專利名稱：一種用于抗hbv病毒的藥用組合物的制作方法
技術領域：
本發明為一種用于抗HIV病毒的藥用組合物，屬于醫藥技術領域。
背景技術：
乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)感染引起的死亡率較高的一種傳染性疾病。全 球大約有20億人感染過或者正在感染HBV，慢性乙型肝炎患者約有3. 5億人。據估計，我國 的慢性無癥狀HBV攜帶者可能超過1. 2億人。世界醫學工作者為乙肝的發病及防治進行了 大量的研究。目前，抗HBV的藥物主要為干擾素一 a及核苷類似物，這些藥物對部分乙肝患 者有顯著效果，如果治療有的放矢，病例選擇得當，藥物將發揮最大治療作用。由于每種抗 病毒藥物均有其副作用，因此，抗病毒藥物聯合應用是治療慢性乙型肝炎的重要方向，可以 是一種免疫調節劑和一種核苷類似物的聯合，也可以是2 3種核苷類似物的聯合。但迄 今還無公認的聯合療效較好的治療方案，需進一步加強研究。近年來，核苷類似物(NA)是發展最快，品種不斷增加的抗乙型肝炎病毒(HBV)的 藥物。實驗研究和臨床實踐均表明慢性乙型肝炎患者采用NA治療口服方便，能有效抑制 HBV復制，使肝功能恢復，肝組織學改善，防止或延緩慢性乙型肝炎進展為肝硬化、肝功能失 代償、肝細胞癌。但長期應用核苷類似物存在病毒變異和耐藥的問題，后者可能引發一系列 嚴重后果。所以預防耐藥的關鍵就是要合理應用核苷類似物。泰立福韋是一種新型的無環核苷膦酸類化合物，口服后水解為泰諾福韋，泰諾福 韋被細胞激酶磷酸化，生成具有藥理活性的代謝產物泰諾福韋二磷酸，后者與5L三磷酸脫 氧腺苷酸競爭，參與HIV病毒和HBV病毒DNA的合成，進入病毒DNA后由于缺乏3-羥基而 導致DNA延長受阻。泰立福韋具有較強的抗HIV和抗HBV活性，而且細胞毒性較低，比泰諾 福韋具有更高的生物利用度高。經過藥理學研究，我們發現當泰立福韋與其它另外一種或 多種類核苷(酸)抗病毒藥物合用時，能明顯的提高抗病毒的活性，且能顯著預防其耐藥性 的形成。

發明內容
本發明為一種用于抗HBV病毒的藥用組合物。它是由泰立福韋和另外一種或多種 類核苷(酸)抗病毒藥物形成的活性成分，與藥學上可接受的輔料組合而成。所述的類核 苷(酸)抗病毒藥物包括拉米夫定、泰立福韋、恩替卡韋、替比夫定、恩曲他濱等。其中泰立 福韋的單位用量為30-1500mg，優選300mg。拉米夫定的單位用量為10_500mg，優選lOOmg。 阿德福韋酯的單位用量為l-100mg，優選10mg。恩替卡韋的單位用量為50-2500mg，優選 500mg。替比夫定的單位用量為60-3000mg，優選600mg。恩曲他濱的單位用量為20_1000mg， 優選200mg。所述的藥用組合物，可制成口服制劑，包括片劑、膠囊、分散片、咀嚼片、口腔崩 解片、口含片、滴丸、軟膠囊劑等，用于乙型病毒肝炎的治療。本發明通過以下實驗進一步說明本復方在用于抗乙肝病毒，尤其是對耐藥菌株 的作用新組方的藥效學試驗細胞株及實驗設計所用細胞為YMDD變異HBV DNA轉染的HepG22. 2. 15細胞株。該細胞含有整合的YMDD變異HBV DNA，在培養過程中，能持續、穩定 地向培養液中分泌HBsAg及HBV DNA。H印G22. 2. 15細胞在含10%的胎牛血清培養液中生 長到70%培養瓶面積(約3X106細胞，25cm2培養瓶)時，改用含2%的胎牛血清培養液， 并開始給予新組方治療(治療組1 (泰立福韋Z^gmr1—拉米夫定Sugmr1)、治療組2 (泰立 福韋ZAugmr1—替比夫定‘Sugmr1)、治療組3 (泰立福韋ZAugmr1—阿德福韋0. SugmF1)、治 療組4 (泰立福韋ZAugmr1—恩替卡韋^ugmr1)，治療組5 (泰立福韋ZAugmr1—恩曲他濱 leugmr1)，治療組6 (泰立福韋24ugmr1+恩曲他濱leugmr、替比夫定48ugmr1)，治療組 7 (泰立福韋ZAugmr1—恩替卡韋^ugmr1—拉米夫定Sugml—1)，治療組8 (泰立福韋？彳呢！^-、 恩替卡韋40ugml_1+阿德福韋0. SugmF1)，總培養液量5ml/25cm2)，并應用相同的細胞不含 藥物同期培養作對照(對照組)，每2d換培養液一次。治療組補充新的相同濃度的新組方， 并治療10d。細胞上清液收集后，進行HBV病毒學指標的檢測。HBsAg的ELISA定量監測應用美國Abbott公司提供的試劑盒定量檢測細胞培養液 中HBsAg的量。HBVDNA定量檢測應用美國Chiron公司提供的試劑盒，應用分支鏈DNA法(bDNA)， 定量檢測細胞培養液中HBV DNA含量。細胞生長及毒性監測在治療期間及治療結束時，每日觀察細胞形態。在收集細胞 時.先用胰蛋白酶處理，并用Trypan藍染色計數。細胞毒性應用熒光分光光度法測定總細 胞DNA量來反映。統計學處理定量檢測的HBsAg、HBV DNA結果，在對照組及治療組應用t檢驗進行 統計學處理。結果發現新組方對細胞培養液中HBsAg的抑制作用結果見表1。表1表明，在各 治療組，細胞培養液中的HBsAg，在治療的第2天起，開始下降，至治療結束時(第10天)， HBsAg明顯降低。而在對照組，Ifep G22. 2. 15細胞培養液中的HBsAg隨著培養時間的進展， 穩定、持續地分泌，經統計學處理，治療組與對照組從第六天開始，差異有顯著性(P < 005. n = 6)。表1對HBsAg抗原的抑制作用(ugml—1) 新組方對細胞外HBVDNA的抑制作用結果見表2。表2表明，在新組方治療第2天 起，細胞外HBVDNA即開始下降，在治療過程中及治療結束時，細胞外HBV DNA明顯下降。而 在對照組，細胞外HBV DNA,隨著培養時間的進展，持續、穩定地分泌表達。經統計學處理，從治療第4天起，差異有顯著性.而在治療結束時(第10天)，差異有高度顯著性(P<0.01， n = 6)。表2對HBV-DNA的抑制作用(Pgmr1) 2)新組方的細胞毒性評價。在治療過程中，對照組及治療的細胞形態，每日用相差顯微鏡觀察，未發現明顯的 變化。治療完成時，應用Trypan藍染色計數，兩組的細胞總數，二者之間差異無顯著性(P > 005, n = 6)應用熒光分光光度法，測定細胞總DNA。在對照組及治療組之間，細胞總DNA 量，差異無顯著性(P > 0. 05, n = 6)。結果表明在新組方治療過程及治療完成時，與對照 組相比，新組方對H印G22. 2. 15細胞的形態、分裂與生長及細胞DNA的合成無明顯的影響， 在該實驗藥物濃度下，新組方細胞毒性作用不明顯。
具體實施例方式實施例1復方泰立福韋拉米夫定片處方 制備方法將泰立福韋、拉米夫定分別過80目篩，采用等量遞增法混合均勻，備用；將微晶纖 維素、CMS-Na、硬脂酸鎂其中，充分混合均勻，粉末直接壓片，即得。實施例2 復方泰立福韋拉米夫定膠囊劑
處方 制備方法將泰立福韋、拉米夫定、預膠化淀粉分別過80目篩，采用等量遞增法混合均勻，加 入滑石粉，分裝，即得。實施例3 復方泰立福韋替比夫定咀嚼片劑處方 制備方法將泰立福韋等原輔料分別過80目篩，采用等量遞增法混合均勻，備用；加入2% PVP-k30乙醇溶液，制軟材，16目篩制粒，干燥，20目篩整粒，加入其他的矯味劑、甜味劑、 助流劑混合均勻，壓片，即得。實施例4 復方泰立福韋阿德福韋酯分散片劑處方
6 制備方法將泰立福韋、阿德福韋酯等原輔料分別過80目篩，采用等量遞增法混合均勻，備 用；加入75%乙醇溶液，制軟材，16目篩制粒，干燥，20目篩整粒，加入其他的矯味劑、甜味 劑、助流劑、崩解劑等混合均勻，壓片，即得。實施例5 復方泰立福韋恩替卡韋口腔崩解片處方 制備方法取以上各原輔料，均過100目篩，備用。取恩替卡韋，按照等量遞加法與微粉硅膠、 部分預膠化淀粉、泰立福韋混合均勻后，再加入等量其他輔料混合均勻，采用粉末直接壓片法進行壓片，即得。實施例6 復方泰立福韋恩曲他濱片處方 制備方法將泰立福韋、恩曲他濱分別過80目篩，采用等量遞增法混合均勻，備用；將微晶纖 維素、CMS-Na、硬脂酸鎂其中，充分混合均勻，粉末直接壓片，即得。實施例7 復方泰立福韋膠囊劑處方 制備方法將泰立福韋、恩替卡韋、拉米夫定分別過80目篩，采用等量遞增法混合均勻，備 用；將微晶纖維素、CMS-Na、硬脂酸鎂其中，充分混合均勻，粉末直接壓片，即得。
權利要求
本發明為一種用于抗HBV病毒的藥用組合物，其特征在于它是由泰立福韋和另外一種或多種類核苷(酸)抗病毒藥物形成的活性成分，與藥學上可接受的輔料組合而成。
2.權利要求1所述的藥用組合物，其特征在于所述的類核苷(酸)抗病毒藥物包括 拉米夫定、泰立福韋、恩替卡韋、替比夫定、恩曲他濱等。
3.權利要求1所述的藥用組合物，其特征在于泰立福韋的單位用量為30-1500mg，優 選 300mgo
4.權利要求1所述的藥用組合物，其特征在于拉米夫定的單位用量為10-500mg，優選 IOOmg0
5.權利要求1所述的藥用組合物，其特征在于阿德福韋酯的單位用量為1-lOOmg，優 選 10mg。
6.權利要求1所述的藥用組合物，其特征在于恩替卡韋的單位用量為50-2500mg，優 選 500mgo
7.權利要求1所述的藥用組合物，其特征在于替比夫定的單位用量為60-3000mg，優 選 600mgo
8.權利要求1所述的藥用組合物，其特征在于恩曲他濱的單位用量為20-1000mg，優 選 200mgo
9.權利要求1所述的藥用組合物，其特征在于，可制成口服制劑，包括片劑、膠囊、分散 片、咀嚼片、口腔崩解片、口含片、滴丸、軟膠囊劑等。
10.權利要求1所述的復方藥用組合物可用于乙型病毒肝炎的治療。
全文摘要
本發明為一種用于抗HBV病毒的藥用組合物，它是由泰立福韋和另外一種或多種類核苷(酸)抗病毒藥物形成的活性成分，與藥學上可接受的輔料組合而成。其中類核苷(酸)抗病毒藥物包括拉米夫定、泰立福韋、恩替卡韋、替比夫定、恩曲他濱等。此種組合物可制成口服制劑用于乙型病毒肝炎的治療，包括片劑、膠囊、分散片、咀嚼片、口腔崩解片、口含片、滴丸、軟膠囊劑等。
文檔編號A61K31/522GK101849952SQ20091008123
公開日2010年10月6日 申請日期2009年3月30日 優先權日2009年3月30日
發明者李寶齊, 王曉丹 申請人:北京利樂生制藥科技有限公司