度下降會較大，在通過上述干冰進行低溫處理的情況下，可在約-60°C左右進行低溫處理。在低溫處理時，為了避免脂肪組織與冷能材料直接接觸，優(yōu)選地放入容器等密閉處理。
[0066]并且，本發(fā)明在采集的步驟中，可以利用可進行伽馬射線處理的注射器容器。在通過上述可進行伽馬射線處理的注射器容器采集脂肪組織時，優(yōu)點是，在進行伽馬射線處理時無需移送至其它容器，易于采集的同時能夠持續(xù)地保持密閉的狀態(tài)。
[0067]并且，本發(fā)明可通過密閉的容器包裝采集的脂肪組織，上述包裝可直接利用采集脂肪組織并盛放的容器，并且可以是可進行伽馬射線處理的容器。并且，上述容器可實現(xiàn)與外部的密閉，并可包括連接蓋，用于實現(xiàn)開閉及與外部的其它容器連接。上述連接蓋可包括一個以上。上述連接蓋的優(yōu)選的數(shù)目是I~2個。
[0068]作為上述可包裝的容器材料，優(yōu)選為是可進行伽馬射線處理的材料，作為這樣的材料，可使用選自聚碳酸酯PC、聚丙烯PP、聚氯乙烯PVC、聚乙烯對苯二甲酯PET及玻璃等組成的群中的一種。上述可進行伽馬射線處理的材料的厚度優(yōu)選為是0.3至3mm，在玻璃的情況下，優(yōu)選為是I~15mm。在上述范圍容易進行密閉及伽馬射線處理，并且移動性及儲存性也容易。
[0069]并且，上述容器可通過雙重以上的包裝實現(xiàn)密閉。優(yōu)選為是以雙重或三重進行包裝。以雙重以上的包裝進行密閉的理由是，為了應對長途移動或長期保存時最外部包裝可能會被破損的情況，按一定間隔以雙重以上進行包裝，以用于外部包裝的消毒。
[0070]另外，在將上述容器以雙重以上包裝的情況下，其中一層以上包裝可以由可防止自然光透射的材料構成。通過由自然光非透射材料構成，以防止自然光從外部滲透到容器內并可能對脂肪組織產(chǎn)生影響的可能性。
[0071]對于上述自然光非透射材料，作為非限定性的例可使用鋁等金屬材料。
[0072]并且，本發(fā)明的一實施例中的活體脂肪材料可進行粉碎，上述粉碎可在伽馬射線照射之前或伽馬射線照射之后粉碎，或也可在伽馬射線照射之前及照射之后粉碎。
[0073]脂肪組織的粉碎是為了通過粉碎而分離出上述脂肪組織中的諸如脂質或油等不必要的物質。
[0074]另外，在伽馬射線照射后，可包括將脂肪組織進行離心分離的步驟。將脂肪組織進行離心分離是為了在脂肪移植時將不必要的物質進行分離并去除。即，用于將脂質、油、水等與作為移植所需成分的細胞外基質物質ECM進行分離。即，分離去除脂肪內存在的諸如三酰甘油(triacylglycerol)、固醇酯(sterol ester)的脂質、油(oil)及水等,并可萃取出脂肪組織中存在的細胞外基質物質(Extra Cellular Matrix (ECM))。
[0075]上述細胞外基質物質ECM是在組織中除細胞以外的其余成分，其由細胞分泌的多種結構性功能性分子的三維組合構成，并且無法人工制備。上述細胞外基質物質通過構成組織的形態(tài)，決定組織的物理性質，即，壓縮強度和彈性等，調節(jié)滲透壓、離子的透過等，起到保持細胞的環(huán)境的重要作用。
[0076]并且，細胞外基質物質ECM除了有助于細胞的附著以外，對其成長也會產(chǎn)生影響，因此，在將去除免疫性的上述細胞外基質物質移植于他人等時，細胞可被附著并成長，從而能夠作為移植材料來使用。
[0077]另外，所采集的脂肪組織可選擇性地在伽馬射線照射之前進行冷凍。增加上述冷凍步驟的理由在于，通過冷凍脂肪組織，能夠長期無腐壞地儲存脂肪組織，并可實現(xiàn)長途移動。
[0078]對于上述冷凍的脂肪組織，可通過實施伽馬射線照射以滅菌及去除免疫性后進行解凍。
[0079]并且，本發(fā)明的活體脂肪材料還可選擇性地包括脂質去除步驟。為了去除脂質，除了利用如上所述的離心分離以外，還可在離心分離之前增加去除脂質的過程。
[0080]作為去除脂質的方法，可通過多種方法進行去除。
[0081]首先，可利用形成有微細結構的固體材料，以利用基于脂質的表面張力的滲透壓現(xiàn)象來吸收脂質。作為上述固體材料的例，可利用紙漿、濾紙、海綿等，通過接觸脂質來將其吸收于固體材料后進行去除。
[0082]作為去除脂質的另一方法，可使用水溶性材料，其在脂肪組織的固形成分表面與脂質競爭性地結合而使脂質脫離。作為其例，可利用水、酒精等，通過將水或酒精混合于脂肪組織，使脂質與其它固形成分脫離而進行分離。
[0083]作為去除脂質的又一方法，在脂肪組織內，通過在接觸的狀態(tài)下誘發(fā)組織之間的相對移動來提高相互接觸機會的手段，能夠分離出脂質并去除。作為其例，可利用振動的方法、旋轉的方法、通過傾斜面旋轉的方法、以一定區(qū)間循環(huán)的方法、振蕩的方法等。
[0084]除此之外，可在可溶解脂質的有機溶劑中進行溶解而去除脂質。
[0085]如上制備的活體脂肪組織可再次進行再包裝而保存或移動，并且，可將活體脂肪材料移植于患者等而使用。
[0086]在通過如上所述的方法取得的本發(fā)明的活體脂肪材料作為移植材料使用于人體時，其免疫性被去除而不會發(fā)生壞死等，可長期保存且保持原有的細胞膜等微細結構，因此，可作為移植用材料使用。并且，通過粉碎及離心分離來去除脂質，將具有可使細胞附著的表面積，因此，可起到細胞培養(yǎng)用支撐體的作用。
[0087]用于實施發(fā)明的方式
[0088]以下，對本發(fā)明的實施例進行詳細的說明。
[0089]實施例1
[0090]利用注射器從人的身體采集脂肪組織后，實施了伽馬射線照射。上述注射器是可進行伽馬射線處理的注射器，對采集的注射器直接照射了伽馬射線。上述伽馬射線以120kGy照射了約120小時。在上述照射時，為了進行低溫處理，在注射器外部接觸冰塊并進行了照射。在上述伽馬射線照射后，以3500rpm離心分離了 5分鐘，分離去除水、油(oil)及脂質而完成了活體脂肪材料。
[0091]利用完成的活體脂肪材料實施了動物實驗，注入給9只實驗用小鼠并觀察了過程。
[0092]實施例2
[0093]利用注射器從人體采集脂肪組織后，首先實施了粉碎。被粉碎的脂肪組織放入可進行伽馬射線處理的包裝容器并照射了伽馬射線。上述伽馬射線以SOkGy照射了約90小時。在上述照射時，為了進行低溫處理，在注射器外部接觸冰塊并進行了照射。在上述伽馬射線照射后，以3500rpm離心分離了 5分鐘，分離去除水、油(oil)及脂質而完成了活體脂肪材料。
[0094]利用完成的活體脂肪材料實施了動物實驗，注入給9只實驗用小鼠并觀察了過程。
[0095]比較例I
[0096]利用注射器從人體采集脂肪組織后，不實施伽馬射線照射，以3500rpm離心分離了 5分鐘，分離去除水、油(oil)及脂質而完成了活體脂肪材料。
[0097]利用完成的活體脂肪材料實施了動物實驗，注入給9只實驗用小鼠并觀察了過程。
[0098]比較例2[0099]利用注射器從人體采集脂肪組織后，實施了粉碎。在進行粉碎后，不實施伽馬射線照射，以3500rpm離心分離了 5分鐘，分離去除水、油(oil)及脂質而完成了活體脂肪材料。
[0100]利用完成的活體脂肪材料實施了動物實驗，注入給9只實驗用小鼠并觀察了過程。
[0101]圖2及圖3是將本發(fā)明的實施例1及實施例2的活體脂肪材料移植于實驗用小鼠后按日期觀察的照片，圖4是將本發(fā)明的實施例1及實施例2的活體脂肪材料移植于實驗用小鼠的4周后切除移植的部位的照片。
[0102]圖5及圖6是將比較例I及比較例2的活體脂肪材料移植于實驗用小鼠后按日期觀察的照片，圖7是本發(fā)明的比較例I及比較例2的活體脂肪材料移植于實驗用小鼠的4周后切除移植的部位的照片。[0103]首先，參照圖5及圖6，由于活體脂肪材料的免疫性未被去除的結果，在注入給實驗用小鼠的情況下，第8天觀察到發(fā)生壞死及傷口，第12天可確認壞死加以惡化。這可以認為是，所注入的材料在小鼠的身體內被識別為是非自身細胞而被破壞。被破壞的細胞在之后還會發(fā)生被治愈的情況(參照圖6的第33天照片)。
[0104]并且，雖未通過圖示表達，在將比較例I及比較例2的活體脂肪材料注入給9只小鼠的情況下，確認出第12天在9只小鼠上全部發(fā)生了壞死。
[0105]并且，參照圖7，其示出將注入給小鼠的活體脂肪材料經(jīng)過4周后進行切除并觀察，可確認出初始注入的形態(tài)全部被消失。在所移植的部位的皮膚觀察到小的壞死，在皮膚內側，所移植的脂肪被分解而沒了形狀。
[0106]與此相比，可確認出本發(fā)明的活體脂肪材料適合作為移植材料。
[0107]參照圖2及圖3，由于本發(fā)明的活體脂肪材料去除了免疫性，即使是注入給實驗用小鼠，也未被作用為抗原，因此不會發(fā)生壞死，并占據(jù)了一定的體積而得到固定。
[0108]即，可確認根本未發(fā)生壞死及傷口，并以所注入的形態(tài)保持了實驗用小鼠的外部形狀。
[0109]并且，參照圖4，其示出將注入給小鼠的活體脂肪材料經(jīng)過4周后進行切除并觀察，可確認出初始注入的形態(tài)基本得到保持，并保持了 90%以上的形狀。
[0110]基于此，可確認本發(fā)明的活體脂肪材料的免疫性被去除，并且?guī)缀鯚o變形地保持形狀，因此，可認為是適合作為移植材料。
[0111]以上所述的本發(fā)明并不限定于前述的實施例及所附的附圖，本發(fā)明所屬的【技術領域】的技術人員應當理解，在不超出本發(fā)明的技術思想的范圍內，可進行多種置換、變形及變更。
【權利要求】
1.一種去除免疫性的活體脂肪組織制備方法，其包括: 采集脂肪組織的步驟； 將所述脂肪組織以20~500kGy的伽瑪(Y )射線進行照射的步驟；以及， 將所述被伽馬射線照射的脂肪組織進行離心分離的步驟。
2.根據(jù)權利要求1所述的去除免疫性的活體脂肪組織制備方法，其中，伽馬射線照射以-60°C~10°C的低溫進行處理。
3.根據(jù)權利要求2所述的去除免疫性的活體脂肪組織制備方法，其中，在低溫處理時，將干冰、低溫的異丙醇(i sopr ophy I a I cho I )、冰、低溫的水凝膠及低溫金屬塊的冷能儲存材料中的一種以上材料放置于伽馬射線照射空間內，以保持低溫。
4.根據(jù)權利要求1所述的去除免疫性的活體脂肪組織制備方法，其中，所述采集脂肪組織的步驟中，利用可進行伽馬射線處理的注射器容器進行采集。
5.根據(jù)權利要 求1所述的去除免疫性的活體脂肪組織制備方法，在所述采集脂肪組織的步驟后還包括進行包裝以密閉的步驟， 所述包裝直接利用采集脂肪組織并盛放的容器，其可進行伽馬射線處理，所述容器包括可進行開閉及連接的連接蓋。
6.根據(jù)權利要求5所述的去除免疫性的活體脂肪組織制備方法，其中，所述容器是使用聚碳酸酯PC、聚丙烯PP、聚氯乙烯PVC、聚乙烯對苯二甲酯PET及玻璃中的一種以上的可進行伽馬射線處理的材料。
7.根據(jù)權利要求5所述的去除免疫性的活體脂肪組織制備方法，其中，所述容器為雙重以上的包裝，可進行密閉。
8.根據(jù)權利要求7所述的去除免疫性的活體脂肪組織制備方法，其中，在所述雙重以上的包裝時，其中一層以上的包裝由可防止自然光透射的材料構成。
9.根據(jù)權利要求1所述的去除免疫性的活體脂肪組織制備方法，還包括: 在所述伽馬射線照射之前或伽馬射線照射之后進行粉碎，或是在伽馬射線照射之前及照射之后進行粉碎的步驟。
10.根據(jù)權利要求1所述的去除免疫性的活體脂肪組織制備方法，其中，在所述采集步驟后進行冷凍，并在伽馬射線照射后進行解凍。
11.根據(jù)權利要求1所述的去除免疫性的活體脂肪組織制備方法，在伽馬射線照射后還包括脂質去除步驟。
12.—種去除免疫性的活體脂肪材料，其通過對采集的脂肪組織以20~500kGy的伽瑪(Y )射線進行照射及離心分離而取得。
13.根據(jù)權利要求12所述的去除免疫性的活體脂肪材料，其中，伽馬射線照射是以-60°C~10°C的低溫進行處理。
14.根據(jù)權利要求13所述的去除免疫性的活體脂肪材料，其中，在低溫處理時，將干冰、低溫的異丙醇(i sopr ophy I a I cho I )、冰、低溫的水凝膠及低溫金屬塊的冷能儲存材料中的一種以上材料放置于伽馬射線照射空間內，以保持低溫。
15.根據(jù)權利要求12所述的去除免疫性的活體脂肪材料，其中，利用可進行伽馬射線處理的注射器容器來采集脂肪組織。
16.根據(jù)權利要求12所述的去除免疫性的活體脂肪材料，其中，在采集所述脂肪組織后進行包裝以密閉， 所述包裝直接利用采集脂肪組織并盛放的容器，其可進行伽馬射線處理，所述容器包括可進行開閉及連接的連接蓋。
17.根據(jù)權利要求16所述的去除免疫性的活體脂肪材料，其中，所述容器是使用聚碳酸酯PC、聚丙烯PP、聚氯乙烯PVC、聚乙烯對苯二甲酯PET及玻璃中的一種以上的可進行伽馬射線處理的材料。
18.根據(jù)權利要求16所述的去除免疫性的活體脂肪材料，其中，所述容器為雙重以上的包裝，可進行密閉。
19.根據(jù)權利要求18所述的去除免疫性的活體脂肪材料，其中，在所述雙重以上的包裝時，其中一層以上的包裝由可防止自然光透射的材料構成。
20.根據(jù)權利要求12所述的去除免疫性的活體脂肪材料，還包括: 在所述伽馬射線照射之前或伽馬射線照射之后進行粉碎，或是在伽馬射線照射之前及照射之后進行粉碎。
21.根據(jù)權 利要求12所述的去除免疫性的活體脂肪材料，其中，在所述采集后進行冷凍，并在伽馬射線照射后進行解凍。
22.根據(jù)權利要求12所述的去除免疫性的活體脂肪材料，其中，在伽馬射線照射后還包括脂質去除。
【文檔編號】C12N7/00GK103958671SQ201280051133
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2012年10月17日 優(yōu)先權日:2011年10月17日
【發(fā)明者】李喜永, 梁賢珍 申請人:李喜永