一種來源火龍果的多肽及其應用、制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及火龍果再加工領域，具體涉及一種多肽及其從火龍果中提取植物性白蛋白的方法；一種多肽ATCRTPTTLKLGGEERRRADTTGKLAA。所述的多肽在制備抗動脈硬化藥物中的應用。本發(fā)明首次采用新提取工藝獲得火龍果的提取白蛋白，在白蛋白混合物中分離得到多肽。該多肽具有抑制動脈硬化功能。拓寬了火龍果深加工，為進一步開發(fā)保健品或藥品提供原料。
【專利說明】一種來源火龍果的多肽及其應用、制備方法

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及火龍果再加工領域，具體涉及一種多肽及其從火龍果中提取植物性白 蛋白的方法

【背景技術】
[0002] 火龍果是一種低能量的水果，富含水溶性膳食纖維，具有減肥、降低膽固醇、預防 便秘、大腸癌等功效，還有豐富的纖維，能夠預防便秘。火龍果中含有一般蔬果中較少有的 植物性白蛋白，這種白蛋白會與人體內的重金屬離子結合而起到解毒的作用。它富含抗氧 化劑維生素 C，能美白皮膚防黑斑。除此之外，火龍果中鐵的含量也非常豐富。
[0003] 它含有一般植物少有的植物性白蛋白及花青素、豐富的維生素和水溶性膳食纖 維。白蛋白是具黏性、膠質性的物質，對重金屬中毒具有解毒的功效。由于工業(yè)廢水、廢棄 物處理回收未獲重視，以致各種水資源受到了嚴重重金屬污染，除了直接飲用水中毒外，人 類攝人食品重金屬含量超標也易中毒。而白蛋白在人體內遇到重金屬離子時，會自動與重 金屬離子結合，由排泄系統(tǒng)排除體外，起到解毒的作用。因此，食用含白蛋白豐富的火龍果， 可避免重金屬離子的吸收而中毒。白蛋白對胃壁還有保護作用。而且火龍果花、果、莖中的 白蛋白十分優(yōu)良，穩(wěn)定性極佳。


【發(fā)明內容】

[0004] 發(fā)明目的
[0005] 本發(fā)明提供一種來源于火龍果的多肽，該多肽是從白蛋白中分離得到，該多肽具 有增加免疫力，促進胃腸蠕動，有望開發(fā)成保健品或藥物。
[0006] 技術方案
[0007] 一種多肽 ATCRTPTTLKLGGEERRRADTTGKLAA。
[0008] -種多肽在制備抗動脈硬化藥物中的應用。
[0009] 本發(fā)明提供一種制備火龍果白蛋白，及純化工藝：
[0010] 將火龍果的皮和果肉分離，然后用濾網(wǎng)過濾果肉溶液中的果籽。果籽用低溫粉碎 器破碎，然后提取總蛋白。在低溫條件下，利用金屬螯合原理，從總蛋白中提取白蛋白，然后 純化。
[0011] 具體方法如下：
[0012] 1、在環(huán)境溫度為16°C的空間進行。在將火龍果剝皮之后，果肉用低溫攪拌器破碎， 按照1:10加水；將火龍果脫皮，火龍果皮用來提取花青素。火龍果的果肉搗爛，然后用濾網(wǎng) 將火龍果的籽從果肉中分離出來。去籽的果肉，拿去做果漿，然后生產(chǎn)火龍果飲料。火龍果 的籽，在低溫下破碎，分離，加水提取總蛋白。
[0013] 2、總蛋白溶液用4倍體積乙酸-乙酸鈉緩沖液稀釋，〇· lmol/L NaOH調整蛋白稀釋 液pH至4. 5。
[0014] 3、室溫下用電磁攪拌器邊攪拌邊緩慢滴加辛酸（加入量為1L蛋白稀釋液加 25ml)，滴加完后繼續(xù)攪拌30min。 、
[0015] 4、離心（10000轉/分，20分鐘），收集上清液，棄去沉淀，上清液用濾紙過濾除去 懸浮物，量體積。
[0016] 5、按照10%體積加入1〇><磷酸鹽-似(：1緩沖液，用 5"1〇1/1^￡1〇}1調邱至7. 4。
[0017] 6、上清液4°C預冷lOmin，測量溶液總體積，在4°C按277g/L緩慢加入硫酸銨粉末 (終濃度達到45%飽和度），邊加邊攪拌，加完后繼續(xù)攪拌3〇min。
[0018] 7、離心（5000轉/分，15分鐘），棄去上清液，收集沉淀。
[0019] 8、沉淀用少量透析液溶解（為原蛋白體積的丨/10)，透析并更換兩次透析液。
[0020] 9、透析后的蛋白溶液離心（5000轉/分，20分鐘），上清液于_2〇°C保存。一
[0021] 1〇、白蛋白從蛋白中的分離-固定金屬親和色譜制備；利用磷酸鹽與金屬離子柱 中的金屬離子螯合，然后與總蛋白中的白蛋白結合，然后利用洗脫液將白蛋白洗脫，（離 子柱可以重復使用）。洗脫后的白蛋白進行純化。半制分離純化，乙腈：水 (20:80)得到的產(chǎn)物凍干后，即為多肽。應用上述方法提取的多肽，經(jīng)過質譜鑒定，序列為 ATCRTPTTLKLGGEERRRADTTGKLAA，該序列為全新序列。
[0022] 有益效果：
[0023] 1、本發(fā)明首次采用新提取工藝獲得火龍果的提取白蛋白，在白蛋白混合物中分離 得到多肽。該多肽具有抑制動脈硬化功能。拓寬了火龍果深加工，為進一步開發(fā)保健品或 藥品提供原料。
[0024] 2、豐產(chǎn)的火龍果每畝產(chǎn)量在1噸_2噸之間，有2〇 %左右為小果和次果，這些次果， 銷路很差，如何解決這些次果的銷路，提高產(chǎn)品附加值，一直困擾果農。如果對這些次果，首 先提取植物性白蛋白，然后分離果肉和果皮。果皮可以提取花青素和天然色素，果肉可以制 備果醬和飲料。這樣綜合利用，將大大提高紅心火龍果的價值，增加農民收入。

【具體實施方式】
[0025] 實施例1
[0026] 1、在環(huán)境溫度為16Γ的空間進行。在將火龍果剝皮之后，果肉用低溫攪拌器破碎， 按照1:10加水；將火龍果脫皮，火龍果皮用來提取花青素。火龍果的果肉搗爛，然后用濾網(wǎng) 將火龍果的籽從果肉中分離出來。去籽的果肉，拿去做果漿，然后生產(chǎn)火龍果飲料。火龍果 的籽，在低溫下破碎，分離，加水提取總蛋白。
[0027] 2、總蛋白溶液用4倍體積乙酸-乙酸鈉緩沖液稀釋，〇· lmol/L NaOH調整蛋白稀釋 液pH至4. 5。
[0028] 3、室溫下用電磁攪拌器邊攪拌邊緩慢滴加辛酸（加入量為1L蛋白稀釋液加 25ml)，滴加完后繼續(xù)攪拌30min。
[0029] 4、離心（10000轉/分，20分鐘），收集上清液，棄去沉淀，上清液用濾紙過濾除去 懸浮物，量體積。
[0030] 5、按照10%體積加入10X磷酸鹽-NaCl緩沖液，用5mol/LNa0H調pH至7. 4。
[0031] 6、上清液4?預冷lOmin，測量溶液總體積，在4°C按277g/L緩慢加入硫酸銨粉末 (終濃度達到45 %飽和度），邊加邊攪拌，加完后繼續(xù)攪拌30min。
[0032] 7、離心（5000轉/分，15分鐘），棄去上清液，收集沉淀。
[0033] 8、沉淀用少廳析液溶解（為原蛋白體積的^10)，透析f；更換兩次透析液。
[0034] 9、透析后的蛋白溶液離心（5〇〇〇轉/分，20分鐘），上清液于-2〇° C保存。
[0035] 10、白蛋白從蛋白中的分離-固定金屬親和色譜制備；利用磷酸鹽與金屬離子竺 中的金屬離子螯合，然后與總蛋白中的白蛋白結合，然后利用洗脫液將白蛋白洗脫，（禹 子柱可以重復使用）。洗脫后的白蛋白進行純化。半制備即-即以^分離純化，乙腈：水 (20:80)得到的產(chǎn)物凍千后，即為多肽。應用上述方法提取的多肽，經(jīng)過質譜鑒定，序列為 ATCRTPTTLKLGGEERRRADTTGKLAA,該序列為全新序列。
[0036] 本發(fā)明涉及多肽也可以委托公司合成。
[0037] 實施例2
[0038] 多肽對小鼠動脈粥樣硬化模型的影響
[0039] 建立小鼠動脈粥樣硬化模型。雄性8周齡的C57BL/6J小鼠40只，隨機分為4 組，分別為：A組為空白對照組：普通飼料喂養(yǎng)；B組為模型對照組：造模+高脂飼料喂養(yǎng)； C組為藥物干預組：造模+高脂飼料+多肽（l〇mg/kg/d) ;D為陽性藥干預組：造模+高脂 飼料+瑞舒伐他汀片（l〇mg/kg/d)。連續(xù)12周。A組小鼠飼料為普通飼料，B、c、 D組小 鼠用高脂高膽固醇飼料（含I5%豬油+〇. 25%膽固醇）喂養(yǎng)，以加速動脈粥樣硬化模型 的形成。I2周后，記錄小鼠體重，檢測多肽對血清膽固醇的影響：血清總膽固醇（total cholesterol, TC)、甘油三酯（tryglyeride，TG)、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL_C)和低密度脂蛋白膽固醇（l〇w density lipoprotein cholesterol, HDL-C)的水平；，檢測小鼠主動脈粥樣硬化形成情況：對小鼠主動脈大體和 主動脈根部冰凍切片行油紅〇染色，對動脈粥樣斑塊面積進行定量；。
[0040] 結果：各組實驗小鼠實驗期間體重都有增長趨勢。隨著喂養(yǎng)時間的變化，高脂飲食 喂養(yǎng)組的體重增長較正常飲食組快（Ρ〈〇·〇 5,見表1)。多膚組小鼠體重增長與正常飲食組 相當（ρ>〇·〇5)，與模型組相比體重較輕（ρ〈〇_〇 5)。多肽組與高脂高膽固醇喂養(yǎng)的模型小鼠 組相比，TG、TC、HDL-C、LDL-C水平顯著降低（Ρ<0· 01，見表2)，動脈粥樣斑塊面 小（Ρ<〇· 01，見表3)，與模型對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義。
[0041] 表1多肽對小鼠動脈粥樣硬化模型小鼠體重的影響
[0042]

【權利要求】
i.一種多肽，其特征在于其氨基酸序列為atcrtpttlklggeerrradttgklaa。
2· -種如權利要1所述的多肽在制備抗動脈硬化藥物中的應用。
3·如權利要求1所述的多肽與藥學藥用輔料形成制劑。
4·如權利要求3所述的多肽與藥學藥用輔料形成制劑，其特征在于所述的輔料有蔗 糖，谷氨酸，甘露醇。
【文檔編號】A23J3/14GK104186919SQ201410425577
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年8月26日 優(yōu)先權日:2014年8月26日
【發(fā)明者】葉亞東, 霍世元, 張娟, 全利, 陶露 申請人:常州亞當生物技術有限公司