本發明涉及一種微囊化牡丹籽油、復配組合物及其制備方法，屬于醫藥保健及食品工業領域。
背景技術：
牡丹籽為牡丹開花后結出的種子。牡丹(PaeoniasufruticosaAndr.)屬毛茛科芍藥屬灌木，主要分布于河南洛陽、山東菏澤、安徽銅陵等地。牡丹籽產量較高，但一直作為牡丹花和丹皮的副產物，處于自生自滅的狀態，而牡丹籽具有抗炎、抗氧化的作用，一直未能得到合理地開發和利用。牡丹籽油是由牡丹籽提取的木本堅果植物油，是中國特有的，因其營養豐富而獨特，又有醫療保健作用，被有關專家稱為“世界上最好的油”，是植物油中的珍品，也是中國獨有的健康保健食用油脂。其中所含有的對人體有益的營養成分包括：大量多不飽和脂肪酸、維生素E、植物甾醇、角鯊烯以及多種對人體有益的微量元素(以鈣離子和鐵離子為主要微量元素)等，具有抗氧化、保肝、降血脂、降血糖等功能。
牡丹籽油中質量分數在1％以上的脂肪酸有α-亞麻酸、亞油酸、油酸、花生烯酸、軟脂酸和硬脂酸。軟脂酸和硬脂酸為飽和脂肪酸，α-亞麻酸、亞油酸、油酸和花生烯酸為不飽和脂肪酸，不飽和脂肪酸占總油量的比例為82.81％～93.23％，其中，α-亞麻酸的含量為32.72％～67.13％，亞油酸的含量為19.09％～34.90％，油酸的含量為15.13％～27.73％(王順利等2016)。現代研究證明，不飽和脂肪酸是大腦和腦神經的重要營養成分，攝入不足對記憶力和思維力影響較大，且也能影響嬰幼兒的智力發育、腦部及視力發育。牡丹籽油還含有Ca，Na，Fe，K，Zn，Mg，Cu等微量元素，其中Ca的含量最高，Na的含量次之，Fe的含量居第三。
然而牡丹籽油的有效成分不飽和脂肪酸在氧化環境中或者高溫下，容易被氧化成反式脂肪酸，對人體反而有害。牡丹籽油直接食用，口感較澀，和其他油調配，雖然能夠改變其口感，但由于不能加熱，只能用于涼拌，限制了牡丹籽油的使用，不利于牡丹籽油產業的發展。
通過微膠囊化技術形成的牡丹籽油產品不僅能防止牡丹籽油的氧化，而且使液態油脂形成粉末狀，更加便于貯存運輸及使用。壁材的性質決定著產品的品質，目前食品工業中常用的微膠囊壁材主要有碳水化合物、蛋白質、纖維素等，不同種類的壁材具有不同的優缺點，單一壁材只能滿足微膠囊壁材的部分要求。將油脂微囊化的一個重要原因是避免油脂的氧化，上述壁材主要是將油脂包裹或分散壁材之中，將芯材與環境隔離從而實現防止油脂的氧化，但因實際微囊化的均勻性不一定相同，可能出現有的芯材未被壁材很好包裹的現象，造成產品穩定性降低的結果。
噴霧干燥方法是目前食品工業中使用最多的微膠囊制備方法，使用該法制得的微膠囊產品具有壽命長，溶解性好，分散性好，成本低等優點，但因溫度過高，易出現孔顆粒，膠囊顆粒不均一，揮發性物質損失，芯材氧化變質等問題(許時嬰，張曉鳴，夏書芹等，2006)，故油性物質使用此法有一定的變質風險，而真空冷凍干燥技術因為在低溫條件下進行，能使芯材保持原來的化學組成和物理性質，能有效的避免芯材變質，保證微囊化產品的穩定性。
專利CN 105961647公開了一種利用β-環糊精包合技術制備牡丹籽油固體粉末的方法，僅采用單一壁材對牡丹籽油進行包合，抗氧化能力較差。專利CN 105413596公開了一種α-亞麻酸的微膠囊的制備方法，但僅僅是針對α-亞麻酸一種成分，未考慮牡丹籽油中的其他成分，且所用壁材也不具有抗氧化活性。且現有技術中也未有關于采用具有抗氧化活性的復合壁材制備微囊化牡丹籽油的報道以及將其與葉酸、低聚木糖相配合制備成滿足孕婦生理需求的產品的報道。因此根據牡丹籽油的理化性質，研發一種牡丹籽油的性質穩定、用途廣泛、攜帶簡便的產品是十分必要的。
技術實現要素：
本發明的目的是針對現有的技術和產品的不足，提供一種微囊化牡丹籽油、復配組合物及其制備方法。即，本發明提供了一種牡丹籽油微囊化的新方法以及以該微囊化牡丹籽油為原料，復配葉酸及低聚木糖，制備具有較好的抗氧化特性，貯存穩定性強，滿足孕婦妊娠期特殊生理需求的產品的方法。本發明所述復配產品具有較好的抗氧化特性，貯存穩定性強，符合孕婦孕期生理特點及胎兒生長發育需要，可促進胎兒腦發育、保證胎兒器官正常發育、緩解孕婦妊娠便秘、提高孕婦的機體免疫力、降血壓、降血脂以及降血糖，降低妊娠期間高血壓、糖尿病等疾病的發生率。
為實現上述目標，本發明第一個方面在于提供一種微囊化牡丹籽油，由牡丹籽油芯材與美拉德產物壁材按質量比為2:1的比例混合均勻，經高速分散、高壓均質、真空冷凍干燥獲得。
所述美拉德產物壁材，原料包括質量比為1:2:1:1:1的明膠、酪蛋白、羧甲基纖維素、乳糖和葡萄糖；其制備方法為將明膠、酪蛋白、羧甲基纖維素、乳糖和葡萄糖的水溶液混合均勻，用1mol/L的NaOH溶液調節混合液pH至8.5，于105℃條件下反應3h。
本發明采用的美拉德產物壁材，是基于羰基化合物(還原糖類)和氨基化合物(氨基酸和蛋白質)間發生羰胺反應，生成具有抗氧化活性的美拉德產物(類黑精、還原酮、揮發性雜環化合物)的原理，通過對原料配比(濃度)，反應pH值及時間進行研究優化，最終確定抗氧化壁材的制備方法。
本發明第二個方面在于，提供一種微囊化牡丹籽油的方法，采用超臨界CO2萃取技術及適宜的精制工藝，制備牡丹籽油；并以明膠、酪蛋白、羧甲基纖維素、乳糖和葡萄糖的美拉德產物為壁材，以牡丹籽油為芯材，高壓均質，真空冷凍干燥既得抗氧化活性強、質量穩定的微囊化牡丹籽油。步驟如下：
①牡丹籽油的制備：采用超臨界CO2萃取技術制得牡丹籽油初提物，采用水化法脫膠、分子蒸餾法脫酸以及活性白土二次脫色技術對其進行純化，制得無異味、顏色透明澄清、純度高的牡丹籽油；
②壁材的制備：將明膠、酪蛋白、羧甲基纖維素、乳糖和葡萄糖的水溶液按照原料質量比為1:2:1:1:1的比例混合均勻，用1mol/L的NaOH溶液調節混合液pH至8.5，于105℃條件下反應3h；
③微囊化牡丹籽油的制備：以步驟①獲得的牡丹籽油為芯材與步驟②制備的壁材，按質量比為2:1的比例混合均勻，高速分散器分散1.5min，18000r·min-1，在35MPa條件下，高壓均質3次，真空冷凍干燥至恒重，即得微囊化牡丹籽油。
具體的，本發明微囊化牡丹籽油的方法，步驟如下：
①牡丹籽油的制備：
菏澤產牡丹籽干燥后，超微粉碎，稱量后裝入萃取釜中，進行超臨界CO2萃取，萃取壓力35MPa，萃取溫度45℃，萃取時間2.5h，CO2流量30L·h-1，萃取完畢減壓放氣，收集牡丹籽油粗品。牡丹籽油粗品采用水化法脫膠，脫膠溫度保持在50℃，加水溫度和油溫基本相同，加水量為4％；采用分子蒸餾法脫酸；采用活性白土二次吸附脫色，加土量為6％，脫色溫度為40℃，脫色時間為10min，制得無異味、顏色透明澄清、純度高的牡丹籽油。
所述的制備的牡丹籽油特征為，采用GC-MS法測定本法牡丹籽油不飽和脂肪酸含量達到95.1％(檢測方法見對比例)；HPLC法測定牡丹籽油中維生素E總含量為57mg/100g；采用濕法消化ICP-MS測定法測定本法制得牡丹籽油中Ca的含量為150mg·kg-1、Na的含量為152mg·kg-1、Fe的含量為34mg·kg-1、K的含量為20mg·kg-1、Zn的含量為55mg·kg-1、Cu的含量為0.73mg·kg-1。
②壁材的制備：將明膠、酪蛋白、羧甲基纖維素、乳糖和葡萄糖水溶液按照原料質量比為1:2:1:1:1比例混合均勻，用1mol/L的NaOH溶液調節混合液pH至8.5，于105℃條件下反應3h；
③牡丹籽油微囊的制備：
稱取適量步驟①精制的牡丹籽油，用無水乙醇充分溶解，制成含有牡丹籽油的乳濁液的芯材，將其緩慢的滴加到步驟②制備的壁材水溶液中，壁材與芯材按2:1比重混合，高速分散器分散1.5min(18000r·min-1)，均質壓力35MPa條件下，高壓均質3次，真空冷凍干燥至恒重，干燥后產物即為微囊化牡丹籽油。得到的微囊化牡丹籽油包埋率為85％以上。
本發明第三個方面在于提供所述的微囊化牡丹籽油在制備具有提高機體免疫力、降血壓、降血脂以及降血糖的功效的食品、保健品、藥物上的應用。尤其是在制備適宜于孕婦食用的產品上的應用。
因此，本發明第四個方面在于，提供一種微囊化牡丹籽油復配組合物，包括以下重量份配比的原料：微囊化牡丹籽油700～950份、葉酸0.004～0.04份、低聚木糖50～300份。
優選的，包括以下重量份配比的原料：微囊化牡丹籽油800～900份、葉酸0.005～0.03份、低聚木糖100～200份。
制備步驟如下：將微囊化牡丹籽油、葉酸及低聚木糖原料過80目篩，使各原料顆粒大小相似；將所有過篩后原料，按重量份配比充分混合。混合原料可進一步分裝，每1-10g為一包裝單元。
優選的，所述微囊化牡丹籽油復配組合物中的各組分除了微囊化牡丹籽油、葉酸、低聚木糖外，還可以含有1～5重量份山梨酸鉀以及1～5重量份甜橙香精。可以制備成粉劑、顆粒劑，或添加藥學上可接受的載體或稀釋劑，制成片劑、膠囊等。
本發明具有如下有益效果：
1.本發明創造性的采用具有抗氧化活性的復合壁材結合真空冷凍干燥技術制備微囊化牡丹籽油，具有牡丹籽油微囊化產率高，效率好，抗氧化活性強，貯存穩定性好的優點，可保證牡丹籽油有效成分不變，延長牡丹籽油存儲期。
2.本發明創造性的將具有促進嬰兒腦及視神經等發育，抗氧化，降血壓，降血糖及降血脂等功能的、富含不飽和脂肪酸，維生素E及多種有益微量元素的微囊化牡丹籽油與具有保證胎兒組織、器官正常發育的葉酸，及既能緩解妊娠便秘又能提高孕婦的機體免疫力、降血壓、降血脂以及降血糖的低聚木糖經科學配比復配，制成滿足孕婦及胎兒妊娠過程的營養需求、降低妊娠期間高血壓、糖尿病等疾病的發生率、效果更好的一種產品。
3.本發明所涉及的產品原料均為可食用原料，安全無毒副作用，可制成粉劑、顆粒劑、片劑、膠囊等多種劑型，便于攜帶，且所述的制備工藝簡單，易實現工業化生產。
具體實施方式
下面結合具體試驗方法對本發明的技術方案及其所產生的技術效果進一步的闡述，下述說明僅是為了解釋本發明，但不以任何方式對本發明加以限制，基于本發明教導所作的任何變換或替換，均屬于本發明的保護范圍。
實施例1 微囊化牡丹籽油的制備
(1)牡丹籽油制備
取適量菏澤產牡丹籽，于40℃條件下干燥，超微粉碎過80目篩，精密稱取牡丹籽粉末適量，裝料密封，采用超臨界CO2萃取技術，在萃取壓力為35MPa，萃取溫度為45℃，CO2流量30L·h-1條件下萃取2.5h，減壓分離得到牡丹籽油初提物。隨后采用水化法脫膠(50℃條件下，加水溫度和油溫基本相同，加水量為4％)、分子蒸餾法脫酸、活性白土二次吸附脫色(加土量為6％，脫色溫度為40℃，脫色時間為10min)，既得精制牡丹籽油。
(2)牡丹籽油成分分析：
采用GC-MS法測定本法牡丹籽油不飽和脂肪酸含量達到95.1％；HPLC法測定牡丹籽油中維生素E總含量為57mg/100g；采用濕法消化ICP-MS測定法測定本法制得牡丹籽油中Ca的含量為150mg·kg-1、Na的含量為152mg·kg-1、Fe的含量為34mg·kg-1、K的含量為20mg·kg-1、Zn的含量為55mg·kg-1、Cu的含量為0.73mg·kg-1。
(3)抗氧化壁材的制備：
分別稱取一定量的明膠、酪蛋白、羧甲基纖維素、乳糖和葡萄糖，用適量的蒸餾水溶解，水浴加熱至完全溶解，將明膠、酪蛋白、羧甲基纖維素、乳糖和葡萄糖水溶液按照原料質量比為1:2:1:1:1的比例混合均勻，用1mol/L的NaOH溶液調節混合液pH至8.5，在105℃條件下反應3h，反應結束后在冰水浴中冷卻至室溫，終止反應，即制得具有抗氧化活性的復合壁材。
(4)牡丹籽油微膠囊制備：
稱取適量牡丹籽油，用無水乙醇充分溶解，制成含有牡丹籽油的乳濁液的芯材，將其緩慢的滴加到上述壁材水溶液中，壁芯材按2:1比重混合，高速分散器分散1.5min(18000r·min-1)，均質壓力35MPa條件下，高壓均質3次，真空冷凍干燥至恒重，干燥后產物即為微囊化牡丹籽油。得到的微囊化牡丹籽油包埋率為85.97％。
實施例2 微囊化牡丹籽油復合物固體沖劑的制備
(1)原料過篩：將微囊化牡丹籽油、葉酸及低聚木糖原料過80目篩，使各原料顆粒大小相似；
(2)混合：將所有過篩后原料，按微囊化牡丹籽油850份、葉酸0.02份、低聚木糖150份的重量份配比，充分混合，即得混合物料；
(3)包裝：混合原料每10g為一包裝單元，即得微囊化牡丹籽油復合物固體沖劑。
所述的葉酸購自陜西康躍生物科技有限公司，純度99％，符合保健食品原料要求。
所述的低聚木糖購自山東龍力生物科技股份有限公司，純度為99％，符合保健食品原料要求。
實施例3 微囊化牡丹籽油復合物顆粒的制備
(1)原料過篩：將微囊化牡丹籽油、葉酸及低聚木糖原料過80目篩，使各原料顆粒大小相似；
(2)混合：將所有過篩后原料，按微囊化牡丹籽油800份、葉酸0.01份、低聚木糖200份的重量份配比，充分混合，即得混合物料；
(3)制粒：將混合物料加入制粒機中加熱造粒，先混合10分鐘，當出風溫度達到40℃時，噴95wt％乙醇溶液，于50℃下干燥使物料含水量控制在3.0wt％以下，然后過14目尼龍篩進行整粒；
(4)包裝：每10g為一包裝單元，即得微囊化牡丹籽油復合物顆粒。
實施例4 微囊化牡丹籽油復合物片劑的制備
(1)原料過篩：將微囊化牡丹籽油、葉酸及低聚木糖原料過80目篩，使各原料顆粒大小相似；
(2)混合：將所有過篩后原料，按微囊化牡丹籽油900份、葉酸0.005份、低聚木糖100份的重量份配比，充分混合，即得混合物料；
(3)制粒：將混合物料加入制粒機中加熱造粒，先混合10分鐘，當出風溫度達到40℃時，噴92wt％乙醇溶液，于50℃下干燥使物料含水量控制在3.0wt％以下，然后過14目尼龍篩進行整粒；
(4)壓片：將步驟3)整粒后的顆粒加入1份甜橙香精和0.5份硬脂酸鎂混合12分鐘，壓片制得牡丹籽油葉酸低聚木糖復配片，每片片重約1g。
(5)包裝：每10片為一包裝單元。
對比例1 不同油成分分析
(1)供試樣品
牡丹籽油：按實施例1-(1)所述方法自制。
葵花籽油：福臨門壓榨一級，市售。
亞麻籽油：紅井源壓榨一級，市售。
玉米胚芽油：中糧初萃，市售。
(2)樣品前處理
稱取待測油脂樣品1.00g于圓底燒瓶中，加入10mLCH3OH-H2SO4(10:1,V/V)溶液，在70℃恒溫水浴鍋中加熱反應1h，冷卻后，用正己烷萃取2次，合并2次萃取液，蒸餾水洗滌3次，無水硫酸鈉干燥，取上清液待測。
(3)GC-MS色譜條件
色譜條件：Agilent 190191S-433型石英毛細管柱(325℃,30m×250μm×0.25μm)，載氣為高純度的氦氣(99.999％)，柱前壓69.8kPa，柱內載氣流速2mL/min；升溫程序：80℃保留2min，以6℃/min升溫至180℃，保持2min，再以8℃/min升溫到250℃，保持2min，載氣流速1mL/min，分流比50:1，進樣量1μL。
質譜條件：質量掃描范圍m/z 40～550amu，EI離子源230℃，分辨率1000，溶劑延遲4min，傳輸線溫度250℃，電子能量70eV，四級桿150℃，采用NIST標準譜庫進行檢索。
(4)結果
不同植物油主要脂肪酸成分比較結果見表1。
表1 不同植物油主要脂肪酸成分比較結果
從實驗結果可以看出，不同品種的食用油中不飽和脂肪酸的組成和含量呈現一定差異，牡丹籽油與其他市售食用油相比，其總不飽和脂肪酸含量最高且種類豐富(ω-3，ω-6，ω-9)，且其亞麻酸含量在其總不飽和脂肪酸中所占的比例最高。
對比例2 抗氧化壁材制備條件優選
(1)抗氧化壁材的制備
分別稱取一定量的明膠、酪蛋白、羧甲基纖維素、乳糖和葡萄糖，加入適量水溶解，各水溶液按原料不同比例混合均勻，用1mol/L的NaOH溶液調節混合液至不同pH，于105℃條件下反應不同時間，既得抗氧化壁材樣品，各樣品編號及反應條件見表2。
表2 抗氧化壁材樣品編號及反應條件
(2)抗氧化活性評價
a)DPPH自由基清除活性評價
梯度濃度的各樣品溶液2mL各加入2mL DPPH溶液(0.14mM)，混勻，室溫避光反應30min，于517nm處測定各樣品的吸光度，以VC為陽性對照。每個樣品重復測定3次，按公式1計算各樣品的自由基清除率，用SPSS計算出各樣品IC50值(半數抑制率時各樣品濃度)，實驗結果見表3。
清除率
b)還原力測定
梯度濃度的各樣品溶液1mL，向其中加入0.5mL 0.2M的磷酸鹽緩沖液(pH6.6)，1.5mL鐵氰化鉀溶液(1％)，混勻，避光50℃反應20min，隨后向其中加入1mL三氯乙酸溶液(10％)終止反應，離心(4000r/min)10min。精密移取2.5mL上清液，向其中再加入2mL去離子水，0.5mL三氯化鐵溶液(0.1％)，室溫反應5min，于700nm測定吸光度。每個樣品重復測定3次，用SPSS計算出各樣品IC50值(吸光度為0.5時各樣品濃度，實驗結果見表3)。
表3 各樣品抗氧化活性
注:*代表組間相比，P＜0.01；
(3)討論
由實驗結果可以看出，各樣品的DPPH自由基清除力和還原力由高到低依次為2>9>3>5>4>7>1>6>8，且2號樣品的DPPH自由基清除力和還原力最強，與其余各樣品呈現顯著性差異(P＜0.01)，表明2號樣品所述的反應條件為最優的反應條件。
對比例3 牡丹籽油及微囊化牡丹籽油穩定性考察
按實施例1步驟(1)所述牡丹籽油制備方法，重復制備3批牡丹籽油樣品(1-1，2-1，3-1)，按實施例1步驟(1)-(4)所述方法重復制備3批微囊化牡丹籽油樣品(2-1，2-2，2-3)，在高溫(38±1℃)、高濕(相對濕度75％)條件下儲存12個月，分別在第1、3、6、9、12個月對上述各樣品進行感官指標(性狀，色澤，味道)、總不飽和脂肪酸含量、酸價檢測，檢測結果見表4。
表4 各批次樣品十二個月穩定性考察結果
由實驗結果可以看出，牡丹籽油在未加任何試劑保護的條件下，保存約一個月之后即開始出現明顯的變質，而以微囊化牡丹籽油為主要原料的復配產品，在高溫高濕的條件下，保存12個月仍能保證穩定的質量，表明本發明所述的微囊化牡丹籽油復配產品12個月穩定性良好。
實驗例1 小鼠碳粒廓清試驗(增強機體免疫力試驗)
取體重18～22g昆明種雄性小鼠60只，隨機分為6組，每組10只，分別為給藥組(實施例2組以及牡丹籽油組)、低聚木糖組、空白對照組1、空白對照組2以及陽性對照組。給藥組分別給予濃度為10mg/mL實施例2所述的微囊化牡丹籽油復合物固體沖劑以及濃度為10mg/mL(含有1％吐溫-80)按照實施例1-(1)所述的方法制備的牡丹籽油乳濁液，低聚木糖組給予濃度為1.5mg/mL低聚木糖水溶液(按實施例2低聚木糖比例折算)，空白對照組1給予生理鹽水，空白對照組2給予含有1％吐溫-80的生理鹽水，陽性對照組給予濃度為10mg/mL貞芪扶正膠囊水溶液，各組按20mL·kg-1的劑量灌胃給藥，每日1次，連續10d，末次給藥24h后，尾靜脈注射稀釋的印度墨汁10mg·kg-1。注入后于第2、10min眼眶靜脈叢取血40μL，并立即將其加入到4mL 0.1％Na2CO3溶液中，隨后用0.1％溶液Na2CO3對紫外可見分光光度計校零，于650nm出測定各樣品OD值(光密度值)，小鼠取血完畢后，脫頸椎處死，取其肝臟、脾臟，用濾紙吸干臟器表面血跡，稱重，并按公式2和公式3計算廓清指數K及吞噬指數α，實驗結果見表5。
廓清指數
吞噬指數
表5 各組提高小鼠免疫力試驗結果(n＝10，)
注:*代表與空白組1相比，P＜0.01；代表與空白組2相比，P＜0.01.
從實驗結果可以看出，實施例2組與陽性對照組的廓清指數與吞噬指數與空白組1和空白組2相比，廓清指數與吞噬指數均高于空白組的值，且呈現顯著性差異(P＜0.01)，低聚木糖組、牡丹籽油組與空白組1和空白組2相比，廓清指數與吞噬指數略微升高，但未呈現顯著性差異，表明低聚木糖和牡丹籽油在該給藥濃度條件下，有一定的提高小白鼠單核巨噬細胞系統吞噬異物的能力，結合實施例2組的實驗結果，表明微囊化牡丹籽油與低聚木糖復配后，協同增效，可顯著增加小白鼠單核巨噬細胞系統吞噬異物的能力，即本發明的微囊化牡丹籽油復合物具有提高機體免疫力的功能。
實驗例2 降血糖活性評價(糖尿病模型大鼠)
取體重240～280gWistar雄性大鼠60只，隨機分為6組，每組10只，選取其中1組大鼠正常喂養，設為空白對照組，剩余5組大鼠在正常進食、飲水條件下，尾靜脈注射鏈脲佐菌素(60mg/kg)，72h后將各組大鼠均禁食不禁水12h，眶后靜脈叢采血，離心分離血清，測定空腹血糖值，隨機選取40只空腹血糖值在16.8mmol/L～25.0mmol/L之間的大鼠作為糖尿病大鼠，將40只糖尿病大鼠隨機分為4組，每組10只，分別為實施例2組、低聚木糖組、牡丹籽油組和模型組。實施例2組給予濃度為10mg/mL實施例2制備的微囊化牡丹籽油復合物固體沖劑，低聚木糖組給予濃度為1.5mg/mL低聚木糖水溶液(按實施例2低聚木糖比例折算)，牡丹籽油組給予以及濃度為10mg/mL(含有1％吐溫-80)按照實施例1-(1)所述的方法制備的牡丹籽油乳濁液，空白對照組和模型組給予生理鹽水，各組按20mL·kg-1的劑量灌胃給藥，每日1次，連續30d，與末次給藥后，測定各組大鼠空腹血糖值，實驗結果見表6。
表6 各組降低糖尿病大鼠空腹血糖試驗結果(n＝10，)
注:*代表與空白對照組相比，P＜0.01；代表與模型組組相比，P＜0.01；代表與給藥前相比，P＜0.01.
從實驗結果可以看出，模型組大鼠空腹血糖值與空白組相比呈現顯著性差異(P＜0.01)，表明大鼠糖尿病模型造模成功，給藥30d后，低聚木糖、牡丹籽油組大鼠空腹血糖值與模型組相比略有下降，且與給藥前大鼠空腹血糖值相比也略有下降，但未呈現顯著性差異，表明低聚木糖、牡丹籽油在該給藥濃度條件下，對糖尿病大鼠有一定的降血糖活性，實施例2組大鼠空腹血糖值雖然與空白組相比仍呈現較高血糖值，但實施例2組給藥30d后，其空腹血糖值與給藥前的大鼠空腹血糖值相比明顯下降，且呈現顯著性差異(P＜0.01)，且給藥30d的空腹血糖值與模型組也呈現顯著性差異(P＜0.01)，也低于牡丹籽油組和低聚木糖組，表明本發明的微囊化牡丹籽油復合物，將微囊化牡丹籽油與低聚木糖經合理復配后，使兩者協同增效，復配物發揮出更強的降血糖活性，可降低高血糖患者的空腹血糖值。
實驗例3 降血脂活性評價(高血脂模型大鼠)
取體重240～280gWistar雄性大鼠50只，隨機分為5組，每組10只，選取其中1組大鼠喂食正常飼料，設為空白對照組，剩余4組大鼠，分別設為實施例2組、低聚木糖組、牡丹籽油組和模型組，喂食高脂飼料。實施例2組給予濃度為10mg/mL實施例2制備的微囊化牡丹籽油復合物固體沖劑，低聚木糖組給予濃度為1.5mg/mL低聚木糖水溶液(按實施例2低聚木糖比例折算)，牡丹籽油組給予以及濃度為10mg/mL(含有1％吐溫-80)按照實施例1-(1)所述的方法制備的牡丹籽油乳濁液，空白對照組和模型組給予生理鹽水，各組按20mL·kg-1的劑量灌胃給藥，每日1次，連續15d，15d后進食過夜，次日斷頭取血，制成血清測定總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)以及低密度脂蛋白值(LDL-C)，實驗結果見表7。
表7 各組血清中血脂指標檢測結果(n＝10，)
注:*代表與空白對照組相比，P＜0.01；代表與模型組組相比，P＜0.01.
從實驗結果可以看出，模型組大鼠血清中各血脂指標與空白組相比呈現顯著性差異(P＜0.01)，表明大鼠高血脂模型造模成功，給藥15d后，低聚木糖組、牡丹籽油組大鼠血清中各血脂指標與模型組相比略有下降，但未呈現顯著性差異，表明低聚木糖、牡丹籽油在該給藥濃度條件下，有一定的降血脂活性，實施例2組大鼠血清中各血脂指標與空白組相比也呈現一定程度的下降，下降程度高于低聚木糖組、牡丹籽油組，且實施例2組大鼠血清中各血脂指標與模型組相比，呈現顯著性差異(P＜0.01)，表明本發明的微囊化牡丹籽油復合物，將微囊化牡丹籽油與低聚木糖經合理復配后，使兩者協同增效，具有更好的降血脂活性，可降低高血脂患者血清中血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)以及低密度脂蛋白值(LDL-C)。
實驗例4 抗氧化活性評價(DPPH·自由基清除)
將實施例2和牡丹籽油的樣品用無水乙醇溶解，制成濃度為2mg/mL的供試品母液，隨后用無水乙醇將各供試品母液稀釋配制成濃度分別為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6和1.00mg/mL的樣品溶液。精密移取各樣品溶液2mL，隨后加入2mL DPPH溶液(0.14mM)，混勻，室溫避光反應30min，于517nm處測定各樣品的吸光度Li,Zhou,and Han(2006)，以無水乙醇為空白，以維生素E為陽性對照，每個樣品重復測定3次，按公式1計算各樣品的自由基清除率，用SPSS計算出各樣品IC50值，實驗結果見表8。
抗氧化活性評價(還原力實驗)
將實施例2和牡丹籽油的樣品用無水乙醇溶解，制成濃度為2mg/mL的供試品母液，隨后用無水乙醇將各供試品母液稀釋配制成濃度分別為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6和1.00mg/mL的樣品溶液。精密移取各樣品溶液1mL，向其中加入0.5mL 0.2M的磷酸鹽緩沖液(pH6.6)，1.5mL鐵氰化鉀溶液(1％)，混勻，避光50℃反應20min，隨后向其中加入1mL三氯乙酸溶液(10％)終止反應，離心(4000r/min)10min。精密移取2.5mL上清液，向其中再加入2mL去離子水，0.5mL三氯化鐵溶液(0.1％)，室溫反應5min，于700nm測定吸光度。以維生素E陽性對照。每個樣品重復測定3次，用SPSS計算出各樣品IC50值(吸光度為0.5時各樣品濃度，實驗結果見表7)。
表8 各樣品抗氧化活性IC50值
注:*代表與維生素E相比，P＜0.01；
從實驗結果可以看出，牡丹籽油組的DPPH自由基清除力和還原力與陽性對照組(維生素E組)相比，呈現顯著性差異(P＜0.01)，表明牡丹籽油DPPH自由基清除力和還原力較差，實施例2組與陽性對照組(維生素E組)的DPPH自由基清除力和還原力相近，表明實施例2組具有與維生素E相近的DPPH自由基清除力和還原力，即本發明的微囊化牡丹籽油復合物具有較好的抗氧化的功能。
實驗例5
人群試驗組30例，低聚木糖組30例，對比組30例，受試人群符合以下標準：
1)年齡：21-40周歲，妊娠期婦女。
2)有妊娠期便秘，大便一周少于3次者。
3)妊娠血壓、血糖和/或血脂有偏高傾向(臨界值)。
采用雙盲法觀察，試驗組服食本發明實施例2制備的粉劑，每日一次，每次用200mL溫開水沖服1包，低聚木糖組服食低聚木糖粉末，每日一次，每次每次用200mL溫開水沖服1.5g，對比組服食牡丹籽油，連續服用四周，記錄試食者試食前后每周平均排便次數，并對其進行統計學分析，實驗結果見表9，同時監測服藥四周后孕婦的血壓、血脂和血糖值，實驗結果見表10。
表9 試食前后排便次數統計結果
注：*代表自身前后比較有極顯著性差異P＜0.01；
代表與對比組相比具有顯著性差異，P＜0.01；
代表與試驗組相比具有顯著性差異，P＜0.01。
實驗結果表明，與自身服藥前后排便次數相比較，試驗組、低聚木糖組均具有較好的通便改善效果，且具有極顯著性差異(p<0.01)，且與對比組相比，試驗組、低聚木糖組排便效果也顯著優于對比組(p<0.01)，表明通過服用低聚木糖和本發明的微囊化牡丹籽油復合物，都能顯著的改善孕婦妊娠便秘，結合服藥后試驗組的排便次數顯著多與低聚木糖組(p<0.01)的觀察結果，表明低聚木糖為微囊化牡丹籽油復合物的改善便秘的有效成分之一，但該復合物經合理配方后，其對妊娠便秘的改善效果更強。
表10 試食前后血壓、血脂、血糖統計結果
通過對比試食前后孕婦的血壓、血脂(總膽固醇)和血糖值，發現服用低聚木糖的受試組孕婦的血壓、血脂(總膽固醇)和血糖值略微降低，但各項指標仍處于臨界值狀態，而服用微囊化牡丹籽油復合物的受試組的孕婦，其血壓、血脂(總膽固醇)和血糖值可由處于臨界值狀態降低到正常值狀態，通過對受試人群進行調查訪問，確認本發明所述產品不會造成任何不良反應，且試驗組孕婦服用后，自覺機體免疫力提高，精神狀態良好，無任何疾病發生。表明微囊化牡丹籽油復合物可以調整孕婦的血壓、血脂和血糖，使其處于正常水平。