疣粒野生稻抗白葉枯病基因Me094及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開一種疣粒野生稻抗白葉枯病基因Me094及其應用。所述基因Me094的cDNA全長的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO：1所示。本發明首次克隆出疣粒野生稻抗白葉枯病基因Me094，并獲得轉Me094基因植株。該基因在疣粒野生稻中屬于誘導型表達，轉入栽培稻后可顯著提高其對白葉枯病的抗性。本發明發掘的疣粒野生稻抗白葉枯病基因Me094對培育高抗白葉枯病水稻具有重要的實際及理論意義，對其他植物對白葉枯病害的防治也具有指導作用。
【專利說明】疣粒野生稻抗白葉枯病基因 Me094及其應用

【技術領域】
[0001] 本發明涉及分子生物學【技術領域】，具體涉及一種由疣粒野生稻中克隆的抗白葉枯 病的新基因。

【背景技術】
[0002] 白葉枯病由革蘭氏陰性菌黃單孢水稻變種（Xanthomonas oryzae pv.oryzae，Xoo)引起的的細菌性病害，最早是1884年在日本福崗地區發現。20世紀50年 代以來，白葉枯病發病范圍逐步擴大，目前已遍及世界各水稻產區。由于其危害嚴重，化學 防治不僅污染周邊環境，還難以奏效，因此，選育帶有主效抗病基因的品種已經成為控制水 稻白葉枯病經濟有效的方法。
[0003] 水稻白葉枯病抗病基因發掘與鑒定是開展抗白葉枯病育種的重要基礎。目前，人 們在抗白葉枯病基因發掘上已取得顯著的成果，截至2013年3月，經國際注冊確認和期刊 報道的水稻白葉枯病抗性基因共38個。其中26個為顯性基因 Xa，其它為隱性基因 xa ;已 被定位的抗性基因有26個，并且Xal、xa5、xal3、Xa21、Xa23、Xa26、Xa27等7個基因已成功 克隆。但是，隨著育種家對栽培稻品種的長期選育和廣泛推廣，品種遺傳背景日益狹窄，力口 之白葉枯菌生理小種不斷進化，導致了一些攜帶較窄抗譜抗病基因的品種逐漸退化。因此， 發掘和鑒定新的抗白葉枯基因對水稻白葉枯病的防治有著十分重要的意義。
[0004] 野生稻由于長期生長在各種逆境中，已經積累了很多優良的基因，研究結果表明， 野生稻中抗病蟲害的檢出率大約是栽培稻的50倍，所以，從野生稻中挖掘有利基因用于栽 培稻的遺傳改良具有十分重要的意義。在已被鑒定出的38個水稻抗白葉枯病基因中，其 中有7個來自于野生稻，即顯性基因 Xa21、Xa23、Xa27、Xa29、Xa30、Xa32和隱性基因 xa32。 Xa21是第一個從野生稻中被克隆出來的重要功能基因，Khush等報道其源自西非長藥野生 稻（Oryza longistaminata) (Khush 等，Rice Gene Newslett, 1990, 7:121-122)，在水稻分 蘗后期抗當時菲律賓的全部6個小種。顯性基因 Xa23、Xa27、Xa29、Xa30、Xa32分別來自于 普通野生稻、小粒野生稻、藥用野生稻、普通野生稻和澳洲野生稻，隱性基因 xa32源自疣粒 野生稻。
[0005] 據程在全等報道（程在全等，植物病理學報，2008, 38:582-591)，云南現存疣粒野 生稻（Oryza meyeriana)居群37個，且大多數居群對白葉枯病都有很強的抗性，甚至還有 免疫的。但是，通過設計已知基因序列的引物對不同居群擴增抗病基因或同源片段都未擴 增出目前已知已經報道的抗白葉枯病基因 Xa21和Xal，因此，推測高抗疣粒野生稻中可能 含有多個尚未分離克隆的抗白葉枯病新基因。另外，阮輝輝等報道的xa32屬于隱性基因且 尚未被克隆（阮輝輝等，西北農業學報，2008, 17 (6) : 170-174)。
[0006] 本發明所述的疣粒野生稻抗白葉枯病基因 Me094編碼金屬硫蛋白。目前，已成功 克隆了多個植物金屬硫蛋白基因，有些研究結果發現，植物的衰老、機械傷害和病原物的侵 染能誘導金屬硫蛋白的表達。如有研究認為煙草中的金屬硫蛋白基因表達受機械傷害和 煙草花葉病毒的誘導而過量表達。當植物受到機械傷害和病原物的侵染時，植物遭受到氧 化脅迫時就會通過產生反應氧以增強植物的抗病性和阻止病癥的進一步擴展，同時認為被 誘導的金屬硫蛋白可以降低細胞內的自由金屬離子濃度同時阻止被脅迫植物增加反應氧。 當植物受到病原物的侵染時，由于植物體內大分子物質的降解而導致許多酶釋放出金屬離 子，在這個過程中金屬硫蛋白的作用是將釋放出來的金屬離子從感染的部位分離并運輸到 植物發育的組織中。有關水稻金屬硫蛋白的研究已有少量報道，目前己獲得的金屬硫蛋白 基因序列對研究疣粒野生稻細胞內的基因表達調控作用、抗病機制提供了依據，同時對病 原早期的抗病反應、激活細胞內一些防衛基因的表達等各方面的研究也提供了很好的研究 基礎。


【發明內容】

[0007] 本發明目的是為解決抗白葉枯病的品種逐漸退化問題，提供一種疣粒野生稻抗白 葉枯病的新基因 Me094及其在水稻抗病中的應用或應用于改良其他植物抵御病害的能力。
[0008] 本發明所提供的一種疣粒野生稻抗白葉枯病基因 Me094的cDNA全長的核苷酸序 列如序列表中SEQ ID NO :1所示。
[0009] 所述的疣粒野生稻抗白葉枯病基因 Me094的CDNA片段賦予植物對由白葉枯病菌 (Xanthomonas oryzae pv.oryzae, Xoo)引起的病害產生抗病反應。所克隆的Me094抗白葉 枯病基因編碼金屬硫蛋白。這種蛋白質富含半胱氨酸，其主要作用是參與植物中微量元素 的儲存、運輸和代謝、重金屬的解毒、自由基的清理以及增強機體的免疫力和抗應激等，同 時還參與植物的脅迫保護反應過程。
[0010] 本發明還提供了所述疣粒野生稻抗白葉枯病基因 Me094在水稻抗白葉枯病中的 應用。
[0011] 與現有技術相比，本發明的有益效果是：
[0012] 本發明首次克隆出疣粒野生稻抗白葉枯病基因 Me094,并獲得轉Me094基因植株。 該基因在疣粒野生稻中屬于誘導型表達，轉入栽培稻后可顯著提高其對白葉枯病的抗性。 本發明發掘的疣粒野生稻抗白葉枯病基因 Me094,通過遺傳轉化獲得的轉Me094基因水稻， 主要用于抗白葉枯病水稻育種，避免白葉枯病細菌病害的危害，對培育高抗白葉枯病水稻 具有重要的理論及實際意義，對其他植物白葉枯病害防治也具有指導作用。
[0013] 序列表中SEQ ID NO :1所示的是本發明疣粒野生稻抗白葉枯病基因 Me094的cDNA 全長的核苷酸序列。
[0014] 序列表中SEQ ID NO :2所示的是疣粒野生稻抗白葉枯病相關基因 Me094編碼的氨 基酸序列。
[0015] 序列表中SEQ ID NO :3所示的是Me094的EST序列上游引物Me094-E(+)的堿基 序列。
[0016] SEQ ID NO :4所示的是Me094的EST序列下游引物Me094-E(_)的堿基序列。
[0017] SEQ ID NO :5所示的是接頭引物Ap-dT的堿基序列。
[0018] SEQ ID NO :6所示的是Me094的ORF序列上游引物Me094-F(+)的堿基序列。
[0019] SEQ ID NO :7所示的是Me094的ORF序列下游引物Me094-F(_)的堿基序列。
[0020] SEQ ID NO :8所示的是Me094基因的3'端核苷酸序列。
[0021] SEQ ID NO :9所示的是Me094基因的5'端核苷酸序列。
[0022] SEQ ID NO :10所示的是疣粒野生稻抗白葉枯病基因 Me094的EST序列。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0023] 圖1 :含有Me094基因的表達載體pCAMBIA1300-BI_Me094圖譜。
[0024] 圖2 :轉Me094基因水稻的DNA的PCR檢測陽性植株圖，圖中M為DL2000Marker， 1為陽性對照，2為陰性對照，3-15為再生植株。
[0025] 圖3 :Me094基因的半定量RT-PCR顯示圖。圖中β-Acti是內參基因，CK、24h、48h、 72h、96h、120h分別為接無菌水對照、白葉枯病病原菌處理24h、48h、72h、96h、120h的cDNA 半定量RT-PCR的擴增結果。

【具體實施方式】
[0026] 下面結合具體實施實例，進一步闡述本發明。各實施例中無特殊說明為常規方法。
[0027] 試驗材料：景洪撫粒野生稻（Oryza meyeriana)。白葉枯病病原菌Y8,白葉枯病病 原菌Y8為中國云南省典型的白葉枯病致病菌株，該菌株使用是利用其白葉枯病菌對水稻 的侵染能力的共性導致水稻葉片形成白葉枯病病斑，因此，使用其它具有白葉枯病致病能 力的各種白葉枯病菌菌株都能達到本發明的效果。以下各實施例所用試劑均為市售。
[0028] 實施例1 :撫粒野生稻抗白葉枯病基因 Me094表達序列標簽的驗證和表達分析
[0029] (1)材料的培養及處理
[0030] 景洪撫粒野生稻（Oryza meyeriana)栽于塑料大棚溫室內，直至開花期。
[0031] 用NA培養基活化白葉枯病病原菌Y8,28°C培養2-3d，用無菌蒸餾水洗下菌苔，配 制成〇D_處值為0.6的菌液。下午15:00以后（該時段為白葉枯病病原菌感染能力最強） 以剪葉法接種于溫室中的疣粒野生稻葉片，對照組用無菌水模擬接種，接菌后分別于24h、 48h、72h、96h、120h等量取樣，對照即無菌水剪葉的疣粒野生稻也同時等量取樣，取樣后立 即把樣品放入液氮中速凍，并放_70°C冰箱中保存。
[0032] (2)總RNA的提取、定量及檢測
[0033] 總RNA的抽提采用TRIzol Reagent (美國Invitrogen公司）操作方法按公司提 供的試劑盒說明書進行。
[0034] 抽提完后，使用Fermentas公司的DNase I (RNase-free)去除總RNA中殘留的基 因組DNA。隨后取5 μ L總RNA測定其在260nm、280nm處的光密度及0D26Q/0D28Q的比值，估 計總RNA的純度，再通過OD 26tl值對疣粒野生稻葉片的總RNA進行濃度計算。取3 μ L總RNA 在1 %瓊脂糖凝膠上分離總RNA，檢測總RNA的完整性。
[0035] (3)半定量RT-PCR分析
[0036] 取不同接菌時期的等量總RNA做反轉錄合成cDNA第一鏈，具體方法按照 TIANScript cDNA第一鏈合成試劑盒（北京天根生物技術有限公司）說明書操作。根據 Me094的EST序列設計Me094-E引物，以β -Actin基因作為內參基因進行不同時期的表達 分析。
[0037] Me094的EST序列上游引物Me094-E(+)的堿基序列如序列表中SEQ ID NO :3所 示，Me094的EST序列下游引物Me094-E(_)的堿基序列如序列表中SEQ ID NO :4所示。
[0038] 圖3是Me094基因的半定量RT-PCR結果，結果顯示Me094基因在疣粒野生稻中受 白葉枯病菌表達，且在120h內隨著接菌時間的增長表達量也隨著增加，這說明Me094可能 與疣粒野生稻抗白葉枯病有重要的關聯。
[0039] 實施例2 :疣粒野生稻抗白葉枯病基因 Me094全長的克隆
[0040] 本發明中Me094基因全長的獲得是通過3' RACE和5' RACE的方法。
[0041] 3'RACE以實施例1中提取的總RNA為模板，設計接頭引物Ap-dT代替TIANScript cDNA第一鏈合成試劑盒中的Oligd(T)引物，其他操作與該試劑盒的說明書相同，將已擴增 的片段進行回收測序，從而獲得Me094基因的3'端序列。接頭引物Ap-dT的喊基序列如序 列表中SEQ ID NO :5所示。
[0042] 5' RACE的操作步驟參照大連寶生物工程有限公司5' RACE全長試劑盒進行操作， 從而犾得Me094基因的5'端序列。最后將Me094基因的5'端序列、3'端序列和基因 Me094 的EST序列拼接成一個完整的疣粒野生稻抗白葉枯病基因 Me094的cDNA全長序列如序列 表中SEQ ID NO :1所示。
[0043] Me094基因的3'端序列如序列表中SEQ ID NO :8所不。
[0044] Me094基因的5'端序列如序列表中SEQ ID NO :9所不。
[0045] 疣粒野生稻抗白葉枯病基因 Me094的EST序列如序列表中SEQ ID NO : 10所示。
[0046] Μθ094基因 EST序列的猶得：
[0047] 疣粒野生稻抗白葉枯病相關基因 Me094的的EST序列是從已構建的疣粒野生稻受 白葉枯病菌誘導的抑制差減文庫（SSH文庫）中獲得的，該SSH文庫按照王天佐等人的方法 構建（王天佐等，干旱脅迫下黃花苜蓿與蒺藜苜蓿兩個抑制性差減雜交文庫的構建及分析 [J].草業學報，21 (6) : 175-181，2012)，從構建好的SSH文庫中隨機挑選288條序列送到上 海生工生物工程有限公司進行測序，然后得到的序列在GenBank的非冗余核酸數據庫中進 行Blast比對分析，得到與水稻金屬硫蛋白基因同源性達到91 %的EST序列Me094。
[0048] 實施例3 :重組農桿菌的獲得
[0049] (l)Me094基因的表達載體構建
[0050] 根據拼接的疣粒野生稻抗白葉枯病基因 Me094的cDNA全長序列設計包含完整 開放閱讀框的Me094-F引物，設計時加入酶切位點，用于將Me094基因重組到表達載體 PCAMBIA1300 中。含有 Me094 基因的表達載體 pCAMBIA1300-BI-Me094 圖譜見圖 1。Me094 的ORF序列上游引物Me094-F(+)的堿基序列如序列表中SEQ ID NO :6所示，Me094的ORF 序列下游引物Me094-F(_)的堿基序列如序列表中SEQ ID N0:7所示。
[0051] (2)轉化農桿菌
[0052] 取_70°C保存的LBA4404根癌農桿菌感受態，置冰上融解。取1 μ L含有Me094基 因的表達載體pCAMBIA1300-BI-Me094的質粒加入到100 μ L感受態中，混勻，加入到處理好 的電擊杯中。設置2200V電壓，點擊轉化。電擊完成加入900 μ 1的液體YEP培養基，28°C， 200rpm搖床培養I. 5h，菌液涂布在含50μ g/mL卡那霉素（Kan)和100μ g/mL利福平（Rif) 平板上，28 °C培養至形成單菌落。
[0053] (3)陽性克隆的鑒定與保存
[0054] 挑取轉化的農桿菌單菌落接種于含50 μ g/mL Kan和100 μ g/mL Rif的液體培養 基中，28°C，200rpm搖床培養16h，取IyL菌液進行PCR檢測，檢測引物為Me094-F(+)和 Me094-F(_)。取檢測結果為陽性的菌液，混合30%甘油，置于甘油管中，于-70°C超低溫冰 箱中保存，備用。
[0055] 實施例4 :農桿菌介導的水稻遺傳轉化
[0056] 本發明是利用感白葉枯病栽培稻02428(栽培稻02428為市售水稻品種）的成熟 胚進行的遺傳轉化，具體操作過程如下：
[0057] (1)水稻愈傷的誘導和繼代
[0058] 取栽培稻02428成熟種子去殼后用75%乙醇消毒l-2min，無菌蒸餾水洗滌2-3次 后，用20%的NaClO并加入一滴吐溫20滅菌25min，消毒完之后用無菌蒸餾水漂洗5-6次， 漂洗干凈后用無菌蒸餾水浸泡種子2-3h。最后從無菌蒸餾水中取出種子置于無菌濾紙上吸 干水分，然后接種于誘導培養基上，每皿12-15粒。28°C恒溫培養箱暗培養兩周后，將長出 來的愈傷組織切下接種到繼代培養基上，繼代一周以后用于農桿菌的轉化。所述的誘導培 養基的配方是：MS+蔗糖30g/L+2, 4-二氯苯氧乙酸（2, 4-D)3. Omg/L+激動素（KT)O. 4mg/L， pH = 5· 8 ;所述的繼代培養基的配方是：MS+蔗糖30g/L+2, 4-二氯苯氧乙酸（2, 4-D)2. Omg/ L+KTO. 4mg/L, pH = 5. 8〇
[0059] (2)含目的Me094基因的表達載體pCAMBIA1300-BI-Me094的農桿菌懸浮菌液的制 備
[0060] 取出保存于_70°C的含有目的Me094基因的表達載體pCAMBIA1300-BI-Me094的根 癌農桿菌LBA4404,劃線接種于添加了 25μ g/mL Rif和50μ g/mL Kna的LB平板上，在28°C 下倒置暗培養2-3d ;從平板上挑取單菌落，接種于30mL添加了 25 μ g/mL Rif和50 μ g/mL Kna YEB液體培養基中，28°C，180rpm震蕩培養16-20h進行活化；活化后得到含目的Me094 基因的表達載體pCAMBIA1300-BI-Me094的農桿菌懸浮菌液（以下簡稱：懸浮菌液），用于 浸泡栽培稻02428愈傷組織。
[0061] (3)水稻愈傷組織與農桿菌的共培養
[0062] 將繼代的質量較好的栽培稻02428愈傷組織切割成直徑2-5mm的小塊并轉入共培 養基，然后將懸浮菌液注射入共培養基，使菌液充分浸泡愈傷，然后將多余菌液吸出，密封。 或者將愈傷組織浸入準備好的懸浮菌液中，浸染20min，期間要緩慢搖動，然后將菌液倒出， 用濾紙把愈傷組織吸干，置于準備好的共培養基上。28°C恒溫培養箱暗培養2-3天。所述 的共培養基的配方是=MS+蔗糖30g/L+2,4-D 2. Omg/L+乙酰丁香酮（As)20mg/L，pH = 5. 2。
[0063] (4)抗性水稻愈傷組織的篩選
[0064] 首先將共培養的愈傷組織用無菌蒸餾水清洗5-6次，每次2-3min，再用MS液體 培養基+500mg/L頭孢拉定震蕩清洗并過夜，待洗液清澈時，用無菌水清洗2-3次后將愈傷 組織置于無菌紙上，并在超凈臺將其風干。接著將愈傷組織轉入篩選培養基，28°C暗培養 15-20d后一些褐化的愈傷組織邊緣長出乳白色的新的抗性愈傷組織，將這些新長出的抗性 愈傷組織轉到新鮮配制的篩選培養基上繼續篩選15-20d。所述的篩選培養基的配方是： MS+ 蔗糖 20g/L+ 甘露糖 10g/L+2, 4-D2. Omg/L+ 頭孢拉定 250mg/L，pH = 5. 8。
[0065] (5)抗性水稻愈傷組織的分化、生根及煉苗
[0066] 從經兩輪篩選后長出的抗性愈傷組織中，挑選乳黃色致密的抗性愈傷組織轉至含 有250mg/L頭孢拉定的分化培養基上，放到28°C，16h/d的光照培養箱中培養，經過15-20d 有綠點出現，30-40d進一步分化出小苗。
[0067] 待幼苗在分化培養基長至2_3cm后，將其轉入生根培養基，并使幼苗的根部深 入到生根培養基的內部，放到28°C，16h/d的光照培養箱中培養，待幼苗根系比較發達苗 高約IOcm時進行煉苗。所述的分化培養基的配方是：MS+蔗糖30g/L+6-芐氨基腺嘌呤 (6_BA)2. Omg/L+萘乙酸（NAA)O. 5mg/L+KT I. 5mg/L+頭孢拉定 150mg/L，pH = 5. 8。所述的 生根培養基的配方是：MS+蔗糖15g/L+NAA0. 5mg/L+頭孢拉定150mg/L，pH = 5. 8。
[0068] 用自來水將幼苗根部瓊脂清洗干凈后放入（30mmX 180mm)大試管中，加入少量 1/2MS培養液（pH5. 8-6. 4)，放在光照培養架上，每2-3天換一次1/2MS培養液。在室內煉 苗7-8d后移栽至溫室土壤環境條件下，每2d澆一次水，水面以不淹沒小苗為度，如果天晴， 需要遮蔭到小苗成活（以吐水為準）即得到轉基因再生植株。
[0069] 實施例5 :轉基因再生植株的分子生物學檢測和抗性鑒定
[0070] (I)PCR 檢測
[0071] 待實施例4所獲得的轉基因再生植株生長旺盛時，取其嫩葉，提取葉片中的DNA， DNA的提取采用CTAB法。
[0072] 1)分別取100_200mg所述的轉基因再生植株的幼嫩葉片加液氮研磨成粉末狀，力口 入 Iml 提取緩沖液（2% CTAB，IOOmM Tris-Hcl ρΗ8· 0, 20mM EDTA ρΗ8· 0,1. 4M NaCl)，置于 65°C水浴鍋中保溫60-90min，其間不斷搖勻；
[0073] 2)室溫，12000rpm 離心 IOmin ;
[0074] 3)將上清液轉移至另一干凈的1.5ml離心管中，加入等體積的氯仿：異戊醇 (24:1)，振蕩混勻；
[0075] 4)靜置片刻后，室溫，12000rpm離心IOmin ;
[0076] 5)將上清液轉移至新的I. 5ml離心管中，加入2/3體積的異丙醇置于_20°C沉淀 30min_lh ;
[0077] 6)室溫，12000rpm 離心 5min ;
[0078] 7)棄去上清液，加入ImL 75%的乙醇洗漆沉淀，室溫，5000rpm離心5min ;
[0079] 8)重復步驟7 ;
[0080] 9)沉淀在室溫中晾至透明狀，加入50 μ LTE(K)OmM Tris-cl ρΗ8· 0, ImM EDTA)或 ddH20溶解沉淀，加入2 μ LRNA酶；
[0081] 10)取3 μ LDNA進行瓊脂糖凝膠電泳，檢測DNA的質量。
[0082] 以提取的水稻總DNA為模板（非轉基因植株為陰性對照，ΜΕ094基因的表達載體 pCAMBIA1300-BI-Me094 為陽性對照），以Me094-F(+)和Me094-F(_)為引物，進行PCR檢測。 檢測結果如圖2所示，其中標記為5、6、9、11、12、14的泳道處存在與陽性對照相同大小的基 因，表明這幾株再生植株可能為陽性轉基因植株。
[0083] (2)抗病性鑒定
[0084] 白葉枯病菌株Y8 (市售）在NA培養基斜面上28°C培養2-3天活化，配制成0D_ 處值為〇. 6的菌液；在孕穗期使用剪葉法對PCR鑒定的陽性轉基因植株接種白葉枯病菌Y8 生理小種，以同期栽培的非轉基因植株02428為對照（接種6株，編號為1-6)，每株剪5片 完全伸展的葉子的葉尖l-3cm。接種20天后，當病斑長度明顯且穩定時調查病情，對每株葉 片進行測量，其中圖2中的5、6、9泳道的轉基因植株在表1中標記為轉基因植株1、2、3,圖 2中的11、12、14泳道轉基因植株在表1中標記為轉基因植株4、5、6號，計算病斑長度并統 計平均值，根據方中達提出的抗性分級標準進行如下分級：
[0085] 0 級（I):病斑長度 0-0· 2cm ;
[0086] 1 級（HR):病斑長度 0· 2-1. 5cm ;
[0087] 3 級（MR):病斑長度 I. 5-3. Ocm ;
[0088] 5 級（MS):病斑長度 3. 0-5. Ocm ;
[0089] 7 級（S):病斑長度 5. 0-10. Ocm ;
[0090] 9級（HS):病斑長度大于KX 0cm。
[0091] 基因 Me094轉化植株對白葉枯病菌的抗病性鑒定結果見表1，表明本發明疣粒野 生稻抗白葉枯病基因 Me094轉化植株對白葉枯病菌的抗性較非轉基因植株有顯著提升，表 明本發明基因 Me094為抗白葉枯病的新基因。
[0092] 表1基因 Me094轉化植株抗白葉枯病的抗病性鑒定結果
[0093]

【權利要求】
1. 疣粒野生稻抗白葉枯病基因財，其cDNA全長核苷酸序列如SEQ ID NO :1所示。
2. 權利要求1所述的疣粒野生稻抗白葉枯病基因在水稻抗白葉枯病中的應用。
【文檔編號】C12N15/29GK104404053SQ201410673790
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年11月21日 優先權日:2014年11月19日
【發明者】程在全, 賀斌, 李定琴, 李維蛟, 余騰瓊, 鐘巧芳, 肖素勤, 柯學, 陳玲, 付堅, 王玲仙, 殷富有, 張敦宇, 蔣聰, 李娥賢, 羅紅梅, 蔣春苗, 王波, 曾民, 黃興奇 申請人:云南省農業科學院生物技術與種質資源研究所