專利名稱：：一種果蔬中不可萃取多酚的堿性制備方法
技術領域：
：本發明涉及一種果蔬中不可萃取多酚的堿性制備方法，屬于食品深加工
技術領域：
。技術背景多酚是一類廣泛存在于植物體內的多元酚化合物，廣泛存在于植物的皮、根、葉、果中，含量可達20%，是植物的次生代謝產物，屬于天然有機化合物。多酚類物質被稱為“第七類營養素”，主要包括黃酮類、單寧類、酚酸類以及花色苷類等幾大類，研究證明多酚具有很強的消除有害自由基的作用，具有延緩衰老、抗輻射作用、抗菌、殺菌等多種功效。多酚的萃取分離方法很多，由于其組成復雜，聚合度不同，以及原料結構性質的差異等諸多因素影響，到目前沒有一種方法完全適于所有多酚的萃取。常用的萃取溶劑有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸、乙酸乙酯、丁醇、水等。目前對果蔬中多酚的研究主要集中在可萃取多酌.(extractable/solublepolyphenols),而很少關注不可萃取多酌.(non-extractable/insolublepolyphenols),在大多文獻包括外文文獻中有關總多酹含量的概念也僅僅是指可萃取部分，而忽略了不可萃取部分，實際上總多酚含量是指可萃取多酚與不可萃取多酚的總和，這正是目前從事活性成分提取的科研工作者所忽視的。Arranz等指出不可萃取多酹主要指一些水合丹寧酸(hydrolyzabletannins)以及與纖維或蛋白結合的原花青素(proanthocyanindins),這需要通過化學或酶處理方法將多酹從細胞壁上分離出來。實際上有關不可萃取多酚早在1973年就有研究，但由于缺乏合適的分析研究方法，一直沒有引起人們的注意。從2007年,西班牙Saura-Calixto領導的研究小組開始關注并研究不可萃取多酚，以谷類、蔬菜、豆類、水果、堅果為實驗材料，研究表明這些材料中含有大量的不可萃取多酚，其含量遠遠超過可萃取多酚，其中蘋果、桃子及油桃中不可萃取的多酚含量是可萃取多酚的5倍以上。Madhujith等采用堿水解的方式研究了大麥中可萃取和不可萃取多酚的含量及其抗氧化性，結果表明不可萃取多酚的含量遠遠高于可萃取多酚，相應的不可萃取多酚的抗氧化性也明顯高于可萃取多酚。Kristl等研究指出，李子中的不可萃取多酚含量也遠遠高于可萃取多酚，在抗氧化作用中的貢獻也遠遠大于可萃取部分。目前從果蔬中提取不可萃取多酚是采用硫酸進行加熱水解的方法。雖然有文獻提出可以用NaOH進行堿水解的方法來提取不可萃取多酚；但是沒有公開用NaOH進行堿水解提取不可萃取多酚的具體的步驟、工藝條件、工藝參數。
發明內容本發明的目的在于提供一種果蔬中不可萃取多酚的堿性制備方法。本發明的技術方案:一種果蔬中不可萃取多酚的堿性制備方法，包括下述步驟:(O收集萃取多酚之后的果蔬殘渣；(2)向果蔬殘渣中加0.l-4mol/L的NaOH溶液進行超聲萃取，然后離心分離、收集上清液，得不可萃取多酚粗提液；果蔬殘渣與NaOH水溶液的比例為Ig:5-30ml；(3)不可萃取多酚粗提液用乙酸乙酯萃取，得不可萃取多酚萃取液；(4)將不可萃取多酚萃取液用大孔樹脂純化、干燥，得不可萃取多酚凍干粉。步驟(I)中的多酚是指可萃取多酚。上述果蔬中不可萃取多酚的堿性制備方法，優選的，步驟(I)采用下述方式完成:將果蔬打漿后與質量濃度為50%-80%乙醇按照lg:2-6ml比例混勻，然后以200-500W超聲頻率超聲萃取l_2h，再以3000-5000r/min離心10_20min，收集果蔬殘渣。上述果蔬中不可萃取多酚的堿性制備方法，優選的，步驟(2)中，超聲萃取條件:溫度350C_50°C，功率為200-500W,時間0.5_2h;離心條件:轉速3000-5000r/min,時間10_20min；更優選的，步驟(2)中，超聲萃取條件，NaOH水溶液的濃度為lmol/L，果蔬殘渣與NaOH水溶液的比例為Ig:10ml，溫度45°C，超聲時間為lh，超聲功率500W;離心條件:轉速3000-5000r/min,時間10_20min。在此條件下,不可萃取多酹的收率最高可達65mg/g,純度可聞達40%。上述果蔬中不可萃取多酚的堿性制備方法，優選的，步驟(3)采用下述方式完成:將不可萃取多酚粗提液與等體積的乙酸乙酯混合，加熱至40°C-50°C，靜置，待分層后收集下層液，濃縮至原體積的1/3-1/5，過濾，收集濾液，得不可萃取多酚萃取液。上述果蔬中不可萃取多酚的堿性制備方法，優選的，步驟(4)采用下述方法完成:首先，將不可萃取多酚萃取液用大孔樹脂吸附；上樣濃度為2-5.0mg/ml，上樣流速為1.5-3m/min，上樣體積為4_6倍柱體積；然后，用蒸餾水洗去樹脂表面的雜物；再用質量濃度60%-90%的乙醇水溶液進行洗脫并收集洗脫液；洗脫速率為1.5-3ml/min，洗脫體積為3_5倍柱體積；最后，將洗脫液濃縮到原體積的1/3-1/5、過濾、將濾液冷凍干燥，得不可萃取多酚凍干粉。上述果蔬中不可萃取多酚的堿性制備方法，優選的，在進行步驟(2)之前，將果蔬殘渣在50-60°C條件下烘干，粉碎。上述果蔬中不可萃取多酚的堿性制備方法，優選的，所述原料為藍莓。上述果蔬中不可萃取多酚的堿性制備方法，優選的，所述大孔樹脂為HPD-100C。有益效果:1.公開了NaOH進行堿水解提取不可萃取多酚的具體步驟、工藝條件、工藝參數；2.與硫酸加熱水解提取不可萃取多酚的方法相比較，本發明具備具有操作步驟簡單、工藝條件要求低、安全性較高、生產成本低、收率高的優點；3.所獲得的不可萃取多酚純度高。具體實施方案實施例1選擇新鮮、成熟的藍莓為原料，剔除霉爛果、病蟲果及雜質并在清水中除去泥沙及漂浮物。將浙干水后的藍莓粉碎打漿，然后按照1:2.5(g/ml)的比例加入質量濃度50%乙醇水溶液，200W超聲萃取2h，3000r/min離心20min。重復提取兩次。過濾后將獲得的果渣50°C烘干，然后粉碎至60目。向果渣中按照1:10(g/mL)的料液比例加入0.5mol/L的NaOH溶液，將混合漿液在35°C條件下、200W超聲萃取2h。然后3000r/min離心20min，過濾取上清液，即為不可萃取多酚粗提液。按照1:1的體積比向上述不可萃取多酚粗提液中加入乙酸乙酯，40°C加熱混勻，靜置分層，收集下層分離液；重復萃取3次，合并下層分離液；然后濃縮至原體積的1/5，過濾，收集濾液。選用HPD-100C大孔樹脂在常溫常壓下對濾液進行吸附提純，調整上樣液的濃度為2.5mg/ml,上樣速度和流出速度均為3ml/min,體積為4倍柱體積。吸附完成后，先用蒸餾水對吸附柱進行沖，洗直到流出液無色；然后使用60%的乙醇溶液進行解吸洗脫，洗脫流速為3ml/min，洗脫體積為3倍柱體積。解吸完成后收集洗脫液進行濃縮，濃縮至原體積的30%，再過濾，將濾液冷凍干燥成粉，即為粉狀不可萃取多酚。用Folin-Ciocalteu法在765nm處測定多酚含量，測得其收率為35mg/g，純度為37%。實施例2選擇新鮮、成熟的藍莓為原料，剔除霉爛果、病蟲果及雜質并在清水中除去泥沙及漂浮物。將浙干水后的藍莓粉碎打漿，然后按照1:6(g/ml)的比例加入質量濃度80%乙醇水溶液；500W超聲萃取lh,5000r/min離心lOmin。重復提取兩次。過濾后將獲得的果渣放烘箱中60°C烘干，然后粉碎至80目。向果渣中按照1:30(g/mL)的料液比例加入2mol/L的NaOH水溶液，將混合漿液在50°C條件下、500W超聲萃取0.5h。然后5000r/min離心lOmin，過濾、取上清液，即為不可萃取多酚粗提液。按照1:1的體積比向上述不可萃取多酚粗提液中加入乙酸乙酯，50°C加熱混勻，靜置分層，收集下層分離液；重復萃取3次，合并下層分離液；然后濃縮至原體積的1/3，過濾，收集濾液。選用HPD-100C大孔樹脂在常溫常壓下對濾液進行吸附提純，調整上樣液的濃度為5.0mg/ml,上樣速度和流出速度均為5ml/3min,體積為6倍柱體積。吸附完成后，先用蒸餾水對吸附柱進行沖，洗直到流出液無色；然后使用質量濃度80%的乙醇溶液進行解吸洗脫，洗脫流速為5ml/3min，洗脫體積為5倍柱體積。解吸完成后收集洗脫液進行濃縮，濃縮至原體積的20%，再過濾，將濾液冷凍干燥成粉，即為粉狀不可萃取多酚。使用Folin-Ciocalteu法在765nm條件下測定多酚含量，測得其收率為42mg/g，純度為43%。實施例3選擇新鮮、成熟的藍莓為原料，剔除霉爛果、病蟲果及雜質并在清水中除去泥沙及漂浮物。將浙干水后的藍莓粉碎打漿，然后按照1:4(g/ml)的比例加入質量濃度50%乙醇水溶液，400W超聲萃取lh,4000r/min離心15min。重復提取兩次。過濾后將獲得的果渣50°C烘干，然后粉碎至100目。向果渣中按照1:20(g/mL)的料液比例加入lmol/L的NaOH溶液，將混合漿液在45°C條件下、500W超聲萃取2h。然后4000r/min離心15min，過濾取上清液，即為不可萃取多酚粗提液。按照1:1的體積比向上述不可萃取多酚粗提液中加入乙酸乙酯，40°C加熱混勻，靜置分層，收集下層分離液；重復萃取3次，合并下層分離液；然后濃縮至原體積的1/5，過濾，收集濾液。選用HPD-100C大孔樹脂在常溫常壓下對濾液進行吸附提純，調整上樣液的濃度為4.0mg/ml,上樣速度和流出速度均為5ml/3min,體積為5倍柱體積。吸附完成后，先用蒸餾水對吸附柱進行沖，洗直到流出液無色；然后使用70%的乙醇溶液進行解吸洗脫，洗脫流速為5ml/3min，洗脫體積為5倍柱體積。解吸完成后收集洗脫液進行濃縮，濃縮至原體積的30%，再過濾，將濾液冷凍干燥成粉，即為粉狀不可萃取多酚。使用Folin-Ciocalteu法在765nm條件下測定多酚含量，測得其收率為55mg/g，純度為44%。實施例4選擇新鮮、成熟的藍莓為原料，剔除霉爛果、病蟲果及雜質并在清水中除去泥沙及漂浮物。將浙干水后的藍莓粉碎打漿，然后按照1:6(g/ml)的比例加入質量濃度80%乙醇水溶液；500W超聲萃取lh,5000r/min離心lOmin。重復提取兩次。過濾后將獲得的果渣放烘箱中60°C烘干，然后粉碎至80目。向果渣中按照1:5(g/mL)的料液比例加入4mol/L的NaOH水溶液，將混合漿液在50°C條件下、500W超聲萃取0.5h。然后5000r/min離心lOmin，過濾、取上清液，即為不可萃取多酚粗提液。按照1:1的體積比向上述不可萃取多酚粗提液中加入乙酸乙酯，50°C加熱混勻，靜置分層，收集下層分離液；重復萃取3次，合并下層分離液；然后濃縮至原體積的1/3，過濾，收集濾液。選用HPD-100C大孔樹脂在常溫常壓下對濾液進行吸附提純，調整上樣液的濃度為5.0mg/ml,上樣速度和流出速度均為5ml/3min,體積為6倍柱體積。吸附完成后，先用蒸餾水對吸附柱進行沖，洗直到流出液無色；然后使用80%的乙醇溶液進行解吸洗脫，洗脫流速為5ml/3min，洗脫體積為5倍柱體積。解吸完成后收集洗脫液進行濃縮，濃縮至原體積的20%，再過濾，將濾液冷凍干燥成粉，即為粉狀不可萃取多酚。使用Folin-Ciocalteu法在765nm條件下測定多酚含量，測得其收率為41mg/g，純度為39%。實施例5選擇新鮮、成熟的藍莓為原料，剔除霉爛果、病蟲果及雜質并在清水中除去泥沙及漂浮物。將浙干水后的藍莓粉碎打漿，然后按照1:6(g/ml)的比例加入質量濃度80%乙醇水溶液；500W超聲萃取lh,5000r/min離心lOmin。重復提取兩次。過濾后將獲得的果渣放烘箱中60°C烘干，然后粉碎至80目。向果渣中按照1:15(g/mL)的料液比例加入0.lmol/L的NaOH水溶液，將混合漿液在50°C條件下、500W超聲萃取0.5h。然后5000r/min離心lOmin，過濾、取上清液，即為不可萃取多酚粗提液。按照1:1的體積比向上述不可萃取多酚粗提液中加入乙酸乙酯，50°C加熱混勻，靜置分層，收集下層分離液；重復萃取3次，合并下層分離液；然后濃縮至原體積的1/3，過濾，收集濾液。選用HPD-100C大孔樹脂在常溫常壓下對濾液進行吸附提純，調整上樣液的濃度為5.0mg/ml,上樣速度和流出速度均為5ml/3min,體積為6倍柱體積。吸附完成后，先用蒸餾水對吸附柱進行沖，洗直到流出液無色；然后使用80%的乙醇溶液進行解吸洗脫，洗脫流速為5ml/3min，洗脫體積為5倍柱體積。解吸完成后收集洗脫液進行濃縮，濃縮至原體積的20%，再過濾，將濾液冷凍干燥成粉，即為粉狀不可萃取多酚。使用Folin-Ciocalteu法在765nm條件下測定多酚含量，測得其收率為46mg/g，純度為44%。實施例6將新鮮的草莓、蘋果、楊梅按照實施例3的工藝進行操作，同樣可以獲得不可萃取多酚，且其收率均在40mg/g以上，純度超過40%。權利要求1.一種果蔬中不可萃取多酚的堿性制備方法，其特征在于，包括下述步驟:(1)收集萃取多酚之后的果蔬殘渣；(2)向果蔬殘渣中加0.l-4mol/L的NaOH溶液進行超聲萃取，然后離心分離、收集上清液，得不可萃取多酚粗提液；果蔬殘渣與NaOH水溶液的比例為Ig:5-30ml；(3)不可萃取多酚粗提液用乙酸乙酯萃取，得不可萃取多酚萃取液；(4)將不可萃取多酚萃取液用大孔樹脂純化、干燥，得不可萃取多酚凍干粉。2.根據權利要求1所述的果蔬中不可萃取多酚的堿性制備方法，其特征在于，步驟(I)采用下述方式完成:將果蔬打漿后與質量濃度為50%-80%乙醇按照lg:2-6ml比例混勻，然后以200-500W超聲頻率超聲萃取l-2h，再以3000_5000r/min離心10_20min，收集果蔬殘渣。3.根據權利要求1所述的果蔬中不可萃取多酚的堿性制備方法，其特征在于，步驟(2)中，超聲萃取條件:溫度350C_50°C，功率為200-500W，時間0.5_2h;離心條件:轉速3000-5000r/min，時間10_20min。4.根據權利要求1所述的果蔬中不可萃取多酚的堿性制備方法，其特征在于，步驟(3)采用下述方式完成:將不可萃取多酚粗提液與等體積的乙酸乙酯混合，加熱至40°C-50°C,靜置，待分層后收集下層液，濃縮至原體積的1/3-1/5，過濾，收集濾液，得不可萃取多酚萃取液。5.根據權利要求1所述的果蔬中不可萃取多酚的堿性制備方法，其特征在于，步驟(4)采用下述方法完成:首先，將不可萃取多酚萃取液用大孔樹脂吸附；上樣濃度為2-5.0mg/ml，上樣流速為1.5-3m/min，上樣體積為4_6倍柱體積；然后，用蒸餾水洗去樹脂表面的雜物；再用質量濃度60%-90%的乙醇水溶液進行洗脫并收集洗脫液；洗脫速率為1.5-3ml/min，洗脫體積為3_5倍柱體積；最后，將洗脫液濃縮到原體積的1/3-1/5、過濾、將濾液冷凍干燥，得不可萃取多酚凍干粉。6.根據權利要求15所述的果蔬中不可萃取多酚的堿性制備方法，其特征在于，步驟(2)中，超聲萃取條件，NaOH水溶液的濃度為lmol/L，果蔬殘渣與NaOH水溶液的比例為Ig:10ml，溫度45°C，超聲時間為lh，超聲功率500W;離心條件:轉速3000_5000r/min，時間10_20min。7.根據權利要求6所述的果蔬中不可萃取多酚的堿性制備方法，其特征在于，在進行步驟(2)之前，將果蔬殘渣在50-60°C條件下烘干，粉碎。8.根據權利要求6所述的果蔬中不可萃取多酚的堿性制備方法，其特征在于，所述原料為藍莓。9.根據權利要求6所述的果蔬中不可萃取多酚的堿性制備方法，其特征在于，所述大孔樹脂為HPD-1OOC0全文摘要本發明涉及一種果蔬中不可萃取多酚的堿性制備方法，屬于食品深加工
技術領域：
。該方法選用新鮮的水果或蔬菜，將可萃取多酚萃取后剩余的果蔬渣干粉，使用NaOH水解萃取，采用超聲輔助法對果蔬中的不可萃取多酚進行萃取，它包括原料的選擇、可萃取多酚的分離、剩余殘渣干燥、不可萃取多酚的萃取、大孔樹脂吸附的提純、冷凍干燥、保存等步驟。與硫酸加熱水解提取不可萃取多酚的方法相比較，本發明具備具有操作步驟簡單、工藝條件要求低、安全性較高、生產成本低、收率高的優點；所獲得的不可萃取多酚純度高。文檔編號A23L1/30GK103169094SQ20131009670公開日2013年6月26日申請日期2013年3月25日優先權日2013年3月25日發明者程安瑋,閻海青,陳相艷,王文亮,曲靜然,韓彩靜,弓志青,石賢權申請人:山東省農業科學院農產品研究所