利用MyoG基因培育京海黃雞快長系的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及家禽育種領(lǐng)域，具體涉及一種利用MyoG基因培育京海黃雞快長系的方法。該方法是提取待測樣本的雞基因組DNA，經(jīng)序列如SEQ?ID?NO：1-2所示的特異性引物擴(kuò)增得到152?bp的目的片段，目的片段經(jīng)SSCP分析，凝膠電泳后用銀染顯色，得到DNA的SSCP圖譜，根據(jù)圖譜中的帶型篩選基因型為CC的個體。統(tǒng)計分析表明CC型個體的2-16周齡均顯著或極顯著的高于TT型(P<0.05或P<0.01)。CC純合型能夠在后代中加以固定，該檢測方法簡單快捷，且不受外界環(huán)境的影響。
【專利說明】利用MyoG基因培育京海黃雞快長系的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及家禽育種領(lǐng)域，具體涉及一種利用MyoG基因培育京海黃雞快長系的 方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 隨著我國經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人民生活水平的不斷提高，優(yōu)質(zhì)雞逐步成為城鄉(xiāng)人民消費 的主流肉食品之一。畜禽的產(chǎn)肉能力及肌肉品質(zhì)均與肌纖維的數(shù)量和類型密切相關(guān)。高生 長速度，優(yōu)良的肉質(zhì)性狀一直是肉用動物長期以來的育種目標(biāo)。運用候選基因法，鑒定分離 出與生長性狀遺傳變異相關(guān)的分子標(biāo)記，有利于對家禽經(jīng)濟(jì)性狀的有效選擇。
[0003] 動物胚胎以及成體骨骼肌的發(fā)育均依賴于生肌調(diào)節(jié)因子家族的精準(zhǔn)調(diào)控，肌細(xì)胞 生成素（MyoG)基因是生肌調(diào)節(jié)因子家族的成員之一，MyoG基因的遺傳變異與肌肉的生成 相關(guān)，并最終導(dǎo)致產(chǎn)肉量的變異，研究MyoG基因?qū)μ岣呔┖｜S雞的產(chǎn)肉能力具有重要的意 義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種利用MyoG基因培育京海黃雞快長系的方 法，該方法利用MyoG基因的突變對京海黃雞的各周齡體重進(jìn)行標(biāo)記輔助選擇，不受環(huán)境影 響。
[0005] 本發(fā)明公開了利用MyoG基因培育京海黃雞快長系的方法。
[0006] 基于上述應(yīng)用的利用MyoG基因培育京海黃雞快長系的方法：提取待測樣本的雞 基因組DNA，經(jīng)序列如SEQ ID N0:1-2所示的特異性引物擴(kuò)增得到152bp的片段，目的片段 經(jīng)SSCP分析，凝膠電泳后用銀染顯色，得到DNA的SSCP圖譜，根據(jù)圖譜中的帶型篩選基因 型為CC的個體。
[0007] 本發(fā)明的原理是：針對MyoG基因設(shè)計1對引物（P1)，引物P1擴(kuò)增產(chǎn)物存在3種 基因型，測序結(jié)果與MyoG基因原序列（GenBank ID: :NC_006113. 3)比對發(fā)現(xiàn)，在外顯子3 序列的36bp處有T-C的點突變。統(tǒng)計分析表明CC型個體的2-16周齡均顯著或極顯著的 高于TT型（P〈0. 05或P〈0. 01)。CC純合型能夠在后代中加以固定，該檢測方法簡單快捷， 且不受外界環(huán)境的影響，可以作為培育京海黃雞快長系的方法。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0008] 圖1是MyoG基因擴(kuò)增產(chǎn)物的PCR-SSCP圖譜。
[0009] 圖2是京海黃雞MyoG基因不同基因型的序列比較。

【具體實施方式】 [0010] 實施例 [0011] 1. 1實驗動物
[0012] 隨機(jī)采取江蘇京海禽業(yè)集團(tuán)有限公司同一批次的378只京海黃雞母雞血樣。 翅靜脈采集血樣1. 5mL，肝素鈉抗凝，采用酚氯仿抽提法提取雞基因組DNA，溶于TE， NAN0DR0P1000核酸濃度測定儀測定濃度和純度后-20°C保存?zhèn)溆谩?. 2引物設(shè)計與PCR擴(kuò) 增
[0013] 根據(jù)GenBank中已發(fā)表的MyoG基因序列（登錄號為：NC_006113. 3)，米用Primer 3. 0設(shè)計1對引物，擴(kuò)增產(chǎn)物大小為152 bp。引物序列如下：
[0014] PI :F :5，-CTTTGCGCCAGCTCAGTT-3，（SEQ ID NO :1)
[0015] R:5/ -CTCCCCCTCCTCTCTCAGAT-3; (SEQ ID NO ：2)
[0016] PCR 反應(yīng)體系為 20μ L，包括 lOXBuffer 2μ L，MgCl2(25 mmol/L)2. 2μ L， dNTPs(10 mmol/L)0· 8μ L，上下游引物（10ymol/L)各1μ L，模板1μ L，Taq 酶 0· 2μ L，補雙 蒸水11.8yL至20yL。反應(yīng)條件為94°C預(yù)變性5 min;31個循環(huán)（94°C變性45 s，56. 3°C 退火40 s，72°C延伸35 s ;最后72°C延伸性10 min，4°C保存產(chǎn)物。PCR產(chǎn)物用10%非變性 聚丙烯酰胺凝膠檢測。
[0017] 1.3 SSCP分析和測序
[0018] 將2yL PCR產(chǎn)物和7. 5yL上樣緩沖液（98%去離子甲酰胺、0.025%溴酚藍(lán)、 0.025% 二甲苯 FF、10 mmol/L EDTA(pH 8.0)、2% 甘油）混合，98°C 變性 10 min 后，迅速 冰浴10 min，10 V/cm進(jìn)行非變性聚丙烯酰胺凝膠（PAGE30%，Acr : Bis = 29 : 1)電泳 10?12 h后，銀染顯色，顯不3種基因型（圖1)。
[0019] 兩種純合的基因型各選取3個樣本交由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司進(jìn) 行測序。測序結(jié)果與MyoG基因原序列比對，發(fā)現(xiàn)TT和CC基因型相比在外顯子3序列的 36bp處有T-C的點突變（圖2)，該突變未造成編碼氨基酸的改變。
[0020] 1. 4 MyoG基因突變位點對京海黃雞各周齡體重的遺傳效應(yīng)
[0021] 配合下列模型分析不同基因型對京海黃雞各周齡體重的影響：Y = μ +基因型效 應(yīng)+殘差效應(yīng)。MyoG不同基因型對京海黃雞各周齡的遺傳效應(yīng)見表1。
[0022] 表1 MyOG基因?qū)┖｜S雞生長性狀的遺傳效應(yīng)
[0023]

【權(quán)利要求】
1. 一種利用MyoG基因培育京海黃雞快長系的方法，其特征在于，提取待測樣本的雞基 因組DNA，經(jīng)序列如SEQ ID N0:l-2所示的特異性引物擴(kuò)增得到152bp的目的片段，目的片 段經(jīng)SSCP分析，凝膠電泳后用銀染顯色，得到DNA的SSCP圖譜，根據(jù)圖譜中的帶型篩選基 因型為CC的個體。
【文檔編號】C12Q1/68GK104087680SQ201410361667
【公開日】2014年10月8日 申請日期:2014年7月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月25日
【發(fā)明者】張跟喜, 王金玉, 唐瑩, 魏岳, 張濤, 戴國俊, 謝愷舟, 俞亞波 申請人:揚州大學(xué)