專利名稱：具有非典型抗精神病活性的吡咯并[2,1－b]苯并硫氮雜類的脫烷基化衍生物的制作方法
技術領域：
本發明涉及具有非典型抗精神病活性的吡咯并[2，1-b]苯并硫氮雜類衍生物，其特征在于良好的藥代動力學特征。本發明還涉及制備所述化合物的方法，它們作為藥物尤其是作為非典型抗精神病藥的應用，以及包含它們的藥物組合物。
背景技術：
非典型抗精神病藥構成了一類重要的治療和預防精神障礙的藥物。
所述藥物被提出作為克服由使用前代抗精神病藥引起的問題的手段，所述前代抗精神病藥也即伴隨有較多和嚴重副作用的典型抗精神病藥。
在以本申請人名義提交的國際專利申請WO 00/06579和WO02/10175中所述的具有吡咯并[2，1-b]苯并硫氮雜結構的一類縮聚雜環中可找到具有有利治療應用的非典型抗精神病的例子。第一篇申請描述了這樣的化合物，其中，在硫氮雜環中，碳9和碳10之間的鍵是飽和的；相反，在第二篇申請中，所述鍵是不飽和的，該后一類化合物一般也稱為″烯胺″。這兩類化合物在9位上共同具有可以選自C1-C4二烷基胺、4-烷基-1-哌嗪基、4-羥基烷基-1-哌嗪基、4-烷基-1-哌啶基和4-烷基-1-高哌嗪基(homopiperazinyl)的基團。特別優選的是在9位上攜帶基團4-烷基-1-哌嗪基、4-羥基烷基-1-哌嗪基、4-烷基-1-哌啶基、4-烷基-1-高哌嗪基之一的化合物，所有這些化合物的共同特征是在雜環4位的烷基。
特別地，在專利申請WO 00/06579中描述的且在下文中簡稱為ST1460的化合物(S) (+) 7-氯-9-(4-甲基哌嗪-1-基)-9，10-二氫吡咯并[2，1-b][1，3]苯并硫氮雜，已被證明具有與臨床參比化合物(氯氮平和奧氮平)相當的非典型抗精神病性質，且伴隨較低的出現錐體束外和/或神經內分泌效應的風險，而這些效應是典型抗精神病藥特征性的。
在專利申請WO 02/10175中描述的且在下文中簡稱為ST1899的化合物9-(4-甲基哌嗪-1-基)-吡咯并[2，1-b]-[1，3]苯并硫氮雜也呈現有利的藥理學特性，且提供了與前述化合物相比活性更大和合成更簡單的優點。
雖然具有令人滿意的藥理學特性，在上述專利申請中描述的化合物的動力學還需要一些改進，因為它們有被快速清除的特征。因此希望擁有具有相似(如果不能更好的話)藥理學特性，但一定要具有改進的藥代動力學特征的化合物。
發明概述本發明的主要目的是提供在9位具有選自1-哌嗪基或1-高哌嗪基或1-哌啶基的基團的化合物，也就是說，在上述專利申請中描述的脫烷基化類似物，它們具有作為非典型抗精神病藥的有利的藥理學活性，且還特征在于有利的藥代動力學特征。
本發明進一步的目的在于制備所述化合物的方法。
本發明進一步的目的在于所述化合物作為藥物的應用，尤其是用于制備用于治療和預防精神障礙、心理障礙和神經障礙的藥物組合物，尤其是與中腦邊緣(mesolimbic)多巴胺能通路活性增加和/或與中間皮質(mesocortical)多巴胺能機能衰退(hypofunctionality)相關的病癥，例如，精神分裂癥的陽性癥狀和陰性癥狀、偏執狀態、躁狂抑郁狀態、情感領域(sphere)的障礙、社交退化、人格退化和幻覺。所述化合物的特征在于非典型抗精神病活性。
本發明進一步的目的在于包含至少一種本發明化合物并混合藥學可接受的載體和/或賦形劑的藥物組合物。
現在將借助于實施例和附圖詳細描述本發明。
發明的詳細描述本發明化合物用下式(I)描述 其中A是CH-CH2或C＝CH；R是氫、鹵素、C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基、C5-C6環烷基；R1是1-哌嗪基、1-高哌嗪基和1-哌啶基；R2是氫、C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基、CHO、CH＝NOH、CH2OH；條件是，當R是C1時，A不是C＝CH，它們的單一旋光異構體、其混合物和它們藥學可接受的鹽。
至于具有在9位和10位飽和硫氮雜環的式(I)化合物，9位的特征在于手性中心。本發明既包括作為外消旋混合物的化合物，又包括單獨分別作為單一異構體(R)和(S)的化合物。
在式(I)中，R優選代表溴、氯(當A是C＝CH時除外)、氟或氫，更優選氫、氯或氟；R1優選為哌嗪-1-基，且R2優選為氫。
本發明的優選化合物是(+)9-(哌嗪-1-基)-9，10-二氫吡咯并[2，1-b][1，3]苯并硫氮雜；(-)9-(哌嗪-1-基)-9，10-二氫吡咯并[2，1-b][1，3]苯并硫氮雜；(±)-7-氯-9-(哌嗪-1-基)-9，10-二氫吡咯并[2，1-b][1，3]-苯并硫氮雜(ST2087)；
(S)-7-氯-9-(哌嗪-1-基)-9，10-二氫吡咯并[2，1-b][1，3]-苯并硫氮雜(ST2432)；(R)-7-氯-9-(哌嗪-1-基)-9，10-二氫吡咯并[2，1b][1，3]-苯并硫氮雜；(+)-7-氟-9-(哌嗪-1-基)-9，10二氫吡咯并[2，1b][1，3]-苯并硫氮雜；9-(哌嗪-1-基)-吡咯并[2，1-b][1，3]苯并硫氮雜(ST2472)；7-氟-9-(哌嗪-1-基)-吡咯并[2，1-b][1，3]苯并硫氮雜；1-甲基-9-(哌嗪-1-基)-吡咯并[2，1-b][1，3]苯并硫氮雜。
本發明進一步的目的在于制備式(I)化合物的方法。在本發明第一個實施方案中，該方法由以下階段組成a)用希望的氯甲酸烷基酯處理相應的4-烷基-(高)哌嗪-1-基-吡咯并[2，1-b]苯并硫氮雜或4-烷基-哌啶-1-基-吡咯并-[2，1-b]苯并硫氮雜或4-烷基-(高)哌嗪-1-基-二氫吡咯并-[2，1-b]苯并硫氮雜或4-烷基-哌啶-1-基-二氫吡咯并[2，1-b]-苯并硫氮雜，得到(高)哌嗪或哌啶環4位氮原子的相應酰胺；b)接著水解如此所得的酰胺，釋放所述氮原子；c)可能的將階段b)中獲得的化合物成鹽。
可選地，式(I)化合物可以用含下列階段的方法制備a)用對甲苯磺酸和哌嗪六水合物處理如專利申請WO 00/06579中所述獲得的9位相應的酮，以得到相應的烯胺；b)接著用氫化物在乙酸中還原相應的烯胺，得到相應的飽和產物；c)可能的將階段b)中獲得的化合物成鹽。
從上述專利申請中所述的那些化合物開始(即從相應的酮開始)很容易制備本發明化合物，相應的酮的合成描述在專利申請WO 00/06579中。一旦已經制備出前體，就根據本發明方法處理該前體，如下列路線圖所例示的，對多種優選產物給出了實施例，但由于本領域普通技術人員可得的公知常識，所以很容易概括推廣到所有的式(I)化合物。
路線圖1 用氯甲酸烷基酯例如氯甲酸乙酯處理前體(例如ST1460或ST1899)，得到相應的哌嗪環4位氮原子的酰胺。如此獲得的酰胺隨后水解釋放出所述氮原子。可用本領域完全常規的方法將如此獲得的化合物成鹽。
路線圖2 用對甲苯磺酸和哌嗪處理如專利申請WO 00/06579中所述合成的酮，得到相應的烯胺。隨后用氫化物在乙酸中還原得到相應的氫化產物。
根據本領域技術人員熟悉的一般方法(例如描述在WO 00/06579中)，可以獲得單一對映異構形式的分離。
本發明進一步的目的在于包含至少一種式(I)化合物并混合藥學可接受的賦形劑和/或載體和可能地對于治療和預防精神病有用的、有待用在聯合療法中的附加活性成分的藥物組合物。
對于藥物組合物的詳細描述，可明確參考專利申請WO 00/06579和WO 02/10175，尤其是關于與對于治療和預防精神病有用的其它活性成分的組合。
本發明化合物具有顯著的抗精神病活性，且具有非典型抗精神病藥特征性的藥理學特性，如按照WO 00/06579和WO 02/10175中所述進行的藥理學試驗所證明的，因此對于制備治療和預防急性和慢性精神障礙的藥物是有用的。
可以用本發明化合物治療的急性和慢性精神障礙的實例是精神分裂癥、偏執狀態、躁狂抑郁狀態、情感領域的障礙、社交退化、人格退化、幻覺、食欲障礙(例如厭食癥)和相關病癥。進一步的適應癥可包括痛覺缺失/感覺缺失、精神抑制性(neuroleptic)感覺缺失、老年人的焦慮表現和錐體束外障礙。
尤其是對于其中碳原子9和碳原子10之間的鍵是單鍵且R是氫、氟或溴的式(I)化合物來說，它們對于制備治療涉及情緒和認知領域的精神分裂癥陰性癥狀的藥物是有用的，尤其是當所述陰性癥狀為癡呆形式時。
尤其是對于其中碳原子9和碳原子10之間的鍵是不飽和鍵的式(I)化合物來說，它們對于制備治療多巴胺能神經傳遞過度活化(hyperactivation)的病況的藥物是有用的，尤其是當這影響了中腦邊緣通路時，和/或對于制備治療中間皮質多巴胺能機能衰退的病況的藥物是有用的。例如，所述病況是精神分裂癥的陽性癥狀和陰性癥狀的形式。
其中碳原子9和碳原子10之間的鍵是不飽和鍵的式(I)化合物也可適用于制備用于治療和預防偏執狀態、躁狂抑郁狀態、情感領域的障礙、社交退化、人格退化、幻覺或認知功能障礙的藥物。
根據要治療疾病的嚴重性和它的急性或慢性成分，式(I)化合物可以在通常可從1-200mg/天變化的劑量范圍內給藥。然而也可以使用超出所示范圍的劑量，由初級護理醫師來決定。
本發明化合物特征在于有利的藥代動力學特征。
下列實施例進一步例示本發明。


圖1在大鼠和小鼠微粒體中第120分鐘時獲得的ST1899的代謝譜，與基線相比較。與肝微粒體培養后的上清液的HPLC分析結果。
圖2在猴微粒體中第120分鐘時獲得的ST1899的代謝譜，與基線相比較。與肝微粒體培養后的上清液的HPLC分析結果。
圖3在大鼠和小鼠微粒體中第120分鐘時獲得的ST2472的代謝譜，與基線相比較。與肝微粒體培養后的上清液的HPLC分析結果。
圖4在猴微粒體中第120分鐘時獲得的ST2472的代謝譜，與基線相比較。與肝微粒體培養后的上清液的HPLC分析結果。
實施例實施例1(路線圖1)a)乙基-4-(7-氯-9，10-二氫吡咯并-[2，1-b][1，3]-苯并硫氮雜-9-基)-1-哌嗪-羧酸酯將ST1460(mg 340，1.02mmol)、1，2-二氯乙烷(3mL)、10mL氯甲酸乙酯和150mg二甲氨基吡啶)放入裝配有被氯化鈣封口的回流冷凝器和溫度計的雙頸50mL無水燒瓶中。在回流溫度下攪拌維持混合物3小時。
然后將反應混合物冷卻到室溫，用二氯甲烷(50mL)稀釋，并用水洗滌直至獲得中性pH(3×50mL)。該二氯甲烷溶液在硫酸鈉上脫水并蒸發溶劑以后生成了油(400mg)，將它在硅膠上用色譜法純化(溶劑己烷-乙酸乙酯80∶20)。得到280mg標題產物(產率70％)。
TLC石油醚[40-70]/AcOEt(80∶20)；Rf0.70。
HPLCLiChrosorb RP-18(5μm)；水/乙腈(40∶60)；0.8mL/min；U.V.λ＝MaxAb s；Rt 25.78min符合標題產物。
1H-NMR[CDCl3]結構在給定范圍內。
13C-NMR[CDCl3]結構在給定范圍內。
b)1-[(9S)-7-氯-9，10-二氫吡咯并[2，1-b][1，3]苯并硫氮雜-9-基]哌嗪鎓二氯化物(ST2432)
將在前述階段獲得的產物(mg 280；0.715mmol)、正丁醇(5mL)和氫氧化鉀(mg 400；7.0mmol)放入裝配有被氯化鈣封口的回流冷凝器和溫度計的雙頸50mL無水燒瓶中。在回流溫度下攪拌混合物1小時。減壓除去溶劑得到油，在硅膠上用色譜法純化(乙酸乙酯/甲醇梯度8∶2/6∶4)，得到186mg產物(產率81.3％)，它隨后被鹽酸化得到標題化合物。
TLC甲醇/AcOEt/Et3N(1∶1+0.5cc)；Rf0.15。
HPLCLiChrosorb RP-18(5μm)；水/乙腈(40∶60)；0.8mL/min；U.V.λ＝MaxAbs；Rt25.78min。
1H NMR(CDCl3)δ7.51(d，1H，J＝2.4Hz)，7.30(d，1H，J＝8.5Hz)，7.06(dd，1H，J＝8.5，2.4Hz)，6.86(m，1H)，6.29(m，1H)，6.05(m，1H)，4.71(dd，1H，J＝14.0，8.6Hz)，4.45(dd，1H，J＝14.0，3.4Hz)，3.95(dd，1H，J＝8.6，3.4Hz)，2.61-2.25(m，8H)。
實施例2(路線圖2)a)9-哌嗪-1-基-吡略并[2，1-b][1，3]苯并硫氮雜(ST2472)將190mg(0.88mmol)吡咯并[2，1-b]苯并硫氮雜-9(10H)-酮、5.13g哌嗪六水合物(0.026mol)和4.53g(0.024mol)對甲苯磺酸在燒瓶中攪拌反應。將反應混合物加熱到180℃的溫度，并保持反應7小時。將所得的膠狀物質溶于乙酸乙酯，并用水洗滌有機相3次，然后在無水硫酸鈉上干燥并蒸發。得到150mg產物，將它在硅膠上純化，用AcOEt/MeOH 1∶1洗脫。
得到43mg油產率＝17.2％TLCAcOEt/MeOH/NH3(1∶1∶0.3ml)Rf＝0.4HPLCLunaCN(5μm)；水/CH3COONH4(25∶75)；1.0mL/min；U.V.λ＝220nm；Rt12.045min。
1H NMR(CDCl3)δ7.65(d，1H)，7.5(d，1H)，7.3(dd，2H)，6.75(m，1H)，6.6(s，1H)，6.2(m，1H)，6.1(m，1H)，3(4H，)，2.95(4H)，2.65(寬峰，1H，NH)。
實施例3(路線圖2)a)7-氯-9-(1-哌嗪基)-9，10-二氫吡咯并[2，1b][1，3]苯并硫氮雜乙酸鹽(ST2516)將500mg(1.57mmol)1-[(9S)-7-氯-9，10-二氫-吡咯并[2，1-b][1，3]苯并硫氮雜-9-基]哌嗪(從7-氯吡咯并[2，1b][1，3]苯并硫氮雜-9(10H)-酮開始，用實施例2中對ST2472描述的相同的方法合成)溶于裝配有攪拌系統的燒瓶中的30ml CH3COOH中；在0℃下小心加入400mg NaBH4，并在室溫下攪拌2小時。
減壓蒸發溶劑，得到油，將其溶于AcOEt，用NaOH 1N洗滌兩次，最后用H2O洗滌；然后在無水硫酸鈉上干燥有機相，并蒸發溶劑。
得到300mg白色固體(產率52％)。
分析在結構給定范圍內(參見ST2432)。
實施例4(路線圖1)a)4-吡咯并[2，1-b][1，3]苯并硫氮雜-9-基哌嗪-1-羧酸乙酯將溶于無水二氯甲烷(methylene)(120mL)的ST1899(3g，0.01mol)和二甲氨基吡啶(DMAP，1.5g)放入無水燒瓶中；向該溶液中逐滴加入氯甲酸乙酯(10mL)。在室溫攪拌下和完全封閉系統中保持反應混合物5小時。然后用氯化鈣trap從反應混合物中真空蒸發溶劑。得到白色固體，將它在硅膠上用色譜法純化(乙酸乙酯/己烷-梯度95∶5/80∶20)。得到3g標題產物。
產率＝90％。
TLC(乙酸乙酯/己烷2∶8；Rf＝0.3。
1H NMR(CDCl3)δ7.65(d，1H)，7.5(d，1H)，7.3(dd，2H)，6.75(m，1H)，6.6(s，1H)，6.2(m，1H)，6.1(m，1H)，4.1(q，2H)，3.5(4H，)，2.8(4H，)，1.2(t，1H)。
b)9-哌嗪-1-基-吡咯并[2，1-b][1，3]苯并硫氮雜(ST2472)將先前階段獲得的產物(3g；8.9mmol)、正丁醇(22mL)和氫氧化鉀(4.9g；8.9mmol)放入裝配有被氯化鈣封口的回流冷凝器和溫度計的雙頸50mL無水燒瓶中。在回流溫度下攪拌混合物3小時。減壓蒸發溶劑，得到固體，將其溶于AcOEt并用H2O洗滌至中性pH。然后在無水硫酸鈉上干燥有機相并蒸發。得到2g產物，當在硅膠上用色譜法(乙酸乙酯/甲醇梯度7∶3/6∶4)純化時，得到1.5g產物(產率60％)。
分析參見實施例2(路線圖2)。
關于可能的外消旋混合物拆分，讀者請參閱上述專利申請WO00/06579中的描述。
實施例5化合物ST1469及其相應的脫甲基衍生物ST2087的藥代動力學。60μmol/kg劑量各產物的口服給藥在大鼠中的影響。
ST1469在大鼠中的給藥(表1)。
ST1469口服給藥以后，該分子的血漿濃度增加，直至給藥2小時后達到大約280pmol/mL的最大濃度(Cmax)。ST1469的消除很快，這可以從小于3小時的半衰期看出。
代謝似乎是產物ST1469的主要消除方法，正如它的脫甲基化代謝產物(ST2087)立即出現所顯示，從第一個樣品(0.5h)起該代謝產物就表現出比原樣的產物ST1469更高的血漿濃度。
ST2087更慢地達到它的Cmax(Tmax～3h)，它消除得也比ST1469慢(t1/2～5h)。
ST2087在大鼠中的給藥(表1)。
產物ST2087給藥以后，吸收速率可比得上對ST1469觀察到的吸收速率，事實上，在給藥2小時內達到了Cmax。
ST2087的消除速率保持與相同分子ST1469給藥以后觀察到的相同的大小數量級。
從該研究看來，照這樣施用的代謝產物在全身水平產生比ST1469給藥導致其形成后所測量到的濃度高得多的濃度，如表1中報道的藥代動力學參數所證明的那樣。
表1大鼠中口服給藥60μmol/kg劑量的各個產物以后，產物ST1469及相應的脫甲基衍生物ST2087的藥代動力學參數

ST1469和ST1899及其各自的脫甲基衍生物ST2087和ST2472的抗精神病效力的評價。在主動回避試驗(activeavoidance test)中的處理效果。
在大鼠中施用增加劑量的抗精神病藥，引起對回避反應的抑制和逃避反應數目的增加，而無反應(non-response)(失敗)沒有任何增加。動物回避行為的這種改變是施用具有抗精神病活性的化合物的作用所特征性的，具有抗精神病活性的化合物在給定劑量范圍內選擇性地阻斷條件性反應。對這種行為的評價使得檢測和確定產物的抗精神病能力成為可能。
實驗過程使用體重180g的雄性Fischer 344大鼠(Charles River)。在試驗前60分鐘給動物口服施用產物ST1469和ST2087。以0.75mg/5ml/kg(1.84μmol/kg)、1.5mg/5ml/kg(3.69μmol/kg)、3mg/5ml/kg(7.37μmol/kg)和6.0mg/5ml/kg(14.7μmol/kg)的劑量施用產物ST1496。
對于產物ST2087來說，使用下列劑量2mg/5ml/kg(6.25μmol/kg)、3mg/5ml/kg(9.38μmol/kg)、4mg/5ml/kg(12.50μmol/kg)、6mg/5ml/kg(18.76μmol/kg)和8mg/5ml/kg(25.01μmol/kg)。
為了評價產物ST1899及其衍生物ST2472的抗精神病效力，分別以0.75mg/5ml/kg(μmol/kg)、1.5mg/5ml/kg(μmol/kg)、3mg/5ml/kg(μmol/kg)；和0.25mg/kg(0.88μmol/kg)、0.5mg/kg(1.76μmol/kg)、1.05mg/kg(3.71μmol/kg)和2mg/kg(7.06μmol/kg)的劑量施用各個化合物。
為進行回避行為評價試驗，使用一件裝置(Ugo Basile)，該裝置由被隔斷壁分成兩室的塑料籠子組成，隔斷壁中有一個開口，允許這兩部分之間相互聯通。這兩部分中的每一個可以用放在罩著籠子的樹脂玻璃蓋上方的10瓦的燈照明。編程裝置可以調節非條件刺激和區別刺激的持續時間和頻率，計算機化系統獲取實驗數據。在研究過程中，在非條件刺激(0.3mA電擊4秒)之前3秒發出區別刺激(光)。在每一段時間內，每分鐘進行一次試驗，一天總共進行20次試驗。每天進行一段時間。
過程包括使大鼠熟悉試驗籠1分鐘，接著進行一系列試驗，試驗的開始是用光刺激發出信號；在區別刺激后數秒鐘給予電擊。大鼠通過逃到相鄰隔室可以避免電擊。在開燈之后和電擊之前產生的反應中斷區別刺激，被認為是″回避″；在電擊過程中產生的反應既終止了區別刺激，又終止了非條件刺激，被認為是″逃避″；不避開被認為是″失敗″。
在用試驗化合物處理之前，按照動物控制任務的能力選擇動物。認可進入該試驗評價治療效果的是在基礎試驗中產生了至少75％回避的那些大鼠。
結果表示為平均值和標準誤。應用GraphPad Prism數據分析程序通過非線性回歸，基于條件性反應(回避)數，計算能夠相對于基線值降低該變量值達50％的產物劑量(ED50)。
結果ST1469和ST2087的作用產物ST1469以劑量依賴性方式抑制動物產生回避反應的能力。
口服給藥的研究產物ST2087以2mg/kg(6.25μmol/kg)、3mg/kg(9.38μmol/kg)、4mg/kg(12.50μmol/kg)、6mg/kg(18.76μmol/kg)和8mg/kg(25.01μmol/kg)的劑量能夠減少動物回避反應的產生。能夠減少回避反應的產生達50％的劑量值(ED50)是3.27mg/kg，相當于10.22μmol/kg。
在該研究中獲得的數據顯示了化合物ST2087的效力類似于起源化合物ST1469的效力(ED503.71mg/kg，相當于9.11μmol/kg)(表2)。
ST1899和ST2472的作用用0.5mg/kg(1.76μmol/kg)、1.05mg/kg(3.71μmol/kg)和2mg/kg(7.06μmol/kg)劑量的ST2472處理引起了回避反應的進行性減少和逃避的增加；在0.5mg/kg和1.05mg/kg的劑量下，失敗率表現出特別有限。用0.25mg/kg(0.88μmol/kg)處理沒有顯著地改變動物的行為。
能夠較基線值減少條件性反應的產生達50％的劑量(ED50)是1.43mg/kg(5.05μmol/kg)(表2)。
該試驗能充分評價該分子的抗精神病能力，證明其與對起源化合物ST1899所測量到的能力相當(表2)。
表2主動回避試驗。用所示物質口服處理。
下表給出了基于回避率變量計算的ED50值。

實施例6ST1899及其N-脫甲基化代謝產物ST2472的體外代謝穩定性。
在該研究中在大鼠、小鼠和猴微粒體中測定了ST1899及其代謝產物ST2472的代謝譜。
材料和方法ST1899和ST2472分別與肝微粒體培養。對所調查的每個動物物種進行單獨的實驗。對于每個實驗來說，除了試驗項外，7-乙氧基香豆素(Sigma-Aldrich)也作為探針培養，以評價微粒體的代謝活性基于保留時間，與合成標準品的保留時間相比，鑒定7-羥基香豆素，并將其用作氧化代謝的標記物。試驗項和7-乙氧基香豆素都在37℃下培養長達120分鐘。
微粒體信息總結在下表3中

在樣品中所用的試驗項、微粒體和試劑的標稱濃度都記錄在下表4中表4

MgCl2、β-D-葡萄糖-6-磷酸、βNADP和葡萄糖-6-磷酸脫氫酶用于制備NADPH再生溶液(NRS)。將250μl 0.1M pH 7.4 KH2PO4緩沖液、100μl NRS和50μl試驗項(或7-乙氧基香豆素)標準溶液加到2ml Eppendorf試管中。在或者不含微粒體或者不含試驗項培養的樣品中，加入等體積0.1 M pH 7.4 KH2PO4緩沖液。
向樣品中加入100μl微粒體混懸液啟動反應，在選定的時間通過加入500μl甲醇終止反應。振搖樣品，在4℃下以8000RPM離心分離10分鐘。上清液用于HPLC分析。按照下述HPLC方法分析7-乙氧基香豆素、ST1899和ST2472。
HPLC條件HPLCJasco PU-2080加上，裝配有Jasco LG-2080-02三元梯度單位和Jasco DG-2080-533線除氣器(或同等物)的智能HPLC泵。JascoAS-950智能自動采樣器(或同等物)。
沖洗H2O/CH3OH 50/50；沖洗3次。
檢測器Jasco UV-1575智能UV/VIS檢測器(或同等物)；λ320nm；Mode NORMAL；響應STD。
柱Luna(Phenomenex) C18，150×4.60mm，3μm；含C18SecurityGuard流動相A0.5％(v/v)乙酸流動相B乙腈注射體積10μl流速0.8ml/min運行時間25分鐘梯度洗脫程序

7-乙氧基香豆素保留時間約18分鐘。
7-羥基香豆素保留時間約12分鐘。
結果與ST1899培養在大鼠微粒體中，ST1899廣泛代謝成ST2472(圖1)，代謝產物M1和M2也作為主要代謝產物存在。ST1899在小鼠微粒體中主要代謝成M1(圖1)；也生成ST2472，但程度有限。發現了兩種其它的代謝產物，可能是M3和M4在培養過程中它們的強度改變(圖1)，且在120分鐘時，M4占優勢。在猴微粒體中，ST1899代謝成了ST2472和代謝產物M3和M4(圖2)。只生成了少量代謝產物M1。
與ST2472培養在大鼠微粒體中，ST2472幾乎唯一地代謝成了M2(圖3)；因此，可以假定代謝產物M1和M2分別源于ST1899和ST2472代謝。
在小鼠微粒體中，ST2472幾乎唯一地代謝成了M2(圖3)。代謝產物M2也存在于與ST1899培養的樣品中，在那里它可能源于ST1899到ST2472且然后到M2的相繼代謝。
ST2472在代謝方面比ST1899更穩定所獲得的主要代謝產物是M3(圖4)。只形成了少量代謝產物M2。
ST1899的N-脫甲基化提供ST2472是大鼠中在數量上占優勢的代謝生物轉化。認為該代謝作用也使得大鼠中口服給藥ST1899生物利用度低，因為存在廣泛的肝臟首過效應。在該研究中調查的其它物種中發現該代謝反應也是廣泛的。在大鼠、小鼠和猴微粒體中溫育ST1899導致形成兩種或三種除ST2742以外的代謝產物，使得培養基中ST1899濃度迅速降低。
另一方面，在大鼠、小鼠和猴微粒體中溫育ST2472的特征是較低程度的代謝作用，產生單一代謝產物(雖然在嚙齒類和非嚙齒類物種中不同)。
總之，在測試的所有物種中，ST2742比ST1899更為代謝穩定，這預示著口服給藥后母體藥物更高的生物利用度和更長的全身半衰期。
權利要求
1.式(I)化合物 其中A是CH-CH2或C＝CH；R是氫、鹵素、C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基、C5-C6環烷基；R1是1-哌嗪基、1-高哌嗪基和1-哌啶基；R2是氫、C1-C4烷氧基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷基、CHO、CH＝NOH、CH2OH；條件是，當R是Cl時，A不是C＝CH，它們的單一旋光異構體、其混合物和它們藥學可接受的鹽。
2.根據權利要求1的化合物，選自下組(+)-9-(哌嗪-1-基)-9，10-二氫吡咯并[2，1-b][1，3]苯并硫氮雜；(-)-9-(哌嗪-1-基)-9，10-二氫吡咯并[2，1-b][1，3]苯并硫氮雜；(±)-7-氯-9-(哌嗪-1-基)-9，10-二氫吡咯并[2，1-b][1，3]-苯并硫氮雜；(S)-7-氯-9-(哌嗪-1-基)-9，10-二氫吡咯并[2，1-b][1，3]-苯并硫氮雜；(R)-7-氯-9-(哌嗪-1-基)-9，10-二氫吡咯并[2，1-b][1，3]-苯并硫氮雜；(+)-7-氟-9-(哌嗪-1-基)-9，10-二氫吡咯并[2，1-b][1，3]-苯并硫氮雜；9-(哌嗪-1-基)-吡咯并[2，1-b][1，3]苯并硫氮雜；7-氟-9-(哌嗪-1-基)-吡咯并[2，1-b][1，3]苯并硫氮雜；1-甲基-9-(哌嗪-1-基)-吡咯并[2，1-b][1，3]苯并硫氮雜。
3.制備權利要求1和2的化合物的方法，包括下列階段a)用希望的氯甲酸烷基酯處理相應的4-烷基-(高)哌嗪-1-基-吡咯并[2，1-b]苯并硫氮雜或4-烷基-哌啶-1-基-吡咯并-[2，1-b]苯并硫氮雜或4-烷基-(高)哌嗪-1-基-二氫吡咯并-[2，1-b]苯并硫氮雜或4-烷基-哌啶-1-基-二氫吡咯并[2，1-b]-苯并硫氮雜，得到(高)哌嗪或哌啶環4位氮原子的相應酰胺；b)隨后水解這樣得到的酰胺，釋放所述氮原子；c)可能的將階段b)中獲得的化合物成鹽。
4.制備權利要求1和2的化合物的方法，包括下列階段a)用對甲苯磺酸和哌嗪六水合物處理相應的9-酮基-吡咯并[2，1-b]苯并硫氮雜或9-酮基-吡咯并[2，1-b]苯并硫氮雜或9-酮基-二氫吡咯并[2，1-b]苯并硫氮雜或9-酮基-二氫吡咯并[2，1-b]-苯并硫氮雜，以得到相應的烯胺；b)接著在乙酸中用氫化物還原相應的烯胺，得到相應的飽和產物；c)可能的將階段b)中獲得的化合物成鹽。
5.包含至少一種權利要求1和2的化合物并混合藥學可接受的載體和/或賦形劑的藥物組合物。
6.權利要求1和2的化合物用于制備藥物的應用。
7.權利要求1和2的化合物在制備用于治療和預防急性和慢性精神障礙的藥物中的應用。
8.根據權利要求7的應用，其中，所述精神障礙選自精神分裂癥、偏執狀態、躁狂抑郁狀態、情感領域的障礙、社交退化、人格退化、幻覺、食欲障礙和相關病癥。
9.根據權利要求7的應用，尤其是根據權利要求1的化合物的應用，其中，碳原子9和碳原子10之間的鍵是單鍵，且R是氫、氟或溴，用于治療涉及情緒和認知領域的精神分裂癥陰性癥狀。
10.根據權利要求9的應用，其中，所述陰性癥狀為癡呆的形式。
11.根據權利要求7的應用，其中，在權利要求1和2的化合物中，碳原子9和碳原子10之間的鍵是不飽和的，用于制備用于治療多巴胺能神經傳遞過度活化的病況的藥物。
12.根據權利要求11的應用，其中，所述多巴胺能過度活化影響中腦邊緣通路。
13.根據權利要求7的應用，其中，在權利要求1和2的化合物中，碳原子9和碳原子10之間的鍵是不飽和的，用于制備用于治療中腦邊緣通路的多巴胺能神經傳遞過度活化和/或中間皮質多巴胺能機能衰退的病況的藥物。
14.根據權利要求13的應用，其中，所述病況為精神分裂癥的陽性癥狀和陰性癥狀的形式。
15.根據權利要求13的應用，用于制備用于治療和預防偏執狀態、躁狂抑郁狀態、情感領域的障礙、社交退化、人格退化、幻覺或認知功能障礙的藥物。
全文摘要
式(I)的吡咯并[2，1－b]苯并硫氮雜類衍生物，其中，A是CH－CH
文檔編號A61K31/407GK1950381SQ200580014656
公開日2007年4月18日 申請日期2005年4月28日 優先權日2004年5月7日
發明者P·米內蒂, M·A·迪切薩雷, O·吉拉迪, M·O·廷蒂, P·卡米納蒂 申請人:希格馬托制藥工業公司