用于防治果蔬采后病害的菌株及生防菌劑的制作方法
【專利摘要】本發明涉及生物拮抗菌，具體為一種用于防治果蔬采后病害的菌株，于2014年3月7日保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏登記號為CCTCC?M2014076。一種用于防止果蔬采后病害的生防菌劑，包括權利要求1所述菌株的菌懸液，所述菌懸液的濃度為1×108cfu/mL，所述每毫升菌懸液中添加25～100mM的Na2SiO3；或者，包括權利要求1所述菌株的菌懸液，所述菌懸液的濃度為1×108cfu/mL，所述每毫升菌懸液中添加25～100mM的NaHCO3。本發明所述的菌株能夠很好地抑制果蔬采后灰霉病的發生，也就大大提高了果蔬采后病害的防治效果。
【專利說明】【技術領域】
[〇〇〇1] 本發明涉及生物拮抗菌，具體為一種用于防治果蔬采后病害的菌株及生防菌劑。 用于防治果蔬采后病害的菌株及生防菌劑 【背景技術】
[0002] 果蔬采后病害引起的腐爛造成的損失是非常巨大的。目前，控制果蔬采后病害最 有效的措施是低溫貯藏結合化學殺菌劑。但長期使用化學殺菌劑，不僅容易使病原菌產生 抗藥性，而且污染環境，對人體健康造成不利影響。因此，尋找低毒性、高效、環境友好和殘 留量低的殺菌劑的替代品或部分替代品就日漸迫切。
[0003] 應用拮抗菌進行生物防治成為近年來的研究熱點。目前，分離到的生防菌主要有 小型絲狀真菌、細菌和酵母菌等。迄今為止，已從柑橘、蘋果、桃、梨、獼猴桃、鮮棗等10多 種水果中篩選出幾十種拮抗微生物。目前應用較多的生防細菌主要有芽孢桿菌（Bacillus subtilis)、假單胞桿菌（Pseudomonas spp·)、土壤放射菌（Agrobacterium radiobacter) 等。目前商品化應用的主要有丁香假單胞桿菌（Pseudomonas syringae)、枯草芽胞桿菌 (Bacillus subtilis)、酵母菌（Candidoleophil)中的季也蒙畢赤酵母菌（Pichiaguillier mondii)、哈茨木霉（Trichoderma harzianum)、白粉寄生菌等。
[0004] 使用拮抗酵母菌防治果蔬采后病害，可以減少化學農藥的用量和在果蔬產品上的 殘毒，對保護人體健康和防止環境污染都極為重要。Aspire?、BiosavellO和Biosavelll 是國外己經注冊登記的微生物抗菌劑，主要用于控制柑橘類和仁果類果實的采后腐爛。這 展示了利用拮抗菌來安全有效地防治水果采后病害具有廣闊的前景。
[0005] 洋蔥伯克氏菌（Burkholderia cepacia)是20世紀50年代作為一種植物病原菌 被人們所認識，Burkholder在1950年首次報道該菌可以引起洋蔥的鱗莖發生腐爛，稱為 洋蔥假單胞菌（Pseudomonas cepacia)。農業領域中，洋蔥伯克氏菌具有生物防治、生物 降解以及促進植物生長等多種功能，也顯示了其在農業方面的廣泛的應用前景。近年來， 隨著分子生物學技術的發展，隨著細菌分類技術也相應得到發展，洋蔥伯克氏菌已不僅僅 作為一個種，而是一組基因型不同、表型相近的復合物，稱為洋蔥伯克霍爾德氏菌復合群 (Burkholderia cepacia complex,簡稱Bcc)。Bcc可以有效防治多種植物的真菌性病害， 近年來國外以防治立枯病、鐮刀病菌和腐霉病等土傳病害的報道較多，但也有一些對梨青 霉病、蘋果灰霉病和桃褐腐病等采后病害及植株莖葉病害的相關報道。范青等發現Bcc對 甜櫻桃褐腐病表現出顯著的抑制效果，謝關林等發現在離體條件下Bcc菌株可顯著抑制水 稻紋枯病菌和惡苗病菌的生長。鄭維等從堆肥中分離出了 Bcc菌株CF-66,并發現該菌株對 尖鐮孢菌、立枯絲核菌和酵母菌表現出很強的抗菌活性。此外，Bcc還可以利用多種物質作 為唯一碳源，可以降解鄰苯二甲酸鹽、除草劑和氯代烴類化合物等土壤和地下水污染的有 毒物質，也是一種很有潛力的生物降解菌，是一種很有潛力的生防菌株。
【發明內容】

[0006] 本發明的目的在于提供一種新的用于防治果蔬采后病害的菌株及生防菌劑。
[0007] -種用于防治果蔬采后病害的菌株，于2014年3月7日保藏在中國典型培養物保 藏中心，保藏中心保藏編號為CCTCC NO :M2014076,地址：中國.武漢.武漢大學。
[0008] -、本發明所述拮抗菌的篩選方法如下：
[0009] 1、實驗材料與方法
[0010] 1. 1、實驗材料
[0011] 灰葡萄孢霉（B. cinerea)從自然發病的番茄果實表面分離得到，經純化后接種于 PDA培養基上，在26 °C下培養7d后，采用血球計數法用無菌水配成1 X 106孢子/mL的孢子 懸浮液。
[0012] 用于分離拮抗菌的果實蔬菜采自山西省代縣、繁峙縣及太原市小店區，或購于太 原市場，樣品及采樣地見表1。
[0013] 接種用的番茄購于太原市小店區。
[0014] 表1樣品及米樣地點
[0015]
【權利要求】
1. 一種用于防治果蔬采后病害的菌株，于2014年3月7日保藏在中國典型培養物保藏 中心，保藏登記號為CCTCC Μ 2014076。
2. -種用于防止果蔬采后病害的生防菌劑，其特征在于：包括權利要求1所述菌株 的菌懸液，所述菌懸液的濃度為lX10 8cfu/mL，所述每毫升菌懸液中添加25?100mM的 Na2Si03〇
3. -種用于防止果蔬采后病害的生防菌劑，其特征在于：包括權利要求1所述菌株 的菌懸液，所述菌懸液的濃度為lX10 8cfu/mL，所述每毫升菌懸液中添加25?100mM的 NaHC03〇
4. 一種用于防止果蔬采后病害的生防菌劑，其特征在于：包括權利要求1所述菌株的 發酵液，發酵條件：在LB液體培養基中，30°C，20r/min搖瓶培養48h。
5. -種權利要求1所述的用于防治果蔬采后病害的菌株的培養方法，其特征在于：配 制培養基的組成如下：麥芽浸粉8?15g/L，大豆蛋白胨8?15 g/L，MnS04 · 7H20 0. 5? 1. 5 g/L，ΚΗ2Ρ04 0. 5?1. 0 g/L，然后在所述培養基中進行接種培養。
6. 權利要求1所述的菌株在防止果蔬采后病害方面的應用。
【文檔編號】C12R1/01GK104109645SQ201410251215
【公開日】2014年10月22日 申請日期:2014年6月6日 優先權日:2014年6月6日
【發明者】施俊鳳, 孫常青, 王瀟冉, 高偉 申請人:山西省農業科學院農產品貯藏保鮮研究所