專利名稱：白蛋白穩定的阿霉素凍干制劑及其在治療腫瘤方面的應用的制作方法
技術領域：
一種用白蛋白穩定的阿霉素納米顆粒的冷凍干燥粉末制劑以及該制劑在治療對阿霉素 敏感的治療惡性腫瘤方面的應用。
背景技術：
惡性腫瘤(癌癥)是我國僅次于心血管疾病死亡率占第二的疾病，化療是治療惡性腫 瘤的重要手段之一，阿霉素類藥物在惡性腫瘤的治療上有著重要的應用價值。由于惡性腫 瘤的發病率居高不下，以吡柔比星為代表的新的阿霉素制劑在腫瘤等疾病的治療上受到新 的肯定，今后幾年中阿霉素類藥物的仍將會在腫瘤治療藥物中占據一席之地。由于新型高 效抗腫瘤治療藥物在很長一段時間內難有突破，而阿霉素類藥物由于抗腫瘤譜廣，療效明 確，無論在用量還是金額上都將繼續占有著舉足輕重的地位。由于整個腫瘤藥物領域競爭 相對緩和，市場成長空間大，利潤較高，這為新的阿霉素類制劑占領市場創造了良好的發 展空間。
目前市售的阿霉素類藥物有多柔比星、表柔比星、阿柔比星、吡柔比星和伊達比星等。 吡柔比星別名為吡喃阿霉素Th印rubicin，化學名(8S， 10S) -[[3-氨基-2，. 3， 6-三去 氧-4-0- (2-四氫吡喃基)-a-L-阿拉伯吡喃糖基]氧]-7， 8， 9， 10-四氫-6， 8， ll-三羥 基-8-羥乙酰基-1-甲氧基-5， 12-萘二酮；分子式C32H37N012;分子量627.6，表柔比 星和吡柔比星作為阿霉素類抗腫瘤藥物的代表，在抗腫瘤藥物市場中占有舉足輕重的地位。 據腫瘤科大夫反應，阿霉素類鹽酸鹽抗腫瘤藥物在臨床使用時具有很強的刺激性，如果能 從制劑上改善該類藥物的刺激性，作為一線用藥的該品種具有更好的市場前景，必能帶來 良好的經濟效益。
白蛋白分子本身具有兩親性，文獻中報道了通過蓖麻油或棉子油對阿霉素進行包裹的 方法，經過實驗發現無法實現工業化生產，經過檢索沒有發現用高壓均質乳化或超聲乳化 等技術可以制備納米微球制備阿霉素白蛋白微球的方法的相關文獻報道，經過研究，該方 法可以實現規模化生產，具有非常重要的實用價值。

發明內容
本發明的主要目的是提供一種用白蛋白穩定的阿霉素納米顆粒的冷凍干燥粉末制劑以 及該制劑在治療對阿霉素敏感的治療惡性腫瘤方面的應用，其中(按重量計)阿霉素的量 在1-20%之間，白蛋白的量在60-98%之間，生物相容性酸的鹽的量在1-20%之間，納米顆粒 的平均粒徑小于lum，在納米顆粒的冷凍干燥粉末中含有至少一種生物相容性酸或酸性緩沖
鹽，重量在O. 5-20%之間。
用白蛋白穩定的阿霉素納米顆粒的冷凍干燥粉末制劑在治療腫瘤方面的應用，其特征 在于所述腫瘤為惡性腫瘤。
本發明用白蛋白穩定的阿霉素納米顆粒的冷凍千燥粉末制劑，用注射用水或生理鹽水 復溶后PH值在5. 0-7. 0之間，復溶后溶液中含有濃度為0.卜10mg/ml的阿霉素，優選復溶 后溶液中含有濃度為0. 1-3mg/ml的阿霉素。
本發明制備白蛋白穩定的阿霉素納米顆粒中生物相容性酸或酸性緩沖鹽，可以選生物 相容性有機酸或無機酸，其中生物相容性酸具體選自鹽酸、檸檬酸、磷酸、醋酸、乳酸、 碳酸、琥珀酸中的一種或兩種以上；酸性緩沖鹽選自生物相容性酸的鈉鹽或鉀鹽。
本發明制備白蛋白穩定的阿霉素納米顆粒凍干粉末中可以加入凍干保護劑，選自小分 子氨基酸、海藻糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖中的一種或兩種以上，其中小分子氨基酸包括所 有的已經發現和使用的20種a-氨基酸，比如
非極性氨基酸丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、 甲硫氨酸(8種);
極性、不帶電荷氨基酸絲氨酸、甘氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、 酪氨酸(7種)；
酸性氨基酸天門冬氨酸、谷氨酸(2種)；
堿性氨基酸精氨酸、賴氨酸、組氨酸(3種)
優選非極性、疏水性氨基酸甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨 酸和脯氨酸，最常使用的是甘氨酸，凍干保護劑的加入可以有效的避免白蛋白分子的聚集。
本發明制備白蛋白穩定的阿霉素納米顆粒凍干粉末，其中白蛋白可以選擇人血清白蛋 白，通過基因工程的方法得到的白蛋白，也可以選擇動物血清白蛋白，優選人血清白蛋白。
本發明制備白蛋白穩定的阿霉素納米顆粒凍干粉末，其中包括所有蒽環類抗生素，比 如目前市售的阿多柔比星、表柔比星、阿柔比星、吡柔比星和伊達比星等。 制備方法如下 一高壓均質乳化法
取處方量的阿霉素用適量乙醇溶解，取處方量的白蛋白水溶液加入適量生物相容性酸
或酸性緩沖鹽混合，調節ra值在5.0-7.0之間，將阿霉素用少量乙醇溶解和自蛋白酸性溶 液或酸性緩沖鹽混合，在4(TC以下將混合物在高壓均質機中反復均質乳化，得到納米乳劑， 乳劑可以加入凍干保護劑，迅速冷凍到-5(TC以下，冷凍干燥至含水量小于5%。
二白蛋白變性復性法
取處方量的濃度為2_10%白蛋白溶液，加入少量二硫蘇糖醇或二硫赤蘇糖醇使白蛋白部
分開環，加入處方量的阿霉素乙醇溶液，4(TC以下攪拌減壓蒸餾使乙醇揮發，用堿性緩沖 鹽調節PH值使體系ra為7.0-8.0，在空氣中攪拌使白蛋白復性，將阿霉素比較牢固的包入 其中，將復性后的白蛋白加入適量酸性溶液或酸性緩沖鹽，調節PH為5.0-7.0之間，在40 'C以下將混合物在超聲或適當的高壓均質機中均質乳化，得到納米乳劑，乳劑可以加入凍 干保護劑，迅速冷凍到-5(TC以下，冷凍干燥至含水量小于5%。
堿性緩沖鹽可以選擇強堿弱酸鹽，其中強堿離子Na，K，Ca，弱酸離子碳酸根離子、 亞硫酸根離子、氫硫酸根離子(HS，S)、醋酸根和磷酸根，優選磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、 磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、檸檬酸、擰檬酸二鈉、檸檬酸三鈉。
具體實施例 實施例1
取25mg多柔比星用適量乙醇溶解，取50ml的人血清白蛋白水溶液(2.5%)加入適量 磷酸調節ra值在5.0-7.0之間，將多柔比星乙醇溶液和白蛋白磷酸溶液混合，在4(TC以下 將混合物在高壓均質機中反復均質乳化，得到納米乳劑，在無菌條件下迅速冷凍到-4(TC以 下，冷凍干燥至含水量小于5%。
為了使復溶迅速，得到的納米乳劑可以加入10%蔗糖作為凍干保護劑，在無菌條件下迅 速冷凍到-4(TC以下，冷凍干燥至含水量小于5%。
將所得到的多柔比星白蛋白納米凍干粉末，溶于0. 9%NaCl水溶液中重制成含多柔比星 0. 5mg/ml的溶液，穩定性大于12小時。
用磷酸代替鹽酸得到同樣的結果。 實施例2
取25mg吡柔比星用適量無菌乙醇溶解，取50ml的人血清白蛋白無菌注射用水溶液(3%) 加入適量無菌檸檬酸，調節PH值在5.0-7.0之間，將吡柔比星乙醇溶液和白蛋白擰檬酸溶 液混合，在4(TC以下將混合物在高壓均質機(無菌處理)中反復均質乳化，得到納米乳劑， 在無菌條件下迅速冷凍到-4(TC以下，冷凍干燥至含水量小于5%，即得合格產品。
為了使復溶迅速，得到的納米乳劑可以加入10%蔗糖作為凍干保護劑，在無菌條件下迅 速冷凍到-40'C以下，冷凍干燥至含水量小于5%，穩定性大于12小時。
將所得到的吡柔比星白蛋白納米凍干粉末，溶于0. 9%NaCl水溶液中重制成含吡柔比星 0. 5mg/ml的溶液。
實施例3
取100mg吡柔比星用適量乙醇溶解，取50ml的牛血清白蛋白水溶液(5%)加入適量檸 檬酸混合，調節ra值在5.o-7.o之間，將吡柔比星乙醇溶液和白蛋白酸性溶液或酸性緩沖 鹽混合，在4(TC以下將混合物在高壓均質機中反復均質乳化，得到納米乳劑，乳劑除菌過 濾，迅速冷凍到-5(TC以下，冷凍干燥至含水量小于5%。
為了使復溶迅速，得到的納米乳劑可以加入10%海藻糖作為凍干保護劑，迅速冷凍到-40 'C以下，冷凍干燥至含水量小于5%。
將所得到的吡柔比星白蛋白納米凍干粉末，溶于0. 9%NaCl水溶液中重制成含吡柔比星 2mg/ml的溶液，穩定性大于12小時。
用琥珀酸代替檸檬酸得到同樣的結果。 實施例4
取50ml的人血白蛋白無菌水溶液(5%)加入適量檸檬酸混合，加入少量二硫蘇糖醇或 二硫赤蘇糖醇攪拌使白蛋白部分開環，加入50mg表柔比星無菌乙醇溶液，4(TC以下攪拌減 壓蒸餾使乙醇揮發，用堿性緩沖鹽調節ra值使體系PH為7-8，在無菌環境下攪拌使白蛋白 復性，將表柔比星比較牢固的包入其中，將復性后的白蛋白加入適量酸性溶液或酸性緩沖 鹽，調節PH為5. 0-7. 0之間，在40°C以下將混合物在超聲或適當的高壓均質機中均質乳化， 得到納米乳劑，乳劑可以加入凍干保護劑，迅速冷凍到-5CTC以下，冷凍干燥至含水量小于 5%。
為了使復溶迅速，得到的納米乳劑可以加入10%蔗糖作為凍干保護劑，乳劑除菌過濾， 在無菌條件下迅速冷凍到-4(TC以下，冷凍干燥至含水量小于5%。
將所得到的表柔比星白蛋白納米凍干粉末，溶于0. 9%NaCl水溶液中重制成含表柔比星 lmg/ml的溶液，穩定性大于12小時。
用琥珀酸代替檸檬酸得到同樣的結果。 實施例5
取50ml的人血白蛋白無菌注射用水溶液(3%)加入適量檸檬酸混合，加入少量二硫蘇 糖醇或二硫赤蘇糖醇攪拌使白蛋白部分開環，加入50mg阿柔比星無菌乙醇溶液，4(TC以下 攪拌減壓蒸餾使乙醇揮發，用堿性緩沖鹽調節PH值使體系PH為7-8，在無菌條件下攪拌使 白蛋白復性，將阿柔比星比較牢固的包入其中，將復性后的白蛋白加入適量酸性溶液或酸 性緩沖鹽，調節ra為5.0-7.之間，在4(TC以下將混合物在超聲或適當的高壓均質機中均 質乳化，得到納米乳劑，乳劑可以加入凍干保護劑，迅速冷凍到-50'C以下，冷凍干燥至含 水量小于5%
為了使復溶迅速，得到的納米乳劑可以加入重量比為10%的無菌蔗糖作為凍干保護劑， 在無菌條件下迅速冷凍到-4(TC以下，冷凍干燥至含水量小于5%。
將所得到的阿霉素白蛋白納米凍干粉末，溶于0.9%NaCl水溶液中重制成含阿柔比星 lmg/ml的溶液，穩定性大于12小時。
用琥珀酸代替檸檬酸得到同樣的結果。 實施例6
取30mg伊達比星用適量無菌乙醇溶解，取50ml的人血清白蛋白無菌注射用水溶液(3%) 加入適量無菌檸檬酸，調節PH值在5.0-7.0之間，將伊達比星乙醇溶液和白蛋白擰檬酸溶 液混合，在4(TC以下將混合物在高壓均質機(無菌處理)中反復均質乳化，得到納米乳劑， 在無菌條件下迅速冷凍到-4(TC以下，冷凍干燥至含水量小于5%，即得合格產品。
為了使復溶迅速，得到的納米乳劑可以加入10%蔗糖作為凍干保護劑，在無菌條件下迅 速冷凍到-4(TC以下，冷凍干燥至含水量小于5%，穩定性大于12小時。
將所得到的伊達比星白蛋白納米凍干粉末，溶于0. 9°/。NaCl水溶液中重制成含伊達比星 0. 3mg/ml的溶液。
權利要求
1、一種用白蛋白穩定的阿霉素納米顆粒的冷凍干燥粉末制劑以及該制劑在治療對阿霉素敏感的治療腫瘤方面的應用，其中(按重量計)阿霉素的量在1-20％之間，白蛋白的量在60-98％之間，納米顆粒的平均粒徑小于1um，在納米顆粒的冷凍干燥粉末中含有至少一種生物相容性酸或酸性緩沖鹽，重量在1-20％之間。
2、 根據權力要求1中在對阿霉素敏感的治療腫瘤方面的應用，其特征在于所述腫瘤為惡 性腫瘤。
3、 根據權力要求1中的冷凍干燥粉末制劑，用注射用水或生理鹽水復溶后PH值在 5. 0-7.0之間。
4、 根據權力要求1-3中的冷凍干燥粉末制劑，其特征在于復溶后溶液中含有濃度為 0. 1-iOmg/ral的阿霉素。
5、 根據權力要求4中的冷凍干燥粉末制劑，其特征在于復溶后溶液中含有濃度為 0. 2-3rag/ml的阿霉素。
6、 根據權力要求3中的冷凍干燥粉末制劑，用注射用水或生理鹽水復溶后PH值在 5. 0-7. 0之間。
7、 根據權力要求1中生物相容性酸或酸性緩沖鹽，可以選生物相容性有機酸或無機酸， 其中生物相容性酸具體選自鹽酸、檸檬酸、磷酸、醋酸、乳酸、碳酸、琥珀酸中的一種或兩 種以上；酸性緩沖鹽選自生物相容性酸的鈉鹽或鉀鹽。
8、 根據權力要求1中冷凍十燥粉末制劑，可以加入凍干保護劑，選自小分子氨基酸、 海藻糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖中的一種或兩種以上。
9、 根據權力要求1中人血清白蛋白，可以選擇人血清白蛋白，通過基因工程的方法得 到的白蛋白，也可以選擇動物血清白蛋白(比如牛血清白蛋白、兔血清白蛋白)，優選人血 清白蛋白。
10、 根據權力要求l中的阿霉素，包括所有蒽環類抗生素，比如目前市售的阿多柔比星、 表柔比星、阿柔比星、吡柔比星和伊達比星等。
全文摘要
一種用白蛋白穩定的阿霉素納米顆粒的冷凍干燥粉末制劑以及該制劑在治療對阿霉素敏感的治療惡性腫瘤方面的應用。
文檔編號A61K31/7028GK101361747SQ20081014734
公開日2009年2月11日 申請日期2008年8月11日 優先權日2008年8月11日
發明者張文芳 申請人:張文芳