胰島分離裝置制造方法
【專利摘要】本實用新型公開了一種胰島分離裝置，包括前置箱、消化系統(tǒng)、收液箱及兩個蠕動泵，所述消化系統(tǒng)具有消化罐，所述消化罐的內(nèi)部具有第一濾網(wǎng)層及第二濾網(wǎng)層，所述消化罐具有雙層空心壁，所述雙層空心壁的外壁具有進水口和出水口，所述消化罐的底部具有入口及出口，所述前置箱、蠕動泵及消化罐的入口依次連通，所述消化罐的出口、蠕動泵及收液箱依次連通，所述第一濾網(wǎng)層的網(wǎng)孔尺寸為600-1000μm，所述第二濾網(wǎng)層的網(wǎng)孔尺寸為200-600μm。本實用新型涉及的一種胰島分離裝置，成本低，分離效果好且操作簡便。
【專利說明】
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本實用新型涉及生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，特別是涉及一種胰島分離裝置。 胰島分離裝置

【背景技術(shù)】
[0002] 胰島pancreaticislets(langerhans)是胰的內(nèi)分泌部分，是許多大小不等和形 狀不定的細胞團，散布在胰的各處，可控制碳水化合物的代謝；如胰島素分泌不足則患糖尿 病。胰島素是促進合成代謝、調(diào)節(jié)血糖穩(wěn)定的主要激素。
[0003] 現(xiàn)有分離技術(shù)主要應(yīng)用機械分離法，持續(xù)應(yīng)用機械力量和消化液流動的沖擊力來 沖擊胰腺達到消化的目的。這種分離方法快速徹底，但是分離后的胰島容易破碎，不適合哺 乳動物的胰島分離，比如成年豬和人的胰島分離。 實用新型內(nèi)容
[0004] 基于此，有必要提供一種分離純度高，成本低且操作簡便的胰島分離裝置。
[0005] -種胰島分離裝置，包括前置箱、消化系統(tǒng)、收液箱及兩個蠕動泵；
[0006] 所述消化系統(tǒng)具有消化罐，所述消化罐的內(nèi)部具有第一濾網(wǎng)層及第二濾網(wǎng)層，所 述消化罐具有雙層空心壁，所述雙層空心壁的外壁具有進水口和出水口，所述消化罐的底 部具有入口及出口；
[0007] 所述前置箱、蠕動泵及消化罐的入口依次連通，所述消化罐的出口、蠕動泵及收液 箱依次連通；
[0008] 所述第一濾網(wǎng)層的網(wǎng)孔尺寸為600-1000μπι，所述第二濾網(wǎng)層的網(wǎng)孔尺寸為 200-600μm〇
[0009] 在其中一個實施例中，所述消化罐的底部具有出口，所述出口連接有T-型連接管 的一個管口，所述Τ-型連接管的另兩個管口分別連接有所述蠕動泵，且所述管口與所述蠕 動泵之間設(shè)有閥門。
[0010] 在其中一個實施例中，所述消化罐的罐底部呈漏斗狀。
[0011] 在其中一個實施例中，所述漏斗狀的罐底部中間設(shè)有所述出口。
[0012] 在其中一個實施例中，所述消化罐的頂部匹配有頂蓋。
[0013] 在其中一個實施例中，所述頂蓋的邊緣具有突出邊，所述突出邊將所述雙層空心 壁覆蓋。
[0014] 在其中一個實施例中，所述雙層空心壁的外壁具有兩個進水口和兩個出水口。
[0015] 在其中一個實施例中，所述兩個進水口設(shè)于所述消化罐的一側(cè)上端和下端，所述 兩個出水口設(shè)于所述消化罐的相對一側(cè)的上端和下端，使得所述兩個進水口與兩個出水口 處于消化罐主軸的兩端。
[0016] 在其中一個實施例中，所述第一濾網(wǎng)層的網(wǎng)孔尺寸為750-850μm，所述第二濾網(wǎng) 層的網(wǎng)孔尺寸為350-450μm。
[0017] 在其中一個實施例中，所述雙層空心壁之間的厚度為4_8cm。
[0018] 本實用新型涉及的胰島分離裝置，通過前置箱、消化系統(tǒng)、收液箱及兩個蠕動泵的 相互配合使用，且通過具有第一濾網(wǎng)層及第二濾網(wǎng)層的消化罐，達到胰腺消化的目的；本實 用新型分離的胰島純度高，分離效果好，成本低，可以連續(xù)操作消化分離，直到消化完全，且 操作簡便。
[0019] 本實用新型涉及的胰島分離裝置，所述消化罐的底部具有出口，所述出口連接有 T-型連接管的一個管口，所述τ-型連接管的另兩個管口分別連接有所述蠕動泵，且所述管 口與所述蠕動泵之間設(shè)有閥門，通過T-型連接管的設(shè)計，可減少所述消化罐的開口，減少 縫隙，避免消化液及收集液的遺漏，且通過T-型連接管的設(shè)計，便于控制消化罐的液體進 入。
[0020] 本實用新型涉及的胰島分離裝置，所述消化罐的罐底部呈漏斗狀，便于收集液的 集中和流出收集。
[0021] 本實用新型涉及的胰島分離裝置，所述漏斗狀的罐底部中間設(shè)有所述出口，在中 間部位，即將所述出口設(shè)于漏斗的最低端，便于所有收集液的排出，不需要人工再去收集， 利用收集液的重力自動收集，節(jié)約時間和人力。
[0022] 本實用新型涉及的胰島分離裝置，所述消化罐的頂部匹配有頂蓋，在消化罐倒置， 混合內(nèi)部消化液與胰腺以加快消化過程的時候，避免消化液的溢出。
[0023] 本實用新型涉及的胰島分離裝置，所述頂蓋的邊緣具有突出邊，所述突出邊將所 述雙層空心壁覆蓋，在消化罐倒置，混合內(nèi)部消化液與胰腺以加快消化過程的時候，避免所 述雙層空心壁內(nèi)的溫水溢出。
[0024] 本實用新型涉及的胰島分離裝置，所述雙層空心壁的外壁具有兩個進水口和兩個 出水口，增加進水量和出水量，便于保持水的溫度恒定。
[0025] 本實用新型涉及的胰島分離裝置，所述兩個進水口設(shè)于所述消化罐的一側(cè)上端和 下端，所述兩個出水口設(shè)于所述消化罐的相對一側(cè)的上端和下端，使得所述兩個進水口與 兩個出水口處于消化罐主軸的兩端，便于保持水的溫度恒定。
[0026] 本實用新型涉及的胰島分離裝置，所述第一濾網(wǎng)層的網(wǎng)孔尺寸為750-850μm，所 述第二濾網(wǎng)層的網(wǎng)孔尺寸為350-450μm，使得較大的顆粒和物質(zhì)被分離。
[0027] 本實用新型涉及的胰島分離裝置，所述雙層空心壁之間的厚度為4-8cm，所述雙 層空心壁之間有一定的厚度便于該壁內(nèi)的水的溫度的維持，也進一步的維持消化罐內(nèi)的溫 度。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0028] 圖1為本實用新型實施例1主視圖；
[0029] 圖2為本實用新型實施例1消化系統(tǒng)主視圖；
[0030] 圖3為本實用新型實施例1消化系統(tǒng)側(cè)視視圖。
[0031] 附圖標記說明
[0032] 10、前置箱；20、消化系統(tǒng)；30、消化罐；32、進水口；34、出水口；36、出口；38、雙層 空心壁；40、T-型連接管；50、蠕動泵；60、收液箱；70、硅膠管；72、夾子；80、第一濾網(wǎng)層； 82、第二濾網(wǎng)層。

【具體實施方式】
[0033] 以下將結(jié)合實施例及附圖對本實用新型做進一步的說明。
[0034] 實施例1
[0035] 本實施例提供了 一種胰島分離裝置。
[0036] 一種胰島分離裝置，參見圖1-圖3,包括前置箱10、消化系統(tǒng)20、收液箱60、Τ_型 連接管40及兩個蠕動泵50 ;所述Τ-型連接管40具有三個管口，分別為第一管口、第二管 口及第三管口，呈Τ型，其規(guī)格為NalgeneBaxterCat#T5342-3,Τ-型連接管40的尺寸規(guī)格 如下：外徑2. 5cm，內(nèi)徑2cm，三個臂長均為3cm;所述消化系統(tǒng)20具有消化罐30,所述消化 罐30呈圓筒狀，其規(guī)格如下：消化罐30內(nèi)徑12cm，外徑18cm，高度6cm;所述消化罐30的 內(nèi)部具有第一濾網(wǎng)層80及第二濾網(wǎng)層82,所述第一濾網(wǎng)層80的網(wǎng)孔大小尺寸為800μm， 所述第二濾網(wǎng)層82的網(wǎng)孔大小尺寸為400μm。
[0037] 所述消化罐30具有雙層空心壁38,所述雙層空心壁38之間的間隔厚度為4_8cm， 所述雙層空心壁38的內(nèi)壁厚度為2cm，外壁厚度為3cm，所述雙層空心壁38的外壁具有兩 個進水口 32和兩個出水口 34,兩個進水口 32和兩個出水口 34均連接有管道，所述兩個進 水口 32和兩個出水口 34處的管道的規(guī)格相同，如下所示：內(nèi)徑均為2cm，外徑均有2. 5cm， 長度4cm;所述兩個進水口 32設(shè)于所述消化罐30的一側(cè)上端和下端，所述兩個出水口 34設(shè) 于所述消化罐30的相對一側(cè)的上端和下端，使得所述兩個進水口 32與兩個出水口 34處于 消化罐30直徑的兩端點處，所述兩個進水口 32均連接于水泵；
[0038] 所述消化罐30的罐底部呈漏斗狀，所述漏斗狀的罐底部中間設(shè)有所述出口 36， 所述出口 36通過硅膠管70連接于所述T-型連接管40的第三管口，所述T-型連接管40 的第一管口、第二管口分別通過硅膠管70連接有所述蠕動泵50,所述硅膠管70的外徑為 2. 5cm，內(nèi)徑為2cm，長度為60-80cm;且所述管口與所述蠕動泵50之間設(shè)有夾子72,或者可 設(shè)有閥門取代夾子72 ;所述前置箱10、蠕動泵50及T-型連接管40的第一管口依次連通， 所述T-型連接管40的第二管口、蠕動泵50及收液箱60依次連通；所述消化罐30的頂部 匹配有頂蓋，所述頂蓋的外徑為12cm，厚度為2cm，所述頂蓋的邊緣具有突出邊，所述突出 邊的寬度為5cm，所述突出邊將所述雙層空心壁38覆蓋。
[0039] 本實用新型的T-型連接管40可以換成Y-型連接管，其規(guī)格為3/16inNalgene BaxterCat#T5343~2 〇
[0040] 實施例2
[0041] 本實施例提供了一種胰島分離方法。
[0042] 一、胰腺消化試劑
[0043] A.化學(xué)試劑
[0044] 1)HanksBalancedSaltSolution(HBSS即Hank平衡鹽溶液緩沖液）Sigma公司
[0045] 2)膠原酶VSigma公司
[0046] 3)Dithizone(DTZ)染色劑（胰島染色）（鉛試劑，中文別名：二苯硫代偶氮羰酰 肼或者雙硫腙）Sigma公司
[0047] 4)HEPESSigma公司
[0048] 5)CMRL1066細胞培養(yǎng)液Sigma公司
[0049] 6)UniversityofWisconsinSolution(UW液）施貴寶公司
[0050] 7)DNaselM酶Sigma公司
[0051] 8)Ficoll離心液Sigma公司
[0052] B.液體配置
[0053] 1)消化液配置
[0054] a.lOOOmlHBSS放入燒瓶里；
[0055] b.水浴箱里將HBSS調(diào)整溫度至28_32°C;
[0056] c.加入 100_200mgDNaseI酶；
[0057] d.加入1500mg的膠原酶V，充分攪拌；
[0058] e.用0. 2μm的濾網(wǎng)過濾消化液，即得膠原酶消化液,備用。
[0059] 2)離心液配置
[0060] a.稱取Ficoll;
[0061] b.用HBSS溶解Ficoll;
[0062] (：.配置1.1，1.09，1.06的？丨(3〇11梯度離心液備用，其中1.06、1.09及1.10的梯 度離心液是用蔗糖和HANKS液配制的密度分別為1. 06mg/ml、l. 09mg/ml及1. 10mg/ml的液 體。
[0063] 二、胰腺準備
[0064] A.器械及設(shè)備
[0065] 1.組織剪
[0066] 2.血管鉗
[0067] 3. 18G靜脈導(dǎo)管
[0068] 4.絲線
[0069]5.冷卻托盤
[0070] 6.冰盒
[0071] 7.離心管
[0072] 8.光學(xué)顯微鏡
[0073] 9.加樣吸管
[0074] 10.冰盒
[0075] B.胰腺插管和灌注
[0076] 1)用組織剪、血管鉗去除胰腺周圍脂肪
[0077] a.胰腺用HBSS沖凈后放入冷卻托盤；
[0078] b.用組織剪、血管鉗將胰腺周圍脂肪組織剪去。
[0079] 2)胰管插管
[0080] a.找出胰管
[0081] b.插入18G的導(dǎo)管
[0082] c. 3. 0絲線固定導(dǎo)管
[0083] 3)稱量膜腺重量
[0084] 灌注胰腺
[0085] a.每克胰腺灌注消化液1. 5-2ml
[0086] b.如有漏滲，夾閉。
[0087] 三、胰腺消化
[0088] A.消化
[0089] 1.胰腺的前處理：選取具有雙層空心壁38消化罐30,且所述消化灌的底部具有兩 層濾網(wǎng)，修整胰腺，往胰腺的胰管內(nèi)灌注消化液后放入所述消化灌中，旋緊頂蓋，所述消化 液為膠原酶消化液，以下步驟所用消化液均為膠原酶消化液；
[0090] 2.加消化液：通過連接于T-型連接管40的第一管口的蠕動泵50,將前置箱10內(nèi) 的消化液泵入至步驟（1)的消化灌中，并密封所述消化灌，所述消化液的加入量為覆蓋所 述胰腺；
[0091] 3.注水：從消化灌的進水口 32注入熱水，使得整個消化罐30的夾層里充滿熱水， 溫度通過進熱水的溫度和速度將消化罐30內(nèi)的溫度調(diào)整至37°C，并控制在37±0. 5°C;
[0092] 4.消化5分鐘后開始晃動消化罐30,每分鐘3-5次/分，消化過程中，可以將消化 罐30倒轉(zhuǎn)過來，即將漏斗狀的罐底部朝上，消化罐30頂部在下；
[0093] 5.記錄消化時間，連續(xù)消化10-30分鐘；
[0094] 6.收集或觀察胰島時，將消化罐30置于正常狀態(tài)即漏斗狀的底部朝下，消化液體 經(jīng)過第一濾網(wǎng)層（網(wǎng)孔大小為800μπι)和第二濾網(wǎng)層（網(wǎng)孔大小為400μπι)流出，可以收 集或觀察胰島；
[0095] Β.檢樣
[0096] 1.觀察胰島
[0097] Α.取消化罐30內(nèi)的消化液少許；
[0098] b.加入DTZ染色液（約50μL);
[0099] c.光學(xué)顯微鏡下觀察胰島，當游離胰島> 60 %時，停止消化，若未達到60%，則繼 續(xù)消化。
[0100] 2.胰島定量
[0101] a.收集2ml消化液；
[0102] b.提取50μ1消化液并加入DTZ染色液；
[0103] c.光學(xué)顯微鏡下觀察胰島并計數(shù)；
[0104] d.計算光學(xué)顯微鏡下所觀察的胰島直徑并折算成IEQ。
[0105] IEQ:Isletequivalents,胰島當量，根據(jù)胰島的直徑大小計算胰島當量
[0106] IEQ計算方法：
[0107]

【權(quán)利要求】
1. 一種胰島分離裝置，其特征在于，包括前置箱、消化系統(tǒng)、收液箱及兩個蠕動泵； 所述消化系統(tǒng)具有消化罐，所述消化罐的內(nèi)部具有第一濾網(wǎng)層及第二濾網(wǎng)層，所述消 化罐具有雙層空心壁，所述雙層空心壁的外壁具有進水口和出水口，所述消化罐的底部具 有入口及出口； 所述前置箱、蠕動泵及消化罐的入口依次連通，所述消化罐的出口、蠕動泵及收液箱依 次連通； 所述第一濾網(wǎng)層的網(wǎng)孔尺寸為600-1000μπι，所述第二濾網(wǎng)層的網(wǎng)孔尺寸為 200-600μm〇
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的胰島分離裝置，其特征在于，所述消化罐的底部具有出口，所 述出口連接有T-型連接管的一個管口，所述T-型連接管的另兩個管口分別連接有所述蠕 動泵，且所述管口與所述蠕動泵之間設(shè)有閥門。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的胰島分離裝置，其特征在于，所述消化罐的罐底部呈漏斗 狀。
4. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的胰島分離裝置，其特征在于，所述漏斗狀的罐底部中間設(shè)有 所述出口。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的胰島分離裝置，其特征在于，所述消化罐的頂部匹配有頂 蓋。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的胰島分離裝置，其特征在于，所述頂蓋的邊緣具有突出邊，所 述突出邊將所述雙層空心壁覆蓋。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的胰島分離裝置，其特征在于，所述雙層空心壁的外壁具有 兩個進水口和兩個出水口。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的胰島分離裝置，其特征在于，所述兩個進水口設(shè)于所述消化 罐的一側(cè)上端和下端，所述兩個出水口設(shè)于所述消化罐的相對一側(cè)的上端和下端，使得所 述兩個進水口與兩個出水口處于消化罐主軸的兩端。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的胰島分離裝置，其特征在于，所述第一濾網(wǎng)層的網(wǎng)孔尺寸 為750-850μm，所述第二濾網(wǎng)層的網(wǎng)孔尺寸為350-450μm。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的胰島分離裝置，其特征在于，所述雙層空心壁之間的厚 度為4_8cm。
【文檔編號】C12M1/12GK203866305SQ201420238903
【公開日】2014年10月8日 申請日期:2014年5月9日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月9日
【發(fā)明者】蔣小峰, 錢滔來, 俞曉立, 楊學(xué)偉, 薛平, 陳德 申請人:蔣小峰, 錢滔來