一種啤酒液體復配酶的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種啤酒液體復配酶及其制備方法，屬于液體復配酶制備【技術領域】，以啤酒釀造用液體酶制劑為主要原料，科學復配糖、多元醇、氨基酸、增稠劑、白蛋白、金屬離子等穩定劑和促進酶制劑更加穩定的酒花提取物、中草藥提取液、抗菌肽等具有防腐作用的物質，完全替代了防腐劑的添加，不僅有效的抑制了有害微生物的繁殖和生長，而且能夠和其它組分協同穩定液體復配酶的活性，從根本上提高了液體復配酶的生物穩定性和酶活力穩定性，有效延長了液體酶制劑的保質期。制備的液體復配酶在室溫儲存12個月菌落總數為168-214CFU/mL；在40℃和0℃條件下儲存12個月，酶活損失率分別為2-2.5％和1-1.7％。
【專利說明】一種啤酒液體復配酶

【技術領域】
[0001] 本發明涉及液體復配酶，具體涉及一種啤酒液體復配酶。

【背景技術】
[0002] 液體酶制劑是一種使用方便，綠色環保，生物降解性良好的原料。專一的催化特性 及溫和的反應條件，在工業界得到越來越多的使用和重視。在使用方面液體酶制劑具有以 下優點：1)液體酶制劑以分子或微粒狀態分散在底物中，分散度大，吸收快，能較迅速地發 生酶解反應，酶活性高；2)易于分劑量，容易復配和二次加工，使用方便；3)有利于提高酶 制劑的利用率，4)直接使用，無須溶解和活化；5)純度高、雜質含量低；6)生產過程短、成本 低；7)生產加工和使用過程中不會造成粉塵污染，有利于保護環境；但是，液體酶制劑體積 較大，攜帶、運輸、貯存都不方便，酶活性容易受到高溫、冷凍、光照、酸堿性、氧化、濕度等貯 存環境的影響而顯著降低，并且因為液體酶制劑的水分活度較高，很容易受到微生物的污 染而失活。因此，液體酶制劑的應用受到限制，最主要的原因就是其穩定性較差，包括生物 穩定性和物理、化學穩定性。
[0003] 為了解決上述問題，現有的酶制劑生產廠家便將經濃縮、分離后的液體酶制劑添 加穩定劑、防腐劑、表面活性劑、金屬離子等，以提高液體酶制劑的生物穩定性、非生物穩定 性和使用效果，拓寬其在食品、紡織、造紙、洗滌、飼料等領域的應用范圍，由此，液體復配酶 應運而生，總體來說，液體復配酶分為兩種，一種是單一液體復配酶，即由一種液體酶制劑 和添加劑加工而成；另一種是多種液體復配酶，是由多種液體酶制劑和添加劑加工而成。因 為酶制劑作用底物的單一性和作用條件的多樣性、差異性，目前，市場上用于工業化的液體 酶制以單一液體復配酶為主，多種液體復配酶較少，幾乎沒有。
[0004] 液體復配酶復配的首要前提條件是應用領域，要具體到加工成品的產品特性，如 果不考慮產品特性的因素而進行盲目的為了提高穩定性的復配，不但不會有效發揮酶制劑 的作用，反而會產生嚴重的副作用，甚至會釀成重大生產事故。因此液體復配酶的制備要綜 合考慮多方面的因素。
[0005] 目前，市場上的液體復配酶主要集中在造紙、洗滌、食品、飼料、酒精制備等技術領 域，且以單種液體復配酶為主，其中添加穩定劑有甘油等多元醇和黃原膠、明膠，CMC等表面 活性劑、聚醇類表面活性劑、脂肪醇聚氧乙烯醚化合物、pvp等高分子化合物、氯化鈉等金屬 氯化物、陰陽離子表面活性劑、苯甲酸鈉等防腐劑等，添加劑的種類還與酶的種類、同一酶 的作用底物和條件、添加劑的物理和化學性質、酶作用效果等多種因素有關，并非能夠統一 添加、使用。
[0006] 與其它發酵工業不同的是，在轟轟烈烈的消泡戰役中，啤酒釀造自始至終在最大 限度的保持泡沫，啤酒泡持性是啤酒的重要理化和感官指標之一。啤酒在外觀上不同于其 它飲料的一個重要特點：就是在倒入杯中時，會產生潔白細膩的泡沫，給人以潔凈、清爽 感，促進人們的飲欲。因此啤酒的泡持性成為消費者認識啤酒品牌的重要特征。啤酒的泡 持性通常是指：啤酒的起泡性，持久性和附著性。液體復配酶某些穩定劑和表面活性劑會 起到強力消泡劑的作用，氯化鈉的添加會是啤酒產生咸味，影響口感，防腐劑的添加會對人 體產生毒害……。
[0007] 因此，對于啤酒釀造工業來說，制備一種安全、穩定、作用效果顯著的液體復配酶 限制條件較多，尤其顯得困難，制備一種適合啤酒釀造的多種液體復配酶更加困難，目前， 還未見公開的啤酒多種液體復配酶的報道。中國專利CN101617740B公開了一種酶活保有 率高的飼用液體植酸酶制劑。本發明是在植酸酶原酶液中加入聚乙二醇6000、海藻糖、苯 甲酸鈉、純水，調節PH值為4. 5?5. 5 :其中聚乙二醇6000中的羥基與酶蛋白分子表面及 其活性中心的羧基、氨基等以共價鍵、氫鍵及范德華力等結合，從而使酶蛋白分子的活性中 心和整個酶蛋白分子得到保護；海藻糖（穩定劑），提高酶溶液的滲透壓，使酶蛋白分子的 舒展度降低，分子相對處于脫水狀態而收縮，從而提高穩定性；苯甲酸鈉（防腐劑）及優選 pH范圍（4. 5?5. 5)，均起到提高液體酶的生物穩定性的作用。中國專利CN101717765B公 開一種環糊精葡萄糖基轉移酶復配酶制劑，其特征在于該酶制劑是一種液體酶制劑；其組 成為：環糊精葡萄糖基轉移酶、甘油、CaC12、PEG400以及明膠；所述環糊精葡萄糖基轉移酶 為蛋白質含量為3g/L-5g/L的發酵液，甘油濃度為10% -20% (體積分數），CaC12濃度為 0· lg/L-0. 2g/L，PEG400濃度為5% -10% (體積分數），明膠濃度為0· 5% -1 % (質量分 數）。具有極其優異的儲存穩定性，在40°C保存60天，其酶活保留率仍高達95%以上，解決 了由于產品運送或儲存時間較長導致產品應用性能下降的問題。本發明提供的液體酶制劑 復配方法簡單，原料來源豐富并且成本低，特別適合在工業上推廣。中國專利CN103131557B 公開了一種液體洗滌劑用酶制劑復合穩定劑，涉及酶穩定劑，解決現有液體洗滌劑中酶穩 定性差，且傳統酶穩定劑主要使用硼砂，對人體存在潛在危害的問題。一種液體洗滌劑用酶 制劑復合穩定劑，由以下重量份的各組分組成：環糊精〇. 05?20、氯化鈣0. 05?20、甘油 和丙二醇混合物1?10、非離子表面活性劑脂肪醇聚氧乙烯醚1?60、陰離子表面活性劑 烷基苯磺酸鈉1?60 ;其中所述的甘油與丙二醇混合物中甘油：丙二醇的重量比為2:6? 10。本發明可簡化液體洗滌劑的生產及配方過程，顯著提高和延長液體洗滌劑中酶制劑的 活性，原料安全無毒，對人體無害。上述公開的液體酶制劑及穩定劑均不適合啤酒釀造生 產。
[0008] 綜上，制備一種適合啤酒釀造的安全、穩定、效果顯著的多種液體復配酶具有廣闊 的市場空間和良好的市場價值。


【發明內容】

[0009] 本發明所解決的技術問題是將一種或多種經濃縮、分離的液體酶制劑按照啤酒釀 造用途合理調配，并科學復配糖、多元醇、氨基酸、增稠劑、白蛋白、金屬離子等穩定劑和促 進酶制劑更加穩定的酒花提取物、中草藥提取液、抗菌肽等具有防腐作用的物質，有效地提 高了液體復配酶的酶活力穩定性和生物穩定性，在啤酒釀造中發揮了重要的催化劑作用， 同時還改善了啤酒的口感和泡沫性能等質量指標，無須添加防腐劑，制備出一種適合啤酒 釀造的安全、穩定、效果顯著的液體復配酶。
[0010] 本發明的首要目的是提供一種啤酒液體復配酶。
[0011] 為了達到上述目的，本發明采用以下技術方案：
[0012] 一種啤酒液體復配酶，由以下重量份數的原料制備：
[0013] 液體酶制劑40-60份，啤酒花提取液10-15份，糖5-10份，天然抗氧化劑4-9份， 中草藥提取液4-6份，抗菌肽4-6份，增稠劑3-5份，β -環糊精3-5份，多元醇2-5份，谷胱 甘肽2-4份，金屬氯化物1-3份，硫酸銨1-2份，半胱氨酸0. 5-1份，牛血清白蛋白0. 1-0. 3 份。
[0014] 所述液體酶制劑的適宜溫度為35-115°C，適宜pH值為2. 5-6 ;
[0015] 進一步地，所述液體酶制劑為葡聚糖酶、木聚糖酶、中溫淀粉酶、α-淀粉酶、耐高 溫α-淀粉酶、真菌α-淀粉酶、糖化酶、β-淀粉酶、普魯蘭酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶中 的任一種或幾種；
[0016] 優選地，所述液體酶制劑由中溫淀粉酶、葡聚糖酶、木聚糖酶按體積比 3-4:1-1. 5:0. 5-1 均勻混合；
[0017] 進一步地，所述啤酒花提取液的制備方法為：將啤酒花置超聲波清洗機中于 200W、40KHz清洗10-15min，浙干，于-18--22°C冷凍l_2h后立即進行粉碎，冷凍料層厚度 3- 5cm，粉碎粒度0. 5-3mm，加入粉碎啤酒花重量1-3倍的乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇 混合的質量比為2-4:1-3,用乳酸調節pH值為3. 0-3. 5,在功率150-300W、頻率2000Hz、溫 度20-35°C條件下進行微波提取20-30min，同時在功率200-300W，頻率30-40KHZ條件下進 行超聲波輔助提?。槐豯_3h，然后，在功率200-400W、頻率2000Hz條件下進行微波提取 15-20min，同時在功率300-500W，頻率40-50KHZ條件下進行超聲波輔助提取，最后自然降 溫至室溫，過濾，濾液于電場強度35-45kV/cm，脈沖時間400-600μ s，脈沖頻率200-300HZ 條件下進行高壓脈沖電場（PEF)殺菌20-30min即得啤酒花提取液；
[0018] 所述啤酒花為新鮮成熟啤酒花、壓縮片花或壓縮顆粒酒花，優選新鮮成熟啤酒花； 在采用顆粒酒花時，無須清洗；
[0019] 優選地，所述超聲波清洗采用質量百分比濃度為0. 2-0. 8%的碳酸氫鈉溶液為清 洗劑；
[0020] 優選地，所述乙醇和丙醇混合的質量比為3:2 ;
[0021] 優選地，所述微波提取采用間歇式提取，即微波輻照20s，停止10s，如此循環；
[0022] 所述乙醇濃度彡75%。
[0023] 進一步地，所述糖為海藻糖、靈芝多糖、葡萄糖中一種或多種；
[0024] 優選地，所述糖為海藻糖、靈芝多糖、葡萄糖按質量比5-8:1-3:2-4均勻混合。
[0025] 進一步地，所述天然抗氧化劑為葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏葉提取物中 的任 種或幾種組合；
[0026] 優選地，所述葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏葉提取物混合的質量比為 4- 6:2-4:1-3 ；
[0027] 進一步地，所述中草藥提取液的制備方法為：按重量份數計，準確稱取黃芪60-70 份，當歸55-65份，黨參40-45份，甘草40-45份，魚腥草35-45份，神曲35-45份，金銀花 25-35份，茯苓20-30份，遠志15-25份，炒茴香15-25份，白術10-20份，厚樸10-20份；分別 將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然后于容器中均勻混合并添加3-6倍重量的水，控 制溫度70°C _90°C保持2-4h，然后降溫至45-60°C，加入混合物料總重量5-10%的混合酶制 劑進行酶解，用乳酸調節pH值為5. 5-6. 8,酶解2-4h，最后添加混合物料0. 5-3倍重量乙醇 和丙醇的混合物，控制溫度至60°C -78°C保持3-4h，過濾，得第一濾液；添加濾渣1-3倍重 量的水，控制溫度85°C -95°C保持l-3h，然后降溫至25-35°C，過濾，得第二濾液；將第一濾 液和第二濾液按照質量比2-3:1-2合并，于電場強度35-45kV/cm，脈沖時間400-600 μ s， 脈沖頻率300-400ΗΖ條件下進行高壓脈沖電場（PEF)殺菌20-30min即得中草藥提取液；
[0028] 優選地，所述第一濾液和第二濾液合并的質量比為2. 5:1. 5 ;
[0029] 所述混合酶的重量份數組成為：內β -葡聚糖酶10-20份，外β -葡聚糖酶10-20 份，β -葡萄糖苷酶10-15份，木聚糖酶15-20份，戊聚糖酶15-20份，普魯蘭酶20-30份， β-淀粉酶10-15份，酸性蛋白酶10-15份，果膠酶10-15份，甘露糖酶10-15份，葡萄糖氧 化酶5-10份，酸性磷酸酶5-10份，脂肪酶5-8份；
[0030] 所述乙醇和丙醇混合的質量比為1:1-2,所述乙醇濃度彡75%。
[0031] 進一步地，所述多元醇為聚乙二醇、丙三醇、山梨醇、二硫蘇糖醇、疏基乙醇中的一 種或幾種；
[0032] 優選地，所述多元醇由聚乙二醇、丙三醇、山梨醇、二硫蘇糖醇按質量比 8-10:4-6:2-4:1-3 均勻混合。
[0033] 進一步地，所述增稠劑為卡拉膠、阿拉伯膠、明膠、黃原膠、海藻膠、CMC、瓊脂、蜂 膠、紫膠、果膠、瓜爾豆膠、皂莢糖膠、亞麻子膠、魔芋膠中一種或者多種；
[0034] 優選地，所述增稠劑由卡拉膠、阿拉伯膠、明膠、黃原膠、CMC按質量比 3-5:2-4:1-3:1-2:0. 5-1 均勻混合。
[0035] 進一步地，所述金屬氯化物為氯化鋅、氯化鈣、氯化鈉、氯化鎂、氯化鐵中的一種或 多種；
[0036] 優選地，所述金屬氯化物為氯化鋅、氯化鈣、氯化鈉、氯化鎂、氯化鐵按質量比 3-5:2-3:1-3:1-2:0· 1-0. 3 均勻混合。
[0037] 本發明另一目的是提供一種啤酒液體復配酶的制備方法，包括如下步驟：
[0038] 以重量份數計，按照上述配方首先準確稱取增稠劑，加入其質量4-6倍的無菌水， 室溫浸泡3-8h，邊升溫邊攪拌，80-90°C保溫20-30min，攪拌，充分溶解，繼續保溫，邊攪拌 邊依次加入β-環糊精、多元醇、糖、金屬氯化物，然后降溫至25-35°C，邊攪拌邊依次加入 硫酸銨、半胱氨酸、谷胱甘肽、抗菌肽、天然抗氧化劑、牛血清白蛋白、中草藥提取液、啤酒花 提取液、液體酶制劑充分溶解、混合，用乳酸調節液體復配酶pH值為2. 5-6,穩定0. 5-2h，同 時于電場強度35-45kV/cm，脈沖時間400-600μ s，脈沖頻率300-400HZ條件下進行高壓脈 沖電場（PEF)殺菌，除菌過濾、無菌灌裝即得液體復配酶。
[0039] 使用方法：
[0040] 糖化階段將本發明啤酒液體復配酶加入糖化鍋
[0041] 添加量：根據麥芽質量的不同和釀造輔料的比例高低，每t干麥芽添加 500-1000ml ；
[0042] 作用條件：最適PH值4. 5-5. 5 ;最適溫度35-68°C ;最佳料水質量比1:4. 5-5. 5。
[0043] 有益效果：
[0044] 1.本發明制備的啤酒花提取液、中草藥提取液采用低溫提取技術，最大限度地將 酒花和中草藥中的有效成分保留，并與抗菌肽科學復配，完全替代了防腐劑的添加，不僅有 效的抑制了有害微生物的繁殖和生長，而且能夠和其它組分協同穩定液體復配酶的活性， 從根本上提高了液體復配酶的生物穩定性和酶活力穩定性，有效延長了液體酶制劑的保質 期。制備的液體復配酶在室溫儲存12個月菌落總數為168-214CFU/mL ;在40°C和0°C條件 下儲存12個月，酶活損失率分別為2-2. 5%和1-1. 7%。
[0045] 2.本發明在長時間的試驗基礎上，科學復配了具有消泡劑作用的多元醇，多元醇 是一類效果較好的酶制劑穩定劑，與其它組分如啤酒花提取液、糖、增稠劑、β -環糊精、中 草藥提取液等一起，不僅沒有對糖化麥汁、發酵液、成品的泡沫性能和口感產生影響，反而 有所提升，取得了意想不到的效果。與市售液體糖化酶相比，麥芽香味與酒花香味明顯、柔 和協調，泡沫性能優良，泡持性時間長；濁度較低，雙乙酰含量較低，發酵良好，酒精度較高， 成品啤酒無論是感官指標還是理化指標都遠遠優先于普通啤酒復配酶，達到或超過了國家 現行啤酒優級標準。
[0046] 3.本發明將天然抗氧化劑與谷胱甘肽科學復配于液體酶制劑中，不僅起到了較強 的抗氧化作用，避免了液體酶制劑中的溶解氧對酶分子蛋白和其它組分的氧化，更重要的 是天然抗氧化劑中的原花青素有效抑制了酶制劑蛋白的硝基化反應和非酶糖基化反應，顯 著提高了液體酶制劑蛋白的活力穩定性。
[0047] 4.本發明中的牛血清白蛋白是牛血清中的一種球蛋白，包含583個氨基酸殘基， 可有效防止酶的分解和非特異性吸附，對有些內切酶效果更加顯著，與其它組分如：谷胱甘 肽、金屬氯化物、多元醇、硫酸銨等科學復配，大大提高了液體復配酶的酶活穩定性。
[0048] 5.本發明的液體復配酶的制備方法工藝簡單、操作方便、可規模化工業生產，采用 高壓脈沖電場低溫殺菌技術（PEF)，既保證了液體酶制劑蛋白的生化活性，又有效殺滅和抑 制了微生物的繁殖和生長，顯著提高了液體酶制劑的酶活穩定性和生物穩定性，有效延長 了液體酶制劑的保質期。

【具體實施方式】
[0049] 下面通過具體的實施方案敘述本發明。除非特別說明，本發明中所用的技術手段 均為本領域技術人員所公知的方法。另外，實施方案應理解為說明性的，而非限制本發明的 范圍，本發明的實質和范圍僅由權利要求書所限定。對于本領域技術人員而言，在不背離本 發明實質和范圍的前提下，對這些實施方案中的物料成分和用量進行的各種改變或改動也 屬于本發明的保護范圍。
[0050] 以下主要原料來源：
[0051] 1.經分離、濃縮的液體中溫淀粉酶、葡聚糖酶、木聚糖酶、糖化酶均由湖南鴻鷹生 物科技股份有限公司生產，其中：
[0052] 中溫淀粉酶的活力為500-2000U/mL，最適反應溫度為60-70°C，最適pH值為5-6 ;
[0053] 葡聚糖酶的活力為5000-12000U/mL，最適反應溫度為40-65°C，最適pH值為 4-5. 5 ；
[0054] 木聚糖酶的活力為5000-20000U/mL，最適反應溫度為50-65°C，最適pH值為 3. 5-6 ；
[0055] 糖化酶的活力為150000-200000U/mL，最適反應溫度為60-70°C，最適pH值為5-6。
[0056] 2.新鮮成熟啤酒花采自新疆啤酒花股份有限公司種植基地。
[0057] 3.糖、增稠劑、β_環糊精、半胱氨酸均購自上海權旺生物科技有限公司。
[0058] 4.葡萄籽原花青素購買于河南安陽晶森生物科技有限公司，有效成分：0PC/ Polyphenol, Assay 0PC95% /polyphenol90% ；
[0059] 銀杏葉提取物購買于徐州恒凱銀杏制品有限公司，中國藥典2010版銀杏葉提取 物，總黃酮醇苷彡24%，產品注冊商標：公孫堂Ginkgo Town ;
[0060] 迷迭香提取物購買于河南森源本草天然產物股份有限公司，主要成分：迷迭香酸、 迷迭香酚等，含量85 %，注冊商標森源本草；
[0061] 上述產品均為固體粉末。
[0062] 5.抗菌肽購自廣東天浩生物工程股份有限公司，為食品用抗菌肽K-100,型號 K-100。
[0063] 6.谷胱甘肽購自西安融升生物科技有限公司，為食品用谷胱甘肽，谷胱甘肽含量 99%，產品編號：P0200375。
[0064] 7.牛血清白蛋白購自上海如吉生物科技發展有限公司，lg國產cas:9048-46-8。
[0065] 實施例1啤酒花提取液的制備
[0066] 所述啤酒花提取液的制備方法為：將新鮮成熟啤酒花置超聲波清洗機中于200W、 40KHz清洗12min，浙干，于-20°C冷凍1. 5h后立即進行粉碎，冷凍料層厚度4cm，粉碎粒度 2mm,加入粉碎啤酒花重量2倍的乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇混合的質量比為3:2， 用乳酸調節pH值為3. 2,在功率200W、頻率2000Hz、溫度30°C條件下進行微波間歇式提取 25min，同時在功率300W，頻率35KHz條件下進行超聲波輔助提?。槐?h，然后，在功率 300W、頻率2000Hz條件下進行微波提取18min，同時在功率400W，頻率45KHz條件下進行超 聲波輔助提取，最后自然降溫至室溫，過濾，濾液于電場強度40kV/cm，脈沖時間500 μ s，脈 沖頻率250Hz條件下進行高壓脈沖電場（PEF)殺菌25min即得啤酒花提取液；
[0067] 所述超聲波清洗采用質量百分比濃度為0. 2-0. 8%的碳酸氫鈉溶液為清洗劑；
[0068] 所述間歇式提取為微波輻照20s，停止10s，如此循環；
[0069] 所述乙醇濃度為80%。
[0070] 實施例2中草藥提取液的制備
[0071] 所述中草藥提取液的制備方法為：按重量份數計，準確稱取黃芪65份，當歸60份， 黨參42份，甘草42份，魚腥草40份，神曲40份，金銀花30份，茯苓25份，遠志20份，炒茴 香20份，白術15份，厚樸15份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然后于容器 中均勻混合并添加5倍重量的水，控制溫度80°C保持3h，然后降溫至50°C，加入混合物料總 重量8 %的混合酶制劑進行酶解，用乳酸調節pH值為6. 2,酶解3h，最后添加混合物料1. 8 倍重量乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇混合的質量比為1:2,控制溫度至70°C保持4h，過 濾，得第一濾液；添加濾渣2倍重量的水，控制溫度90°C保持2h，然后降溫至30°C，過濾，得 第二濾液；將第一濾液和第二濾液按照質量比2. 5:1. 5合并，于電場強度40kV/cm，脈沖時 間500 μ s，脈沖頻率350Hz條件下進行高壓脈沖電場（PEF)殺菌25min即得中草藥提取 液；
[0072] 所述混合酶的重量份數組成為：內葡聚糖酶20份，外β-葡聚糖酶18份， β -葡萄糖苷酶12份，木聚糖酶18份，戊聚糖酶18份，普魯蘭酶25份，β -淀粉酶12份， 酸性蛋白酶12份，果膠酶12份，甘露糖酶12份，葡萄糖氧化酶6份，酸性磷酸酶8份，脂肪 酶6份；
[0073] 所述乙醇濃度為75%。
[0074] 實施例3
[0075] -種啤酒液體復配酶，由以下重量份數的原料制備：
[0076] 液體酶制劑50份，啤酒花提取液12份，糖8份，天然抗氧化劑7份，中草藥提取液 5份，抗菌肽5份，增稠劑4份，β -環糊精4份，多元醇3份，谷胱甘肽3份，金屬氯化物2 份，硫酸銨2份，半胱氨酸0. 8份，牛血清白蛋白0. 2份。
[0077] 所述液體酶制劑由中溫淀粉酶、葡聚糖酶、木聚糖酶按體積比3. 5:1. 2:0. 8均勻 混合；
[0078] 所述糖為海藻糖、靈芝多糖、葡萄糖按質量比7:2:3均勻混合；
[0079] 所述天然抗氧化劑由葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏葉提取物按質量比 5:3:2均勻混合；
[0080] 所述增稠劑由卡拉膠、阿拉伯膠、明膠、黃原膠、CMC按質量比4:3:2:1.5:0. 8均勻 混合；
[0081] 所述多元醇由聚乙二醇、丙三醇、山梨醇、二硫蘇糖醇按質量比9:5:3:2均勻混 合；
[0082] 所述金屬氯化物為氯化鋅、氯化鈣、氯化鈉、氯化鎂、氯化鐵按質量比 4:2. 5:2:1. 5:0. 2 均勻混合；
[0083] 所述啤酒花提取液由實施例1制備；
[0084] 所述中草藥提取液由實施例2制備；
[0085] 制備方法：以重量份數計，按照上述配方首先準確稱取增稠劑，加入其質量5倍的 無菌水，室溫浸泡6h，邊升溫邊攪拌，85°C保溫25min，攪拌，充分溶解，繼續保溫，邊攪拌 邊依次加入β-環糊精、多元醇、糖、金屬氯化物，然后降溫至30°C，邊攪拌邊依次加入硫酸 銨、半胱氨酸、谷胱甘肽、抗菌肽、天然抗氧化劑、牛血清白蛋白、中草藥提取液、啤酒花提取 液、液體酶制劑充分溶解、混合，用乳酸調節液體復配酶pH值為5. 2,穩定1. 5h，同時于電場 強度40kV/cm，脈沖時間500 μ s，脈沖頻率350Hz條件下進行高壓脈沖電場（PEF)殺菌，除 菌過濾、無菌灌裝即得液體復配酶。
[0086] 經上述方法制備的液體復配酶在室溫儲存12個月菌落總數為168CFU/mL ;在40°C 和〇°C條件下儲存12個月，酶活損失率分別為2 %和1%。
[0087] 實施例4
[0088] -種啤酒液體復配酶，由以下重量份數的原料制備：
[0089] 液體酶制劑40份，啤酒花提取液10份，糖5份，天然抗氧化劑4份，中草藥提取液 4份，抗菌肽4份，增稠劑3份，β -環糊精3份，多元醇2份，谷胱甘肽2份，金屬氯化物1 份，硫酸銨1份，半胱氨酸〇. 5份，牛血清白蛋白0. 1份。
[0090] 所述液體酶制劑由中溫淀粉酶、葡聚糖酶、木聚糖酶按體積比3:1:0. 5均勻混合；
[0091] 所述糖為海藻糖、靈芝多糖、葡萄糖按質量比5:1:2均勻混合；
[0092] 所述天然抗氧化劑由葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏葉提取物按質量比 4:2:1均勻混合；
[0093] 所述增稠劑由卡拉膠、阿拉伯膠、明膠、黃原膠、CMC按質量比3:2:1:1:0. 5均勻混 合；
[0094] 所述多元醇由聚乙二醇、丙三醇、山梨醇、二硫蘇糖醇按質量比8:4:2:1均勻混 合；
[0095] 所述金屬氯化物為氯化鋅、氯化鈣、氯化鈉、氯化鎂、氯化鐵按質量比3:2:1:1:0. 1 均勻混合；
[0096] 所述啤酒花提取液由實施例1制備；
[0097] 所述中草藥提取液由實施例2制備；
[0098] 制備方法同實施例3。
[0099] 經上述方法制備的液體復配酶在室溫儲存12個月菌落總數為208CFU/mL ;在40°C 和〇°C條件下儲存12個月，酶活損失率分別為2. 2 %和1.3%。
[0100] 實施例5
[0101] 一種啤酒液體復配酶，由以下重量份數的原料制備：
[0102] 液體酶制劑60份，啤酒花提取液15份，糖10份，天然抗氧化劑9份，中草藥提取 液6份，抗菌肽6份，增稠劑5份，β -環糊精5份，多元醇5份，谷胱甘肽4份，金屬氯化物 3份，硫酸銨2份，半胱氨酸1份，牛血清白蛋白0. 3份。
[0103] 所述液體酶制劑由中溫淀粉酶、葡聚糖酶、木聚糖酶按體積比4:1. 5:1均勻混合；
[0104] 所述糖為海藻糖、靈芝多糖、葡萄糖按質量比8:3:4均勻混合；
[0105] 所述天然抗氧化劑由葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏葉提取物按質量比 6:4:3均勻混合；
[0106] 所述增稠劑由卡拉膠、阿拉伯膠、明膠、黃原膠、CMC按質量比5:4:3:2:1均勻混 合；
[0107] 所述多元醇由聚乙二醇、丙三醇、山梨醇、二硫蘇糖醇按質量比10:6:4:3均勻混 合；
[0108] 所述金屬氯化物為氯化鋅、氯化鈣、氯化鈉、氯化鎂、氯化鐵按質量比5:3:3:2:0. 3 均勻混合；
[0109] 所述啤酒花提取液由實施例1制備；
[0110] 所述中草藥提取液由實施例2制備；
[0111] 制備方法同實施例3。
[0112] 經上述方法制備的液體復配酶在室溫儲存12個月菌落總數為214CFU/mL ;在40°C 和〇°C條件下儲存12個月，酶活損失率分別為2. 5 %和1.7%。
[0113] 實施例6
[0114] 一種啤酒液體糖化酶，由以下重量份數的原料制備：
[0115] 糖化酶50份，啤酒花提取液12份，糖8份，天然抗氧化劑7份，中草藥提取液5份， 抗菌肽5份，增稠劑4份，β -環糊精4份，多元醇3份，谷胱甘肽3份，金屬氯化物2份，硫 酸銨2份，半胱氨酸0.8份，牛血清白蛋白0.2份。
[0116] 所述糖為海藻糖、靈芝多糖、葡萄糖按質量比7:2:3均勻混合；
[0117] 所述天然抗氧化劑由葡萄籽原花青素、迷迭香提取物和杏葉提取物按質量比 5:3:2均勻混合；
[0118] 所述增稠劑由卡拉膠、阿拉伯膠、明膠、黃原膠、CMC按質量比4:3:2:1.5:0. 8均勻 混合；
[0119] 所述多元醇由聚乙二醇、丙三醇、山梨醇、二硫蘇糖醇按質量比9:5:3:2均勻混 合；
[0120] 所述金屬氯化物為氯化鋅、氯化鈣、氯化鈉、氯化鎂、氯化鐵按質量比 4:2. 5:2:1. 5:0. 2 均勻混合；
[0121] 所述啤酒花提取液由實施例1制備；
[0122] 所述中草藥提取液由實施例2制備；
[0123] 制備方法同實施例3。
[0124] 經上述方法制備的液體糖化酶在室溫儲存12個月菌落總數為168CFU/mL ;在40°C 和〇°C條件下儲存12個月，酶活損失率分別為2 %和1%。
[0125] 實施例7啤酒液體復配酶的生物穩定性
[0126] 以本發明實施例6制備的液體糖化酶與市售相同生產日期的同規格液體糖化酶 為試驗對象，在相同儲藏條件（室溫、通風、避光）下，采用《GB8726-2006食品添加劑糖化 酶制劑》中檢測方法檢測了 pH值、菌落總數、致病菌等衛生指標，結果如表1 :
[0127] 表1儲存12個月微生物指標檢測結果
[0128]

【權利要求】
1. 一種啤酒液體復配酶，由以下重量份數的原料制備： 液體酶制劑40-60份，啤酒花提取液10-15份，糖5-10份，天然抗氧化劑4-9份，中草 藥提取液4-6份，抗菌肽4-6份，增稠劑3-5份，β -環糊精3-5份，多兀醇2-5份，谷胱甘肽 2-4份，金屬氯化物1-3份，硫酸銨1-2份，半胱氨酸0. 5-1份，牛血清白蛋白0. 1-0. 3份； 所述液體酶制劑為葡聚糖酶、木聚糖酶、中溫淀粉酶、α-淀粉酶、耐高溫α-淀粉酶、 真菌α-淀粉酶、糖化酶、β-淀粉酶、普魯蘭酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶中的任一種或幾 種。
2. 如權利要求1所述的啤酒液體復配酶，其特征在于，所述啤酒花提取液的制備方 法為：將啤酒花置超聲波清洗機中于200W、40KHz清洗10-15min，浙干，于-18 --22°C冷 凍l-2h后立即進行粉碎，冷凍料層厚度3-5cm，粉碎粒度0. 5-3mm，加入粉碎啤酒花重量 1- 3倍的乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇混合的質量比為2-4:1-3,用乳酸調節pH值 為3. 0-3. 5,在功率150-300W、頻率2000Hz、溫度20-35°C條件下進行微波提取20-30min， 同時在功率200-300W，頻率30-40KHZ條件下進行超聲波輔助提??；保溫l-3h，然后，在 功率200-400W、頻率2000Hz條件下進行微波提取15-20min，同時在功率300-500W，頻 率40-50KHZ條件下進行超聲波輔助提取，最后自然降溫至室溫，過濾，濾液于電場強度 35-45kV/cm，脈沖時間400-600μ s，脈沖頻率200-300HZ條件下進行高壓脈沖電場殺菌 20-30min即得啤酒花提取液。
3. 如權利要求1所述的啤酒液體復配酶，其特征在于，所述液體酶制劑由中溫淀粉酶、 葡聚糖酶、木聚糖酶按體積比3-4:1-1. 5:0. 5-1均勻混合。
4. 如權利要求1所述的啤酒液體復配酶，其特征在于，所述糖為海藻糖、靈芝多糖、葡 萄糖中一種或多種。
5. 如權利要求1所述的啤酒液體復配酶，其特征在于，所述天然抗氧化劑為葡萄籽原 花青素、迷迭香提取物和杏葉提取物中的任一一種或幾種。
6. 如權利要求1所述的啤酒液體復配酶，其特征在于，所述中草藥提取液的制備方法 為：按重量份數計，準確稱取黃芪60-70份，當歸55-65份，黨參40-45份，甘草40-45份，魚 腥草35-45份，神曲35-45份，金銀花25-35份，茯苓20-30份，遠志15-25份，炒茴香15-25 份，白術10-20份，厚樸10-20份；分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，然后于容器 中均勻混合并添加3-6倍重量的水，控制溫度70°C -90°C保持2-4h，然后降溫至45-60°C， 加入混合物料總重量5-10 %的混合酶制劑進行酶解，用乳酸調節pH值為5. 5-6. 8,酶解 2- 4h，最后添加混合物料0. 5-3倍重量乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇混合的質量比為 1:1-2,控制溫度至60°C -78°C保持3-4h，過濾，得第一濾液；添加濾渣1-3倍重量的水，控 制溫度85°C -95°C保持l_3h，然后降溫至25-35°C，過濾，得第二濾液；將第一濾液和第二 濾液按照質量比2-3:1-2合并，于電場強度35-45kV/cm，脈沖時間400-600 μ s，脈沖頻率 300-400ΗΖ條件下進行高壓脈沖電場殺菌20-30min即得中草藥提取液； 所述混合酶的重量份數組成為：內β -葡聚糖酶10-20份，外β -葡聚糖酶10-20份， β -葡萄糖苷酶10-15份，木聚糖酶15-20份，戊聚糖酶15-20份，普魯蘭酶20-30份，β -淀 粉酶10-15份，酸性蛋白酶10-15份，果膠酶10-15份，甘露糖酶10-15份，葡萄糖氧化酶 5-10份，酸性磷酸酶5-10份，脂肪酶5-8份； 所述乙醇濃度彡75%。
7. 如權利要求1所述的啤酒液體復配酶，其特征在于，所述增稠劑為卡拉膠、阿拉伯 膠、明膠、黃原膠、海藻膠、CMC、瓊脂、蜂膠、紫膠、果膠、瓜爾豆膠、皂莢糖膠、亞麻子膠、魔芋 膠中一種或者多種。
8. 如權利要求1所述的啤酒液體復配酶，其特征在于，所述多元醇為聚乙二醇、丙三 醇、山梨醇、二硫蘇糖醇、疏基乙醇中的一種或幾種。
9. 如權利要求1所述的啤酒液體復配酶，其特征在于，所述金屬氯化物為氯化鋅、氯化 鈣、氯化鈉、氯化鎂、氯化鐵中的一種或多種。
10. 如權利要求1-9任一所述的啤酒液體復配酶，其特征在于，制備方法包括如下步 驟：以重量份數計，按照配方首先準確稱取增稠劑，加入其質量4-6倍的無菌水，室溫浸泡 3_8h，邊升溫邊攪拌，80-90°C保溫20-30min，攪拌，充分溶解，繼續保溫，邊攪拌邊依次加 入β-環糊精、多元醇、糖、金屬氯化物，然后降溫至25-35°C，邊攪拌邊依次加入硫酸銨、半 胱氨酸、谷胱甘肽、抗菌肽、天然抗氧化劑、牛血清白蛋白、中草藥提取液、啤酒花提取液、液 體酶制劑充分溶解、混合，用乳酸調節液體復配酶pH值為2. 5-6,穩定0. 5-2h，同時于電場 強度35-45kV/cm，脈沖時間400-600μ s，脈沖頻率300-400HZ條件下進行高壓脈沖電場殺 菌，除菌過濾、無菌灌裝即得液體復配酶。
【文檔編號】C12N9/88GK104099313SQ201410345400
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2014年7月18日 優先權日:2014年7月18日
【發明者】邵素英 申請人:天津天綠健科技有限公司