專利名稱：：一種3-甲氧基黃酮類化合物,其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
：本發明述及多甲氧基黃酮類化合物，具體是關于一種3-甲氧基黃酮類化合物，其制備方法和應用。
背景技術：
：3-甲氧基黃酮類化合物屬于從柑桔屬植物中分離出來的多甲氧基黃酮化合物(PMFs)，由于其具有包括抗炎、抗癌和抗動脈粥樣硬化等廣譜的生物學活性，一直受到特別的關注(LiSetal.,JChromatogrBAnalytTechnolBiomedLifeSci,2007,846(1-2):291-297;LiSetal.,JAgricFoodChem，2006，54(12):4176-4185;KimDKetal.，ArchPharmRes，1999，22(6):642-645.)。因此，人們探索從甜桔皮中分離、鑒定PMFs特性，使桔皮桔汁加工的副產品得到新的應用的興趣在不斷增高。關于3-甲氧基黃酮類化合物在文獻上的報道還有例如從桔子汁的乙酸乙酯提取物中分離得3,3',4',5，6,7,8-七甲氧基黃酮(一種3-甲氧基黃酮)，以濃度依賴性方式顯著增強阿霉素抵抗的人髓細胞性白血病細胞攝取卩H]長春新堿。數據顯示，3,3'，4',5,6,7,8-七甲氧基黃酮抑制P-糖蛋白介導的卩H]長春新堿的輸出，導致化療藥物在細胞內積聚。這一化合物有望成為腫瘤化療中一個候選的多藥耐藥性逆轉劑(IkegawaTetal.，CancerLett,2000，160(1):21-28,)。從藥用植物中分離的多聚甲基化黃酮和C-糖基化衍生物，它們對大鼠肝微體中FeS(V半胱氨酸引起的脂類氧化的影響都己得到研究，其中梔子素D是非酶促脂類過氧化的抑制劑。從Varthemia(VarthemiaiphionoidesBoiss)地上部分分離、鑒別得到七種3-甲氧基黃酮，研究了它們的基團清除活性、抗氧化活性和豬胰腺a-淀粉酶抑制活性(Al-DabbasMMetal.,BiosciBiotechnolBiochem，2006,70(9):2178-2184)。在3-甲氧基黃酮中，5，7,4'-三羥基-3,6-二甲氧基黃酮，5，7,4'-三羥基-3,3'-二甲基黃酮和5，4'-二羥基-3,7，3'-三甲基黃酮顯示了顯著的基團清除活性。5,7,4'-三羥基-3,6-二甲氧基黃酮，5J，4'-三羥基-3，3'-二甲氧基黃酮和5，4'-二羥基-3，6，7-三甲氧基黃酮具有亞油酸體系中的抗氧化活性。5J，4'-二羥基-3,6-二甲氧基黃亂5,7,4'-三羥基-3，3'-二甲氧基黃酮和5，4'-二羥基-3,6,7-三甲氧基黃酮，5，7，4'-三羥基-3-甲氧基黃酮和5,4'-二羥基-3,7-二甲氧基黃酮則表現出很高的豬胰腺a-淀粉酶抑制活性。Sergeev的研究顯示(SergeevINetal.,LifeSci,2006,23;80(3):245陽253.)，來源于甜桔的5-羥基-3，6,7，8,3',4'-六甲氧基黃酮(5-011-版]^)和3'-羥基-5，6，7,4'-四甲氧基黃酮(3'-OH-TtMF)通過鈣離子依賴性細胞凋亡機制抑制人乳腺癌細胞(MCF-7)生長。這些結果強烈提示，PMFs的細胞(^2+調節活性是其細胞凋亡機制的基礎，PMFs的羥基化對于它們能誘導Ca^增加，進而活化鈣離子依賴的細胞凋亡蛋白酶至關重要。為了更廣泛地對PMFs進行研究，除了前述的從柑桔或其它植物中分離鑒定外，采用合成方法進行新的PMFs的合成，也是」個新的科研工作方向。
發明內容本發明提供一種新的3-甲氧基黃酮類化合物，其制備方法和應用。一種3-甲氧基黃酮類化合物的化學結構通式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>R=OMe或HR=OMe時，化合物A為5，7-二羥基-8-(3,3-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黃酮；R=H時，化合物B為5,7畫二羥基陽8-(3，3-二甲基烯丙基)-3,4'陽二甲氧基黃酮。化合物A5，7-二羥基-8-(3,3-二甲基烯丙基)畫3，3',4'-三甲氧基黃酮的制備方法，包括下列4個步驟，是參見文獻(DaskiewiczJBetal.，JMedChem.,2005Apr.21;48(8):2790-2804.)制備，對其中第(4)步中的反應加熱溫度和時間作了改進，制得本發明的新化合物A。(1)3，4-二甲氧基苯甲酸和甲磺酰氯在室溫下反應2小時，制得3，4-二甲氧基苯甲酸酐；(2)2'，4'，6'-三羥基-2-甲氧基苯乙酮和3，4，-二甲氧基苯甲酸酐在三乙胺中40。C下反應4小時，再在KOH/MeOH中40'C下反應2小時，得到5，7-二羥基-3，3'，4'-三甲氧基黃酮粗產物，在己烷和丙酮的混合溶劑中重結晶，得純產品5，7-二羥基-3,3',4'-三甲氧基黃酮；(3)5，7-二羥基-3，3'，4'-三甲氧基黃酮，異戊二烯溴化物和含無水&0)3的丙酮溶液在室溫下反應5小時，過濾，濾液蒸發得的固體物，在甲醇中重結晶得5-羥基-7-異戊烯氧基-3,3'，4'-三甲氧基黃酮；(4)5-羥基-7-異戊烯氧基-3,3',4'-三甲氧基黃酮和含無水醋酸鈉的乙酸酐溶液改進在40-80。C反應30-60小時(文獻報道是在室溫下反應8小時)，用氯仿萃取反應物，萃取液濃縮蒸發得固體物，在KOH/甲醇溶液中改進于50-7(TC下攪拌2-6小時(文獻報道是在室溫下攪拌0.5-1小時)，所得溶液經乙酸乙酯酸化萃取后，在己垸和丙酮的混合液中析出結晶，得純產物5，7-二羥基-8-(3,3-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黃酮(文獻報道的產物是5，7-二羥基-8-(1，l二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黃酮)。化合物B5，7-二羥基-8-(3，3-二甲基烯丙基)-3,4'-二甲氧基黃酮的制備方法，包括下列4個步驟，是參見文獻(DaskiewiczJBetal.，JMedChem"2005Apr.21;48(8):2790-2804.)制備，對其中第(4)步中的反應加熱溫度和時間作了改進，制得本發明的新化合物B。(1)對甲氧基苯甲酸和甲磺酰氯在室溫下反應2小時，制得對甲氧基苯甲酸酐；(2)2'，4'，6'-三羥基-2-甲氧基苯乙酮和對甲氧基苯甲酸酐在三乙胺中40'C下反應4小時，再在KOH/MeOH中4(TC下反應2小時，制得麥角新堿；(3)麥角新堿，異戊二烯溴化物和含無水K2C03的丙酮溶液在室溫下反應5小時，過濾，濾液蒸發得的固體物，在甲醇中重結晶得5-羥基-7-異戊烯氧基-3，4'-二甲氧基黃酮；(4)5-羥基-7-異戊酰氧基-3，4'-二甲氧基黃酮和含無水醋酸鈉的乙酸酐溶液改進在40-80'C反應30-60小時(文獻報道是在室溫下反應8小時)，用氯仿萃取反應物，萃取液濃縮蒸發得固體物，在KOH/甲醇溶液中改進于50-70"C下攪拌2-6小時(文獻報道是在室溫下攪拌0.5-1小時)，所得溶液經乙酸乙酯酸化萃取后，在己烷和丙酮的混合液中析出結晶，得純產物5,7-二羥基-8-(3,3-二甲基烯丙基)-3,4'-二甲氧基黃酮(文獻報道的產物是5，7-二羥基-8-(1,l-二甲基烯丙基)-3，4'-二甲氧基黃酮)。本發明化合物A[5，7-二羥基-8-(3，3-二甲基烯丙基)-3,3'，4'-三甲氧基黃酮]和化合物B[5,7-二羥基-8-(3，3-二甲基烯丙基)-3，4'-二甲氧基黃酮]是在已有文獻的基礎上將反應加熱溫度提高和反應時間延長而制得的二個新化合物。與已有文獻上制得的上述二個化合物相比較，本發明人作了更深入的研究和試驗，證實本發明化合物A和化合物B的藥理性能更強。通過試驗證明化合物A和化合物B都是有效的脂肪酸合成酶(FAS)抑制劑，能廣泛抑制多種類型的人腫瘤細胞系生長，并進一步誘導腫瘤細胞凋亡。在人腫瘤異種移植模型試驗中，化合物A或化合物B被證明是一種有效的抗腫瘤劑，能強烈抑制人肺癌、結腸癌、前列腺癌和乳腺癌等癌細胞在體內生長。化合物A和化合物B都具有被開發成為新的廣譜抗腫瘤藥物的巨大潛力。本發明3-甲氧基黃酮類化合物的藥理試驗1.體外試驗a)化合物A或化合物B對腫瘤細胞脂肪生成的抑制活性為了證實化合物A或化合物B抑制脂肪生成的能力，用不同濃度的化合物A或化合物B處理LnCAP前列腺癌細胞5小時，定量檢測細胞脂質中2-"C標記醋酸鹽的摻入量。如圖1和圖2所示，化合物A在0.1"M和化合物B在0.3UM濃度時抑制脂肪生成率超過50%。更高濃度則進一步減少脂肪生成，并呈現濃度依賴方式。處理24小時后則進一步降低。b)化合物A或化合物B通過抑制脂肪酸合成酶(FAS)活性以降低腫瘤細胞中脂肪合成為證實化合物A或化合物B是一個FAS抑制劑，用不同濃度的化合物A或化合物B處理LnCAP細胞蛋白提取物，定量檢測脂肪酸中2-14C標記丙二酸單酰-CoA摻入量。如圖3和圖4所示，化合物A在0.1PM和化合物B在0.3PM濃度時降低體外脂肪酸合成酶活性50%以下。WesternBlot分析顯示，化合物A或化合物B不影響LnCAP細胞中FAS蛋白水平，由此可知，抑制脂類合成是抑制FAS酶活性的直接結果，而不是FAS表達減少的結果。c)使用人腫瘤細胞株進行細胞毒性試驗33株人腫瘤細胞株在含化合物A或化合物B的普通培養基中培養。3天后應用MTT測定細胞生存力。結果如表l所示，大多數人腫瘤細胞對化合物A或化合物B敏感。并且發現，大多數人腫瘤細胞對化合物A或化合物B都較敏感，而化合物A比化合物B的作用更強。但是，正常人乳腺上皮細胞(MCF10A)和正常小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)對這兩個化合物不敏感。兩種化合物濃度為50uM時這些細胞仍能正常成長。體外細胞毒性試驗證明化合物A或化合物B能廣泛抑制人腫瘤細胞株生長，但不抑制正常細胞株生長。2.應用人腫瘤移植裸鼠模型進行化合物A或化合物B的抗腫瘤有效性試驗在化合物A或化合物B對腫瘤細胞株的體外抗增殖作用的基礎上，應用人前列腺癌細胞(LnCAP)、人乳腺癌細胞(ZR-75-l)、人肺癌細胞(NCI-H23)或人結腸癌細胞(HCT-116)的皮下移植裸鼠模型評價化合物A或化合物B的抗腫瘤效果。化合物A在T/C值為14.2%,0%，31%和20%時分別強烈抑制LnCAP，ZR-75-1,NCI-H23和HCT-116腫瘤細胞生長(見圖5，7,9,11)。化合物B在T/C值為17.5%，60%,50%和30%時分別強烈抑制LnCAP，ZR-75-1,NCI-H23和HCT-116腫瘤細胞生長(見圖6，8,10，12)。同時未發現化合物A或化合物B給藥的動物產生任何明顯的副作用，包括體重減輕等。這些數據明顯顯示，化合物A或化合物B是可被開發為新的抗癌藥物的很好的候選物。化合物A或化合物B給藥后對小鼠的急性毒性試驗受試小鼠處死后進行病理分析，結果顯示，以單次劑量1000mg/kg和多次劑量200mg/kg(Q2DX15)給予化合物A或化合物B均未觀察到毒性，所有受試小鼠生長良好，無一死亡。由以上藥理試驗的效果證明，本發明3-甲氧基黃酮類化合物化合物A[5，7-二羥基-8-(3,3-二甲基烯丙基)-3,3'，4'-三甲氧基黃酮]或化合物B[5,7-二羥基-8-(3，3-二甲基烯丙基)-3,4'-二甲氧基黃酮]是有效的脂肪酸合成酶抑制劑；多種類型腫瘤細胞株的細胞毒性試驗結果顯示有廣譜的抗腫瘤作用；應用人腫瘤移植裸鼠模型試驗，化合物A或化合物B顯示出對人前列腺癌細胞LnCAP，人乳腺癌細胞ZR-75-l，人肺癌細胞NCI-H23或人結腸癌細胞HCT-116有強烈的抑制腫瘤生長的作用，證明是一種有效的抗腫瘤劑。同時未顯示給藥的動物有任何明顯的副作用，包括體重減輕等。化合物A或化合物B對小鼠的急性毒性試驗結果也顯示未觀察到毒性，所有受試小鼠生長良好，無一死亡。本發明3-甲氧基黃酮類化合物可應用于抗腫瘤藥物的制備，化合物A或化合物B可作為抗腫瘤藥物的有效成分，該抗腫瘤藥物中也可含有有效量的化合物A或化合物B及可藥用載體和/或賦形劑。本發明3-甲氧基黃酮類化合物是一種具有很大開發前景的廣譜抗腫瘤藥物。口服有效劑量推薦為每日750mg/體表面積M2,連續三周，休息一周為一療程，每日一次于早餐后半小時服用。具體病例可由醫師根據病情調整。表1化合物A或化合物B—體外抑制人腫瘤細胞生長<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>圖1是化合物A抑制人前列腺癌細胞LnCAP脂肪生成-濃度曲線圖。圖2是化合物B抑制人前列腺癌細胞LnCAP脂肪生成-濃度曲線圖。圖3是化合物A抑制人前列腺癌細胞LnCAP脂肪酸合成酶活性-濃度曲線圖。圖4是化合物B抑制人前列腺癌細胞LnCAP脂肪酸合成酶活性-濃度曲線圖。圖5是化合物A治療小鼠皮下接種人前列腺癌細胞LnCAP腫瘤的腫瘤體積-治療天數曲線圖。圖6是化合物B治療小鼠皮下接種人前列腺癌細胞LnCAP腫瘤的腫瘤體積-治療天數曲線圖。圖7是化合物A治療小鼠皮下接種人乳腺癌細胞ZR-75-1腫瘤的腫瘤體積-治療天數曲線圖。圖8是化合物B治療小鼠皮下接種人乳腺癌細胞ZR-75-1腫瘤的腫瘤體積-治療天數曲線圖。圖9是化合物A治療小鼠皮下接種人肺癌細胞NCI-H23腫瘤的腫瘤體積-治療天數曲線圖。圖10是化合物B治療小鼠皮下接種人肺癌細胞NCI-H23腫瘤的腫瘤體積-治療天數曲線圖。圖11是化合物A治療小鼠皮下接種人結腸癌細胞HCT-116腫瘤的腫瘤體積-治療天數曲線圖。圖12是化合物B治療小鼠皮下接種人結腸癌細胞HCT-116腫瘤的腫瘤體積-治療天數曲線圖。具體實施例方式實施例1化合物A5，7-二羥基-8-(3,3-二甲基烯丙基)-3,3',4'-三甲氧基黃酮的制備(1)10g(55mmol)3，4-二甲氧基苯甲酸和2.2m1(28.4mmol)甲磺酰氯在室溫下反應2小時，制得8.47g3，4-二甲氧基苯甲酸酐，產率為89%。(2)1.6g(8.1腿ol)2',4'，6'-三羥基-2-甲氧基苯乙酮和8.4g(21.0mmol)3,4-二甲氧基苯甲酸酐在100mlEt3N中4(TC下反應4小時，再在100ml含5。/。KOH甲醇溶液中4(TC下反應2小時，得到2.2g5，7-二羥基-3，3',4'-三甲氧基黃酮粗產物，產率74%。在己垸Me2CO(50:50，V/V)混合液中重結晶，得0.85g純的5，7-二羥基-3，3',4'-三甲氧基黃酮。(3)0.34g(0.98纖ol)5，7-二羥基-3，3',4'-三甲氧基黃酮，0.25ml(1.97mrno1)異戊二烯溴化物和含0.4g無水K2C03(2.0mmo1)的50ml丙酮溶液在室溫下反應5小時。過濾，濾液蒸發后得的固體物，在甲醇中重結晶得0.3g5-羥基-7-異戊烯氧基-3，3'，4'-三甲氧基黃酮，產率為74%。(4)0.3g(0.73醒ol)5-羥基-7-異戊烯氧基-3，3',4'-三甲氧基黃酮和含0.12g(73mmo1)無水醋酸鈉的20ml(36.5mmol)乙酸酐溶液在6(TC下反應48小時。用100ml氯仿萃取反應物，萃取液濃縮蒸發得固體物，在70ml含5。/。KOH甲醇溶液中于6(TC下攪拌4小時。所得溶液經300ml乙酸乙醋酸化(pH=4)萃取后，在己垸丙酮(50:50)混合液中析出結晶，得0.183g純產物5，7-二羥基-8-G，3-二甲基烯丙基)-3,3'，4'-三甲氧基黃酮，產率為60%。該化合物A產物為黃色粉末，mp為216'C。化合物A的^NMR，"CNMR和質譜如下JHNMR(300MHz，CDC13):51.68(s，6H，H4''+H5''),3.82(s，3H，30Me),3.94(s，3H，3'OMe),3.97(s，3H，4'OMe),5.39(d，lH,J=10.7Hz,H3'')，5.46(d,lH，J=17.7Hz，H3''),6.29(s，lH，H6),6.46dd，lH,片17.7和10.7Hz，H2〃)，7.00(d,lH，J=8.7Hz,H5')，7.25(s,lH，70H),7.53(d，lH,J=2.1Hz,H2'V7.63(dd，lH,J=8.7和2.1Hz,H6'),13.03(s,1H，50H);13CNMR(75MHz，CDCl3):528.06(C4''+C5''),40.64(Cl''),55.97(3'OMe)，55.98(4'OMe)，60.29(3-OMe)，101.17(C6)，106.95(C10),109.70(C8),110.84(C5'),111.54(C2'),113.68(C3'')，122.53(C6')，122.74(Cl')，138.65(C3)，148.69(C3'),148.96(C2''),151.08(C4'),155.27(C9),156.54(C2),60.54(C5)，161.48(C7)，179.07(C4)。化學電離質譜(CI-MS)顯示m/e413[M+H]+，提示化合物A分子量應為412，分子式為C23H2407。實施例2化合物B5,7-二羥基-8-(3,3-二甲基烯丙基)-3,4'-二甲氧基黃酮的制備(1)10g(65.7讓ol)對甲氧基苯甲酸和2.6ml(33.6匪ol)甲磺酰氯在室溫下反應2小時得6.13g對甲氧基苯甲酸酐，產率89%。(2)0.6g(3腿ol)2'，4',6'-三羥基-2-甲氧基苯乙酮和2.6§(9醒01)對甲氧基苯甲酸酐在100mlEt3N中40"C下反應4小時，再在100ml含5%KOH甲醇溶液中4(TC下反應2小時。得到0.763g麥角新堿，產率81%。(3)0.30g(0.95mmol)麥角新堿，0.2ml(1.73mmol)異戊二烯基溴化物和0.4g無水K2C03(2.0mmol)的50ml丙酮溶液在室溫下反應5小時。過濾，濾液蒸發后得的固體物，在甲醇中重結晶，得0.33g5-羥基-7-異戊烯氧基-3,4，-二甲氧基黃酮，產率91%。(4)0,28g(0.73mmol)5-羥基-7-異戊烯氧基-3,4'-二甲氧基黃酮和含0.12g(73mmol)無水醋酸鈉的20m1(36.5mmol)醋酸酐溶液在60°C下反應48小時。用100ml氯仿萃取反應物，萃取液濃縮蒸發得固體物，在70ml含5%K0H甲醇溶液中于60。C下攪拌4小時。所得溶液經300ml乙酸乙酯酸化(pH=4)萃取后，在己烷丙酮(50:50，V/V)混合液中析出結晶，得0.21g純產物5,7-二羥基8-(3，3-二甲基烯丙萄-3,4'-二甲氧基黃酮，產率71%。該化合物B產物為黃色粉末，mp為212°C。化合物B的^NMR，13CNMR和質譜如下iHNMR(200MHz,DMSO-d6):51.55(s，6H，l''Me)，3.75(s，3H,30Me),3,84(s,3H，4'OMe),4.77(dd,lH,J=10.5和1.1Hz,H3'')，4.80(dd,lH，J=17.5和1.1Hz,H3''),6.27(dd，1H，J=17.5禾口0.5Hz，H2'')，6.30(s1H,H6),7.10(d,2H，J=9.0Hz,H3'+H5'),7.91(d，2H，J=9.0Hz,H2'+H6')，10.52(brs，lH,7OH),13.00s,lH,50H);13CNMR(50MHz，DMSO-d6):529.54(1''Me),40.34(CI'')，5.25(4'OMe),59.66(3陽OMe)，99.60(C6),105.02(C10),108.36C3''),10.75(C8)，113.80(C3'+C5')，121.95(Cl'),130.33(C2'+C6')，137.42(C3),149.66(C2'')，154.75(C2)，156.07(C9)，58.98(C5)，61.03(C4'),162.89(C7),178.13(C4)。化學電離質譜(CI-MS)顯示m/e383[M+H]+，提示化合物B分子量應為382，分子式為C22H2206。實施例3用[2-"C]醋酸鹽摻入法測定化合物A或化合物B對LnCAP細胞脂肪生成的抑制能力用不同濃度的化合物A或化合物B處理人前列腺癌細胞LnCAP5小時或24小時，在LnCAP細胞培養液中加入2-14C標記的醋酸鹽，孵育4小時，收集培養液和細胞，離心，0.8mlPBS重懸。應用BlighDyer法(Swi皿enJ.V.etal.，Endocrinology,1996，137,4468-4474.)抽提脂質，應用閃爍計數法定量摻入細胞脂質的[2-"C]醋酸鹽，所得結果以樣本蛋白含量校正。化合物A或化合物B抑制人前列腺癌細胞LnCAP脂肪生成-濃度曲線圖見圖1和圖2。實施例4化合物A或化合物B對人前列腺癌細胞LnCAP的脂肪酸合成酶活性抑制的測定按文獻(BrusselmansKetal.，JBiolChem,2005,280(7):5636-5645.)報道的方法測定LnCAP細胞提取物脂肪酸合成酶活性。收集LnCAP細胞，離心，低滲緩沖液(lmMEDTA，20mMTris-HCl,pH7.5)重懸；隨后應用BCA法測定樣品蛋白質含量。預先在含不同濃度的化合物A或化合物B(0.01-10pM)的2.5ml磷酸鉀鹽緩沖液(lOOmM,pH7.0)中37。C孵育相同量的蛋白質(50嗎)30分鐘。然后加入20|al反應混和液(2.5mMNADPH,1.25mM乙酰-CoA,1.25mM丙二酸單酰-CoA和0.02mM[2-14C]丙二酸單酰-CoA(60mCi/mmol;PerkinElmerLifeSciences),樣品在37。C中孵育15分鐘。加入3ml預冷的1MHCl/甲醇(6:4,V/V)終止反應，石油醚萃取脂肪酸，閃爍計數法分析摻入的[2-"C]丙二酸單酰-CoA。結果如圖3和圖4所示。實施例5細胞毒性試驗(參見CarmichaelJetal.,CancerResearch,1987,47:943-946.)應用人腫瘤細胞株進行化合物A或化合物B(溶解于DMSO)的細胞毒性試驗。人腫瘤細胞株購自ATCC(美國細胞菌種庫)和NCI(美國國立癌癥研究所)在10%FBS(胎牛血清)的DMEM培養液中，置于5%(:02的37。C孵箱中培養。細胞生長匯合后作毒性分析，胰蛋白酶消化細胞后用培養液洗滌，然后計數。96孔板每孔中加入3000-6000個細胞孵育16-24小時，再加入不同濃度的化合物A或化合物B。繼續培養72小時后，對藥物處理的細胞和對照細胞進行MTT(四氮唑藍)試驗。結果見表1。實施例6應用人腫瘤異種移植裸鼠模型進行化合物A或化合物B的抗腫瘤有效性試驗(1)建立人腫瘤異種移植裸鼠模型(參見HarrisonSDJr;etal.,JNatlCancerInst,1991,83(20):1509.)T細胞缺陷裸小鼠(nu/nu)，6周齡，購自CharlesRiver實驗室，按照大學動物飼養和使用委員會條例，在無菌環境中飼養、處理。48只鼠肋腹部分別皮下接種5乂106個懸浮于0.2mlHBSS/基質膠(50:50，V/V)中的乳腺癌細胞ZR-75-l、前列腺癌細胞LnCAP、人肺癌細胞NCI-H23和人結腸癌細胞HCT-116。當腫瘤平均直徑長至7-8mm，腫瘤體積約在100-200mm3大小時，24只鼠被分成治療組(16只/2組)，按50mg/kg和100mg/kg化合物A或化合物B(溶解在15%Captisol,Captisol是美國CyDex公司生產)給藥，對照組(8只)只接受賦形劑(15%Captisol)。為保證化合物A或化合物B治療組和對照組在處理開始時腫瘤大小的分布基本相同，小鼠被分成三類小體積腫瘤(<4mm)、中等體積腫瘤(4-8mm)和大體積腫瘤(〉8mm)。將每一類中相同數目的小鼠分別分在對照組和化合物A或化合物B治療組中。(2)裸小鼠腫瘤移植模型的給藥腫瘤移植裸鼠的化合物A或化合物B給藥方案口服給藥，化合物A或化合物B溶解在15%Captisol。每日給予200^含1.25mg或2.5mg化合物A或化合物B(15%Captisol)的藥液，每周5天，連續3周，或200^1賦形劑(15。/。captisol)3周(對照組)。兩組動物分開飼養，自由進食。(3)抗腫瘤效果的評價每3或4天測量腫瘤大小，采用下面的公式計算腫瘤體積.-V=(a2Xb)/2其中a代表寬(較小的直徑)，b代表長(較長的直徑)。每個瘤體的相對腫瘤體積(RTV)定義為給定時間點的腫瘤體積與治療開始時的體積的比率。每個治療組計算平均RTV和SE。應用下面的公式計算腫瘤生長抑制值確定抗腫瘤活性。TGI(%)=T/CX100其中T代表實驗結束點(4周)治療組腫瘤的平均RTV，C代表對照組的平均RTV。采用國立癌癥研究所制定的抗腫瘤活性最低水平(T/C《42。/。)標準。實驗結束后切除瘤體并在甲醛中固定，進行組織學觀察。試驗結果見圖5-圖12。實施例7化合物A或化合物B給藥后對小鼠的急性毒性試驗取兩組8周齡的BALB/c小鼠，每組10只(5只雄性和5只雌性)，分別以單次劑量1000mg/kg和多次劑量200mg/kg(Q2DX7)給予化合物A或化合物B(用15%Captisol配制)，然后分別觀察2周。每兩天稱體重。試驗結束后，將受試小鼠處死，進行病理分析。結果顯示，以單次劑量1000mg/kg和多次劑量200mg/kg(Q2DX15)給予化合物A或化合物B,均未觀察到毒性，所有受試小鼠生長良好，無一死亡。權利要求1.一種3-甲氧基黃酮類化合物，其特征在于是具有下述化學結構通式的化合物其中R＝OMe或H。2.5,7-二羥基-8-(3,3-二甲基烯丙基)-3,3'，4'-三甲氧基黃酮的制備方法，包括4個步驟(1)3，4-二甲氧基苯甲酸和甲磺酰氯反應制得3,4-二甲氧基苯甲酸酐；(2)2'，4'，6'-三羥基-2-甲氧基苯乙酮和3，4，-二甲氧基苯甲酸酐反應制得5，7-二羥基-3，3'，4'-三甲氧基黃酮；(3)5，7-二羥基-3,3'，4'-三甲氧基黃酮，異戊二烯溴化物和含碳酸鉀的丙酮溶液一起反應制得5-羥基-7-異戊烯氧基-3,3',4'-三甲氧基黃酮；(4)5-羥基-7-異戊烯氧基-3,3',4'-三甲氧基黃酮和含無水醋酸鈉的乙酸酐溶液在室溫反應8小時，用氯仿萃取反應物，萃取液濃縮蒸發得固體物，在KOH/甲醇溶液中于室溫下攪拌0.5-1小時，所得溶液經乙酸乙酯酸化萃取后，在己垸和丙酮的混合液中析出結晶，其特征在于在第(4)步中5-羥基-7-異戊烯氧基-3，3',4'-三甲氧基黃酮和含無水醋酸鈉的乙酸酐溶液在40-8(TC反應30-60小時，氯仿萃取液濃縮蒸發得的固體物在KOH/甲醇溶液中于50-7(TC下攪拌2-6小時，最后在己烷和丙酮的混合液中析出結晶，得產物5，7-二羥基-8-(3，3-二甲基烯丙基)畫3，3',4'-三甲氧基黃酮。3.5,7-二羥基-8-G,3-二甲基烯丙基)-3,4'-二甲氧基黃酮的制備方法，包括4個步驟(1)對甲氧基苯甲酸和甲磺酰氯反應制得對甲氧基苯甲酸酐；(2)2',4'，6'-三羥基-2-甲氧基苯乙酮和對甲氧基苯甲酸酐反應制得麥角新堿；(3)麥角新堿，異戊二烯溴化物和含碳酸鉀的丙酮溶液一起反應制得5-羥基-7-異戊烯氧基-3,4'-二甲氧基黃酮，(4)5-羥基-7-異戊酰氧基-3，4'-二甲氧基黃酮和含無水醋酸鈉的乙酸酐溶液在室溫反應8小時，用氯仿萃取反應物，萃取液濃縮蒸發得固體物，在KOH/甲醇溶液中于室溫下攪拌0.5-1小時，所得溶液經乙酸乙酯酸化萃取后，在己烷和丙酮的混合液中析出結晶，其特征在于在第(4)步中5-羥基-7-異戊酰氧基-3,4'-二甲氧基黃酮和含無水醋酸鈉的乙酸酐溶液在40-80'C反應30-60小時，氯仿萃取液濃縮蒸發得的固體物在KOH/甲醇溶液中于50-7(TC下攪拌2-6小時，最后在己烷和丙酮的混合液中析出結晶，得產物5，7-二羥基-8-(3,3-二甲基烯丙基)-3，4'-二甲氧基黃酮。4.權利要求1所述3-甲氧基黃酮類化合物的應用，其特征在于所述化合物在制備抗腫瘤藥物中的應用。全文摘要一種3-甲氧基黃酮類化合物，包括5，7-二羥基-8-(3，3-二甲基烯丙基)-3，3′，4′-三甲氧基黃酮和5，7-二羥基-8-(3，3-二甲基烯丙基)-3，4′-二甲氧基黃酮。藥理試驗效果證明該3-甲氧基黃酮類化合物是有效的脂肪酸合成酶抑制劑；對多種類型腫瘤細胞株的細胞毒性試驗顯示有廣譜的抗腫瘤作用；應用人腫瘤移植裸鼠模型試驗對人前列腺癌細胞LnCAP，人乳腺癌細胞ZR-75-1，人肺癌細胞NCI-H23或人結腸癌細胞HCT-116有強烈的抑制腫瘤生長作用，且該3-甲氧基黃酮類化合物對小鼠的急性毒性試驗顯示無毒性，因此可用于作為抗腫瘤藥物，是一種具有很大開發前景的廣譜抗腫瘤新藥。文檔編號A61K31/352GK101104611SQ20071004028公開日2008年1月16日申請日期2007年4月29日優先權日2007年4月29日發明者南張,殷正豐,邱日輝申請人:殷正豐;張南;邱日輝