本發明涉及一種增強犬抗病能力和調節胃腸菌群的寵物主糧，屬于寵物食品
技術領域：
。
背景技術：
：隨著當今社會生活水平的不斷提高以及寵物飼料的迅速發展，人們對于其寵物犬的膳食要求越來越高，寵物犬糧不僅要滿足犬的營養需求，蛋白質、脂肪、能量等，還要滿足犬適口性、機體和骨骼健康、毛發亮麗、腸道健康等條件。本發明在寵物犬飼料基本配方的基礎上，添加了乳鐵蛋白、溶菌酶、乳清蛋白、低聚果糖、酵母提取物、凹凸棒石（粉）等功能性成分，增強了寵物犬抗病力、幫助滋養肌膚、改善皮毛的光澤度、減少了寵物皮膚瘙癢、大大降低了皮膚病的發病幾率、改善犬毛發、改善腸道的微生物環境、提高了消化和吸收能力。長久以來，抗生素作為抗菌促生長添加劑被添加到飼料中，但其廣泛和大量使用，導致動物性食品中藥物殘留等問題愈來愈令人擔憂。因此，尋找一種安全、環保的新型飼料添加劑已成為當務之急。近年來，乳鐵蛋白(lactoferrin,簡稱LF)成為當今乳品界最為關注的“熱點”之一。因其具有抗菌、抑菌、抗病毒、抗氧化和調節機體免疫等作用，可用于開發新型的飼料添加劑。乳鐵蛋白能加強動物腸道中雙歧桿菌和乳酸桿菌等有益菌群的生長，抑制有害菌群的繁殖，對腸道菌群有較大影響。LF具有調節巨噬細胞活性和刺激淋巴細胞合成的能力。另外，LF對抗體生成、T細胞成熟、淋巴細胞中自然殺傷細胞比例都具有調節作用。溶菌酶本身是一種天然蛋白質，無毒性，是一種安全性高的飼料酶。作為自然來源的抗菌劑，在動物機體內具有抗菌、抗病毒和加快組織恢復，減少腹瀉，增強機體非特異性免疫力等功能。本發明中乳鐵蛋白協同溶菌酶，不僅能促進動物腸道微生物菌群的穩定，在飼料中替代抗生素，還能增強機體抗病力和免疫功能。低聚果糖，是一種新型的綠色飼料添加劑，具有多種生物化學功能，是近年才應用于飼料工業中的。大量研究表明，在飼養動物日糧中應用低聚果糖，可以促進生長發育，提高飼料報酬，增強機體抗病能力，提高動物繁殖力，增強機體免疫性能。同時低聚果糖在大腸中被機體腸道內的益生菌選擇性的利用，促進其生長，提高活性；有益菌排斥和抑制有害菌的生長繁殖，雙向調節腸道菌群至平衡狀態。酵母提取物（Epicor）含有豐富的蛋白、B族維生素、氨基酸等物質，廣泛用于動物飼料的蛋白質補充物。它能促進動物的生長發育，改善皮毛的光澤度，并能增加機體的抗病能力。凹凸棒石（粉）作為混合飼料的添加劑，以其特有的物理性能，在促進動物機體的新陳代謝，提高飼料的轉化率，使動物食欲旺盛，皮毛豐潤；同時還具有優良的吸附性能，能有效地吸除動物大腸桿菌、腸道毒素，起到防疫治病、除蟲殺菌的作用，并能提供生長必須的微量元素。技術實現要素：本發明的目的是提供一種增強寵物犬抗病力和調節胃腸菌群的寵物飼料，其配方合理，功能顯著。本發明的技術方案：本發明在基礎飼料配方的基礎上添加了乳鐵蛋白、溶菌酶、乳清蛋白、低聚果糖、酵母提取物、凹凸棒石（粉）等功能性成分，該寵物飼料不僅能增強寵物犬抗病力、幫助滋養肌膚、改善皮毛的光澤度；還能改善腸道的微生物環境、提高了消化和吸收能力。一種增強犬抗病能力和調節胃腸菌群的寵物主糧，配方比例按重量份計如下：脫水雞肉粉15-25份，脫水魚粉10-20份，精米10-20份，豆粕5-15份，小麥粉10-20份，玉米粉10-20份，磷酸二氫鈣1-3份，食鹽0.5-1.0份，維生素0.5-1.0份，礦物質0.5-1.0份，山梨酸鉀0.1-0.5份，乳鐵蛋白0.1-1.0份，溶菌酶0.05-0.10份，乳清蛋白0.05-0.10份，低聚果糖0.5-1.0份，酵母提取物1.0-5.0份，氨基葡萄糖0.1-0.5份，凹凸棒石粉0.1-0.5份。所述維生素具體為維生素A，維生素B1，維生素B2，維生素B6，維生素B12，維生素C，維生素D，維生素E或維生素K中的一種或幾種。所述礦物質以游離或者結合物形式存在，具體包括鐵，銅，鋅，錳，鈷，硒或碘中的一種或幾種。所述增強犬抗病能力和調節胃腸菌群的寵物主糧，配方比例按重量份計如下：脫水雞肉粉20份，脫水魚粉15份，精米12份，豆粕12份，小麥粉15份，玉米粉15份，磷酸二氫鈣2份，食鹽0.8份，維生素0.6份，礦物質0.5份，山梨酸鉀0.2份，乳鐵蛋白0.1份，溶菌酶0.05份，乳清蛋白0.05份，低聚果糖1.0份，酵母提取物5.0份，氨基葡萄糖0.3份，凹凸棒石粉0.4份。所述增強犬抗病能力和調節胃腸菌群的寵物主糧，配方比例按重量份計如下：脫水雞肉粉18份，脫水魚粉15份，精米10份，豆粕10份，小麥粉20份，玉米粉15份，磷酸二氫鈣3份，食鹽1.0份，維生素0.8份，礦物質0.7份，山梨酸鉀0.3份，乳鐵蛋白0.25份，溶菌酶0.075份，乳清蛋白0.10份，低聚果糖0.8份，酵母提取物4.5份，氨基葡萄糖0.4份，凹凸棒石粉0.3份。本發明的有益效果：本發明所述的具有多種保健功能的寵物飼料不僅營養充分，而且還添加了功能性飼料添加劑：乳鐵蛋白、溶菌酶、低聚果糖、酵母提取物和凹凸棒石（粉），能顯著提高寵物的免疫力，增加機體的抗病能力，同時改善腸道微生物環境，保持其生態平衡，促進毛發光滑豐潤，具有非常顯著的保健功能。附圖說明圖1乳鐵蛋白對環磷酰胺致免疫低下小鼠T淋巴細胞增殖的影響；`x（T細胞增值率均值）±s（標準差），每組老鼠只數n=10，注:*P<0.05,**P<0.01,vs模型組；##P<0.01，vs空白組。圖2乳鐵蛋白對環磷酰胺致免疫低下小鼠血清溶血素的影響`x（評分均值）±s（標準差），每組老鼠只數n=10，注:**P<0.01,vs模型組；###P<0.01，vs空白組。圖3乳鐵蛋白對環磷酰胺致免疫低下小鼠巨噬細胞吞噬實驗的影響`x（OD值均值）±s（標準差），每組老鼠只數n=10，注:**P<0.01,vs模型組；##P<0.01，vs空白組）。具體實施方式實施例1寵物飼料的配方組成：按重量份計：脫水雞肉粉18，脫水魚粉15，精米10，豆粕10，小麥粉20，玉米粉15，磷酸二氫鈣3，食鹽1.0，維生素預混物0.8，礦物質預混物0.7，山梨酸鉀0.3，乳鐵蛋白0.25，溶菌酶0.075，乳清蛋白0.10，低聚果糖0.8，酵母提取物4.5，氨基葡萄糖0.4，凹凸棒石（粉）0.3。實施例2按重量份計：脫水雞肉粉20，脫水魚粉15，精米12，豆粕12，小麥粉15，玉米粉15，磷酸二氫鈣2，食鹽0.8，維生素預混物0.6，礦物質預混物0.5，山梨酸鉀0.2，乳鐵蛋白0.1，溶菌酶0.05，乳清蛋白0.05，低聚果糖1.0，酵母提取物5.0，氨基葡萄糖0.3，凹凸棒石（粉）0.4。實施例3制備過程：以制備約100g量的寵物主糧為例，將實施例1或2的原料按照重量份計經超微粉碎機粉碎過60目篩，將粉碎好的物料經螺帶混合機將物料混合均勻后加水調制成含水量20%；擠壓膨化：三段機筒溫度為80℃、100℃、120℃，螺桿轉速為190r/min；將混合好的物料放入喂料器，經由喂料器進入擠壓機內擠壓膨化，完成熟化，60℃干燥6h；干燥后的加工顆粒在其未完全冷卻時用油脂噴涂機噴涂8%的（w/w）大豆油；最后將加工好的顆粒犬糧密封包裝。應用實施例1調節胃腸菌群的研究：選用SPF級昆明種雌性小白鼠48只，體重18~22g。實驗參照人體每日推薦量(推薦量為0.025g/kg·bw)的5倍、10倍和30倍分成低、中、高劑量組和對照組共四組，每組12只。分別供低（0.125g/kg?bw）、中（0.250g/kg?bw）、高（0.750g/kg?bw）三個劑量組動物灌胃使用，每日給予受試物灌胃，給樣量根據每周體重增減調整，連續灌胃14d。對照組灌服無菌純凈水。在給予受試物之前和末次給予受試物后24h，每組無菌采取其中10只小鼠糞便。置已稱重的裝有玻璃珠的干燥滅菌小試驗管中，再稱重，計算出小鼠糞便重量，以滅菌稀釋液稀釋10倍，制成均勻懸液，再依次進行10倍系列稀釋，選擇合適的稀釋度，分別接種在各培養基上，按要求進行培養。培養后，計算每克濕便中的菌數，取對數后進行統計處理。比較實驗前后自身及組間雙歧桿菌、乳桿菌、腸球菌、腸桿菌、產氣莢膜梭菌的變化情況。由表1可以發現，與對照組小鼠相比，0.250g/kg?bw劑量組與0.750g/kg?bw劑量組的實驗組小鼠雙歧桿菌數量有顯著性差異（p＜0.05），且給樣后與給樣前相比，差異也有統計學意義（p＜0.05）。與對照組小鼠相比，0.750g/kg?bw劑量組的實驗組小鼠乳桿菌數量有顯著性差異（p＜0.05），且給樣后與給樣前相比，差異也有統計學意義（p＜0.05）。與對照組小鼠相比，各劑量實驗組小鼠腸道內腸桿菌、腸球菌和產氣莢膜梭菌數量無顯著性差異（p＞0.05）。研究結果表明小鼠攝入含量不小于0.250g/kg?bw劑量的乳鐵蛋白對腸道菌群調節結果呈陽性，更加有利于改善小鼠腸道乳酸桿菌和雙歧桿菌的菌群環境。表1乳鐵蛋白對小鼠腸道菌群的影響（logcfu/g）應用實施例2增強免疫力的研究試驗動物：SPF級BALB/c小鼠，18~22g，全雌性小鼠，上海杰思捷實驗動物有限公司提供。建立小鼠免疫低下模型。分組：18~22gSPF級雌性BALB/c小鼠60只，動物經適應性飼養3d后按體重分層隨機分為6組，每組10只，按組分籠飼養，自由進食和飲水。分別分為空白對照組，模型對照組，陽性對照（湯臣倍健蛋白粉）組，乳鐵蛋白低劑量組，乳鐵蛋白中劑量組，乳鐵蛋白高劑量組。各組每日灌胃給藥，給藥濃度分別為陽性藥167mg/kg，乳鐵蛋白低、中、高濃度分別為10，20，60mg/kg，空白組和模型組給予同等體積的生理鹽水，連續灌胃給藥30d，每日一次。實驗總周期為30天。1、T淋巴細胞增殖試驗：給藥30天后，于超凈臺中無菌取脾臟，稱重，記錄，D-Hank’s液沖洗3次，剪碎，過300目篩，1200r/m，離心5min，棄上清液，加入Tris-NH4Cl(0.83%)溶解紅細胞，D-Hank’s清洗2遍，1200r/m，離心5min，用RPMI1640(含10%犢牛血清)調整細胞1×106個/ml。37℃，5%CO2，孵育。細胞調整計數后，將細胞懸液分兩孔加入96孔板中，每孔加100μl的細胞懸液，一孔加ConA50μl，另一孔作為對照。37℃、5%CO2培養72h。每孔加MTT10μl，孵育4h，離心2400rpm×10min，棄去上清，每孔加DMSO150μl，振搖10min，在570nm處用酶標儀測吸光度。由圖1可見，環磷酰胺造模之后模型組與空白組相比T細胞增殖率顯著降低（P<0.01），表明模型組細胞免疫功能受到顯著抑制。陽性藥物組及乳鐵蛋白高劑量組與模型組比較T細胞增殖率顯著升高（P<0.05，P<0.01），其余組與模型對照組相比未見顯著性差異（P>0.05）。s空白組）2、血清溶血素實驗：免疫低下模型造模及給藥方法同1，造模后，每鼠腹腔注射2%壓積SRBC0.2ml致敏。4天后，小鼠眼球后靜脈叢取血，取血于離心管內，放置約1h，2000r/min離心10min，收集血清。用生理鹽水將血清倍比稀釋，將不同稀釋度的血清分別置于微量血凝試驗板內，每孔100μl，再加入100μl0.5％(v/v)的SRBC懸液，混勻，裝入濕潤的平盤內加蓋，于37℃溫箱孵育3h，觀察血球凝集水平。由圖2可見，環磷酰胺造模之后模型組與空白組相比血清溶血素評分顯著降低（P<0.01），表明模型組體液免疫功能受到顯著抑制。陽性藥組與乳鐵蛋白低劑量、中劑量組和模型組相比顯著升高（P<0.01）。其余組與模型對照組相比未見顯著性差異（P>0.05）。3、巨噬細胞吞噬實驗：小鼠末次給藥1h后，摘眼球取血后脫頸椎處死，置于超凈臺中75%酒精中浸泡5min，于腹腔注射含肝素的無菌PBS液4mL，輕揉腹部2min，開腹，滴管收集腹腔內液，10mL離心管中，1500rpm離心10min，棄上清，用冷PBS液洗細胞3次后，完全1640培養基懸浮細胞，調細胞濃度為1×106/mL，加到96孔板中，100μL/孔。置37℃、5%CO2培養箱中培養2h后取出板，棄去培養基，溫PBS液沖洗，貼壁得到巨噬細胞備用。將上述含巨噬細胞的細胞懸液均勻加入96孔板中，每孔巨噬細胞的個數控制在4～6×105個/mL，后每孔加入0.1%中性紅生理鹽水100μL置37℃、5%CO2培養箱培養1h，傾去上清液，溫PBS洗細胞2次，每孔加入細胞溶解液100μL(為體積分數50%的乙酸和體積分數50%的無水乙醇)，4℃過夜，待細胞溶解中性紅釋放后，在酶標儀上550nm處測量吸光度值，以A值表示巨噬細胞功能的強弱。由圖3可見，環磷酰胺造模之后模型組與空白組相比巨噬細胞吞噬實驗吸光度顯著性低（P<0.01），表明模型組單核—巨噬細胞功能受到顯著抑制。乳鐵蛋白中劑量組和高劑量組與模型組相比巨噬細胞吞噬實驗吸光度顯著升高（P<0.01），其余組與模型對照組相比未見顯著性差異（P>0.05）。綜合上述結果，本實驗中細胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細胞功能實驗均為陽性，因此判定添加乳鐵蛋白的寵物飼料對免疫功能低下者具有增強免疫力作用。應用實施例3整體動物實驗實驗動物與飼喂條件：8只健康比格犬，犬齡均為4個月，體重6kg左右/只，每只犬單獨喂養，自由飲水，飼喂時間為每天的早八點和晚八點，共分2個實驗組，每組隨機4只，實驗周期共30天。實驗開始前各實驗組犬統一飼喂未添加乳鐵蛋白、溶菌酶、低聚果糖、酵母提取物等功能性成分的基礎犬糧，實驗開始后分別飼喂各實驗犬糧。實驗犬糧制備與分組：（1）對照組：未添加低聚果糖和乳鐵蛋白的基礎犬糧；（2）實驗組：實施例2配方(基礎犬糧的基礎上添加了乳鐵蛋白0.1%，溶菌酶0.05%，乳清蛋白0.05%，低聚果糖1.0%，酵母提取物5.0%，氨基葡萄糖0.3%，凹凸棒石（粉）0.4%）。動物實驗指標收集：在實驗開始之前各組均飼喂未添加功能性成分的基礎犬糧，在此期間觀察犬的采食量與糞便質量直至穩定為止。糞便微生物檢測方法：在實驗前第一天和實驗結束最后一天，早晨空腹取2.5g新鮮幼犬糞便于滅菌后的裝有玻璃珠的錐形瓶中，加入50mL無菌生理鹽水搖勻，5000r/min離心10min取上清液。取1mL糞便稀釋液進行梯度稀釋，取合適的稀釋梯度于BBL（雙歧桿菌）、LBS（乳桿菌）和EMB(腸桿菌）培養基中進行接種培養，測定其中的雙歧桿菌、乳酸桿菌和大腸桿菌數目，結果見表2。表2配方飼料對寵物犬糞便中菌群數量的影響單位(logCFU/g)時間實驗組對照組雙歧桿菌第0天7.98±0.548.04±0.64第30天8.43±0.378.11±0.56乳酸桿菌第0天8.27±0.488.53±0.35第30天8.86±0.678.66±0.52大腸桿菌第0天7.34±0.427.65±0.23第30天6.73±0.367.78±0.45從結果來看，實驗組犬與對照組犬比較，實驗組犬腸道有益菌雙歧桿菌和乳酸桿菌的數量有了明顯增加，對照組基本沒變化；飼喂了實驗組飼料的犬大腸桿菌數量明顯降低，對照組犬大腸桿菌數量實驗前后有小幅地增加。因此證實將乳鐵蛋白、溶菌酶、低聚果糖、酵母提取物等功能性成分添加到基礎配方飼料中，能明顯改善犬腸道菌群，有益于犬腸道健康，增加了犬抗病能力。當前第1頁1 2 3