調(diào)控機體能量代謝的牦牛皮小分子膠原蛋白的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種調(diào)控機體能量代謝的牦牛皮小分子膠原蛋白的制備方法，該方法包括以下步驟：⑴將新鮮或經(jīng)浸潤、軟化后的干燥的青藏高原特有牛種牦牛wildyak的牦牛皮清洗干凈，然后加堿浸泡，得到脫毛后的牦牛皮；⑵脫毛后的牦牛皮加水浸泡脫堿后清水沖洗，得到脫堿脫毛的牦牛皮；⑶脫堿脫毛的牦牛皮剪切成小塊，然后加水焯皮，得到脫脂后的牦牛皮；⑷脫脂后的牦牛皮用水進行提取后過濾，棄去殘渣，得到濾液；⑸濾液用水稀釋后進行分離，即得4Kda小分子的牦牛皮膠原蛋白溶液；⑹將4Kda小分子的牦牛皮膠原蛋白溶液經(jīng)濃縮、干燥，即得牦牛皮小分子膠原蛋白。本發(fā)明方法簡單、效果顯著，所制得的牦牛皮膠原蛋白分子量分布集中，具有調(diào)控機體能量代謝的功能。
【專利說明】調(diào)控機體能量代謝的牦牛皮小分子膠原蛋白的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種膠原蛋白的制備方法，尤其涉及調(diào)控機體能量代謝的牦牛皮小分子膠原蛋白的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]機體所需的能量來源于食物中的糖、脂肪和蛋白質(zhì)，這些營養(yǎng)成分經(jīng)消化轉(zhuǎn)變成為可吸收的小分子營養(yǎng)物質(zhì)而被吸收。人體大約有16%是蛋白質(zhì)，而蛋白質(zhì)中有35~45%的膠原蛋白，主要存在的部位有皮膚、肌肉、骨骼、牙齒等，膠原蛋白是人體骨骼、尤其是軟骨組織中的重要組成成分。
[0003]乳酸脫氫酶(LDH)是一種糖酵解酶，存在于機體所有組織細胞的胞質(zhì)內(nèi)，是催化丙酮酸與乳酸之間還原與氧化反應，丙酮酸當糖酵解速度超過有氧代謝速度時被還原為乳酸，是參與糖無氧酵解和糖異生的重要酶。
[0004]肌酸激酶(CK)存在于心臟、肌肉以及腦等組織的細胞漿和線粒體中，是一個與細胞內(nèi)能量運轉(zhuǎn)、肌肉收縮、ATP再生有直接關(guān)系的重要激酶，它可逆地催化肌酸與ATP之間的轉(zhuǎn)磷酰基反應。
[0005]三磷酸腺苷(ATP)直接供給能量的物質(zhì)，PCr是主要的能量儲備物質(zhì)，生理情況下ATP可被線粒體肌酸激酶從線粒體內(nèi)膜轉(zhuǎn)移并形成PCr，PCr在需能部位再經(jīng)胞質(zhì)CK同工酶催化轉(zhuǎn)為ATP以供利用。
[0006]牦牛是中國古老而又原始的牛種之一，是唯一能在青藏高原生態(tài)環(huán)境下生存繁衍的牛種，是青藏高原特有的優(yōu)勢畜種，具有獨特的生態(tài)學特性及經(jīng)濟價值。經(jīng)過千百年的自然選擇與進化，形成了其獨特的遺傳性能和對高寒缺氧惡劣環(huán)境的適應能力，具有極強的抗逆能力、抗病能力、耐受性和適應性，能適應一般家畜不能適應的高海拔、高缺氧等嚴酷的高寒惡劣生態(tài)環(huán)境。牦牛體內(nèi)含有許多抗疲勞、抗缺氧的生物活性物質(zhì)。從牦牛皮中提取純天然的小分子膠原蛋白，被機體吸收后被轉(zhuǎn)化成參與機體能量代謝過程中所需酶類或參與到中間產(chǎn)物合成代謝過程中，在機體需要能量時能有效及時提供能量，有效降低乳酸含量，避免代謝產(chǎn)物對機體的損傷。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種方法簡單、效果顯著的調(diào)控機體能量代謝的牦牛皮小分子膠原蛋白的制備方法。
[0008]為解決上述問題，本發(fā)明所述的調(diào)控機體能量代謝的牦牛皮小分子膠原蛋白的制備方法，包括以下步驟:
⑴將新鮮或經(jīng)浸潤 、軟化后的干燥的青藏高原特有牛種牦牛wild yak的牦牛皮清洗干凈，然后按其重量的2~3倍加入質(zhì)量濃度為0.5^10%的堿，在溫度為2(T38°C的條件下浸泡2~?2小時，得到脫毛后的牦牛皮；
⑵將所述脫毛后的牦牛皮按其重量的3飛倍加入水，在水溫為2(T30°C的條件下浸泡脫堿，重復f 4次，每次10-30分鐘，然后清水沖洗，洗凈殘余毛屑，并測定pH值，得到脫堿脫毛的牦牛皮；
⑶將所述脫堿脫毛的牦牛皮剪切成3~5cm的小塊，然后加入其重量5~20倍的水，在溫度為4(T60°C的條件下焯皮2~3次，得到脫脂后的牦牛皮；
⑷將所述脫脂后的牦牛皮用其質(zhì)量8~12倍的水進行提取，2~10小時后過濾，棄去殘渣，得到濾液；
(5)將所述濾液用其體積的5~50倍水稀釋后，在分離溫度為3(T50°C的條件下進行分離，即得4Kda小分子的牦牛皮膠原蛋白溶液；
(6)將所述4Kda小分子的牦牛皮膠原蛋白溶液經(jīng)濃縮、干燥，即得牦牛皮小分子膠原蛋白。
[0009]所述步驟⑴中的堿是指氫氧化鈉溶液、氫氧化鉀溶液、碳酸氫鈉溶液中的一種。
[0010]所述步驟(5)中的濾液分離為離心、膜分離、透析方法中的任意一種。
[0011 ] 所述步驟(6)中的濃縮是指減壓濃縮、吹干濃縮中任意一種。
[0012]所述步驟(6)中的干燥條件為噴霧干燥、冷凍干燥、微波干燥、烘箱干燥中的任意一種。
[0013]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點:
1、本發(fā)明以牦牛皮為原料，通過堿法脫毛處理牦牛皮，經(jīng)過提取分離得到小分子膠原蛋白。采用該方法制得的牦牛皮膠原蛋白分子量分布集中，其分子量在4KDa，粒度為
2.9nm，含量大于99.9%以上(參見表1、表2、圖1、圖2)。
[0014]表1:小分子膠原DLS動態(tài)光散射測定結(jié)果
【權(quán)利要求】
1.調(diào)控機體能量代謝的牦牛皮小分子膠原蛋白的制備方法，包括以下步驟: ⑴將新鮮或經(jīng)浸潤、軟化后的干燥的青藏高原特有牛種牦牛Wild yak的牦牛皮清洗干凈，然后按其重量的2~3倍加入質(zhì)量濃度為0.5^10%的堿，在溫度為2(T38°C的條件下浸泡2~?2小時，得到脫毛后的牦牛皮； ⑵將所述脫毛后的牦牛皮按其重量的3飛倍加入水，在水溫為2(T30°C的條件下浸泡脫堿，重復f 4次，每次10-30分鐘，然后清水沖洗，洗凈殘余毛屑，并測定pH值，得到脫堿脫毛的牦牛皮； ⑶將所述脫堿脫毛的牦牛皮剪切成3~5cm的小塊，然后加入其重量5~20倍的水，在溫度為4(T60°C的條件下焯皮2~3次，得到脫脂后的牦牛皮； ⑷將所述脫脂后的牦牛皮用其質(zhì)量8~12倍的水進行提取，2~10小時后過濾，棄去殘渣，得到濾液； (5)將所述濾液用其體積的5~50倍水稀釋后，在分離溫度為3(T50°C的條件下進行分離，即得4Kda小分子的牦牛皮膠原蛋白溶液； (6)將所述4Kda小分子的牦牛皮膠原蛋白溶液經(jīng)濃縮、干燥，即得牦牛皮小分子膠原蛋白。
2.如權(quán)利要求1所述的調(diào)控機體能量代謝的牦牛皮小分子膠原蛋白的制備方法，其特征在于:所述步驟⑴中的堿是指氫氧化鈉溶液、氫氧化鉀溶液、碳酸氫鈉溶液中的一種。
3.如權(quán)利要求1所述的調(diào)控機體能量代謝的牦牛皮小分子膠原蛋白的制備方法，其特征在于:所述步驟(5)中的濾液`分離為離心、膜分離、透析方法中的任意一種。
4.如權(quán)利要求1所述的調(diào)控機體能量代謝的牦牛皮小分子膠原蛋白的制備方法，其特征在于:所述步驟(6)中的濃縮是指減壓濃縮、吹干濃縮中任意一種。
5.如權(quán)利要求1所述的調(diào)控機體能量代謝的牦牛皮小分子膠原蛋白的制備方法，其特征在于:所述步驟(6)中的干燥條件為噴霧干燥、冷凍干燥、微波干燥、烘箱干燥中的任意一種。
【文檔編號】C12P21/06GK103820517SQ201410080303
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2014年3月6日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月6日
【發(fā)明者】杜玉枝, 魏立新, 李岑, 高婷婷, 劉海青 申請人:中國科學院西北高原生物研究所, 青海省食品藥品檢驗所