專利名稱：大鼠急性或持續(xù)性高尿酸血癥模型的復(fù)制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及動(dòng)物模型的復(fù)制方法，具體地說是涉及大鼠急性或持續(xù)性高尿酸血癥模型的復(fù)制方法。
背景技術(shù)：
痛風(fēng)是嘌呤代謝紊亂或(和)尿酸排泄減少所引起的一組異質(zhì)性疾病。臨床上以高尿酸血癥為主要特征，高尿酸血癥是痛風(fēng)的生化基礎(chǔ)，而痛風(fēng)必然伴有高尿酸血癥。從本質(zhì)上說，高尿酸血癥與痛風(fēng)之間并無嚴(yán)格界限。近年來研究痛風(fēng)的發(fā)病機(jī)制及其藥物治療成為醫(yī)學(xué)界的熱點(diǎn)之一，目前國內(nèi)外尚缺乏有關(guān)痛風(fēng)的成熟動(dòng)物模型，而構(gòu)建高尿酸血癥動(dòng)物疾病模型則是痛風(fēng)研究的前提。現(xiàn)存模型中還有很多不完善的地方，從而給痛風(fēng)的研究帶來了極大的不便。下面對一些有代表性的大鼠高尿酸血癥動(dòng)物模型做簡要介紹。
1.Wistar大鼠，雄性，體重(200±10)g，腺嘌呤100mg·kg-1+乙胺丁醇250mg·kg-1灌胃給藥，每日1次，連續(xù)7～21天，大鼠血清尿酸明顯升高。(熊湘明，曲秋竹.大鼠高尿酸血癥模型建立.天津中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2001；20(4)28～29)2.SD大鼠或Wistar大鼠，雌雄各半，110～150g，以腺嘌呤300mg·kg-1灌胃，連續(xù)21天，大鼠血尿酸明顯升高并出現(xiàn)慢性腎功能衰竭。(周小舟，張盛光，楊曉等.腺嘌呤所致大鼠慢性腎功能衰竭的機(jī)理研究.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，1997；17(1)54～57)3.SD大鼠，體重(200±20)g，將酵母干粉、腺嘌呤均勻拌入粉碎的大鼠顆粒飼料中，含量分別為10％和01％，重新壓粒成型。給予大鼠高嘌呤飼料，酵母、腺嘌呤的進(jìn)食量分別為10g·kg-1、100mg·kg-1。第七天大鼠血清尿酸略有升高，第十二天、第十九天大鼠血清尿酸、肌酐、尿素氮含量明顯升高，停用高嘌呤飼料后仍繼續(xù)上升，第二十四天時(shí)才開始回落，第五十二天時(shí)，與對照組相比仍有顯著性差異。(奚九一，趙兆琳，魯培基等.高尿酸血癥腎病的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型研究.上海中醫(yī)藥雜志，2001；(10)10～12)
4.SD大鼠，150～180g，將酵母、腺嘌呤、沙丁魚與少量市售粉飼料攪拌均勻后喂大鼠，造模第21天后大鼠血尿酸、肌酐、尿素氮都升高。(何力群，聶永紅，鄒士林.新型尿酸性腎病動(dòng)物模型的建立.上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)，2001；21(1)22～25)5.SD大鼠或Wistar大鼠，雄性，體重250±10g，腺嘌呤2、4g·kg-1灌胃給藥，第三天大鼠血尿酸水平開始升高，第七天明顯升高，第十天降低，同時(shí)出現(xiàn)腎功能損害。(張超，曹克光，楊崇青等.高尿酸血癥及尿酸性腎病動(dòng)物模型的建立及應(yīng)用.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)與管理，1999；16(4)18～21)6.人鼠飼以2％的oxonicacid，并給予低鹽飲食，持續(xù)7周，可出現(xiàn)輕度高尿酸血癥，同時(shí)血壓升高、入球小動(dòng)脈增厚。(Mazzali M，Kanellis J，Han，etal.Hyperuricemia induces a primary renal arteriolopathy in rats by a bloodpressure independent mechanism.Am J Physiol Renal Physiol，2002；282(6)F991～997)7.給Wistar大鼠飼喂氧嗪酸0.4g·d-1和尿酸0.6g·d-1，3～4周后，大鼠血尿酸持續(xù)性升高。(Bluestone R，Waisman J，Klinenberg JR.Chronic experimentalhyperuricemic nephropathy.Lab Invest，1975；33(3)273～279)尿酸不能被人體利用或在體內(nèi)分解，在正常人體液pH7.4的環(huán)境中呈尿酸鈉形式，溶解度417μmol/L(7mg/dl)(尹濰.高尿酸血癥和痛風(fēng)[J].醫(yī)師進(jìn)修雜志，1998，21(11)573)，故尿酸濃度必須高于該值才能被沉淀于組織中。現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道大鼠高尿酸血癥的復(fù)制方法多采用給予大劑量嘌呤物質(zhì)、抑制尿酸排泄的藥.物或尿酸酶抑制劑，即通過增加體內(nèi)尿酸的來路，抑制尿酸排出體外，或抑制尿酸在體內(nèi)的分解，使血尿酸含量增加，造成大鼠的高尿酸血癥模型。此種模型接近于人類高尿酸血癥及痛風(fēng)的產(chǎn)生機(jī)理，為研究痛風(fēng)和高尿酸血癥及評估治療用藥提供可行的研究方法。但以上方法存在兩點(diǎn)不足一、均需較長時(shí)間才能完成模型的復(fù)制；二、復(fù)制出的高尿酸血癥模型尿酸水平多低于尿酸產(chǎn)生結(jié)晶的飽和濃度。以上的不足將為研究治療高尿酸血癥和痛風(fēng)類藥物帶來較多的困難復(fù)制周期長；運(yùn)用現(xiàn)有模型僅能觀察藥物對輕度高尿酸的治療作用；高尿酸水平低于尿酸產(chǎn)生沉積的飽和濃度，這將不利于痛風(fēng)模型的復(fù)制等等。

發(fā)明內(nèi)容
1.發(fā)明目的本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足之處，提供一種更接近于人類嘌呤代謝障礙所形成的大鼠急性或持續(xù)性高尿酸血癥模型，且血尿酸水平高于飽和濃度的方法。
2.技術(shù)方案2.1動(dòng)物大鼠。種屬SD、Wistar。性別雌、雄。體重不限。
2.2造模藥物名稱嘌呤類次黃嘌呤、黃嘌呤、尿酸；尿酸酶抑制劑Oxonic acid，potassiumsalt(OA)、allantoxanamide。
給藥途徑灌胃、皮下注射、腹腔注射。
給藥劑量嘌呤類100～2000mg·kg-1尿酸酶抑制劑5～1000mg·kg-1溶劑生理鹽水、液體石蠟、CMC-Na、油、可溶性淀粉、甘油、增稠劑。
配制要求混懸劑的配制一定要濃度均勻，使用時(shí)要搖勻。
造模間隔時(shí)間5～24小時(shí)。
2.3大鼠急性高尿酸血癥模型的復(fù)制方法，其步驟如下(1)選取種屬為SD、Wistar的雌、雄健康大鼠，體重150～450g，禁食、不禁食均可，于室溫下，對大鼠用灌胃、皮下注射或腹腔注射的方式同時(shí)給予嘌呤類100～2000mg·kg-1和尿酸酶抑制劑5～1000mg·kg-1；(2)或者經(jīng)過5～12小時(shí)，再用上述同樣的方式，再次給予嘌呤類100～2000mg·kg-1和/或尿酸酶抑制劑5～1000mg·kg-1，造模后可自由進(jìn)食、飲水。
上述的嘌呤類為次黃嘌呤、黃嘌呤、尿酸；上述的尿酸酶抑制劑為0A、allantoxanamide。
上述尿酸酶抑制劑的最佳用量為100mg·kg-1/天/1次或200mg·kg-1/天/2次，配合嘌呤類500mg·kg-1/天/1次或1000mg·kg-1/天/2次。
2.4大鼠持續(xù)性高尿酸血癥模型的復(fù)制方法，其步驟如下(1)選取種屬為SD、Wistar的雌、雄健康大鼠，體重150-450g，禁食、不禁食均可，于室溫下，對大鼠用灌胃、皮下注射或腹腔注射同時(shí)給予嘌呤類100～2000mg·kg-1和尿酸酶抑制劑，5～1000mg·kg-1；(2)經(jīng)過5～24小時(shí)，用上述同樣的方式，再次同時(shí)給予嘌呤類100～2000mg·kg-1和尿酸酶抑制劑5～1000mg·kg-1，造模后可自由進(jìn)食、飲水；(3)每日連續(xù)按(1)、(2)步驟的方法造模，連續(xù)給藥一周至兩周。
上述的嘌呤類為次黃嘌呤、黃嘌呤、尿酸；上述的尿酸酶抑制劑為OA、allantoxanamide。
上述尿酸酶抑制劑的最佳用量為100mg·kg-1/天/1次或200mg·kg-1/天2次配合嘌呤類的最佳用量500mg·kg-1/天/1次或1000mg·kg-1/天2次。
3.有益效果在本實(shí)驗(yàn)中，我們使用尿酸酶抑制劑配合嘌呤類，可獲得穩(wěn)定的急性或持續(xù)性大鼠高尿酸血癥模型。動(dòng)物的血尿酸水平可顯著的提高，12h后高尿酸水平仍然高于尿酸產(chǎn)生結(jié)晶的飽和濃度417μmol·L-1，急性高尿酸血癥模型復(fù)制周期短，且與高尿酸血癥的發(fā)生機(jī)制相吻合。如果每日造模兩次，尿酸水平明顯高于飽和濃度，且尿酸水平可不斷蓄積升高，形成持續(xù)性大鼠高尿酸血癥模型，其中還可見到一定數(shù)量的痛風(fēng)模型大鼠。這與高尿酸血癥和痛風(fēng)的發(fā)生機(jī)制吻合，增加動(dòng)物體內(nèi)嘌呤類以增加生成尿酸的原料，同時(shí)使用尿酸酶抑制劑抑制對尿酸的分解，以此減少尿酸的去路，兩者協(xié)同，從而明顯提高血尿酸水平，且高尿酸水平維持時(shí)間明顯延長，而當(dāng)動(dòng)物體內(nèi)尿酸持續(xù)處于超飽和水平，就會(huì)沉積到動(dòng)物關(guān)節(jié)腔形成痛風(fēng)模型。可見，嘌呤類和尿酸酶抑制劑配合使用，是復(fù)制出持續(xù)性高尿酸血癥模型的理想組合。為進(jìn)一步提高痛風(fēng)模型發(fā)生的百分率提供了有價(jià)值的參考。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1.大鼠急性高尿酸血癥模型的復(fù)制方法，其方法如下選取雄性健康的Wistar大鼠，體重250g±10g，在室溫下，用灌胃方式灌入黃嘌呤500mg·kg-1，用腹腔注射方式注射OA 200mg·kg-1。
實(shí)施例2.大鼠急性高尿酸血癥模型的復(fù)制方法，其方法如下1.選取雄性健康的Wistar大鼠，體重250g±10g，在室溫下，用灌胃方式灌入黃嘌呤500mg·kg-1，用腹腔注射方式注射OA 100mg·kg-1；2.5h后，再次腹腔注射OA 100mg·kg-1。
實(shí)施例3.大鼠急性高尿酸血癥模型的復(fù)制方法，其方法步驟如下1.選取雄性健康的Wistar大鼠，體重250g±10g，在室溫下，用灌胃方式灌入黃嘌呤500mg·kg-1，用腹腔注射方式注射OA 200mg·kg-1；2.5h后，再次灌胃給予黃嘌呤500mg·kg-1。
實(shí)施例4.大鼠急性高尿酸血癥模型的復(fù)制方法，其方法步驟如下1.選取雄性健康的Wistar大鼠，體重250g±10g，在室溫下，用灌胃方式灌入黃嘌呤500mg·kg-1，用腹腔注射方式注射OA 100mg·kg-1；2.5h后，用上述同樣的方式，再次同時(shí)給予相同用量的黃嘌呤和OA。
實(shí)施例5.大鼠急性高尿酸血癥模型的復(fù)制方法，其方法如下選取雌性健康的SD大鼠，體重250g±10g，在室溫下，用灌胃方式，灌給大鼠次黃嘌呤500mg·kg-1，用腹腔注射的方式，注射OA 50mg·kg-1。
實(shí)施例6.大鼠急性高尿酸血癥模型的復(fù)制方法，其方法如下選取雌性健康的SD大鼠，體重250g±10g，在室溫下，用灌胃方式，灌給大鼠次黃嘌呤500mg·kg-1，用腹腔注射的方式，注射OA 10mg·kg-1。
實(shí)施例7.大鼠急性高尿酸血癥模型的復(fù)制方法，其方法如下選取雌性健康的SD大鼠，體重250g±10g，在室溫下，用灌胃方式，灌給大鼠次黃嘌呤250mg·kg-1，用腹腔注射的方式，注射OA 50mg·kg-1。
實(shí)施例8.大鼠急性高尿酸血癥模型的復(fù)制方法，其方法如下選取雌性健康的SD大鼠，體重250g±10g，在室溫下，用灌胃方式，灌給大鼠次黃嘌呤250mg·kg-1，用腹腔注射的方式，注射OA 10mg·kg-1。
實(shí)施例9.大鼠急性高尿酸血癥模型的復(fù)制方法，其方法如下選取雄性健康的SD大鼠，體重250g±10g，在室溫下，用灌胃方式灌入次黃嘌呤500mg·kg-1，用腹腔注射方式，注射OA 50mg·kg-1。
實(shí)施例10.大鼠急性高尿酸血癥模型的復(fù)制方法，其方法如下選取雄性健康的SD大鼠，體重250g±10g，在室溫下，用灌胃方式灌入次黃嘌呤500mg·kg-1，用皮下注射方式，注射OA 50mg·kg-1。
實(shí)施例11.大鼠急性高尿酸血癥模型的復(fù)制方法，其方法步驟如下1.選取雄性健康的SD大鼠，體重300g±20g，在室溫下，用灌胃方式，灌給大鼠次黃嘌呤500mg·kg-1和OA 100mg·kg-1；2.經(jīng)過12h，重復(fù)以上步驟。
實(shí)施例12.大鼠持續(xù)性高尿酸血癥模型的復(fù)制方法，其方法步驟如下1.選取雄性健康的SD大鼠，體重300g±20g，在室溫下，用灌胃方式，灌給大鼠次黃嘌呤500mg·kg-1和OA 100mg·kg-1；2.經(jīng)過12h，重復(fù)以上步驟。
3.每日按照步驟1、2連續(xù)造模，連續(xù)給藥一周。
實(shí)施例13.大鼠急性或持續(xù)性高尿酸血癥模型的復(fù)制1.實(shí)驗(yàn)材料1.1動(dòng)物SD、Wistar大鼠，雄性，180～320g。由南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)許可證號(hào)SYXK(蘇)2002-0002。
1.2藥物Oxonic acid，potassium salt(OA)，sigma-Aldrich公司，Sigma公司。用生理鹽水或油配制，配制時(shí)先加少許溶劑，放入研缽研勻后，在將剩余溶劑加入，混勻。黃嘌呤(Xanthine，X)sigma-Aldrich公司，Sigma公司。次黃嘌呤(Hypoxanthine，HX)，天津市北洋化工廠。由可溶性淀粉配制，先配制3％可溶性淀粉，煮沸，冷卻后先加少量至盛有嘌呤的研缽中，研勻，再將剩余可溶性淀粉加入，混勻。尿酸試劑盒，為Sysmex公司產(chǎn)品。
1.3儀器日立7020全自動(dòng)生化分析儀。
2.方法與結(jié)果2.1X與OA合用對大鼠血尿酸水平的影響將大鼠隨機(jī)分為5組，正常對照組(C)、X1+OA1組、X1+OA2組、X2+OA1組、X2+OA2組，每組6只，單籠飼養(yǎng)。X1+OA1組腹腔注射OA200mg·kg-1，1h后灌胃給予X500mg·kg-1；X1+OA2組腹腔注射OA100mg·kg-1，1h后灌胃給予X500mg·kg-1，5h后再次腹腔注射OA100mg·kg-1；X2+OA1組腹腔注射OA200mg·kg-1，1h后灌胃給予X500mg·kg-1，5h后再次灌胃給予X500mg·kg-1；X2+OA2組腹腔注射OA100mg·kg-1，1h后灌胃給予X500mg·kg-1，5h后再次腹腔注射OA100mg·kg-1，灌胃給予X500mg·kg-1。C組腹腔注射等體積生理鹽水和灌胃給予等體積蒸餾水。分別于第一次灌X后2h、6h給每只大鼠取血，離心取血清，測血尿酸值。結(jié)果見表1。
表1X與OA合用對大鼠血尿酸的影響(X±S)(n＝6)

與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
結(jié)果表明，在第一次給予X2h后，各組血尿酸水平均高于正常對照組(P＜0.05)；在第一次灌X6h后，X1+OA2組血尿酸水平與正常對照組有一定差異(P＜0.05)，X2+OA2組血尿酸水平明顯升高，與正常對照組有顯著性差異(P＜0.01)。上述結(jié)果表明一次給予X和OA雖可升高大鼠血清尿酸水平，但維持時(shí)間較短，給藥六小時(shí)后血清尿酸水平已接近正常。一日內(nèi)OA和X的總量采取一次或分兩次給予，或減半給予，大鼠血清尿酸水平出現(xiàn)了不同的改變。根據(jù)表1可見OA無論100mg·kg-1還是200mg·kg-1對給予相同劑量的X所致的大鼠血清尿酸水平的升高均無明顯差異，OA一日總量200mg·kg-1一次給予雖可升高大鼠血清尿酸水平，但僅維持不到六小時(shí)。而將OA一日總量200mg·kg-1分兩次給予，一次給予X則可使大鼠血清尿酸水平持續(xù)升高，并維持在六小時(shí)以上，說明OA的劑量在100mg·kg-1時(shí)即可發(fā)揮對尿酸酶的抑制作用，如在此基礎(chǔ)上同時(shí)增加X的劑量，則不僅可使大鼠血清尿酸水平持續(xù)升高，還可使大鼠血清尿酸水平升高達(dá)800umol·L-1以上。
2.2不同劑量HX與OA合用對大鼠血尿酸水平一日變化的影響 將大鼠隨機(jī)分為A、B、C、D、E、F六組。B組灌胃給予HX 500mg·kg-1；C組腹腔注射OA50mg·kg-1+灌胃給予HX 500mg·kg-1；D組腹腔注射OA 10mg·kg-1+灌胃給予HX 500mg·kg-1；E組腹腔注射OA 50mg·kg-1+灌胃給予HX 250ma·kg-1；F組腹腔注射OA10mg·kg-1+灌胃給予HX 250mg·kg-1；A組腹腔注射等體積生理鹽水+灌胃給予等體積蒸餾水；分別于1h、3h、5h、7h、9h、24h時(shí)，給各組取血，離心取血清，測血尿酸濃度。結(jié)果見表2。
表2 HX與OA合用對大鼠血尿酸的影響(X±S)(n＝5)

與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
結(jié)果表明，OA 50mg·kg-1和HX 500mg·kg-1的劑量在給藥后1h，血尿酸值即有顯著的升高，在1h、3h、5h、7h處與空白對照組即有顯著性差異(P＜0.01)，在9h處與空白對照組也有差異(P＜0.05)。OA 100mg·kg-1和HX 500mg·kg-1的劑量在給藥后1h，血尿酸值與空白對照組有顯著性差異(P＜0.05)，在3h處與空白對照組也有差異(P＜0.05)。OA 50mg·kg-1和HX 250mg·kg-1的劑量在1h、3h處與空白對照組即有顯著性差異(P＜0.01)，在24h處與空白對照組也有差異(P＜0.05)。OA 10mg·kg-1和HX 250mg·kg-1的劑量在1h、3h處與空白對照組即有顯著性差異(P＜0.01)。
2.3不同給藥途徑對大鼠血尿酸的影響 將大鼠隨機(jī)分為對照組、腹腔注射組和皮下注射組。給腹腔組大鼠腹腔注射OA(生理鹽水配制)50mg·kg-1+灌胃給予HX(蒸餾水配制)500mg·kg-1，給皮下組大鼠皮下注射OA 50mg·kg-1+灌胃給予HX 500mg·kg-1。于造模后1h、3h、5h、7h、9h、11h、24h給大鼠取血，離心，取血清，測血尿酸值。結(jié)果見表3。
表3不同給藥途徑對大鼠血尿酸的影響(X±S)(n＝5)

結(jié)果表明，皮下注射組大鼠在造模后1h、3h、5h、7h與對照組均有差異(P＜0.01，P＜0.05)，從兩組造模后血尿酸水平來看，皮下組大鼠血尿酸9h內(nèi)均高于腹腔組，7h時(shí)血尿酸下降到尿酸產(chǎn)生沉積的飽和濃度處，7h后血尿酸值逐漸恢復(fù)至正常。通過組間比較，我們選擇皮下注射OA和灌胃給予HX作為造模的給藥途徑。
在以上的實(shí)驗(yàn)過程中，我們發(fā)現(xiàn)用生理鹽水所配制的OA和用蒸餾水配制的HX均不溶解，很快會(huì)分層，對藥物溶液的均勻度有很大的影響，因此復(fù)制出的動(dòng)物模型尿酸水平的離散度較大，故我們考慮以下實(shí)驗(yàn)將藥物做成混懸劑，提高藥物溶解的均勻度。
2.4不同劑量、不同體積OA對大鼠血尿酸水平的影響 將大鼠隨機(jī)分為對照組、大濃度(C)小體積(V)組、中C大V組、中C小V組、小C大V組。OA(溶劑為食用油)皮下注射給藥，HX(溶劑為可溶性淀粉)灌胃給藥，給藥劑量和體積見表4。12h后，重復(fù)以上步驟。于第一次造模后5h、12h、24h給大鼠取血，離心，取血清，測血尿酸值。結(jié)果見表4。
表4不同劑量、不同體積OA對大鼠血尿酸水平的影響(X±S)(n＝6)

與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
結(jié)果表明，各模型組在第一次造模后5h均高于對照組(P＜0.01，P＜0.05)。在第一次造模后12h，僅大C小V組血尿酸值高于尿酸產(chǎn)生結(jié)晶的飽和濃度，其余各組血尿酸值已低于尿酸飽和濃度。第一次造模后24h(即第二次造模后12h)，除小C大V組，其余三個(gè)組的動(dòng)物血尿酸均超出尿酸飽和濃度，但是僅中C大V組與對照組有一定差異(P＜0.05)，大C小V組24h尿酸值高于其余各模型組，但未表現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這主要與數(shù)據(jù)離散度大有關(guān)，影響離散度的因素主要包括造模藥物的均勻度及動(dòng)物的個(gè)體差異等，提示在今后模型復(fù)制時(shí)要克服以上影響因素，可通過擴(kuò)大實(shí)驗(yàn)樣本數(shù)，嚴(yán)格控制藥物混懸劑的均勻度等。另從對動(dòng)物的尸體解剖發(fā)現(xiàn)，皮下注射小體積組大鼠背部皮膚損傷小，基本無殘留溶劑。而皮下注射大體積組大鼠背部殘留大量油無法被吸收，故不利于長期實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，最終確定采用OA的用量為200mg·kg-1/天/2次，80mg/ml，1.25ml/kg，配合HX 1000mg·kg-1/天/2次(OA采用油配制，HX采用可溶性淀粉配制)復(fù)制大鼠急性高尿酸血癥模型。
2.5大鼠持續(xù)性高尿酸血癥模型的復(fù)制 將大鼠隨機(jī)分為對照組、稀油(溶劑為食用油)模型組、稠油(溶劑為食用油，10％甘油，泊洛沙姆1％)模型組。模型組皮下注射OA 1.25ml/kg(80mg/ml)，灌胃給予HX 10ml/kg(50mg/ml)，對照組給予等體積食用油和可溶性淀粉；12h后，重復(fù)以上步驟。連續(xù)三天。于每次造模后12h給大鼠取血，離心，取血清，測血尿酸值。結(jié)果見表5。三天后將大鼠處死，觀察背部皮膚損傷程度。
表5大鼠持續(xù)性高尿酸血癥模型的復(fù)制結(jié)果(X±S)(n＝6)

與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
結(jié)果表明，稀油組造模后可立即達(dá)到尿酸鈉沉積的飽和濃度，造模三天，血尿酸水平居高不下，且第一天血尿酸值與對照組比較，有一定差異(P＜0.05)。稠油組第一天第一次造模后12h，尚不能立即達(dá)到飽和濃度，12h后可達(dá)到飽和濃度，36h處血尿酸值與對照組有一定差異(P＜0.05)，但稠油組使動(dòng)物達(dá)到的高尿酸水平在各點(diǎn)均低于稀油組，再從兩組動(dòng)物的狀態(tài)，處死后，解剖背部皮膚觀察造模對動(dòng)物的損傷來看，稠油組對動(dòng)物背部損傷較大，基質(zhì)多數(shù)殘留在背部不被吸收，產(chǎn)生炎癥，動(dòng)物背部粘連，化膿壞死。故我們認(rèn)為選用食用油作為OA的溶劑，可溶性淀粉作為HX的溶劑，采用OA的用量為200mg·kg-1/天/2次，80mg/ml，1.25ml/kg，配合HX 1000mg·kg-1/天/2次，連續(xù)造模，可復(fù)制出穩(wěn)定的大鼠持續(xù)性高尿酸血癥模型。
綜上所述，選擇適宜的造模藥物，溶劑，制定出恰當(dāng)?shù)慕o藥劑量、給藥時(shí)間、給藥方式，復(fù)制出更接近于人類嘌呤代謝障礙所形成的大鼠持續(xù)性高尿酸血癥模型，將會(huì)使我們深入觀察受試藥物對模型動(dòng)物腎臟尿酸排出的影響、對嘌呤代謝的作用環(huán)節(jié)以及對尿酸鹽沉積于關(guān)節(jié)腔過程的影響成為可能，從而為抗痛風(fēng)藥物的篩選和作用機(jī)理的研究提供必要和可靠的動(dòng)物模型。
權(quán)利要求
1.一種大鼠急性或持續(xù)性高尿酸血癥模型的復(fù)制方法，其方法步驟如下(1)選取種屬為SD、Wistar的雌、雄健康大鼠，體重150-450g，禁食或不禁食，于室溫下，用罐胃，皮下注射或腹腔注射方式，對大鼠同時(shí)給予嘌呤和尿酸酶抑制劑；(2)或者經(jīng)過5-12小時(shí)再對大鼠用上述同樣的方式和同樣的藥物用量造模，造模后可自由進(jìn)食、飲水。
2.一種大鼠持續(xù)性高尿酸血癥模型的復(fù)制方法，其方法步驟如下(1)選取種屬為SD、Wistar的雌、雄健康大鼠，體重150-450g，禁食或不禁食，于室溫下，用罐胃，皮下注射或腹腔注射方式，對大鼠同時(shí)給予嘌呤和尿酸酶抑制劑；(2)經(jīng)過5-24小時(shí)，用上述同樣的方式和同樣的藥物用量再次對大鼠造模，造模后可自由進(jìn)食、飲水；(3)每日按上述(1)、(2)步驟的方法造模，持續(xù)給藥一周至二周。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的復(fù)制方法，其特征在于步驟(1)中所述的嘌呤類為次黃嘌呤、黃嘌呤、尿酸；所述的尿酸酶抑制劑為Potassium salt(OA)、allantoxanamide。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的復(fù)制方法，其特征在于步驟(1)中嘌呤類的最佳用量為100-2000mg·kg-1和尿酸酶抑制劑的用量為5-1000mg·kg-1。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的復(fù)制方法，其特征在于尿酸酶抑制劑的最佳用量為100mg·kg-1/天/1次或200mg·kg-1/天2次，800mg/ml，1.25mg/ml配合嘌呤類的最佳用量為500mg·kg-1/天/1次或1000mg·kg-1/天2次。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種大鼠急性或持續(xù)性高尿酸血癥模型的復(fù)制方法，該方法步驟是(1)選取種屬為SD、Wistar的雌、雄健康大鼠，體重150－450g，禁食或不禁食，于室溫下，用罐胃，皮下注射或腹腔注射方式，同時(shí)給予嘌呤類100－2000mg·kg
文檔編號(hào)A61K49/00GK1698906SQ20051004039
公開日2005年11月23日 申請日期2005年6月6日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月6日
發(fā)明者徐立, 時(shí)樂 申請人:南京中醫(yī)藥大學(xué)