專利名稱：白蛋白穩定的多西紫杉醇凍干制劑及其在治療腫瘤方面的應用的制作方法
技術領域：
一種用白蛋白穩定的多西紫杉醇納米顆粒的冷凍干燥粉末制劑以及該制劑在治療對多 西紫杉醇敏感的治療腫瘤方面的應用。
背景技術：
多烯紫杉醇(Docetaxel)英文名Docetaxel，是由羅納普朗克*樂安公司開發的一 個半合成紫杉醇衍生物，屬微管解聚抑制劑，本品通過促進小管聚合成穩定的微管并抑制 其解聚從而使游離小管的數量顯著減少。本品已于1995年4月在墨西哥首次上市，并隨即 在英、美、法、意、德、日等主要國家上市，目前批準的適應癥有經蒽環類抗腫瘤藥物治 療無效或仍復發的晚期和轉移性乳腺癌及曾經治療無效的非小細胞肺癌。
多烯紫杉醇抗瘤譜廣，抗腫瘤作用強，對難治性的乳腺癌、非小細胞肺癌、卵巢癌、 頭頸部腫瘤等的療效均較突出，臨床應用潛力深厚。乳腺癌和肺癌是國內最為常見的兩類 腫瘤，且其發病率還有上升趨向。Goldman公司估計多烯紫杉醇1998年的全球銷售額可達 3億美元。
多烯紫杉醇為白色或類白色粉末，具親脂性，幾乎不溶于水。其注射液為黃色或棕黃 色粘稠液體，規格有20mg， 80mg。每瓶20mg注射液為將無水多烯紫杉醇20mg溶于吐溫80 0.5ml中制成；每瓶80mg注射液為將無水多烯紫杉醇80mg溶于吐溫80 2ml中制成，溶劑 為13% w/w的注射用乙醇水溶液。
白蛋白分子本身具有兩親性，用高壓均質乳化或超聲乳化等技術可以制備納米微球，
經過檢索文獻報道了用戊二醛交聯固化法制備白蛋白微球的方法，該方法制備的白蛋白由 于戊二醛可以使白蛋白分子互相交聯，也可以使白蛋白分子滅活變性，臨床使用有致敏的 危險，不能作為藥物制劑實現靜脈給藥。

發明內容
本發明的主要目的是提供一種用白蛋白穩定的多西紫杉醇納米顆粒的冷凍干燥粉末制 劑以及該制劑在治療對多西紫杉醇敏感的治療腫瘤方面的應用，其中(按重量計)紫杉醇 的量在1-20%之間，白蛋白的量在60-98%之間，納米顆粒的平均粒徑小于lum，在納米顆粒 的冷凍干燥粉末中含有至少一種生物相容性酸或酸性緩沖鹽，重量在0. 5-20%之間。
用白蛋白穩定的多西紫杉醇納米顆粒的冷凍干燥粉末制劑在治療腫瘤方面的應用，其 特征在于所述腫瘤為實體瘤，主要包括乳腺癌和非小細胞癌。
本發明用白蛋白穩定的多西紫杉醇納米顆粒的冷凍干燥粉末制劑，用注射用水或生理 鹽水復溶后PH值在5. 0-7. 0之間，優選用注射用水或生理鹽水復溶后PH值在5. 5-6. 5之 間，復溶后溶液中含有濃度為0. l-10mg/ml的多西紫杉醇，優選復溶后溶液中含有濃度為 l-5mg/ml的多西紫杉醇。
本發明制備白蛋白穩定的多西紫杉醇納米顆粒中生物相容性酸或酸性緩沖鹽，可以選 生物相容性有機酸或無機酸，其中生物相容性酸具體選自鹽酸、擰檬酸、磷酸、醋酸、乳 酸、碳酸、琥珀酸中的一種或兩種以上；酸性緩沖鹽選自生物相容性酸的鈉鹽或鉀鹽。
本發明制備白蛋白穩定的多西紫杉醇納米顆粒凍干粉末中可以加入凍干保護劑，選自 小分子氨基酸、海藻糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖中的一種或兩種以上，其中小分子氨基酸包 括所有的已經發現和使用的20種a-氨基酸，比如
非極性氨基酸丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、色氨酸、苯丙氮酸、 甲硫氨酸(8種)；
極性、不帶電荷氨基酸絲氨酸、甘氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、 酪氨酸(7種);
酸性氨基酸天門冬氨酸、谷氨酸(2種)；
堿性氨基酸精氨酸、賴氨酸、組氨酸(3種)
優選非極性、疏水性氨基酸甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨 酸和脯氨酸，最常使用的是甘氨酸，凍干保護劑的加入可以有效的避免白蛋白分子的聚集。
本發明制備白蛋白穩定的多西紫杉醇納米顆粒凍干粉末，其中白蛋白可以選擇人血清 白蛋白，通過基因工程的方法得到的白蛋白，也可以選擇動物血清白蛋白，優選人血清白 蛋白。
制備方法如下
一高壓均質乳化法
取處方量的多西紫杉醇用適量乙醇溶解，取處方量的白蛋白水溶液加入適量生物相容
性酸或酸性緩沖鹽混合，調節ra值在5.0-7.0之間，優選PH值在5.5-6.5之間，將多西 紫杉醇用少量氯仿溶解和白蛋白酸性溶液或酸性緩沖鹽混合，在40'C以下將混合物在高壓 均質機中反復均質乳化，得到納米乳劑，乳劑可以加入凍千保護劑，迅速冷凍到-50度以下， 冷凍千燥至含水量小于5%。
二白蛋白變性復性法
取處方量的白蛋白溶液，濃度(2-10%),加入少量二硫蘇糖醇或二硫赤蘇糖醇使白蛋 白部分開環，加入處方量的多西紫杉醇氯仿溶液，4(TC以下攪拌減壓蒸餾使氯仿揮發，用 堿性緩沖鹽調節PH值使體系ra為8-9，在無菌環境攪拌使白蛋白復性，將多西紫杉醇比較
牢固的包入其中，將復性后的白蛋白加入適量酸性溶液或酸性緩沖鹽，調節PH為5.5-6.5 之間，在4(TC以下將混合物在超聲或適當的高壓均質機中均質乳化，得到納米乳劑，乳劑 可以加入凍干保護劑，迅速冷凍到-50度以下，冷凍干燥至含水量小于5%。
堿性緩沖鹽可以選擇強堿弱酸鹽，其中強堿離子Na，K，Ca，弱酸離子碳酸根離子、 亞硫酸根離子、氫硫酸根離子(HS，S)、醋酸根和磷酸根，優選磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、 磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、檸檬酸、檸檬酸二鈉、檸檬酸三鈉。
具體實施例 實施例l
取50mg多西紫杉醇用適量氯仿溶解，取50ml的人血清白蛋白水溶液(2.5%)加入適 量磷酸調節PH值在5.0-7.0之間，優選PH值在5.5-6.5之間，將多西紫杉醇氯仿溶液和 白蛋白磷酸溶液混合，在4(TC以下將混合物在高壓均質機中反復均質乳化，得到納米乳劑， 在無菌條件下迅速冷凍到-4(TC以下，冷凍干燥至含水量小于5%。
為了使復溶迅速，得到的納米乳劑可以加入10%蔗糖作為凍干保護劑，在無菌條件下迅 速冷凍到-4(TC以下，冷凍干燥至含水量小于5%。
將所得到的多西紫杉醇白蛋白納米凍干粉末，溶于0. 9%NaCl水溶液中重制成含多西紫 杉醇0. 5mg/ml的溶液，穩定性大于12小時。
用磷酸代替鹽酸得到同樣的結果。 實施例2
取50mg多西紫杉醇用適量無菌氯仿溶解，取50ml的人血清白蛋白無菌注射用水溶液 (2. 5%)加入適量無菌檸檬酸，調節PH值在5. 0-7. 0之間，優選ra值在5. 5-6. 5之間， 將多西紫杉醇氯仿溶液和白蛋白檸檬酸溶液混合，在40'C以下將混合物在高壓均質機(無 菌處理)中反復均質乳化，得到納米乳劑，在無菌條件下迅速冷凍到-40度以下，冷凍干燥 至含水量小于5%，即得合格產品。
為了使復溶迅速，得到的納米乳劑可以加入10%蔗糖作為凍干保護劑，在無菌條件下迅 速冷凍到-40度以下，冷凍干燥至含水量小于5%，穩定性大于12小時。
將所得到的多西紫杉醇白蛋白納米凍干粉末，溶于0. 9%NaCl水溶液中重制成含多西紫 杉醇O. 5mg/ml的溶液。
實施例3
取100mg多西紫杉醇用適量乙醇溶解，取50ml的牛血清白蛋白水溶液(5%)加入適量 檸檬酸混合，調節PH值在5.0-7.0之間，優選PH值在5.5-6.5之間，將多西紫杉醇乙醇 溶液和白蛋白酸性溶液或酸性緩沖鹽混合，在4(TC以下將混合物在高壓均質機中反復均質 乳化，得到納米乳劑，乳劑除菌過濾，迅速冷凍到-5(TC以下，冷凍干燥至含水量小于5%。
為了使復溶迅速，得到的納米乳劑可以加入10%海藻糖作為凍干保護劑，迅速冷凍到-40 °C以下，冷凍千燥至含水量小于5%。
將所得到的多西紫杉醇白蛋白納米凍干粉末，溶于0. 9%NaCl水溶液中重制成含多西紫 杉醇2mg/ml的溶液，穩定性大于12小時。
用琥珀酸代替檸檬酸得到同樣的結果。 實施例4
取50ml的人血白蛋白水溶液(5°/。)加入適量檸檬酸混合，加入少量二硫蘇糖醇或二硫 赤蘇糖醇攪拌使白蛋白部分開環，加入150mg多西紫杉醇氯仿溶液，4(TC以下攪拌減壓蒸 餾使氯仿揮發，用堿性緩沖鹽調節PH值使體系PH為8-9，在無菌環境攪拌使白蛋白復性， 將多西紫杉醇比較牢固的包入其中，將復性后的白蛋白加入適量酸性溶液或酸性緩沖鹽， 調節PH為5.5-6.5之間，在4(TC以下將混合物在超聲或適當的高壓均質機中均質乳化，得 到納米乳劑，乳劑可以加入凍干保護劑，迅速冷凍到-5(TC以下，冷凍干燥至含水量小于5%。
為了使復溶迅速，得到的納米乳劑可以加入10%庶糖作為凍干保護劑，乳劑除菌過濾， 在無菌條件下迅速冷凍到-40度以下，冷凍干燥至含水量小于5%。
將所得到的多西紫杉醇白蛋白納米凍干粉末，溶于0. 9%NaCl水溶液中重制成含多西紫 杉醇3mg/ml的溶液，穩定性大于12小時。
用琥珀酸代替檸檬酸得到同樣的結果。 實施例5
取50ml的人血白蛋白無菌注射用水溶液(3%)加入適量檸檬酸混合，加入少量二硫蘇 糖醇或二硫赤蘇糖醇攪拌使白蛋白部分開環，加入100mg多西紫杉醇的氯仿溶液，4(TC以 下攪拌減壓蒸餾使氯仿揮發，用堿性緩沖鹽調節PH值使體系ra為8-9，在無菌條件下攪拌 使白蛋白復性，將多西紫杉醇比較牢固的包入其中，將復性后的白蛋白加入適量酸性溶液 或酸性緩沖鹽，調節PH為5.5-6.5之間，在4(TC以下將混合物在超聲或適當的高壓均質機 中均質乳化，得到納米乳劑，乳劑可以加入凍干保護劑，迅速冷凍到-5(TC以下，冷凍干燥 至含水量小于5%
為了使復溶迅速，得到的納米乳劑可以加入重量比為10%的無菌蔗糖作為凍干保護劑，
在無菌條件下迅速冷凍到-40度以下，冷凍干燥至含水量小于5%。
將所得到的多西紫杉醇白蛋白納米凍干粉末，溶于0. 9%NaCl水溶液中重制成含多西紫 杉醇2rag/ml的溶液，穩定性大于12小時。
用琥珀酸代替檸檬酸得到同樣的結果。
實施例6
取實施例2中制備的多西紫杉醇白蛋白納米凍干粉末，溶于0. 9%NaCl水溶液中重制成 含多西紫杉醇0.5mg/ml的溶液，對一名乳腺癌患者進行了為期3個周期的治療，每個周期 以250rag/m2的劑量、5mg/ml注入生理鹽水瓶中靜脈點滴，通過檢查發現乳腺癌消失。
權利要求
1、一種用白蛋白穩定的多西紫杉醇納米顆粒的冷凍干燥粉末制劑以及該制劑在治療對多西紫杉醇敏感的治療腫瘤方面的應用，其中(按重量計)紫杉醇的量在1-20％之間，白蛋白的量在60-98％之間，納米顆粒的平均粒徑小于1um，在納米顆粒的冷凍干燥粉末中含有至少一種生物相容性酸或酸性緩沖鹽，重量在0.5-20％之間。
2、 根據權力要求1中在對多西紫杉醇敏感的治療腫瘤方面的應用，其特征在于所述腫 瘤為實體瘤，主要包括乳腺癌和非小細胞癌。
3、 根據權力要求i中的冷凍千燥粉末制劑，用注射用水或生理鹽水復溶后ra值在5.0-7.0之間。
4、 根據權力要求卜3中的冷凍干燥粉末制劑，其特征在于復溶后溶液中含有濃度為 0. 1-10mg/ml的多西紫杉醇。
5、 根據權力要求4中的冷凍干燥粉末制劑，其特征在于復溶后溶液中含有濃度為 0. 5-3mg/ml的多西紫杉醇。
6、 根據權力要求3中的冷凍千燥粉末制劑，用注射用水或生理鹽水復溶后PH值在 5. 5-6. 5之間。
7、 根據權力要求l中生物相容性酸或酸性緩沖鹽，可以選生物相容性有機酸或無機酸， 其中生物相容性酸具體選自鹽酸、檸檬酸、磷酸、醋酸、乳酸、琥珀酸中的一種或兩種以上； 酸性緩沖鹽選自生物相容性酸的鈉鹽或鉀鹽。
8、 根據權力要求1中冷凍干燥粉末制劑，可以加入凍干保護劑，選自小分子氨基酸、 海藻糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖中的一種或兩種以上。
9、 根據權力要求1中人血清白蛋白，可以選擇人血清白蛋白，通過基因工程的方法得 到的白蛋白，也可以選擇動物血清白蛋白(比如牛血清白蛋白、兔血清白蛋白)，優選人血 清白蛋白。
全文摘要
一種用白蛋白穩定的多西紫杉醇納米顆粒的冷凍干燥粉末制劑以及該制劑在治療對多西紫杉醇敏感的治療腫瘤方面的應用。
文檔編號A61P35/00GK101361731SQ20081014734
公開日2009年2月11日 申請日期2008年8月11日 優先權日2008年8月11日
發明者張文芳 申請人:張文芳