本發明屬于飼料添加劑領域，具體涉及一種微生物組合發酵滸苔的方法。
背景技術：
目前全世界海藻粉產量達5萬噸，許多國家建有海藻飼料加工廠，將海藻粉作為飼料添加劑廣泛應用于畜禽飼養。滸苔（Entermorpha prolifera）屬于綠藻門石莼目石莼科滸苔屬的藻類植物，具有味道鮮美、營養全面、野生資源豐富、極易生長繁殖等特點，是一種極具開發價值的海洋藻類。滸苔自古以來就是一種食材和藥材?，F代醫學研究還發現滸苔有抑制癌癥的功效，日本大阪熏英女子短期大學的HIGASHI-OKAI Kiyoka和OKAI Yasuji在1999年發表的一篇文章中指出，給小鼠使用滸苔提取物可以顯著抑制其皮膚癌的生長。在畜牧養殖業中的研究表明，飼喂滸苔粉可以顯著降低肉兔血液低密度脂蛋白膽固醇和甘油三酯的含量，提高生長豬日增重和料肉比，提高肉雞胃腸道消化酶活性和飼料利用率。
滸苔富含滸苔多糖、蛋白質、粗纖維、氨基酸、脂肪酸、維生素和多種礦物質, 其中鐵含量在中國食物營養成分表上記載為我國食物之最，同時還含有脂肪和維生素。在滸苔蛋白質中，氨基酸種類齊全，必需氨基酸含量較高。滸苔的脂肪酸組成中，多不飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸和飽和脂肪酸的含量為分別為50.5%、12.7%和36.8%。因此滸苔是高蛋白、高膳食纖維、低脂肪、低能量，且富含礦物質和維生素的天然理想營養食品的原料。
利用植物細胞和微生物等生物體的代謝功能，將有機物進行分解的生化反應過程被稱為發酵。在微生物發酵過程中，微生物在植物供養下進行分裂、生長、繁殖和代謝，同時分泌出可使細胞破裂的酶，從而減小了細胞間質和細胞壁的阻力，增加了細胞間隙，使植物類藥材有效成分提取率大大提高。滸苔粉富含滸苔多糖和各種無機鹽，營養豐富，具備發酵所需的基礎營養。
技術實現要素：
本發明的目的旨在提供一種微生物組合發酵滸苔的方法。
為實現上述目的，本發明采取的技術方案如下：
一種微生物組合發酵滸苔的方法，包括如下步驟：
S1、發酵菌液的制備：
S1.1、以重量份計，準備下述物料：紅糖1份、水5~10份以及酵母菌、地衣芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌，備用；其中，每g總物料中：酵母菌的活菌數≥1×109CFU/g、地衣芽孢桿菌的活菌數≥1×109CFU/g、嗜酸乳桿菌的活菌數≥1×1010CFU/g；
S1.2、先取部分水，加熱，加入紅糖至其完全融化；然后把上述紅糖水降溫至30~40℃時，加入酵母菌、地衣芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌；
S1.3、S1.2所得體系中加入剩余的水，密封，室溫下發酵3~5天，獲得發酵菌液；
S2、發酵滸苔：
S2.1、滸苔清洗，陰涼干燥處風干，粉碎成粉；
S2.2、重量份以kg計、體積份以L計，稱取滸苔粉25~30重量份、玉米粉0~10重量份、紅糖0~10重量份、尿素0~10重量份、酵母浸粉0~10重量份、發酵菌液4~6體積份、水9-11體積份，并且玉米粉、紅糖、尿素、酵母浸粉四種中至少有一種，混勻后，密封，室溫下發酵3~5天即可。
較好地，步驟S2.1中，粉碎成30~40目的滸苔粉。
較好地，步驟S2.2中：先將滸苔粉和玉米粉、紅糖、尿素、酵母浸粉置于混合機中混勻，再將發酵菌液用水稀釋，隨著混合機的工作均勻地噴灑在混合物表面，噴完后再混合均勻，密封，室溫下發酵。
有益效果：
1、本發明通過能夠大量分泌各種消化酶的酵母菌，產生生長因子的地衣芽孢桿菌菌以及產酸性好、能夠很好定植于腸道的嗜酸乳桿菌，可以有效地提高滸苔粉中有效成分如滸苔多糖等的利用率，并且改善其口感，使其可以應用在畜禽養殖業；
2、本發明發酵后的滸苔在畜禽養殖中可以顯著提升畜禽的生長性能，而且味道酸香，口感好，無毒副作用。
附圖說明
圖1：發酵前后滸苔的薄層色譜圖，其中A為實施例1發酵滸苔樣品，B為實施例2發酵滸苔樣品，C為實施例3發酵滸苔樣品，1、2、3為未經發酵處理的原料滸苔粉的三個重復。
具體實施方式
以下結合具體實施例對本發明的技術方案作進一步詳細說明，但本發明的保護范圍并不局限于此。
實施例1
一種微生物組合發酵滸苔的方法，包括如下步驟：
S1、發酵菌液的制備：
S1.1、準備1kg紅糖、10kg無菌水以及酵母菌、地衣芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌（涉及的三種菌均為市購菌粉），備用；其中，每g總物料中：酵母菌的活菌數為1×109CFU/g、地衣芽孢桿菌的活菌數為1×109CFU/g、嗜酸乳桿菌的活菌數為1×1010CFU/g；
S1.2、先燒開1kg的無菌水，加1kg的紅糖，把紅糖融化開，把紅糖里面的有害菌消除；然后把上述融化后的紅糖水降溫至35℃時，加入酵母菌、地衣芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌；
S1.3、S1.2所得體系中加入剩余9kg的無菌水，整體裝進一個大塑料壺或者其他的容器中，裝填系數70%(不要裝的太滿，在發酵過程中會產生氣體，裝滿容易漲破塑料壺)，28℃發酵5天，打開瓶口，有氣體產生，取樣檢測，發酵樣品中酵母菌≥1×109 CFU/mL、地衣芽孢桿菌≥1×109 CFU/mL、嗜酸乳桿菌≥1×1010 CFU/mL，說明發酵液制備成功，獲得發酵菌液；
S2、發酵滸苔：
S2.1、清洗滸苔，陰涼干燥處風干，粉碎成40目的滸苔粉；
S2.2、取滸苔粉30kg、玉米粉5kg、發酵菌液5L、井水10L；先將滸苔粉和玉米粉置于槽型混合機中混勻，將發酵菌液5L用井水10L稀釋，隨著混合機的工作均勻地噴灑在滸苔粉和玉米粉混合物表面，噴完后再混合30min，分裝至5kg規格的呼吸膜發酵袋，每袋5kg，封口，放置在28℃恒溫室內；5天后開口，氣味酸香，取樣檢測，發酵樣品中酵母菌達到2.4×109CFU/g、地衣芽孢桿菌達到3.2×109 CFU/g、嗜酸乳桿菌達到5×1010 CFU/g。
實施例2
一種微生物組合發酵滸苔的方法，包括如下步驟：
S1、發酵菌液的制備：同實施例1；
S2、發酵滸苔：
S2.1、清洗滸苔，陰涼干燥處風干，粉碎成30目的滸苔粉；
S2.2、取滸苔粉25kg、尿素5kg、酵母浸粉5kg、發酵菌液5L、井水10L；先將滸苔粉和尿素、酵母浸粉置于槽型混合機中混勻，將發酵菌液5L用井水10L稀釋，隨著混合機的工作均勻地噴灑在混合物表面，噴完后再混合30min，分裝至5kg規格的呼吸膜發酵袋，每袋5kg，封口，放置在28℃恒溫室內；4天后開口，氣味酸香，取樣檢測，發酵樣品中酵母菌達到4.1×109 CFU/g，地衣芽孢桿菌達到5.3×109 CFU/g，嗜酸乳桿菌達到5.8×1010 CFU/g。
實施例3
一種微生物組合發酵滸苔的方法，包括如下步驟：
S1、發酵菌液的制備：同實施例1；
S2、發酵滸苔：
S2.1、清洗姜科植物滸苔的干燥根莖，陰涼干燥處風干，粉碎成30目的滸苔粉；
S2.2、取滸苔粉25kg、玉米粉2kg，紅糖粉3kg、酵母浸粉5kg、發酵菌液5L、井水10L；先將滸苔粉和玉米粉、紅糖粉、酵母浸粉置于槽型混合機中混勻，將發酵菌液5L用井水10L稀釋，隨著混合機的工作均勻地噴灑在混合物表面，噴完后再混合30min，分裝至5kg規格的呼吸膜發酵袋，每袋5kg，封口，放置在28℃恒溫室內；4天后開口，氣味酸香，取樣檢測，發酵樣品中酵母菌達到6.1×109CFU/g、地衣芽孢桿菌達到6.4×109 CFU/g、嗜酸乳桿菌達到8.9×1010 CFU/g。
以上實施例中，按照《GB/T 22547-2008 飼料添加劑 飼用活性干酵母（釀酒酵母）》、《NY/T 1461-2007 飼料微生物添加劑 地衣芽孢桿菌》和《DB44/T 1136-2013 飼料中乳酸菌活菌的檢驗方法》，分別檢測發酵樣品中酵母菌、地衣芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌的含量。
檢測例1--發酵前后滸苔多糖的含量
取相當于1g滸苔粉原料的實施例1、2、3發酵樣品（“相當于1g滸苔粉原料的發酵樣品”是指1g滸苔粉原料制備的發酵樣品，即取1/30000實施例1發酵樣品，1/25000實施例2發酵樣品，1/25000實施例3發酵樣品）和1g滸苔粉原料，分別溶于10mL水中，以發酵樣品溶液作為供試品溶液，滸苔粉溶液作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，分別吸取供試品溶液和對照品溶液各10 μL，點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-水-乙酸-氨水（10：5：5：1，體積比）為展開劑，置展開缸中25℃條件下展開，取出，晾干，噴以0.5%（g/mL）茚三酮溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。其中，所述氨水是指國家標準GB-T631-1989規定的試劑級氨水。
結果見圖1，由圖1可以看出：發酵后滸苔多糖變成了若干單糖或者寡糖，說明發酵過程利用了滸苔多糖，并將其分解為小分子物質，易于機體的吸收利用。
臨床驗證
1、試驗藥物：
A：實施例1制成規格為5kg/袋的發酵滸苔；
B：實施例2制成規格為5kg/袋的發酵滸苔；
C：實施例3制成規格為5kg/袋的發酵滸苔；
a：滸苔粉30kg、玉米粉5kg的混合物；
b：滸苔粉25kg、尿素5kg、酵母浸粉5kg的混合物；
c：滸苔粉25kg、玉米粉2kg，紅糖粉3kg、酵母浸粉5kg的混合物。
2、試驗分組
本試驗選用1日齡的健康羅斯308肉雞630羽，平均體重為(42.59±0.13)g，隨機分成7組，每組3個重復，每個重復30羽(公、母各占1/2)。試驗分：空白對照組，飼喂不添加抗生素的基礎飼糧，基礎飼糧為參照美國NRC(1994)肉雞營養需要配制的粉狀配合飼料；A、B、C組，分別在基礎飼糧中添加A、B、C，添加比例5g/kg（即每kg基礎飼糧添加5g A/B/C）；a、b、c組，分別在基礎飼糧中添加a、b、c，添加比例5g/kg（即每kg基礎飼糧添加5g a/b/c）。試驗周期35d。采用網上平養，自由采食和飲水，按雞場常規管理程序進行管理和免疫接種。
3.測定指標及方法
3.1生長性能
分別于雞群1日齡和35日齡分組測量體重，并逐日記錄每組雞的采食量。計算每組雞群的平均日增重和料肉比。
平均日增重=［35日齡平均體重（g）-1日齡平均體重（g）］/35d。
料重比=試驗期間總耗料量（g）/［35日齡平均體重（g）-1日齡平均體重（g）］。
3.2免疫器官指數
于雞群21日齡和35日齡，每個重復各隨機抽取3只，逐只稱重、解剖，分別采集其胸腺、法氏囊和脾臟器官稱重。
免疫器官指數=免疫器官重（g）/雞體重量（kg）。
4、試驗結果
4.1生長性能
發酵滸苔粉和未發酵滸苔粉對仔雞生產性能的影響見表1。由表1可知：與空白對照組相比，飼糧中添加A、B、C可以顯著提高肉雞生長各階段的體重和平均日增重(P<0.05)，其中又以C組效果為最明顯，a、b、c組和對照組組間無顯著差異(P>0.05)。料肉比方面，A、B、C組均比空白對照組顯著降低。由此表明，飼糧中添加發酵滸苔粉能夠顯著提高肉雞的生長性能，增加飼料營養的吸收利用，并且該功能與發酵滸苔粉中的益生菌及其代謝產物具有劑量依賴性的增加。
4.2 對肉仔雞免疫器官指數的影響
發酵滸苔粉和未發酵滸苔粉對仔雞免疫器官指數的影響見表2。由表2可知：與對照組相比，飼糧中添加A、B、C、a、b、c均可顯著提高21日齡和35日齡的肉雞免疫器官指數(P<0.05)，其中C組免疫器官指數均高于其他組，35日齡胸腺指數、法氏囊指數和脾臟指數比對照分別提高了53%、73%和72%，滸苔不發酵組（a、b、c）中35日齡最高胸腺指數、法氏囊指數和脾臟指數比對照分別提高了29%、37%和39%。說明滸苔粉發酵或者不發酵對肉雞的免疫器官指數均有增強作用，發酵后其免疫提升作用得到增強。由此表明，飼糧中添加發酵滸苔粉可以提高肉雞免疫功能。
從檢測結果可以看出，本發明提供的發酵滸苔粉能顯著改善滸苔粉中滸苔多糖的吸收利用。在畜禽養殖中可以顯著增強畜禽的生長性能和免疫功能，增加養殖效益，而且與未經發酵的相同處理比較效果顯著加強，說明本發明所述的制備方法增強了所述的滸苔粉在畜禽養殖中的臨床效果。
以上實施例僅用以說明本發明的技術方案，而非對其進行限制；盡管參照前述實施例對本發明進行了詳細的說明，對于本領域的普通技術人員來說，依然可以對前述實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分技術特征進行等同替換；而這些修改或替換，也屬于本發明所要求保護的技術方案的精神和范圍。