一種等位基因特異性甲基化中雜合子進行檢測的方法
【專利摘要】本發明公開了一種等位基因特異性甲基化中雜合子進行檢測的方法。具體來說，用甲基化敏感限制性內切酶切割DNA后，再用含有酶切位點序列的特異性引物進行PCR擴增。檢測甲基化敏感酶的PCR擴增產物，就可以檢測出兩個等位基因的甲基化狀態；進行MSRE-PCR檢測，鑒定雙等位基因特定位點甲基化狀態是否存在差異；根據甲基化敏感限制性內切酶只能夠識別并切斷未發生甲基化的酶切位點，而不能識別、切斷發生了甲基化的DNA序列這一原理。本發明的有益效果是，可以有效阻礙轉錄因子與啟動子結合，導致轉錄失活，合成成熟功能蛋白受阻而導致細胞增殖失控。
【專利說明】一種等位基因特異性甲基化中雜合子進行檢測的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種生化的檢測方法，具體來說，是指一種等位基因特異性甲基化中雜合子進行檢測的方法。
【背景技術】
[0002]DNA甲基化(DNA methylation)是最重要的表觀遺傳學修飾方式之一，與腫瘤發生密切相關。抑癌基因啟動區甲基化可以阻礙轉錄因子與啟動子結合，導致基因轉錄失活，合成成熟功能蛋白受阻進而導致細胞增殖失控。有關抑癌基因甲基化失活的研究在臨床腫瘤早期診斷，治療以及預后判斷方面具有重要指導意義，是目前的一個研究熱點。
[0003]我們前期曾對遼南高發區胃癌的多位點甲基化情況進行了檢測，結果發現此地區臂、癌患、考P16、hMLHl、TIMP3、DKK3、RASSF1A以及等特定基因啟動子區DNA甲基化頻率和程度都明顯增高[I]，但同時我們發現基因啟動子區異常高甲基化與基因表達沉默并非完全相關，國外也有越來越多的研究者發現并提出了這個問題。

【發明內容】

[0004]為克服上述技 術問題，我們提出了以下技術方案:
一種等位基因特異性甲基化中雜合子進行檢測的方法，用甲基化敏感限制性內切酶切割DNA后，再用含有酶切位點序列的特異性引物進行PCR擴增。檢測甲基化敏感酶的PCR擴增產物，就可以檢測出兩個等位基因的甲基化狀態。。
[0005]本發明中，進行MSRE-PCR檢測，鑒定雙等位基因特定位點甲基化狀態是否存在差
巳升。
[0006]本發明中，根據甲基化敏感限制性內切酶只能夠識別并切斷未發生甲基化的酶切位點，而不能識別、切斷發生了甲基化的DNA序列這一原理。
[0007]本發明的有益效果是，可以有效阻礙轉錄因子與啟動子結合，導致轉錄失活，合成成熟功能蛋白受阻而導致細胞增殖失控。
【具體實施方式】
[0008]一種等位基因特異性甲基化中雜合子進行檢測的方法。具體來說，用甲基化敏感限制性內切酶切割DNA后，再用含有酶切位點序列的特異性引物進行PCR擴增。檢測甲基化敏感酶的PCR擴增產物，就可以檢測出兩個等位基因的甲基化狀態；進行MSRE-PCR檢測，鑒定雙等位基因特定位點甲基化狀態是否存在差異；根據甲基化敏感限制性內切酶只能夠識另IJ并切斷未發生甲基化的酶切位點，而不能識別、切斷發生了甲基化的DNA序列這一原理。
[0009]以上所述，僅為本發明較佳的【具體實施方式】，但本發明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本【技術領域】的技術人員在本發明披露的技術范圍內，根據本發明的技術方案及其發明構思加以等同替換或改變，都應涵蓋在本發明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.一種等位基因特異性甲基化中雜合子進行檢測的方法，其特征在于，用甲基化敏感限制性內切酶切割DNA后，再用含有酶切位點序列的特異性引物進行PCR擴增；檢測甲基化敏感酶的PCR擴增產物，就可以檢測出兩個等位基因的甲基化狀態。
2.如權利要求1所述的一種等位基因特異性甲基化中雜合子進行檢測的方法，其特征在于，進行MSRE-PCR檢測，鑒定雙等位基因特定位點甲基化狀態是否存在差異。
3.如權利要求1所述的一種等位基因特異性甲基化中雜合子進行檢測的方法，其特征在于，根據甲基化敏感限制性內切酶只能夠識別并切斷未發生甲基化的酶切位點，而不能識別、切斷發生了甲基化的DNA序列這一原理。
【文檔編號】C12Q1/68GK103589792SQ201310518802
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年10月29日 優先權日:2013年10月29日
【發明者】王景文 申請人:王景文