專利名稱：一類兒茶酚-o-甲基轉移酶的特異性探針底物及其應用的制作方法
技術領域：
本發明屬醫藥技術領域，具體涉及一類兒茶酚-O-甲基轉移酶的特異性探針底物及其應用。
背景技術：
兒茶酚-O-甲基轉移酶(COMT)是哺乳動物體內廣泛分布的一種甲基化轉移酶，其主要生理功能是負責代謝內源性的神經遞質(如腎上腺素，去甲腎上腺素以及多巴胺等)和外源性的兒茶酚內化合物。在人體中，COMT酶有兩種存在形式，一種是溶解性的COMT (S-COMT)，另一種是膜結合型的COMT (MB-COMT)。COMT在人體的多種組織中都有分布，如腎臟，肝臟，肺等，在人體的大腦中，主要存在于突觸后神經元。在人體的大多數組織中，而S-COMT的量是MB-COMT的3_4倍左右。在人腦中，COMT酶主要以MB-COMT的形式存在，占總量的70%，S-COMT占30%。COMT酶的活性在人體中呈基因多態性，分別表現為低活性(COMTLL)，中等活性(COMTLH)和高活性(COMTHH)。有研究表明，人體中的低COMT活性和酒精中毒、抑郁癥和乳腺癌都有相關性，因此，定量測定人體組織及細胞中的COMT活性對于多種疾病的臨床診斷和治療具有重要指導意義。另外，由于COMT還是帕金森病治療的一個重要靶點，利用探針反應并借助體外代謝孵育體系可高通量的篩選和評價COMT抑制劑，對于帕金森病治療藥物的發現意義重大。目前，最常用的COMT酶的探針底物有四個，包括原兒茶酸，左旋多巴，多巴胺以及腎上腺素。后三者由于是人體中的內源性物質，因此無法作為體內探針使用。此外，以上COMT酶的探針底 物包括原兒茶酸在哺乳動物COMT酶的催化下分別生成兩個單甲基化產物，而兩個產物由于結構和理化性質相近，在液相色譜上通常難以分離，給其定量檢測帶來了不便。因此，急需尋找代謝產物單一，檢測靈敏的COMT酶探針底物，同時安全性高，體內代謝路徑明確的COMT酶探針底物一直未見報道，也亟待開發。目前，COMT的體外評價體系主要包括哺乳動物的紅細胞，以及亞細胞組分及等，其中亞細胞組分主要包括肝臟組織的S9、胞漿以及腦組織勻漿等成分。采用這些標準化的評價體系，結合相應的輔因子(SAM)和孵育條件，可通過檢測探針底物的代謝清除或產物生成速率,對上述各種體系中表達的COMT酶活性進行表征。

發明內容
本發明的目的是提供一類兒茶酚-O-甲基轉移酶的特異性探針底物及其應用，該特異性探針底物是B環7，8位具有羥基的香豆素兒茶酚類化合物，與目前已報道的探針底物原兒茶酸相比，這類7，8- 二羥基香豆素兒茶酚類化合物對COMT具有更高的選擇性，在人肝等生物樣品中也可用于COMT酶活性的評估與測定，對評估個體樣本的酶活差異具有重
要意義。本發明提供了一類兒茶酚-O-甲基轉移酶的特異性探針底物，該特異性探針底物為7，8-二羥基香豆素類化合物，其結構式見式(I )，其中R1為-CH3、-Ph中的一種，R2為-H、-OCH3中的一種。
權利要求
1.一類兒茶酚-O-甲基轉移酶的特異性探針底物，其特征在于:該特異性探針底物為7，8-二羥基香豆素類化合物，其結構式見式(I )，其中R1為-CH3、-Ph中的一種，R2為-H、-OCH3中的一種。
2.一種利用權利要求1所述特異性探針底物定量測定生物體系中COMT酶活的方法，其特征在于:采用上述式(I)化合物作為底物，該類底物在COMT酶的催化下僅選擇性生成7-0-甲基化產物，通過定量檢測單位時間內甲基化產物的生成量來測定各生物樣品及細胞中COMT酶的活性。
3.按照權利要求2所述利用特異性探針底物定量測定生物體系中COMT酶活的方法，其特征在于:所述方法條件為:底物濃度介于1/1(Γ10ΚΠ之間；催化反應時孵育體系pH介于5.5 10.5之間；反應溫度介于2(T60°C之間。
4.按照權利要求3所述利用特異性探針底物定量測定生物體系中COMT酶活的方法，其特征在于:所述催化反應時孵育體系PH介于7.(Γ7.5之間。
5.按照權利要求3所述利用特異性探針底物定量測定生物體系中COMT酶活的方法，其特征在于:所述反應溫度介于35 4(TC之間。
6.按照權利要求3所述利用特異性探針底物定量測定生物體系中COMT酶活的方法，其特征在于:所述產物生成率或底物轉化率低于10%。
7.權利要求1所述特異性探針底物的應用，其特征在于:該特異性探針底物用于人及哺乳動物組織制備液及各類組織細胞中COMT酶活的定量測定。
全文摘要
本發明提供了一類兒茶酚-O-甲基轉移酶的特異性探針底物及其應用，該特異性探針底物為7,8-二羥基香豆素類化合物，其可用于不同來源哺乳動物組織及細胞中COMT酶活的測定，具體操作流程如下選擇具有7,8位羥基的香豆素類化合物作為高特異性探針底物，并借助COMT體外孵育體系開展特異性底物的COMT催化反應，通過定量檢測單位時間內產物生成量來測定各生物樣品及細胞中COMT酶的活性。本發明可用于不同種屬、不同個體來源生物樣本中COMT酶活的定量評估，以及不同來源的動物組織細胞培養液及細胞制備物中COMT酶活的定量測定，以期實現對重要藥物代謝酶COMT處置藥物能力的評估。
文檔編號C07D311/16GK103193746SQ201310044369
公開日2013年7月10日 申請日期2013年2月4日 優先權日2013年2月4日
發明者楊凌, 夏楊柳, 葛廣波, 孫曉宇, 寧靜, 何桂元 申請人:中國科學院大連化學物理研究所