專利名稱：一種具有免疫增強作用的補骨脂提取物及應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于醫藥領域，具體而言是一種中草藥提取物，主要涉及含有補 骨脂總苷的補骨脂提取物，以及在制備升高白細胞的藥物中的應用。
背景技術：
目前，在全球范圍內，中草藥都有一定的市場，隨著人們對健康要求認 識水平的增高以及人口的老齡化，亞健康狀態化，人們更加渴望回歸自然， 利用純天然程度高的藥物治療、預防一些化學合成藥物所不能解決得問題， 因此天然植物藥的應用超出它原來民族傳統文化的背景。從天然藥物中尋求 副作用小、且物美價廉的藥物成為世界各國醫藥企業所追逐的目標。歐共體 對草藥進行了統一立法，加拿大和澳大利亞等國草藥地位已經合法化，美國 政府也已起草了植物藥管理辦法，開始接受天然藥物的復方混合制劑作為治 療藥，這些為中藥作為治療藥進入國際醫藥市場提供了良好的國際環境。另
一方面，隨著全球經濟一體化進程的加快，特別是我國正式加入WTO，中 國醫藥市場融入國際醫藥大市場的廣度和深度將進一步加劇。面臨強大跨國 醫藥集團的激烈競爭以及日本、韓國、印度、泰國等亞洲國家傳統醫藥產品 和德國、法國等歐洲國家植物藥的巨大沖擊，我國傳統中藥產生的眾多產品 由于尚不能符合國際醫藥市場的標準和要求而被拒之門外。
中藥補骨脂為豆科植物補骨脂(PsoraleacorylifoliaL)果實，性溫，味 辛，具補腎助陽之功效。主治腎虛冷瀉，小便頻數，陽萎，腰膝冷痛，虛寒 喘咳，外用治白癜風。現代研究表明，補骨脂具有擴張血管，增加心肌收縮 力，抗菌，雌性激素樣作用，治療白癜風等生理活性。補骨脂含有多種活性 成分，以補骨脂苷和異補骨脂苷為代表的苷類是其重要的活性成分之一，目 前尚沒有以補骨脂總苷為主要成分的藥物面世。
發明內容
本發明的目的在于提供一種補骨脂總苷提取物，主要含有重量百分比為 40-50%的補骨脂苷和40-50%的異補骨脂苷， 補骨脂苷結構式<formula>formula see original document page 4</formula>
本發明的另一個目的是提供所述的補骨脂總苷提取物在制備升高白細胞 的藥物中的應用。
本發明所述的補骨脂總苷提取物，與制劑允許的敷料或賦形劑制備成任 何一種藥劑學上所說的劑型，也可配合其他藥物或組分一起制成制劑使用。 所述藥物的制劑形式包括液體制劑、顆粒劑、片劑或膠丸。所述藥物的給藥 方式包括口服給藥或注射給藥。
本發明首次得到了一種成分明確，療效顯著的補骨脂總苷提取物，該補
骨脂總苷提取物中補骨脂苷和異補骨脂苷的含量均可達到40%以上，藥理實 驗證明，該補骨脂總苷以及其含有的補骨脂苷和異補骨脂苷均能對抗環磷酰 胺所致的白細胞降低，具有顯著的免疫增強作用。
圖l補骨脂總苷色譜圖。
圖2補骨脂苷氫譜。
圖3補骨脂苷碳譜。
圖4補骨脂苷DEPT譜。
圖5異補骨脂苷氫譜。
圖6異補骨脂苷碳譜。
圖7異補骨脂苷DEPT譜。
具體實施例方式
本發明結合附圖和實施例作進一步的說明。實施例一
取補骨脂lkg， 5(TC千燥6小時，加10倍量水微沸狀態加熱回流提取2 次，每次2小時，提取液過濾，減壓濃縮，醇沉，調節醇濃度至70%，取上 清液，濃縮至無醇后加乙酸乙酯萃取3遍，分離水層，上大孔樹脂，用水沖 洗至無糖(molish反應)，棄去，繼續用70%乙醇水溶液洗脫。收集洗脫 液，減壓濃縮至無醇，冷凍干燥，即得補骨脂總苷。經液相分析，含有兩個 主要成分，含量分別為40-50%，參見圖l，圖中l為異補骨脂苷，2為補骨 脂苷。將分離得到異補骨脂苷和補骨脂苷，分別做氫譜，碳譜，DEPT譜，參 見圖2-圖7，可以確認l為異補骨脂苷，2為補骨脂苷。
實施例二 補骨脂總苷對環磷酰胺所致正常小鼠白細胞計數降低的影響
1. 實驗目的考察補骨脂總苷對環磷酰胺所致白細胞降低的影響。
2. 實驗材料
2. l藥品與試劑阿膠，山東東阿阿膠股份有限公司，批號0311101; 注射用環磷酰胺(CTX)，江蘇恒瑞醫藥股份有限公司，批號7063021;白 細胞稀釋液冰醋酸2ml， ln/。龍膽紫lml，蒸餾水加至100ml。
2.2實驗器材細胞計數板，顯微鏡，1000|dl、 lOOial微量移液器。 2.3實驗動物ICR小鼠，雌雄對半，體重18-22g，由浙江省醫學科學院 動物中心提供。
3. 方法與步驟
3. l取健康18-22glCR小鼠，在本實驗室條件下詞養2天后，隨機分
組
正常對照組等容積生理鹽水 模型組等容積生理鹽水 阿膠組1.5g《g";
實驗組低、高劑量組(生藥量2g'Kg"、 4g'Kg");
每組10只。各組小鼠連續給藥8天。
3.2給藥第3天，每只小鼠腹腔注射環磷酰胺100mg/kg (0.2ml/10g)。 3.3第8天(注射環磷酰胺后第五天)給藥2h后，眼眶靜脈取血，吸取
20|11血液，立即轉入380pl白細胞稀釋液，輕輕搖動1 2分鐘，充分混勻后計數。
4. 實驗結果
實驗結果顯示，注射環磷酰胺后第五天，模型組白細胞計數為 (3.33±0.98) xio6/ml，較正常組(7.24±1.62) xio6/ml明顯降低，差異有顯著 意義(尸<0.01)。低劑量組與高劑量組白細胞計數為(4.05±0.80) xio6/ml、 (4.29±1.37) xl06/ml，較模型組明顯升高，差異有顯著意義(/><0.05， /><0,05)。陽性對照組(阿膠組)白細胞計數為(4.05±0.83) xl06/ml，較模型 組明顯升高，差異有顯著意義(尸<0.05)。 一
表l補骨脂總苷對環磷酰胺所致正常小鼠白細胞計數降低的影響(Y士l "=10) ^ , 劑量 白細胞計數
(g.Kg") (xl06/ml)
注與正常組比較><0.05，》<0.01; 與模型組比較A尸〈0.05， AAP<0.01。 5.結論
補骨脂總苷低、高劑量均能對抗環磷酰胺所致的白細胞降低。
實施例三 補骨脂苷對環磷酰胺所致正常小鼠白細胞計數降低的影響
1. 實驗目的考察補骨脂苷對環磷酰胺所致白細胞降低的影響。
2. 實驗材料
2. 1藥品與試劑
阿膠，山東東阿阿膠股份有限公司，批號0311101; 注射用環磷酰胺(CTX)，江蘇恒瑞醫藥股份有限公司，批號
07063021;
白細胞稀釋液冰醋酸2ml，P/。龍膽紫lml，蒸餾水加至100ml。 2.2實驗器材細胞計數板，顯微鏡，100(^1、 微量移液器。
2. 3實驗動物
ICR小鼠，雌雄對半，體重18-22g，由浙江省醫學科學院動物中心提供。
3. 方法與步驟
3.1取健康18-22glCR小鼠，在本實驗室條件下飼養2天后，隨機分組: 正常對照組等容積生理鹽水 模型組等容積生理鹽水 阿膠組1.5g《g";
實驗組低、高劑量組(O.lg'Kg'1、 0.3g'Kg"); 每組10只。各組小鼠連續給藥8天。
3.2給藥第3天，每只小鼠腹腔注射環磷酰胺100mg/kg (0.2ml/10g)。
低劑量組 2 4.05±0.80A
高劑量組 4 4.29±1.37A
組 1.5 4.05±0.83A
組 一 3.33士0.98"
組 一 7.24±1.62
膠型常
阿模正3.3第8天(注射環磷酰胺后第五天)給藥2h后，眼眶靜脈取血，吸取 20^1血液，立即轉入380iil白細胞稀釋液，輕輕搖動1 2分鐘，充分混勻后 計數。
4.實驗結果
實驗結果顯示，注射環磷酰胺后第五天，模型組白細胞計數為
(3.33±0.98) xl06/ml，較正常組(7.24±1.62) xl06/ml明顯降低，差異有顯著
意義(/><0.01)。低劑量組與高劑量組白細胞計數為(3.82±0.66) xio6/ml、
(3.99±1.12) xio6/ml，較模型組明顯升高，差異有顯著意義(尸<0.05， P<
0.05)。陽性對照組(阿膠組)白細胞計數為(4.05±0.83)xl06/ml，較模型組
明顯升高，差異有顯著意義(尸<0.05)。
表2補骨脂苷對環磷酰胺所致正常小鼠白細胞計數降低的影響(丁士^ n=10)
》 劑量 白細胞計數
一 (g'Kg") (xl06/ml)
低劑量組 0.1 3.82±0.66"
高劑量組 0.3 3.99士1.12"
阿膠組 1.5 4.05士0.83"
模型組 一 3.33±0.98*
正常組 一 7.24±1.62
注與正常組比較'尸<0.05， "P<0.01; 與模型組比較A尸〈0.05， AA/><0.01。 5.結論
補骨脂苷低、高劑量均能對抗環磷酰胺所致的白細胞降低。
實施例四異補骨脂苷對環磷酰胺所致正常小鼠白細胞計數降低的影響
1. 實驗目的考察異補骨脂苷對環磷酰胺所致白細胞降低的影響。
2. 實驗材料
2. l藥品與試劑阿膠，山東東阿阿膠股份有限公司，批號0311101;
注射用環磷酰胺(CTX)，江蘇恒瑞醫藥股份有限公司，批號07063021; 白細胞稀釋液冰醋酸2ml，l。/。龍膽紫lml，蒸餾水加至100ml。
2.2實驗器材細胞計數板，顯微鏡，100(^1、 10(Hil微量移液器。
2. 3實驗動物
ICR小鼠，雌雄對半，體重18-22g，由浙江省醫學科學院動物中心提供。
3. 方法與步驟3. l取健康18-22glCR小鼠，在本實驗室條件下飼養2天后，隨機分
組
正常對照組等容積生理鹽水 模型組等容積生理鹽水 阿膠組1.5g'Kg";
實驗組低、高劑量組(O.lg'Kg"、 0.3g'Kg"); 每組10只。各組小鼠連續給藥8天。
3.2給藥第3天，每只小鼠腹腔注射環磷酰胺100mg/kg (0.2ml/10g)。 3.3第8天(注射環磷酰胺后第五天)給藥2h后，眼眶靜脈取血，吸取
20iul血液，立即轉入38(^1白細胞稀釋液，輕輕搖動1 2分鐘，充分混勻后計數。
4. 實驗結果
實驗結果顯示，注射環磷酰胺后第五天，模型組白細胞計數為 (3.33±0.98) xl06/ml，較正常組(7.24±1.62) xl06/ml明顯降低，差異有顯著
意義(尸<0.01)。低劑量組與高劑量組白細胞計數為(4.01土1.02) xl06/ml、 (3.89±0.65) xl0Vml，較模型組明顯升高，差異有顯著意義(戶<0，05,戶<
0.05)。陽性對照組(阿膠組)白細胞計數為(4.05±0.83) xl06/ml，較模型
組明顯升高，差異有顯著意義(尸<0.05)。 —
表3異補骨脂苷對環磷酰胺所致正常小鼠白細胞計數降低的影響(丁士s, "=10)
^ Si 白細胞計數
(g.Kg") (xl06/ml)
低劑量組 0.1 4.01±1.02￡
高劑量組 0.3 3.89±0.65"
阿膠組 1.5 4.05±0.83"
模型組 一 3.33±0.98*
正常組 一 7.24±1.62
注與正常組比較*戶<0.05， "P<0.01; 與模型組比較^<0.05， AAP<0.01。 5.結論
異補骨脂苷低、高劑量均能對抗環磷酰胺所致的白細胞降低。 實施例五 滴丸的制備
取補骨脂總苷0.5g與10.5g聚乙二醇-6000混合均勻，加熱熔融，化料后 移至滴丸滴灌中，藥液滴至6 8"C液體石蠟中，除油，制得滴丸300粒。 實施例六凍干粉針劑的制備取降香油1.5g,加入到13ml飽和的羥丙基(3-環糊精中，攪拌溶解，濾 過，濾液低溫干燥得降香油和羥丙基P-環糊精的包合物粉末。除上述降香油 合羥丙基!3-環糊精的包合物粉末外，再取補骨脂總苷0.5g、甘露醇5.5g、依 地酸鈣鈉0.9g和蒸餾水2ml，上述組分混勻后，冷凍干燥，分裝350支，即 得。
實施例七片劑的制備
取補骨脂總苷100克，與微晶纖維素混合均勻，加3%聚維酮乙醇溶液制 軟材，過18目篩制顆粒，6(TC干燥1小時，整粒，加入滑石粉適量，混勻， 壓片，即得。
實施例八膠囊的制備
取補骨脂苷與花生油按2: 18的比例(重量比)水溶式不銹鋼攪拌灌 中，同時加入適量明膠和甘油混合，放出再用膠體磨磨漿，磨出的混合液攪 拌，制成藥液；將甘油與蒸餾水在40-5(TC溫度下攪拌混溶，再將甘油液溫至 80-90°C，取明膠加入其中混合攪拌，直至全部溶化成膠液，然后在6(TC溫度 下使膠液靜置4小時，用制板機制成膠板供制丸工序使用；將上述制成的藥 液和膠板送入壓丸機制丸，然后在22-25-C溫度下吹風4小時作滾筒定型，又 在25-30。C溫度下吹風干燥16-20小時，檢選合格膠丸，用95%乙醇清洗，在 25-3(TC下吹風干燥4小時，即得。
實施例九 注射液的制備
取異補骨脂苷100克(同實施例七)用40。C注射用水溶解，加入適量藥 用載體等滲劑，調節溶液的pH值為7.0-8.0，加注射用水至全量，用超濾器超 濾除熱源，測定pH值后，用膜過濾，分裝后，高壓滅菌，檢驗、包裝，即 得。
權利要求
1.一種補骨脂總苷提取物，其特征在于提取物含有重量百分比為40-50％的補骨脂苷和40-50％的異補骨脂苷。
2. 根據權利要求1所述的一種補骨脂總苷提取物在制備升高白細胞的藥 物中的應用。
3. 根據權利要求l所述的一種補骨脂總苷提取物的應用，其特征在于 所制備的藥物還含有制劑允許的藥物賦形劑或敷料。
4. 根據權利要求3所述的一種補骨脂總苷提取物的應用，其特征在于所述藥物的制劑形式包括液體制劑、顆粒劑、片劑或膠丸。
5. 根據權利要求4所述的一種補骨脂總苷提取物的應用，其特征在于所述藥物的給藥方式包括口服給藥或注射給藥。
全文摘要
本發明提供一種補骨脂總苷提取物，主要含有40-50％的補骨脂苷和40-50％的異補骨脂苷。所述的補骨脂總苷提取物，與藥劑學允許的敷料或賦形劑制備成任何一種藥劑學上所說的劑型，也可配合其他藥物或組分一起制成制劑使用。藥理實驗證明，該補骨脂總苷以及其含有的補骨脂苷和異補骨脂苷均能對抗環磷酰胺所致的白細胞降低，具有顯著的免疫增強作用，可在制備升高白細胞的藥物中的應用。
文檔編號A61P37/00GK101554399SQ200910098768
公開日2009年10月14日 申請日期2009年5月14日 優先權日2009年5月14日
發明者斌 吳, 瞿海斌, 程翼宇 申請人:浙江大學