專利名稱：防治齲齒甘蔗葉提取物和制劑的制備及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種用于防治齲齒的甘蔗葉提取物及其提取工藝，還涉及甘蔗葉提取物在制備藥物、功能性食品和化工用品中的應用。
背景技術：
甘鹿(Saccharum sinensis Roxb.)為禾本科多年生甘鹿屬植物,廣泛種植于1600米以下溫帶及熱帶地區。近年，我國甘蔗總產量達上億噸，其中廣西甘蔗產量占全國一半以上。甘蔗在我國種植歷史悠久，除用于制糖外，我國用甘蔗汁、皮、渣治病已有上千年歷史，據《本草綱目》記載“鹿，脾之果也，其漿甘寒，能瀉火熱。”，中醫認為本品味甘性涼，有清熱生津、潤燥解酒等功效，可用于熱病津傷、心煩口渴、反胃嘔吐、肺燥咳嗽、大便燥結等癥。我 國種植甘蔗主要用于生產蔗糖，然而占甘蔗15 %的甘蔗葉除部分用于牲畜飼料外，其余大部分就地被焚燒，既污染環境又浪費資源。研究表明，甘蔗葉含有豐富的化學成分，具有重要的經濟價值和廣泛的藥理作用，如抑菌、抗氧化、抗腫瘤及抗疲勞調解免疫等藥理活性。甘蔗葉資源豐富，若進行深入研究和開發利用其藥用價值，不僅使蔗農獲得經濟效益，還能緩解中草藥資源缺乏問題，促進中草藥資源的可持續發展。

發明內容
本發明目的是提供一種從甘蔗葉中提取抗齲齒活性成分的方法，提取工藝利用高效的分離技術，所用填料大孔吸附樹脂和聚酰胺均能循環再生。本發明解決了農作物廢棄物甘蔗葉的循環利用，避免了具有藥用價值甘蔗葉的浪費。本發明人通過對甘蔗葉的研究，發現甘蔗葉經本發明方法分離得到的提取物具有明顯的抗齲齒作用，藥效試驗研究表明本發明甘蔗葉提取物對口腔中致齲齒變異鏈球菌和粘性放線菌均有明顯的抑制作用。本發明中的甘蔗葉提取物，其制備方法如下1、制備方法(I)制備方法一取甘蔗葉，洗凈、干燥、粉碎，經常規提取、濃縮，濃縮液首先以水或含水低級醇為洗脫劑上聚酰胺柱洗脫，再以無水或含水低級醇為洗脫劑，得醇洗脫液，洗脫液減壓濃縮，干燥，得甘蔗葉提取物。制備方法說明所述的常規提取方法包括但不限于水浸提、水煎煮、醇浸提、醇回流提取、醇滲漉。所述的常規濃縮方法包括但不限于常壓濃縮、減壓濃縮、反滲透濃縮。所述的干燥包括但不限于噴霧干燥、冷凍干燥。優選的，當洗脫劑均采用含水低級醇時，作為第一次洗脫劑的低級醇的濃度低于作為第二次洗脫劑的低級醇的濃度。優選的，作為第二次洗脫劑的低級醇為乙醇；更優的，低級醇為乙醇；最佳的，所述的低級醇為乙醇且作為第二次洗脫劑的濃度為30 100%乙醇。(2)制備方法二取甘蔗葉，洗凈、干燥、粉碎，經常規提取、濃縮，濃縮液首先以水或含水低級醇為洗脫劑上聚酰胺柱洗脫，再以無水或含水低級醇為洗脫劑，得醇洗脫液，將洗脫液濃縮；之后，濃縮液再上聚酰胺柱首先以水或含水低級醇為洗脫劑，再以無水或含水低級醇為洗脫齊 ，得醇洗脫液，將洗脫液濃縮，干燥，得甘蔗葉提取物。制備方法說明所述的常規提取方法包括但不限于水浸提、水煎煮、醇浸提、醇回流提取、醇滲漉?！に龅某Ｒ帩饪s方法包括但不限于常壓濃縮、減壓濃縮、反滲透濃縮。所述的干燥包括但不限于噴霧干燥、冷凍干燥。優選的，對于上一次聚酰胺柱而言，當洗脫劑均采用含水低級醇時，作為第一次洗脫劑的低級醇的濃度低于作為第二次洗脫劑的低級醇的濃度。優選的，對于上一次聚酰胺柱而言，作為第二次洗脫劑的低級醇為乙醇；更優的，低級醇為乙醇；最佳的，所述的低級醇為乙醇且作為第二次洗脫劑的濃度為30 100%乙醇。(3)制備方法三取甘蔗葉，洗凈、干燥、粉碎，經常規提取、濃縮，濃縮液首先以水或含水低級醇為洗脫劑上大孔吸附樹脂柱洗脫，再以無水或含水低級醇為洗脫劑，得醇洗脫液，將洗脫液濃縮；之后，濃縮液再上聚酰胺柱首先以水或含水低級醇為洗脫劑，再以無水或含水低級醇為洗脫劑，得醇洗脫液，將洗脫液濃縮，干燥，得甘蔗葉提取物。制備方法說明所述的常規提取方法包括但不限于水浸提、水煎煮、醇浸提、醇回流提取、醇滲漉。所述的常規濃縮方法包括但不限于常壓濃縮、減壓濃縮、反滲透濃縮。所述的干燥包括但不限于噴霧干燥、冷凍干燥。優選的，大孔吸附樹脂柱為AB-8。優選的，對于上大孔吸附樹脂柱而言，當洗脫劑均采用含水低級醇時，作為第一次洗脫劑的低級醇的濃度低于作為第二次洗脫劑的低級醇的濃度。優選的，對于上大孔吸附樹脂柱而言，作為第二次洗脫劑的低級醇為乙醇；更優的，低級醇為乙醇；最佳的，所述的低級醇為乙醇且作為第二次洗脫劑的濃度為10 70%乙醇。優選的，對于上聚酰胺柱而言，當洗脫劑均采用含水低級醇時，作為第一次洗脫劑的低級醇的濃度低于作為第二次洗脫劑的低級醇的濃度。優選的，對于上聚酰胺柱而言，作為第二次洗脫劑的低級醇為乙醇；更優的，低級醇為乙醇；最佳的，所述的低級醇為乙醇且作為第二次洗脫劑的濃度為30 100%乙醇。(4)制備方法四·取甘蔗葉，洗凈、干燥、粉碎，經常規提取、濃縮，濃縮液首先以水或含水低級醇為洗脫劑上聚酰胺柱洗脫，再以無水或含水低級醇為洗脫劑，得醇洗脫液，將洗脫液濃縮；之后，濃縮液再上大孔吸附樹脂柱首先以水或含水低級醇為洗脫劑，再以無水或含水低級醇為洗脫劑，得醇洗脫液，將洗脫液濃縮，干燥，得甘蔗葉提取物。
制備方法說明所述的常規提取方法包括但不限于水浸提、水煎煮、醇浸提、醇回流提取、醇滲漉。所述的常規濃縮方法包括但不限于常壓濃縮、減壓濃縮、反滲透濃縮。所述的干燥包括但不限于噴霧干燥、冷凍干燥。優選的，對于上聚酰胺柱而言，當洗脫劑均采用含水低級醇時，作為第一次洗脫劑的低級醇的濃度低于作為第二次洗脫劑的低級醇的濃度。優選的，對于上聚酰胺柱而言，作為第二次洗脫劑的低級醇為乙醇；更優的，低級醇為乙醇；最佳的，所述的低級醇為乙醇且作為第二次洗脫劑的濃度為30 100%乙醇。優選的，大孔吸附樹脂柱為AB-8。 優選的，對于上大孔吸附樹脂柱而言，當洗脫劑均采用含水低級醇時，作為第一次洗脫劑的低級醇的濃度低于作為第二次洗脫劑的低級醇的濃度。優選的，對于上大孔吸附樹脂柱而言，作為第二次洗脫劑的低級醇為乙醇；更優的，低級醇為乙醇；最佳的，所述的低級醇為乙醇且作為第二次洗脫劑的濃度為10 70%乙醇。2、甘蔗葉提取物的一些制備方法實施例實施例1提取工藝取甘蔗葉，洗凈、干燥、粉碎，用70%乙醇水溶液回流提取二次，料液比為1: 8 1: 10，提取溫度80°C，每次提取2h，合并提取液，過濾，濾液濃縮至無醇味；濃縮液用石油醚脫脂，直至石油醚萃取部分無色，繼續濃縮得甘蔗葉浸膏。分離工藝甘蔗葉浸膏加入適量蒸餾水稀釋，上樣于預處理好的處理好的聚酰胺柱，先用3倍柱體積的蒸餾水洗脫；第二步用10倍量柱體積30% -70%的乙醇洗脫；第三步用5倍量柱體積95%乙醇洗脫，得醇洗脫液，干燥，得到甘蔗葉提取物。實施例2提取工藝取甘蔗葉，洗凈、干燥、粉碎，用70%乙醇水溶液回流提取二次，料液比為1: 8 1: 10，提取溫度80°C，每次提取2h，合并提取液，過濾，濾液濃縮至無醇味；濃縮液用石油醚脫脂，直至石油醚萃取部分無色，繼續濃縮得甘蔗葉浸膏。分離工藝甘蔗葉浸膏加入適量蒸餾水稀釋，上樣于預處理好的聚酰胺柱，先用3倍柱體積的水洗脫，再用10倍柱體積的70%乙醇洗脫，收集合并70%乙醇洗脫液，濃縮回收溶劑至1/10體積；70 %洗脫濃縮液上樣于預處理好的聚酰胺柱，首先用3倍柱體積的蒸餾水洗脫；第二步用10倍量柱體積30% -70%的乙醇洗脫；第三步用5倍量柱體積95%乙醇洗脫，得醇洗脫液，干燥，得到甘蔗葉提取物。實施例3提取工藝取甘蔗葉，洗凈、干燥、粉碎，用70%乙醇水溶液回流提取二次，料液比為1: 8 1: 10，提取溫度80°C，每次提取2h，合并提取液，過濾，濾液濃縮至無醇味；濃縮液用石油醚脫脂，直至石油醚萃取部分無色，繼續濃縮得甘蔗葉浸膏。分離工藝甘蔗葉浸膏加入適量蒸餾水稀釋，上樣于預處理好的AB-8大孔吸附樹脂柱，先用3倍柱體積的水洗脫，再用5倍柱體積10%乙醇洗脫，最后用3倍柱體積的70%乙醇洗脫，收集合并70%乙醇洗脫液，濃縮回收溶劑至1/10體積；甘蔗葉大孔吸附樹脂70%洗脫濃縮液上樣于預處理好的聚酰胺柱，首先用3倍柱體積的蒸餾水洗脫；第二步用10倍量柱體積30% -70%的乙醇洗脫；第三步用5倍量柱體積95%乙醇洗脫，得醇洗脫液，干燥，得到甘蔗葉提取物。實施例4提取工藝取甘蔗葉，洗凈、干燥、粉碎，用70%乙醇水溶液回流提取二次，料液比為1: 8 1: 10，提取溫度80°C，每次提取2h，合并提取液，過濾，濾液濃縮至無醇味；濃縮液用石油醚脫脂，直至石油醚萃取部分無色，繼續濃縮得甘蔗葉浸膏。分離工藝甘蔗葉浸膏加入適量蒸餾水稀釋，上樣于預處理好的聚酰胺柱，首先用3倍柱體積的蒸餾水洗脫；第二步用10倍量柱體積30% -70 %的乙醇洗脫；第三步用5倍量柱體積95%乙醇洗脫，得醇洗脫液，濃縮回收溶劑至1/10體積；濃縮液上樣于預處理好的AB-8大孔吸附樹脂柱，先用3倍柱體積的水洗脫，再用5倍柱體積10%乙醇洗脫，最后用3倍柱體積的70%乙醇洗脫，收集合并70%乙醇洗脫液，干燥，得到甘蔗葉提取物。 本發明中甘蔗葉提取物的不同制劑，其制備方法如下1、制備方法取上述制備方法制得的甘蔗葉提取物，按常規方法加入輔料，制成不同的制劑。2、甘蔗葉提取物不同制劑的一些劑型制備方法實施例實施例1甘蔗葉抗齲齒口含片制備將甘蔗葉提取物與賦形劑、矯味劑、粘合劑一起混勻，用造粒機造粒并烘干制成顆粒，再加入潤滑劑，用壓片機壓片成形，片劑送入包衣機進行打光包衣，即得甘蔗葉抗齲齒含片。實施例2甘蔗葉抗齲齒口香糖制備將膠基質在45°C -60°C的溫度下熔融，加入乳化劑、矯味劑、保濕劑一起充分攪拌混勻，待溫度降到40°C時，再加入甘蔗葉提取物攪拌混勻，入模、壓片、切片、成型，即得甘蔗葉抗齲齒口香糖。實施例3甘蔗葉抗齲齒口含滴丸制備將甘蔗葉提取物與賦形劑、矯味劑、粘合劑一起混勻，用造粒機造粒并烘干制成顆粒，干燥，加入熔融的基質中，攪勻，滴入冷凝劑中，取出滴丸，洗除冷凝劑，干燥，即得甘蔗葉抗齲齒口含滴丸。實施例4甘蔗葉抗齲齒口腔泡騰片制備將甘蔗葉提取物與填充劑、矯味劑、粘合劑一起混勻，用造粒機造粒并烘干制成顆粒，再加入潤滑劑，用壓片機壓片成形，片劑送入包衣機進行打光包衣，即得甘蔗葉抗齲齒口腔泡騰片。實施例5甘蔗葉抗齲齒牙膏制備將甘蔗葉提取物與保濕劑、水、糖精、磷酸二氫鈉、色素、增稠劑、摩擦劑、發泡劑和香精混合，攪拌均勻并脫氣，制成膏體，分裝即得甘蔗葉抗齲齒牙膏。藥理實施例將變異鏈球菌和粘性放線菌接種于BHI培養液中，放置厭氧培養袋，于37°C恒溫培養18h，在722分光光度計下比濁，用生理鹽水調0D550nm值至1. 0，備用。用無菌腦心浸液培養基(BHI) 二倍稀釋法將甘蔗葉提取物制備成16mg/ml，8mg/ml, 4mg/ml, 2mg/ml, lmg/ml, O. 5mg/ml, 0. 25mg/ml的藥物稀釋液。將已制備的變異鏈球菌和粘性放線菌細菌懸液與各組藥液按1:1比例，各100 μ I分別接種于96孔板，同時設立溶劑對照組(DMSO)，用震蕩器震蕩Imin后，放入厭氧袋于80 % Ν2，20% C02，37°C恒溫培養24H。以培養液中無細菌生長的最低稀釋濃度為最低抑菌濃度(MIC)。選取給藥濃度大于MIC的各孔，分別取20 μ I涂布于BHI固體培養基上，相同條件下培養24Η，觀察菌落數少于5-6個的最低濃度為最低殺菌濃度(MBC)。實驗結果表明，甘蔗葉提取物對變異鏈球菌和粘性放線菌最低抑制濃度(MIC)為lmg/ml ο最低殺菌濃度(MBC)為4mg/ml。 本實驗研究證實，甘蔗葉中有多種有效抑菌成分，對口腔常見致齲齒菌均有抑制作用，甘蔗葉提取物對變異鏈球菌和粘性放線菌抑菌和殺菌效果與茶多酚效果相當。
權利要求
1.一種甘蔗葉提取物的制備及其作為預防和治療齲齒的藥物、功能性食品和化工用品的應用，其中所述的甘蔗葉提取物是按以下方法制備的將甘蔗葉粉碎，以水或低級醇為溶齊 ，提取、濃縮，經大孔樹脂柱和聚酸胺柱分離，收集洗脫液，干燥后得到甘蔗葉提取物。該提取物中含有多糖2-10%，總黃酮1-2%。
2.按權利要求1所述的甘蔗葉提取物，其特征在于，所述的上聚酰胺柱的步驟為(I) 以水或含水低級醇為洗脫劑上柱洗脫；(2)以無水或含水低級醇為洗脫劑，得醇洗脫液。
3.按權利要求1所述的甘蔗葉提取物，其特征在于，分離步驟還包括在提取液上聚酰胺柱之前上大孔吸附樹脂柱。
4.按權利要求1所述的甘蔗葉提取物，其特征在于，分離步驟還包括在提取液上聚酰胺柱之后再上大孔吸附樹脂柱或聚酰胺柱。
5.按權利要求3或4所述的甘蔗葉提取物，其特征在于，上大孔吸附樹脂的步驟為(I)以水或含水低級醇為洗脫劑上柱洗脫；(2)以無水或含水低級醇為洗脫劑，得醇洗脫液。
6.按權利要求1所述的甘蔗葉提取物，其特征在于，當洗脫劑均采用含水低級醇時，作為第一次洗脫劑的低級醇的濃度低于作為第二次洗脫劑的低級醇的濃度。
7.按權利要求1所述的甘蔗葉提取物，其特征在于，作為第二次洗脫劑的低級醇為乙醇。
8.按權利要求7所述的甘蔗葉提取物，其特征在于，所述的乙醇濃度為30 100%。
9.按權利要求5所述的甘蔗葉提取物，其特征在于，所述的大孔吸附樹脂為ΑΒ-8。
10.按權利要求5所述的甘蔗葉提取物，其特征在于，當洗脫劑均采用含水低級醇時， 作為第一次洗脫劑的低級醇的濃度低于作為第二次洗脫劑的低級醇的濃度。
11.按權利要求5所述的甘蔗葉提取物，其特征在于，作為第二次洗脫劑的低級醇為乙醇。
12.按權利要求11所述的甘蔗葉提取物，其特征在于，所述的乙醇濃度為10 100%。
全文摘要
本發明涉及一種用于防治齲齒的甘蔗葉提取物及其制備方法、不同制劑的制備方法和應用，其中包括用于預防和治療齲齒的甘蔗葉提取物，甘蔗葉提取物的提取工藝，甘蔗葉提取物制備成防治齲齒產品(包括藥物、功能性食品、化工產品)及其應用。本發明以農作物廢棄物甘蔗葉為原料，無毒副作用，成本低，工藝完整，療效確切，適宜推廣應用。
文檔編號A23L1/29GK103007090SQ20131001478
公開日2013年4月3日 申請日期2013年1月16日 優先權日2013年1月16日
發明者侯小濤, 鄧家剛, 廖澤勇, 黃慧學 申請人:廣西中醫藥大學