專利名稱：：一種具有增強免疫力功能的復合真菌多糖及其應用的制作方法
技術領域：
：本發明涉及一種以食(藥)用真菌為原料制備的具有增強免疫力功能的復合真菌多糖，同時本發明還涉及一種具有增強免疫力功能的復合真菌多糖的用途。
背景技術：
：真菌多糖是從真菌子實體、菌絲體、發酵液中分離出的一類可以控制細胞分裂分化、調節細胞生長和衰老的活性多糖，一般都是由十個分子以上的單糖通過糖苷鍵連接而成的高分子多聚物。真菌多糖分子單體之間，大量地以e(i—3)與e(i—6)糖苷鍵結合，形成鏈狀分子，具有螺旋狀的立體構型?？茖W實驗表明真菌多糖具有很強烈的抗腫瘤活性，對癌細胞有很強的抑制力，且在免疫調節，降血壓、降血脂、抗血栓，健胃保肝等方面起著重要的作用。真菌多糖現已廣泛應用于免疫缺陷性疾病、自身免疫疾病和腫瘤等疾病的臨床治療，因而被稱為一種重要的生物效應調節劑。
發明內容本發明的目的在于提供一種以多種食(藥)真菌為主要原料，通過傳統工藝制備而成的具有增強免疫力功能的復合真菌多糖，該復合真菌多糖對增強免疫力具有明顯的效果，對亞健康人士具有良好的保健作用。本發明的另一目的在于提供上述復合真菌多糖在制備具有增強免疫力功能的保健食品中的用途。本發明提供的具有增強免疫力功能的復合真菌多糖由下述重量份配比的原料制備而成香菇8100、茯苓15100、竹蓀10200、銀耳1580、蝙蝠蛾擬青霉菌絲體250。制備本發明復合真菌多糖的各原料的優選重量份配比是香菇1050、茯苳4580、竹蓀30150、銀耳2555、蝙蝠蛾擬青霉菌絲體1050。制備本發明復合真菌多糖的各原料的最佳重量份配比是香菇30、茯苓60、竹蓀90、銀耳40、蝙蝠蛾擬青霉菌絲體20。進一步的，本發明提出上述復合真菌多糖在制備具有增強免疫力功能的保健食品中的用途，以所述復合真菌多糖為主要功效成分制備保健食品，通過常規工藝，可以制成藥劑學上所說的多種劑型，如膠囊劑、片劑、粉劑、顆粒劑或口服液等。香菇為Ze油'm^(berk.)Sing的子實體。根據《中藥大詞典》記載，香菇性甘、平，益胃氣。香菇多糖是香菇中的重要藥用成分，香菇多糖是典型的T細胞激活劑，體內外均能促進細胞毒T淋巴細胞(CTL)的產生，提高CTL的殺傷活力，增強正常或免疫功能低下小鼠的遲發型超敏反應(DTH),提高抗體依賴性細胞毒細胞(ADDC)活性。大量的文獻證明香菇多糖具有較強的抗腫瘤活性和調節機體免疫功能。冬蟲夏草(Cw辦ce戸(BerK.)Sacc)是我國特有的一種名貴藥用真菌。為了解決嚴重的供需矛盾，采用液體深層發酵培養蟲草菌絲體替代天然冬蟲夏草己經獲得普遍認可。蝙蝠蛾擬青霉屬于衛生部公布的可用于保健食品的蟲草菌種。1972年，中國醫學科學院藥物研究所開始了人工培養蟲草菌絲體的研究，他們從青海化隆產新鮮冬蟲夏草[Cor辦ce戸(Berk)Sacc]中率先分離出蝙蝠蛾擬青霉CS-4菌株，經人工發酵培養，獲得發酵蟲草菌絲體。研究證實，經發酵獲得的蝙蝠蛾擬青霉菌絲體中含有核苷類(腺嘌呤核苷、尿嘧啶核苷)、蟲草酸(D—甘露醇)、麥角甾醇、蟲草多糖及天門冬氨酸等19種氨基酸,藥理實驗研究表明蟲草多糖具有增強機體免疫力的作用。茯苓為多孔菌科真菌茯苓Pon'ococas(Schw.)Wolf的干燥菌核，根據藥典記載，茯苓甘、淡、平，功能健脾和胃寧心。茯苓中含多糖成分，茯苓中茯苓聚糖對正常和荷瘤小鼠的免疫功能有增強作用，能增強小鼠巨噬細胞吞噬功能，服用茯苓多糖可改善老年人的細胞免疫功能。近年來大量的動物實驗證明，與其它真菌多糖一樣，茯苓多糖有非常顯著的抗腫瘤作用。目前普遍認為主要是通過增強機體免疫功能，激活免疫監視系統采實現的。竹蓀為鬼筆科真菌竹蓀的子實體。根據《中華本草》記載，竹蓀味甘微苦，性涼，具補氣養陰之功；藥理作用表明竹蓀提取物具有抗癌作用，從竹蓀中分離到的多糖對小鼠肉瘤S180有抑制作用。杜昱光在竹蓀深層發酵菌絲體提取液對抗腫瘤及提高小鼠免疫功能的研究中發現，竹蓀深層發酵菌絲粉提取液能明顯提高巨噬細胞的吞噬功能，明顯增加小鼠胸腺、脾臟的重量，增強小鼠的免疫力。銀耳為銀耳科銀耳的子實體。《中華本草》記載，銀耳性甘、淡、平，具有滋補生津，潤肺養胃之功。銀耳中含銀耳多糖、銀耳孢子多糖、糖蛋白、酸性雜多糖等成分。近年來，國內外對銀耳的主要成分——銀耳多糖進行了大量研究，表明銀耳多糖具有廣泛的藥理作用，銀耳多糖可使正常小鼠免疫器官重量增加，增強小鼠體液免疫功能和細胞免疫功能，促進細胞因子的分泌和抗腫瘤作用。用銀耳多糖和香燕多糖共同制成復合真菌多糖0.75g/kg劑量能明顯提高荷瘤小鼠的體液和細胞免疫功能，對非特異性免疫有明顯的促進作用。林曉明等用銀耳和茯苓水提取液飼喂小鼠，發現能促進小鼠T淋巴細胞增殖和IL-2分泌。本發明復合真菌多糖的特點是以富含活性多糖的食(藥)真菌為主料，利用各種多糖成分合理組合、配合共用，通過多種途徑增強機體免疫力，對亞健康保健具有良好的效果。將本發明復合真菌多糖為主要功效成分制備的保健食品，對增強免疫力具有明顯的效果，對亞健康人士具有良好的保健作用。下面通過具體實施方式及藥效學研究結果對本發明作進一步說明。具體實施例方式下面列舉一部分具體實施例對本發明進行說明，有必要在此指出的是以下具體實施例只用于對本發明作進一步說明，不代表對本發明保護范圍的限制。其他人根據本發明做出的一些非本質的修改和調整仍屬于本發明的保護范圍。實施例1本發明實施例2提供的具有增強免疫力功能的復合真菌多糖由下述重量配比的原料制備而成香菇30kg，茯苓60kg，竹蓀90kg，銀耳40kg,蝙蝠蛾擬青霉菌絲體20kg。實施例2本發明實施例1提供的具有增強免疫力功能的復合真菌多糖由下述重量配比的原料制備而成香菇10kg，茯苓80kg，竹蓀100kg，銀耳60kg，蝙蝠蛾擬青霉菌絲體45kg。實施例3本發明實施例3提供的具有增強免疫力功能的復合真菌多糖由下述重量配比的原料制備而成香菇40kg，茯苓80kg，竹蓀70kg,銀耳50kg，蝙蝠蛾擬青霉菌絲體25kg。5實施例4本發明實施例4提供的具有增強免疫力功能的復合真菌多糖由下述重量配比的原料制備而成香菇60kg，茯苓100kg，竹蓀120kg，銀耳20kg，蝙蝠蛾擬青霉菌絲體20kg。實施例5本發明實施例5提供的具有增強免疫力功能的復合真菌多糖由下述重量配比的原料制備而成香菇80kg，茯苓50kg，竹蓀130kg，銀耳30kg，蝙蝠蛾擬青霉菌絲體15kg。實施例6本發明實施例6提供的具有增強免疫力功能的復合真菌多糖由下述重量配比的原料制備而成香菇90kg，茯苓30kg，竹蓀70kg，銀耳30kg，蝙蝠蛾擬青霉菌絲體35kg。實施例7本發明實施例7提供的具有增強免疫力功能的復合真菌多糖由下述重量配比的原料制備而成香菇15kg，茯苓50kg，竹蓀30kg，銀耳30kg，蝙蝠蛾擬青霉菌絲體20kg。實施例8本發明實施例8提供的具有增強免疫力功能的復合真菌多糖由下述重量配比的原料制備而成香菇70kg，茯苓90kg，竹蓀180kg，銀耳70kg，蝙蝠蛾擬青霉菌絲體40kg。實施例9本發明實施例9提供的具有增強免疫力功能的復合真菌多糖由下述重量配比的原料制備而成香菇35kg，茯苓50kg，竹蓀120kg，銀耳40kg，蝙蝠蛾擬青霉菌絲體35kg。實施例10本發明實施例10提供的具有增強免疫力功能的復合真菌多糖由下述重量配比的原料制備而成香菇50kg,茯苓80kg，竹蓀150kg，銀耳55kg，蝙蝠蛾擬青霉菌絲體50kg。以上實施例中，香菇、竹蓀、銀耳為普通食品原料，位于《中國食物成分表》(2004年版)中，香菇、竹蓀滿足GB7096《食用菌衛生標準》，銀耳滿足GB11675《銀耳衛生標準》，茯苓滿足《中華人民共和國藥典》(2005年版)質量標準，蝙蝠蛾擬青霉菌絲體滿足WS3-d-0001-95(Z)《中華人民共和國衛生部部標準發酵蟲草菌粉(Cs-4)》部頒質量標準。由以上實施例所提供的復合真菌多糖為主要功效成分制備保健食品，通過常規工藝，可以制成藥劑學上所說的多種劑型，如膠囊劑、片劑、粉劑、顆粒劑或口服液等。藥效學研究申請人使用按上述實施例1所提供的原料配比，通過常規工藝制得的復合真菌多糖固體粉末(以下稱為復合真菌多糖)進行了功效驗證試驗，試驗結果如下1.試驗單位中山大學生命科學學院醫藥分子生物學實驗室。2.實驗目的研究復合真菌多糖對機體的免疫增強作用。3.試驗材料3.1試驗樣品復合真菌多糖，外觀為棕褐色粉末，有本品特有的香味，多糖含量為30%(硫酸-苯酚法測)。由本專利申請人提供。3.2陽性對照物注射用環磷酰胺，國藥準字H14023686，0.2g/瓶，山西普德藥業有限公司生產;云芝糖肽膠囊，國藥準字Z10980124，上海新康制藥廠生產。3.3試驗動物NIH小鼠，SPF級，體重1822g，購于廣東省醫學實驗動物中心。KM小鼠，SPF級，體重18-22g，購于廣東省醫學實驗動物中心。豚鼠普通級，體重300克左右，購于廣東省醫學實驗動物中心。3.4試劑及藥品S180細胞株，購于中山大學實驗動物中心細胞庫；四甲基偶氮唑鹽(MTT，sigma公司)，購于廣州市威佳生物有限公司；胰蛋白酶(上海華美生物公司產品)，購于廣州市博理生物有限公司；二甲基亞砜(DMSO)，AR級，天津市博迪化工有限公司；RPMI1640培養基，InvitrogenCo.提供；青霉素，華北制藥股份有限公司，國藥準字H13020657;硫酸鏈霉素，華北制藥股份有限公司，國藥準字H13020650;胎牛血清，HycloneLabomtoreisInc.提供，Cat.NO:SH30401.01;2.4-二硝基氯苯(DNCB),CP級，上海試劑一廠生產；丙酮，AR級，廣東光華化學廠有限公司；Na2C03，AR級，廣州試劑廠生產；氰化鉀，CP級，廣州試劑廠生產；鐵氰化鉀，AR級，廣州化學試劑廠生產；MouseCD3，100ug/1.0ml，Cat:LHM3401，Lo估1385242B;MouseNKU，50ug/0.5mJ，NO.LMM6604,Lot:10903M;以上由美國InvitrogenCALTAGLABORATORIES公司生產；10XFCMLysingSolution(溶血素)20ml，產品號MAB-LS01，Lot:0706610010，美國MULTISCIENCESBIOTECASSAYSInc.生產；多聚甲醛AR級，天津市元立化工有限公司生產。3.5試驗設備BS110S電子天平，北京塞多利斯天平有限公司生產；UV2102-PC可掃描紫外可見光分光光度計，龍尼柯(上海)儀器有限公司生產；TG型高速離心機，上海安亭儀器廠生產；C02培養箱，2123TC，美國SHELDONMANUFACTURING,INC生產；37XB-Z型倒置顯微鏡，上海光學儀器六廠生產；353型酶標儀，ThermoLabsystems生產；板式離心機；流式細胞儀。3.6劑量設計表l:給藥劑量設計<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注環磷酰胺注射液劑量為100mg/kg,每周注射2次，間隔3天，相當于60kg成人臨床用量為850mg的7倍；云芝糖肽膠囊的給藥劑量為765mg/kg，相當于60kg成人服用量3.06g/日的15倍。4.試驗方法4.1受試樣品對S180荷瘤小鼠的作用選取健康NIH系小鼠85只，單性。復蘇腫瘤細胞S180細胞株，小鼠30只做移植瘤種鼠，觀察7-10天左右，凡是腹腔出現腹水的小鼠說明瘤株存活，另外55只用于實體瘤小鼠試驗。實驗開始時，取腹水種鼠20只，在超凈工作臺中將小鼠脫頸椎處死，依次用碘酒、75%酒精棉簽消毒腹部，用3ml無菌一次性注射器抽取腹水置于無菌干燥錐形瓶內，冰上保存，每只小鼠腹水應不少于5ml，一般抽7ml左右腹水，注意抽取的腹水應為乳黃色或乳白色液體，凡是有大量紅細胞存在的腹水棄去。將腹水稀釋100倍后，臺盼藍計數，細胞密度約為2X107/ml。用滅菌生理鹽水對腹水進行稀釋后備用。將稀釋好的腹水瘤于每只小鼠右腋下皮下注射0.2ml。全部合格的55只小鼠完成注射后，隨機分成5組，分別為空白對照組、復合真菌多糖低、中、高劑量組，陽性藥環磷酰胺對照組，每組ll只小鼠。第二天開始給藥，空白對照組小鼠每日灌胃給予等體積純凈水，2個受試樣品組小鼠每日灌胃給藥劑量見表1，環磷酰胺對照組小鼠腹腔注射環磷酰胺100mg/kg，每周2次。給藥后ll天后，處死所有小鼠，稱體重、瘤重、胸腺重量及脾臟重量。實驗結束后，進行統計學處理并比較組間差異。胸腺(脾臟)指數=胸腺(脾臟)重/體重XlOg體重變化=給藥后體重一給藥前體重抑制率％=(空白組瘤重一給藥組瘤重)+空白組瘤重乂100%4.2小鼠免疫功能試驗4.2.1小鼠碳廓清試驗選取健康KM雄性小鼠74只，體重18-22g，隨機分成6組，分別是正常對照組、環磷酰胺模型對照組、復合真菌多糖低、中、高劑量組及陽性對照組，每組11-13只小鼠。實驗前各組小鼠先灌胃給藥，每天1次，連續給藥4周，正常對照組和模型對照組小鼠灌胃給予同體積的純凈水。受試樣品和云芝糖肽膠囊對照組的給藥劑量見表1所示。同時用注射用環磷酰胺60mg/kg造成小鼠的免疫抑制模型，除正常對照組外，各組小鼠腹腔注射環磷酰胺劑量為60mg/kg，每周2次，間隔3天。于末次給藥30min后，尾靜脈注射已用生理鹽水稀釋10倍并經過濾的中華墨汁0.2ml/20g，注射后2min及10min時，用預先1%肝素鈉濕潤的吸管分別從眶后靜脈叢取血20w1溶于2ml0.1%Na2CO3溶液中搖勻，在波長A640nm下比色，測定光密度OD值。實驗結束后處死小鼠，分別稱取肝、脾、胸腺重量。按下列公式計算廓清指數K或校正系數a值。*K-(lgOD廣lgOD2)/(t2-h)注OD,，OD2:不同時間所取血樣的光密度；t2-ti:兩取血樣的時間差。*a-k1/3X體重/(肝重+脾重)注若肝脾重量差異不太大，只計算k值亦可。4.2.2小鼠遲發性超敏反應試驗選取健康NIH雄性小鼠86只，體重18-22g，隨機分成7組，分別是正常對照組、未致敏對照組、環磷酰胺模型對照組、復合真菌多糖低、中、高劑量組，云芝糖肽膠囊對照組，每組12-13只小鼠。實驗前各組小鼠先灌胃給藥，每天l次，連續給藥4周，正常對照組、未致敏對照組和環磷酰胺模型對照組小鼠灌胃給予同體積的純凈水。受試樣品和云芝糖肽膠囊對照組給藥劑量見表1所示。除正常對照組和未致敏對照組外，其它各組小鼠均腹腔注射環磷酰胺60mg/kg制備免疫低下小鼠模型，每周2次，間隔3天。從給藥第4周開始，除未致敏對照組外，其余各組用新鮮配制的7%DNCB丙酮麻油(丙酮:麻油=1:1)50Ul均勻涂沫在小鼠已經預先去毛的腹部皮膚，第2天再強化一次進行致敏，致敏5日后，用1%DNCB丙酮麻油溶液均勻涂沫在小鼠右耳進行攻擊，24小時后處死小鼠，用打孔器打下8mm左右耳片，稱重，計算左右耳片重量之差為腫脹度，以之表示DHT程度。進行統計學處理并比較組間差異。4.2.3對免疫低下小鼠血清溶血素的影響選擇健康KM小鼠74只，體重18-22g，隨機分成6組，分別是正常對照組、環磷酰胺模型對照組、復合真菌多糖低、中、高劑量組，陽性對照組，每組1011-14只小鼠。實驗前各組小鼠先灌胃給藥，每天1次，連續給藥4周，正常對照組和環磷酰胺模型對照組小鼠灌胃給予等體積純凈水，受試樣品及陽性對照組組小鼠給藥劑量按表l所示；給藥第l周開始，除正常對照組外，其它各組小鼠均腹腔注射環磷酰胺60mg/kg制備免疫低下小鼠模型，每周2次。于末次給藥30min后，各組小鼠腹腔注射3:5(V/V)SRBC懸液0.2ml進行免疫，5天后小鼠摘眼取血，分離血清，用生理鹽水稀釋100倍后進行溶血素測定。取上述稀釋的血清lml，依次加入10%SRBC懸液0.5ml、lmll:IO稀釋的豚鼠血清，對照管取lml生理鹽水，加入0.5ml10%SRBC懸液，lmll:10稀釋的豚鼠血清，然后37'C恒溫水浴中保溫10分鐘，孵畢即放入冰水中終止反應，用2000r/min離心10分鐘，取lml上清液，加入3ml都氏試劑混勻，放置10分鐘后，以對照管作為試劑空白(扣除補體的影響)，于540nm波長處比色，測定OD值。另取0.25ml10%SRBC懸液，用都氏試劑稀釋至4ml,，搖勻放置10分鐘后，于540nm測定SRBC半數溶血時的OD值。按下式計算樣品的半數溶血值(HC50)。樣品HC50=p2tC!業一x稀釋倍數IO。Si萬C半數溶血時的吸光度值4.2.4對正常小鼠T淋巴細胞增殖和轉化的影響試驗選擇健康NIH小鼠，體重18-22g，全為雄性，共66只，隨機分成5組，分別為正常對照組、復合真菌多糖低、中、高劑量組，陽性藥云芝糖肽膠囊對照組，每組12-16只小鼠。小鼠每日灌胃給藥l次，連續給藥4周。分三批進行下述實驗于末次給藥30min后，將小鼠脫頸椎處死，無菌取每只小鼠脾的同一部位，置于滅菌的1.5mlEP管內，加入lmlPBS液，用眼科剪先輕輕剪碎組織，再用吸管吹打，制備單細胞懸液。經200目篩網過濾2次，PBS洗滌2次，每次1000rpm離心5min，棄上清，懸浮于2mlRPMI1640培養液中，用臺盼蘭染色計數活細胞數(存活率應在95%以上)，調整細胞濃度為1乂107個/ml后，將細胞懸液分成2孔轉移至24孔培養板中，每孔lml，一孔立即加入75ulConA液(相當于7.5ug/ml)，另一孔作為對照，置于5%0)2培養箱內，37。C培養72h。培養結束前4小時，將24孔板的懸浮液轉移至96孔板內，作3個孔的平行樣，每孔100u1，加入50u1RPMI1640培養液，再加入MTT液(5mg/ml)50ul/孔，繼續培養4h。培養結束后，板式離心機1000rpm離心10min，小心吸去上清，每孔加入lOOulDMSO溶液，輕輕振蕩使結晶溶解并混合均勻，酶標儀450nm測定OD值，進行統計學處理并比較組間差異。4.2.5對正常小鼠NK細胞的影響選擇健康KM小鼠，體重18-22g，全為雄性，共51只，隨機分成5組，分別為正常對照組、復合真菌多糖低、中、高劑量組，陽性藥云芝糖肽膠囊對照組，每組10-11只小鼠。小鼠每日灌胃給藥l次，連續給藥4周。于末次給藥30min后，分兩批將小鼠摘眼采血0.5ml于EDTA-K2抗凝管內混勻，取50iil外周血于流式管，分別設定NKU抗體單染管及CD3抗體單染管。于各組小鼠外周血中，力口入小鼠NKl.l抗體2.5lU及CD3抗體2wl，避光反應15min，加入溶血素lml，避光反應10min后，1000rpm離心5min，棄上清，用2mlPBS洗滌l次，振蕩，1000rpm離心5min，棄上清；0.5ml多聚甲醛固定后4'C過夜，第二天振蕩重懸后上機。選取NK1.1呈陽性而CD3呈陰性的象限值，進行統計學處理并比較組間差異。5.試驗結果5.1受試樣品對S180荷瘤小鼠的作用結果表2:五個受試樣品對小鼠移植瘤試驗結果(x±SD，n=10,11)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注與同期空白對照組比較*P<0.05、**P<0.01、***P<0.001，AP>0.05(標志略)。由表1結果可得，多糖復合真菌多糖組小鼠體內取出的腫瘤重量均明顯下降，其中高劑量組與同期空白對照組相比，具有顯著性差異(PO.05);陽性藥環磷酰胺能夠明顯抑制腫瘤的生長，抑瘤率達到95.9%，但小鼠狀態很差，胸腺及脾臟的明顯萎縮，其中腫瘤重量、脾臟指數與同期空白對照組相比，具有顯著性差異(PO.OOl)。由此提示，復合真菌多糖具有一定的抑制腫瘤生長的作用，并能夠改善小鼠的生存狀態，減少對免疫器官的損害，可以考慮與化療藥物合并使用，發揮其減毒增效的作用。5.2小鼠免疫功能試驗結果5.2.1小鼠碳粒廓清試驗結果表3:五種受試樣品對小鼠碳粒廓淸試驗的影響(;c士SD，n=)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>由表3實驗結果可見，環磷酰胺模型對照組小鼠的體重、脾臟重量較小，胸腺明顯萎縮，廓清指數K值和校正系數ci值均明顯較小，與同期模型對照組相比，具有顯著性差異(PO.OOl)，說明腹腔注射環磷酰胺造成小鼠的免疫系統損傷，提示免疫低下模型制備成功；環磷酰胺模型對照組小鼠的肝臟重量與空白對照組相比無顯著性差異(P>0.05),提示環磷酰胺60mg/kg的用量下，對免疫功能低下小鼠的肝臟損傷程度較輕；以上均與臨床上使用環磷酰胺的安全性及副作用情形較符合。受試樣品給藥4周后，各組小鼠的體重增加緩慢，相應內臟器官的重量也增加緩慢，云芝糖肽膠囊對照組小鼠體重和肝臟重量也同樣出現這種情況，與同期模型對照組相比，具有顯著性差異(P<0.05、PO.Ol、PO.OOl)，可能因為免疫低下小鼠精神萎彌不振、活動量減少，再每日給予藥物后可能一定程度地影響其對基礎飼料的攝入量，因此體重及脾臟重量增加緩慢。復合真菌多糖能夠增加免疫低下小鼠的胸腺重量，廓清指數K值及校正系數a值明顯增加，云芝糖肽膠囊組小鼠的胸腺重量、K值和a值也增加，上述各指標與同期模型對照組相比，具有顯著性差異(P<0.05、PO.Ol、PO.OOl)，提示上述受試樣品對小鼠血液中的單核細胞及巨噬細胞的吞噬速率和每單位組織重量的吞噬活性影響較明顯，對免疫低下小鼠的非特異性免疫功能可能具有一定的增強作用。5.2.2對小鼠遲發性超敏反應試驗結果表4:受試樣品對小鼠遲發型超敏反應結果(;c士SD，n=)組別給藥劑量(rag/kg)動物數(n)腫脹度(％)提高率(％)正常對照組等體積124.43±1.90***——未致敏對照組等體積120.84±0.44——環磷酰胺模型組等體積130.99±0.78——復合低劑量組低131.03±0.614.4真菌中劑量組中121.88±1.08*89.9多糖高劑量組高122.59±1.12***161.6云芝糖肽膠囊對照組765122.31±1.32**133.3注與同期模型對照組比較*P<0.05、**P<0.01、***P<0.001。由以上實驗結果可得，未致敏組小鼠右耳受攻擊時無明顯腫脹發生，而正常對照組小鼠右耳受攻擊后發生明顯的腫脹反應，說明二硝基氯苯與動物皮膚接觸后，刺激T淋巴細胞轉化、增殖至致敏淋巴細胞，受到抗原攻擊時局部產生DTH反應，兩者之間具有顯著性差異(P〈0.00D。環磷酰胺模型對照組小鼠耳腫脹度最低，與其對T淋巴細胞較強的抑制作用有關，使T淋巴細胞絕對數目減少，小鼠免疫功能受到明顯抑制。給藥4周后，各組小鼠的耳腫脹度呈現不同程度的升高，其中復合真菌多糖中、高劑量組及陽性對照組小鼠耳腫脹度與同期模型對照組相比，具有顯著性差異(P<0.05、P<0.01、P〈0.001);復合真菌多糖低、中、高劑量組的提高率分別為4.4%、89.9%和161.6%;5.2.3對小鼠血清溶血素試驗結果表5:受試樣品對小鼠血清溶血素結果(jc士SD，n=)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>注與同期模型對照組比較*P<0.05、**P<0.01、***P<0.001。由以上實驗結果可得，環磷酰胺模型對照組小鼠HC5。顯著降低，與同期正常對照組相比具有顯著性差異(P〈0.00D，說明注射環磷酰胺引起小鼠體液免疫抑制發生，使血清溶血素的生成明顯降低。給藥4周后，測定各組小鼠的HCs。呈現不同程度的升高，其中復合真菌多糖高劑量組及陽性對照組小鼠的HC5。與同期模型對照組相比，具有顯著性差異(P〈0.05、P〈0.01、P〈0.001);復合真菌多糖低、中、高劑量組的提高率分別為24.5%、50.0%和72.4%;陽性對照組的提高率為133.5%;由此提示受試樣品能夠對抗注射環磷酰胺引起的小鼠的免疫功能下降的抗體水平。5.2.4對正常小鼠T淋巴細胞增殖和轉化試驗結果表6:受試樣品對正常小鼠T淋巴細胞增殖和轉化試驗結果(jc土SD，n=)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>注與同期正常對照組比較*P<0.05、**P<0.01、***P<0.001。T淋巴細胞與刀豆球蛋白(ConA)等有絲分裂原或特異性抗原一起體外培養時，可轉化成淋巴母細胞，并出現旺盛的分裂現象，活細胞特別是增殖細胞通過線粒體水解酶將MTT分解為紫紅色結晶而顯色，其光密度值能反映細胞的增殖情況。由表6實驗結果可得，正常對照組小鼠光密度差值最小，復合真菌多糖低、中、高三個劑量組與同期正常對照組相比，具有顯著性差異(P<0.05、P<0.01、P〈0.001);復合真菌多糖低、中、高劑量的提高率分別為90.2%、102.9%、110.3%。由此提示復合真菌多糖及陽性藥云芝糖肽膠囊能夠促進ConA誘導的小鼠脾臟內的T淋巴細胞增殖與轉化，提示其可能具有較好的細胞免疫調節作用。5.2.5對正常小鼠NK細胞免疫試驗結果表7:受試樣品對免疫低下小鼠血清溶血素結果(;c土SD，n=)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>注與同期正常對照組比較*P<0.05、**P<0.01、***P<0.001，AP>0.05(標志略)。天然殺傷性NK細胞是機體內存在的具有自然殺傷能力的細胞，是自發的細胞介導的細胞毒，其細胞毒活力雖比T細胞、K細胞弱，但作用發生快，是機體重要的非特異性防御功能之一。NK細胞能在無任何抗原刺激下，無需補體參與，即可破壞溶解細胞，目前臨床是采用流式細胞儀的方法檢測經特異性抗體標記的外周血中NK細胞的數量。由以上實驗結果可得，正常對照組小鼠服%為小鼠服1.1呈陽性而CD3呈陰性的細胞群，目的是去除NKT細胞的干擾；復合真菌多糖低、中、高劑量和陽性藥云芝糖肽膠囊的N跳值均明顯升高，復合真菌多糖高劑量組服%與同期正常對照組相比，均具有顯著性差異(P〈0.05)，提示復合真菌多糖可能具有較好的刺激NK細胞增殖的免疫調節作用。6.結論菌多糖樣品的移植瘤實驗、碳廓清實驗、DTH實驗、血清溶血素實驗、T淋巴細胞增殖與轉化實驗和NK細胞檢測實驗結果，依據中華人民共和國衛生部《保健食品檢驗與評價技術規范》(2003年版)判定復合真菌多糖具有免疫增強作用。權利要求1.一種具有增強免疫力功能的復合真菌多糖，其特征在于，由下述重量份配比的原料制備而成香菇8～100、茯苓15～100、竹蓀10～200、銀耳15～80、蝙蝠蛾擬青霉菌絲體2～50。2.根據權利要求1所述的具有增強免疫力功能的復合真菌多糖，其特征在于，各原料的重量份配比是香菇1050、茯苓4580、竹蓀30150、銀耳2555、蝙蝠蛾擬青霉菌絲體1050。3.根據權利要求1所述的具有增強免疫力功能的復合真菌多糖，其特征在于，各原料的重量份配比是香燕30、茯苳60、竹蓀90、銀耳40、蝙蝠蛾擬青霉菌絲體20。4.權利要求1所述的具有增強免疫力功能的復合真菌多糖在制備具有增強免疫力功能的保健食品中的應用。5.根據權利要求4所述的復合真菌多糖在制備具有增強免疫力功能的保健食品中的應用，其特征在于，所述保健食品的主要功效成分為所述復合真菌多糖。6.根據權利要求4所述的復合真菌多糖在制備具有增強免疫力功能的保健食品中的應用，其特征在于，所述保健食品的劑型是膠囊劑、片劑、粉劑、顆粒劑或口服液。全文摘要本發明公開了一種具有增強免疫力功能的復合真菌多糖，該復合真菌多糖由下述重量份配比的原料制備而成香菇8～100、茯苓15～100、竹蓀10～200、銀耳15～80、蝙蝠蛾擬青霉菌絲體2～50。本發明還公開了所述復合真菌多糖在制備具有增強免疫力功能的保健食品中的應用。本發明復合真菌多糖的特點是以富含活性多糖的食(藥)真菌為主料，利用各種多糖成分合理組合、配合共用，通過多種途徑增強機體免疫力，對亞健康保健具有良好的效果。將本發明復合真菌多糖為主要功效成分制備的保健食品，對增強免疫力具有明顯的效果，對亞健康人士具有良好的保健作用。文檔編號A61K36/076GK101618050SQ200910041320公開日2010年1月6日申請日期2009年7月23日優先權日2009年7月23日發明者健唐,徐曉飛,方文娟,珍羅,馬忠華申請人:無限極(中國)有限公司