專利名稱：：治療潰瘍性結腸炎的中成藥顆粒劑的制備工藝的制作方法
技術領域：
：本發明涉及一種治療潰瘍性結腸炎的中成藥顆粒劑的制備工藝。
背景技術：
：目前，治療潰瘍性結腸炎的藥物基本上只能根據處方配置的藥材現熬成湯劑服用，尚未有較為有效的治療潰瘍性結腸炎的中成藥顆粒劑及其制備工藝，這種現狀一方面給病人的治療帶來很大不便，另一方面由于湯劑的療效受其熬制方法和熬制時間的影響較大，給治療效果也帶來一定程度的影響。此外，在常規的顆粒劑制劑工藝中，揮發油是直接噴灑在顆粒劑中。由于揮發油化學性質很不穩定，隨著顆粒劑保存時間的延長，顆粒劑中的揮發油會發生質和量的變化，從而影響藥物的療效。
發明內容本發明的目的在于提供一種治療潰瘍性結腸炎的中成藥顆粒劑的制備工藝，它能較好的保持藥物療效，使本發明制作的中成藥顆粒劑達到甚至優于中藥湯劑的治療效果。本發明的技術方案是這樣構成的一種治療潰瘍性結腸炎的中成藥顆粒劑的制備工藝，其特征在于，它包括以下制備步驟(1)揮發油提取工藝按照重量份數比取砂仁4-8份、防風4-8份、荷葉15-25份三味藥材粉碎后，加2.5-7.5倍體積量的水，不浸泡，直接進行4-10小時的揮發油提取，提取揮發油后，剩余濾液A;(2)煎煮液提取工藝按照重量份數比取白芍10-15份、淮山藥25-35份、黨參15-20份、野麻草25-35份、甘草3-8份、白術10-15份六味藥材，將其中一味藥材淮山藥的10%磨為細粉，淮山藥的剩余90%與其余五味藥材混合后，浸泡30-90分鐘，之后加水煎煮1-5次，每次煎煮1-2小時，每次加入的水的數量是浸泡前藥材的4-12倍體積量，將每次煎煮所得濾液合并得到濾液B;(3)揮發油的包合工藝將步驟(1)提取的揮發油用其6_12倍體積量的95%乙醇溶解后，加入體積量為揮發油的8-12倍的13-環糊精45-6(TC飽和溶液中，先恒溫攪拌1-2小時，再靜置18-28小時，接著抽濾后將濾渣低溫干燥得到白色干燥粉末；(4)濃縮將濾液A和濾液B合并后，加95X的乙醇稀釋至含醇量為70%，靜置18-28小時，抽濾后得到濾液，水浴濃縮后恒溫干燥得干固物，在干固物內加入P-環糊精及步驟(2)制得的淮山藥細粉，e-環糊精及淮山藥細粉的總和量為干固物重量的1-1.5倍，之后噴霧干燥得到干燥粉末；(5)制成顆粒劑將步驟(3)和(4)得到的干燥粉末合并，混合均勻，干壓制粒，分裝，包裝，質檢，獲得成品。本發明上述技術方案的優選方案如下步驟(1)中，三味藥材的重量份數比為砂仁6份、防風6份、荷葉20份，加入的水的數量是該步驟所述的三味藥材的5倍體積量，揮發油提取的時間為7小時。步驟(2)中，六味藥材的重量份數比為白芍15份、淮山藥30份、黨參20份、野麻草30份、甘草5份、白術10份，浸泡時間為60分鐘，煎煮次數為3次，每次煎煮時間為1.5小時，每次煎煮時加入的水的數量是該步驟浸泡前藥材的8倍體積量。步驟(3)中，所述乙醇的體積量為揮發油的9倍；所述P-環糊精飽和溶液的溫度為55t:，體積量為揮發油的10倍；恒溫攪拌時間為1.5小時，靜置時間為24小時。步驟(4)中，靜置時間為24小時，e-環糊精及淮山藥細粉的總和量為干固物重量的1.2倍。較之現有技術而言，本發明具有以下優點1、通過實驗表明，本發明制備方法生產的中成藥顆粒劑治療效果優于原配方中藥湯劑的治療效果。2、本發明能較好地提高治療潰瘍性結腸炎中成藥制劑穩定性，不但相同療效下，減少原湯劑的服用量，且具有體積小、重量輕、易于運輸攜帶與儲藏、服用方便等特點。3、本發明的制備工藝中，P-環糊精包合揮發油的工藝技術是制備過程中的重要環節，實驗結果表明應用該工藝后制粒容易，顆粒較理想，粉得率比較高，包合率可達70%左右，達到設計要求，證明該工藝可行。山藥粉末為配方所有，制劑過程最后階段和P-環糊精一起加入，既符合制劑要求，又降低成本，并減少了患者的服用劑量。本發明不但增加藥物穩定性，且提高生物利用度及其藥物療效，且為該中成藥顆粒劑的研究及后續實驗奠定基石出。4、本制劑工藝技術質量控制好，可重復性強。圖1是久瀉寧顆粒等實驗組對UC大鼠血清IL-2的影響對比示意圖。圖2是久瀉寧顆粒等實驗組對UC大鼠血清TNF-a的影響對比示意圖。圖3是正常對照組的光鏡下病理切片示意圖。圖4是正常對照組的光鏡下病理切片示意圖。圖5是UC模型組的光鏡下病理切片示意圖。圖6是UC模型組的光鏡下病理切片示意圖。圖7是陽性對照組的光鏡下病理切片示意圖。圖8是久瀉寧顆粒低劑量組的光鏡下病理切片示意圖。圖9是久瀉寧顆粒中劑量組的光鏡下病理切片示意圖。圖10是久瀉寧顆粒高劑量組的光鏡下病理切片示意圖。具體實施例方式下面結合具體實施例和制備工藝研究過程對本
發明內容進行詳細說明—.實施例如下實施例1按以下制備步驟制備治療潰瘍性結腸炎的中成藥顆粒劑(1)揮發油提取工藝按照重量份數比取砂仁6份、防風6份、荷葉20份三味藥材粉碎后，加約三味藥材的5倍體積量的水，不浸泡，直接進行7小時左右的揮發油提取(按照傳統工藝)，提取揮發油后，剩余濾液A;(2)煎煮液提取工藝按照重量份數比取白芍15份、淮山藥30份、黨參20份、野麻草30份、甘草5份、白術10份六味藥材，將其中一味藥材淮山藥的10%磨為細粉，淮山藥的剩余90%與其余五味藥材混合后，浸泡約60分鐘，之后加水煎煮3次，每次煎煮1.5小時左右，每次加入的水的數量大約是浸泡前藥材的8倍體積量，將每次煎煮所得濾液合并得到濾液B;(3)揮發油的包合工藝將步驟(1)提取的揮發油用大約其9倍體積量的95%乙醇溶解后，加入體積量大約為揮發油的io倍的e-環糊精55t:飽和溶液中，先恒溫攪拌1.5小時左右，再靜置24小時左右，接著抽濾后將濾渣低溫干燥得到白色干燥粉末；(4)濃縮將濾液A和濾液B合并后，加95X的乙醇稀釋至含醇量為70X，靜置24小時左右，抽濾后得到濾液，水浴濃縮(按照傳統工藝)后恒溫干燥得干固物，在干固物內加入e-環糊精及步驟(2)制得的淮山藥細粉，P-環糊精及淮山藥細粉的總和量約為干固物重量的1.2倍，之后噴霧干燥得到干燥粉末(按照現有技術手段)；(5)制成顆粒劑將步驟(3)和(4)得到的干燥粉末合并，混合均勻，干壓制粒，分裝，包裝，質檢，獲得成品。實施例2按以下制備步驟制備治療潰瘍性結腸炎的中成藥顆粒劑(1)揮發油提取工藝按照重量份數比取砂仁4份、防風4份、荷葉15份三味藥材粉碎后，加約三味藥材的2.5倍體積量的水，不浸泡，直接進行4小時左右的揮發油提取(按照傳統工藝)，提取揮發油后，剩余濾液A;(2)煎煮液提取工藝按照重量份數比取白芍10份、淮山藥25份、黨參15份、野麻草25份、甘草3份、白術12份六味藥材，將其中一味藥材淮山藥的10%磨為細粉，淮山藥的剩余90%與其余五味藥材混合后，浸泡約30分鐘，之后加水煎煮1次，每次煎煮2小時左右，每次加入的水的數量大約是浸泡前藥材的4倍體積量，將每次煎煮所得濾液合并得到濾液B;(3)揮發油的包合工藝將步驟(1)提取的揮發油用大約其6倍體積量的95%乙醇溶解后，加入體積量大約為揮發油的8倍的e-環糊精451:飽和溶液中，先恒溫攪拌1小時左右，再靜置18小時左右，接著抽濾后將濾渣低溫干燥得到白色干燥粉末；(4)濃縮將濾液A和濾液B合并后，加95X的乙醇稀釋至含醇量為70X，靜置18小時左右，抽濾后得到濾液，水浴濃縮(按照傳統工藝)后恒溫干燥得干固物，在干固物內加入e-環糊精及步驟(2)制得的淮山藥細粉，P-環糊精及淮山藥細粉的總和量約為干固物重量的l倍，之后噴霧干燥得到干燥粉末(按照現有技術手段)；(5)制成顆粒劑將步驟(3)和(4)得到的干燥粉末合并，混合均勻，干壓制粒，分裝，包裝，質檢，獲得成品。實施例3按以下制備步驟制備治療潰瘍性結腸炎的中成藥顆粒劑(1)揮發油提取工藝按照重量份數比取砂仁8份、防風8份、荷葉25份三味藥材粉碎后，加約三味藥材的7.5倍體積量的水，不浸泡，直接進行10小時左右的揮發油提取5(按照傳統工藝)，提取揮發油后，剩余濾液A;(2)煎煮液提取工藝按照重量份數比取白芍12份、淮山藥35份、黨參18份、野麻草35份、甘草8份、白術15份六味藥材，將其中一味藥材淮山藥的10%磨為細粉，淮山藥的剩余90%與其余五味藥材混合后，浸泡約90分鐘，之后加水煎煮5次，每次煎煮1小時左右，每次加入的水的數量大約是浸泡前藥材的12倍體積量，將每次煎煮所得濾液合并得到濾液B;(3)揮發油的包合工藝將步驟(1)提取的揮發油用大約其12倍體積量的95%乙醇溶解后，加入體積量大約為揮發油的12倍的P-環糊精6(TC飽和溶液中，先恒溫攪拌2小時左右，再靜置28小時左右，接著抽濾后將濾渣低溫干燥得到白色干燥粉末；(4)濃縮將濾液A和濾液B合并后，加95X的乙醇稀釋至含醇量為70X，靜置28小時左右，抽濾后得到濾液，水浴濃縮(按照傳統工藝)后恒溫干燥得干固物，在干固物內加入e-環糊精及步驟(2)制得的淮山藥細粉，P-環糊精及淮山藥細粉的總和量約為干固物重量的1.5倍，之后噴霧干燥得到干燥粉末(按照現有技術手段)；(5)制成顆粒劑將步驟(3)和(4)得到的干燥粉末合并，混合均勻，干壓制粒，分裝，包裝，質檢，獲得成品。二.下面為本發明所提供的治療潰瘍性結腸炎的中成藥顆粒劑的制備工藝研究過程1提取工藝研究1.1砂仁等三味藥材揮發油提取工藝研究本顆粒劑中砂仁等三味藥材均含有揮發油，故三味中藥在工藝中先用提取揮發油的方法。本文以揮發油提取量作為揮發油提取工藝的考察指標，按照L9(34)正交表進行了試驗，以探討揮發油最佳提取工藝。1.1.1提取流程取6倍處方量砂仁、防風等3味藥材用揮發油測定器提取，揮發油收集于棕色瓶中備用，提取揮發油的藥液濾過，濾液備用。1.1.2測定方法直接從揮發油測定器刻度處讀取揮發油量。1.1.3正交試驗及結果根據預試驗，選用煎煮時間、浸泡時間、加水量3個因素，每個因素設3個水平的實驗方案。見表l。表1揮發油提取工藝因素水平表因素ABCD水平加水量(倍)煎煮時間(h)空白浸泡時間1550<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>以揮發油提取量為考察指標，采用L9(34)正交表試驗，見表2.表2揮發油提取工藝正交試驗表ABCDX試驗號加水量(倍)煎煮時間(h)空白浸泡時間揮發油提取量111110.90212221.05313331.10421230.95522311.00623120.95731320.80832131.05933211.20Kl3.052.652.90110K22.903.103.202.80K33.053.252.903.10R0.150.600.300.30由上表直觀分析Rb最大，Rc、Rd次之，Ra最小。已知Rc為空項，Rc等于Rd，二者均大于Ra，若三項合并為誤差項，該實驗無意義；又Rc大于Ra，故考慮可能有交互作用。結合各因素條件，去掉A2B1D2，重新安排實驗。(見表3)1.1.4第二次揮發油提取正交試驗和結果表3第二次揮發油提取工藝因素水平表因素AA*BBA*CCB*CD水平煎煮時間'(h)浸泡時間(h)加水量(倍)空白16052737.5以揮發油提取量為考察指標，采用L8(27)正交表試驗，見表4。表4揮發油提取工藝正交試驗表AA*BBA*CCB*CD試驗號煎煮時間(h)浸泡時間(h)加水量(倍)空白<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>結果顯示各因素對實驗結果的影響大小依次為B>A>C。揮發油提取條件以B1A2C1，即加入5倍于藥材量的水，不浸泡，直接提取7小時為最佳，且各因素間交互作用影響不大。1.1.5按照最佳條件進行提取的重復試驗取6倍處方量砂仁、防風等3味藥材，加入5倍于藥材量的水，不浸泡，直接提取7小時，重復3次，分別取得揮發油1.2ml、1.2ml、1.15ml，揮發油得率均較高。1.2砂仁等三味中藥揮發油的包合工藝研究在常規制劑工藝中，揮發油是直接噴灑在顆粒劑中。由于揮發油是一類極易揮發的物質，化學性質很不穩定，隨著顆粒劑保存時間的延長，顆粒劑中的揮發油會發生質和量的變化，影響藥物的療效。因此本課題組采用P-環糊精包合的方法，使揮發油進入P-環糊精的環狀筒型空洞骨架中，形成包合物，以增加藥物穩定性，提高生物利用度及其藥物療效。本文以揮發油包合率作為揮發油包合工藝的考察指標，按照L9(34)正交表進行試驗，以探討揮發油最佳包合工藝條件。1.2.l包合流程將上面提取的揮發油用13-環糊精包合，靜置24小時，濾過，包合物低溫干燥。1.2.2測定方法包合物中實際回收揮發油量(ml)揮發油包合率=__*100%揮發油投入量(ml)*(l—揮發油回收耗損率)1.2.3揮發油回收耗損率的測定取揮發油lml，加水400ml，按照中華人民共和國藥典2000版揮發油測定法進行提取。測定結果，揮發油回收耗損率為20%。1.2.4正交試驗及結果根據文獻資料，本課題組選用了揮發油與P-環糊精的投放量的比例、包合溫度、包合時間3個因素，每個因素三個水平的實驗方案。(1)(2)見表5。表5揮發油包合工藝因素水平表因素ABCD水平環糊精油(g:ml)攪拌溫度(°C)攪拌時間(小時)空白_16:1451.0空白28:1551.5空白310:1_^__空白正交實驗表及結果。見表6。表6揮發油包合工藝正交實驗表實驗號環糊精油攪拌溫度攪拌時間空白揮發油投入量揮發油回收量AB'C_0__^__I_11111.00.25212221.00.30313330.90.25421231.00.30522311.00.35623120.80.3531321.00.25832131.00.30933211.00.359以揮發油包合率為考察指標，實驗結果見表7。表7揮發油包合工藝正交實驗表實驗號<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>結果顯示各因素對實驗結果的影響大小依次為B>A>C。揮發油包合條件為B3A2C2，即揮發油加入其體積10倍量的13-環糊精65t:飽和溶液中，恒溫攪拌1.5小時。觀察實驗結果可以看出，總的包合率太低，最高還不到50%，后來考慮揮發油為脂溶性成分，若分散不完全，在包合過程中，容易揮發，不利于13-環糊精的包合，因此重新選擇包合條件，增加無水乙醇與揮發油體積比作為新的考慮因素，重新選用L9(34)正交表(表8)進行正交試驗。攪拌時間影響較小，參照預正交試驗的結果，選定為1.5小時。1.2.5第二次正交試驗及結果表8第二次揮發油包合工藝因素水平表因素ABC水平乙醇油(ml:ml)環糊精油(g:ml)溫度D空白6:19:112:16:18:110:1455565空白空白空白正交實驗及結果。見表9。表9第二次揮發油包合工藝正交實驗表及結果實驗號乙醇油環糊精油溫度空白揮發油投入量揮發油回收量水平ABCDXIX2YlY2111111.000.900.400.30212220.901.000.500.50313331.000.850.500.40421231.200.850.550.50522310.900.950.500.45623120.801.000.450.50731320.951.000.450.50832130.950.950.350.45933210.801,100.500.55以揮發油包合率為指標，實驗結果見表10c表10第二次揮發油包合工藝正交實驗表11實驗號乙醇油環糊精油溫度空白結果水平ABCDXIX2￡X111150.042.692.62122269.462.131.93133361.958.8120.74212357.373.5130.85223169.459.2128.66231270.362.132.87313259.262.5121.78321346.152.698.79332178.162.5140.6Kl345.2345.1324.1361.8K2392.2359.2403.3386.4K3361.0394.1371.0350.2R47.049.079.236.2S245.4266.8697.0145.6**為P小于0.01,F5.3*5.7*15.0*'3.1*為P小于0.05結果顯示各因素對實驗結果的影響大小依次為C>B>A，揮發油包合條件為C^B^p即揮發油用9倍體積的無水乙醇溶解，加入揮發油體積10倍量的13-環糊精55t:飽和溶液中，恒溫攪拌1.5小時。1.2.6按照最佳條件進行包合的重復試驗取揮發油lml，用9ml無水乙醇溶解，加入10gP-環糊精55。C飽和溶液中，恒溫攪拌1.5小時。重復上面的實驗3次，油利用率分別為69%、70%、74%，揮發油包合率均較高。1.2.7薄層層析鑒別揮發油包合前后的變化取包合物2g加水20ml，用石油醚(30-60°C)提取3次，每次50ml，合并石油醚提取液濃縮至約2ml，作為供試液。另取揮發油，加石油醚制成每ml含0.2ml的揮發油，作為對照品溶液。按照薄層色譜法(中華人民共和國藥典2000版一部附錄VIB)試驗。吸取上述兩種溶液各10ml，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-丙酮(12:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液。供試品色譜中，在與對照揮發油色譜相應的位置上，顯示基本相同的斑點。結果表明包合前后揮發油的薄層圖譜基本一致。1.3山藥等六味藥材煎煮液提取工藝研究根據山藥等六味中藥的理化性質及其藥理作用，該六味中藥采用水提醇沉的方法12進行提取。本文以干粉量及芍藥苷提取率為考察指標，按照L9(34)正交表進行了試驗，以探討煎煮液最佳提取工藝條件。1.3.l提取流程取3倍處方量的野麻草、荷葉、甘草等五味藥材，與3倍處方量山藥的90%合并，水煎醇沉，水浴濃縮，得流浸膏，72t:恒溫烘干得總固物(備用)。1.3.2測定方法芍藥苷的測定對照品溶液的配制精密稱取真空干燥至恒重的芍藥苷標準品至5ml容量瓶中，用50%甲醇溶解，定容，制成每lml含芍藥苷0.44mg的對照品溶液。供試品溶液的制備取干固物約2g，精密稱定，加甲醇80ml，水浴回流30分鐘，放冷，濾過，濾渣用20ml甲醇洗滌，合并甲醇液，除去甲醇，精密吸取10ml水，加入殘留物中使溶解，于離心機上3000r/min離心12分鐘，精密移取上清液5ml于10ml容量瓶中，加水定容至10ml，用微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液。高效液相色譜條件HypersilC18色譜柱(4.6X250mm，5um);流動相為水甲醇為66:34;流速為0.8ml/min，檢測波長232nm，進樣10ul。1.3.3正交試驗及結果根據預試驗結果，選定浸泡時間、煎煮時間、加水量、煎煮次數4個因素，每個因素設3個水平的試驗方案。見表ll.表ll煎煮液提取工藝因素水平表因素ABCD水平浸泡時間(分鐘)加水量(倍)煎煮時間(小時)煎煮次數1061.01230.81.523_^_^_^_^_以3倍處方量的藥材提取所得干粉量及芍藥苷提取率為考察指標，采用L9(34)正交表試驗。結果見表12、13。表12煎煮液提取工藝正交實驗表13<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>浸泡時間加水量煎煮時間煎煮次數芍藥苷提取量<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>結果顯示各因素對實驗結果的影響大小依次為D>A>C>B;從芍藥苷提取量看提取條件以D3A3C2B2，即浸泡60分鐘，加8倍于藥材體積量的水，煎煮3次，每次1.5小時為最佳。綜合分析二者B、C、D—致，A不一致，A因素對干粉量影響不大，而對芍藥苷提取率影響較大；故最佳提取工藝為D3A3C2B2，即浸泡60分鐘，加8倍于藥材量的水，煎煮3次，每次1.5小時。1.3.4按照最佳條件進行提取的重復試驗取3倍處方量的野麻草、荷葉、甘草等五味藥材，3倍處方量山藥的90%合并，加8倍于藥材量的水，浸泡60分鐘，煎煮3次，每次1.5小時。重復3次，測得芍藥苷分別為8.68mg/g、8.27mg/g、9.17mg/g.2濃縮與干燥工藝研究芍藥苷相對來講是比較穩定的，但在藥液濃縮、浸膏烘干等過程中，若條件掌握不好，則損失率明顯增加。[OMO]2.1濃縮工藝研究文獻報道藥液濃縮過程中，減壓濃縮的芍藥苷損失率明顯低于直火濃縮的芍藥苷損失率。如郭氏等研究發現將同一份煎煮液分為等量的兩份，一份直火濃縮，一份減壓濃縮。結果直火濃縮的芍藥苷含量為14.74mg/g，芍藥苷轉移率為69.1%;減壓濃縮的芍藥苷含量為18.60mg/g，芍藥苷轉移率為87.2%。[OH2]2.2干燥工藝研究文獻報道藥液干燥過程中，噴霧干燥的芍藥苷損失率明顯低于烘箱干燥的芍藥苷損失率。有文獻報道婦炎康顆粒中芍藥苷的含量，采用烘箱干燥法6批樣品中芍藥苷平均含量為8.5mg/g，采用噴霧干燥法6批樣品中芍藥苷平均含量為14.4mg/g。因此，我們選用了噴霧干燥工藝。本發明所述的治療潰瘍性結腸炎的中成藥顆粒劑為中藥復方，經提取所得干浸膏吸濕性強，粘度大，因此，我們以噴霧干燥的難易程度及干粉得率為指標，篩選輔料及輔料用量，確定處方，對該顆粒劑的噴霧干燥工藝進行了研究2.2.l實驗材料的準備取30倍處方量藥材進行小試，得浸膏525克，干固物含量66.8%，折合生藥提取率為7.84%。將上述浸膏平均分為6份，每份含干固物58克。2.2.2噴霧干燥的條件在以下試驗中，噴霧干燥的條件為固定的，即進風溫度170°C，出風溫度90-100°C，給液速度20ml/min。2.2.3加入輔料的篩選根據實踐經驗和預試驗結果，選用微晶纖維素、微粉硅膠和e-環糊精三種物質作為輔料進行試驗。取上述浸膏粉3份，各加入山藥細粉(過120目)18g，另按照干固物輔料=1:1.5分別加入上述三種物質，見表14.表14輔料加入表試驗號加入輔料.名稱重量1微晶纖維素^2微粉硅膠87克3P—環糊精87克以藥粉是否粘壁、顆粒性狀及粉得率為指標，試驗結果見表15.表15輔料加入試驗結果表試驗號粘壁與否顆粒性狀粉得率1有些粘壁顆粒略呈絮狀84%2.不粘壁顆粒輕，顏色淺91%3不粘壁顆粒較理想92%結果顯示以e-環糊精作為輔料最為理想，故選用e-環糊精作為成型的輔料。2.2.4輔料加入量的篩選本顆粒劑選用|3_環糊精作為輔料，但輔料加入量的多少，直接影響顆粒劑的制備和保存。過多，增加顆粒劑成本，并增大服藥劑量；過少，導致生產困難、穩定性差。為了尋求一較好比例，我們仍以藥粉是否粘壁及粉得率為指標，進行了輔料加入量的篩選。取上述浸膏粉3份，按照不同比例加入輔料。見表16。表16輔料加入量表試驗號加入輔料名稱加入輔料用量加入山藥粉量干固物與輔料比例1<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>結果顯示加入輔料量以2、3組為佳，考慮到成本及服藥量等問題，故選用第三組，及加入e-環糊精與山藥粉總和為干固物的1.5倍。3久瀉寧顆粒制劑成型工藝研究3.l干壓制粒工藝研究芍藥苷為一親水性成分，無論單煎還是合煎，提取率均較高，但受外界條件影響較大，可能與芍藥苷結構中具有苯甲酸酯鍵，其受熱過久或溫度過高，均易發生分解有關。因此，我們在工藝制備過程中不僅選用減壓濃縮、噴霧干燥、而且采用干壓制粒技術盡量減少芍藥苷的損失，提高藥品質量。干壓制粒使物料不經過濕和熱的過程，可縮短工時，并可減少生產設備對受濕、熱容易變質的藥物的影響，提高產品質量、成品率，并可減少污染。3.2休止角的測定采用固定漏斗法，將3只漏斗串聯并固定于水平放置的坐標紙上2厘米處，小心地將藥粉沿漏斗壁倒入最上面的漏斗中，直到下面的藥粉圓錐體尖端接觸到最下面漏斗下口為止。測出圓錐底部的直徑，計算出休止角。結果為3=29.5結果顯示本顆粒劑流動性良好。3.3吸濕率的測定將稱量瓶烘干至恒重，準確稱量，加入干燥至恒重的久瀉寧顆粒，均勻攤開，使稱量瓶底部顆粒厚約2mm。將底部盛有NaCL過飽和溶液的干燥器放入25。C恒溫箱恒溫24小時，此時干燥器內的相對濕度為75%。將藥粉瓶放入干燥器內，瓶蓋打開，25t:恒溫保存48小時，1、2、4、8、12、24、48小時定時稱量，按照下面的公式計算吸濕率。結果見表18。17吸濕后藥粉重量-干燥至恒重的藥粉重量吸濕率=-*ioo%干燥至恒重的藥粉重量表18藥粉在相對濕度為75%的環境中的吸濕率及物理外觀時間'(h)1248122448因素吸濕率0.84%2.00°/。2.67%3.72%5.75%7.68%13.5%物理棕黃色棕黃色棕黃色棕黃色棕黃色棕黃色棕黃色外觀顆粒顆粒顆粒顆粒顆粒顆粒顆粒結果顯示顆粒吸濕程度較小，物理外觀在吸濕后仍能保持顆粒狀態，相對容易儲存，達到了成型工藝研究的目的。三.本發明所制備的治療潰瘍性結腸炎的中成藥顆粒劑(以下簡稱久瀉寧顆粒)與功能主治有關的主要藥效學試驗資料(—)久瀉寧顆粒主要藥效學研究摘要目的觀察久瀉寧顆粒對大鼠潰瘍性結腸炎模型的影B向，為臨床用藥的有效性提供實驗依據。方法采用異種異體結腸黏膜組織致敏法和三硝基苯磺酸(TNBS)和無水乙醇局部灌腸相結合。將SD大鼠隨機分為空白對照組，模型對照組，陽性對照組，久瀉寧顆粒劑量組、久瀉寧湯藥劑量組。連續給藥20天，末次給藥后24h，大鼠腹主動脈取血，采用ELISA法測定大鼠細胞因子IL-2、TNF-a以及免疫球蛋白IgG、IgM含量。結果久瀉寧顆粒中、高劑量組可升高IL-2，與UC模型組比較，差異非常顯著(P<0.01);久瀉寧顆粒各劑量組可降低TNF-q，與UC模型組比較，差異有顯著意義(P<0.05P<0.01)。久瀉寧顆粒中劑量組可顯著降低IgG水平，久瀉寧顆粒中、高劑量組可顯著降低IgM水平，與UC模型組比較，差異有顯著意義(P<0.05)。結論久瀉寧顆粒對潰瘍性結腸炎模型大鼠有顯著的治療作用。(二)實驗方法與結果1.實驗材料1.l實驗動物清潔級SD種大鼠60只，雌雄各半，體重為200士20g，上海西普爾_必凱實驗動物有限公司提供，許可證號SCXK(滬)2003-0002。大耳白家兔6只，體重2.0kg-2.5kg，福建中醫學院實驗動物中心提供。1.2主要實驗藥品久瀉寧顆粒，實驗用藥為顆粒劑成劑前之藥液。久瀉寧湯藥野麻草、荷葉、防風等九味中藥購于福建中醫學院國醫堂中藥房提供。弗氏完全佐劑，批號Lot102K8930，美國Sigma提供。2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)，批號Lot42K5002，美國Sigma提供。無水乙18醇，批號030518，上海聯試化工試劑有限公司提供。乙醚，批號CY030805，國藥集團化學試劑有限公司提供。1.3實驗試劑i厶大鼠白介素-2(IL-2)、腫瘤壞死因子(TNF-a)試劑盒由大連泛邦化工技術開發有限公司提供。一氧化氮(NO)試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。補體C3、Q試劑盒由上海太陽生物技術公司提供。大鼠免疫球蛋白IgG、IgM試劑盒由美國Bethyl提供。總蛋白試劑盒由上海榮盛生物技術有限公司提供。1.4實驗儀器TGL-16G高速冷凍離心機上海安亭科學儀器廠4020型自動生化分析儀日立BS210S電子天平北京賽多利斯天平有限公司TDL-4低速臺式離心機上海安亭科學儀器廠MDF-V5410深低溫冰箱日本HH-2數顯恒溫水浴鍋國華電器有限公司ELX808酶聯免疫檢測儀美國寶特公司生產2.實驗方法2.1實驗動物分組清潔級SD大鼠60只，雌雄各半，體重為200士20g，隨機分為6組，每組10只。各組分別為正常組，uc模型對照組，uc模型+久瀉寧湯藥陽性對照組，uc模型+久瀉寧顆粒高劑量組、中劑量組和低劑量組。2.2模型所需藥物的制備(1)異種異體抗原參照徐叔云方法稍作改進，取家兔新鮮結腸粘膜組織，勻漿充分后，-2(TC下冷凍24h，溶凍后以4000r/min速度離心30min，取上清夜提純，用總蛋白試劑盒雙縮脲法測定蛋白質含量。(2)抗原乳化液異種異體抗原與弗氏完全佐劑等體積配比。(3).灌腸液2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)與無水乙醇等體積配比，濃度為2.5%(w/v)。白。勻分布c弱拱背c(4)麻醉劑乙醚。2.3UC大鼠模型的制備(1)在大鼠一側足趾皮下注射抗原乳化液，使大鼠獲得8mg異種蛋白。(2)14天后，在大鼠腹股溝部位皮下注射抗原乳化液，同樣使大鼠獲得8mg異種蛋(3)將免疫剌激40天的大鼠用乙醚麻醉。(4)用硅膠管插入大鼠肛門深約8cm，局部灌腸lml灌腸液。(5)拔出硅膠管后迅速捏緊大鼠肛門8min，其間不斷搖擺大鼠，使液體在腸道均(6)待液體不再從肛門流出，把大鼠放回籠中常規飼養。三天后，大部分大鼠出現稀便，甚至稀水、膿血，肛門周圍潮濕、污穢，精神萎靡，瘦造模1周后隨機取2只大鼠處死取其部分結腸，肉眼可見結腸粘膜層變黑，腸壁增厚，管腔變粗，病理分析示粘膜糜爛壞死，但仍較完整，粘膜層可見炎性滲出壞死物，各層均見炎細胞浸潤；2周后取2只大鼠結腸病理分析示粘膜脫落，潰瘍明顯；3周后大部分大鼠可見稀便或粘液便、精神萎靡等癥狀，模型大鼠結腸病理分析示仍有明顯潰瘍，腺體及腸壁各層可見大量急、慢性炎細胞，鏡下可見血管增生、炎性肉芽腫及淋巴濾胞結構。實驗中模型組大鼠的免疫球蛋白IgM、IgG和補體C3、C4以及IL-2、TNF-a等免疫和炎癥指標較正常組都發生明顯變化，說明大鼠體內存在免疫異常。以上表明造模成功。2.4給藥方法正常組和UC模型對照組給等量的飲用水，各給藥組分別給予久瀉寧顆粒高劑量30g/kg、中劑量15g/kg(相當于60kg人的等效劑量)、低劑量7.5g/kg(以上濃度均為生藥含量)，久瀉寧湯藥組12g/kg(相當于60kg人的等效劑量)，每天1次，連續灌胃20天。2.5標本采集及處理大鼠灌胃第20天后，禁食不禁水24小時，第21天用氯胺酮麻醉，腹主動脈采血6ml左右，以3000r/min離心10min，分離血清，冰凍保存待測，所有血清樣本在1小時內分離完畢。取脾臟、胸腺、腎上腺、結腸(肛門處向上8cm，洗凈內容物，用濾紙吸干)稱重。取結腸潰瘍明顯處作病理分析。2.6實驗指標檢測與方法白介素-2(IL-2)、腫瘤壞死因子(TNF-a)的測定采用ELISA法。—氧化氮(NO)的測定采用硝酸還原酶法。補體C3、C4的測定采用免疫濁度法。免疫球蛋白IgG、IgM的測定采用ELISA法。總蛋白的測定采用雙縮脲法。3.統計學處理數據均用SPSS11.0統計軟件進行分析，用t檢驗作統計學處理，以顯著性差異界定在0.05水平，結果以均數±標準差(；±S)表示。4.實驗結果(見表16)4.1久瀉寧顆粒對UC模型大鼠脾臟、胸腺、腎上腺的影響表1久瀉寧顆粒對UC大鼠脾臟、胸腺、腎上腺的影響G±S)組另J鼠數劑量脾臟指數胸腺指數腎上腺指數(只)(g/kg)(%)(y。)正常對照組90.17±0.030.11±0.030.014±0.006uc模型組8O響21±0.040.09±0.030,017±0,006陽性對照組9120.23±0.040.10±0.020.018±0.007低劑量組97.50.29±0.07"0.12±0.030.018±0.007中劑量組9150.22±0.080.11±0.030.016±0.006髙劑量組10300.24±0.050.13±0.02*.0.018±0.005注t檢驗，與UC模型組比較，"<0.05;與陽性對照組比較,P<0.05。表1結果顯示UC模型組與正常對照組比較，脾臟和腎上腺的臟器指數增高，胸腺指數降低，但差異均不顯著(P>0.05)。藥物治療組與UC模型組比較，久瀉寧顆粒低劑量組可顯著增高脾臟指數(P<0.05);久瀉寧顆粒高劑量組可顯著增高胸腺指數(P<0.05)，且和陽性對照組比較，差異有顯著意義(P<0.05)。4.2久瀉寧顆粒對UC模型大鼠細胞因子的影響表2久瀉寧顆粒對UC大鼠IL_2、TNF_a的影響G±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>注t檢驗，與正常對照組比較，**P<0.01;與UC模型組比較，AP<0.05，"P<0.Ol，與陽性對照組比較，'P<0.05，"P<0.01。表2結果顯示UC模型組與正常對照組比較，IL-2降低與TNF-a升高，差異非常顯著(P<0.01)。藥物治療組與UC模型組比較，久瀉寧顆粒中、高劑量組可升高IL-2，差異非常顯著(P<0.01);久瀉寧顆粒各劑量組和陽性對照組可降低TNF-a，差異有顯著意義(P<0.05P<0.01)。與陽性對照組比較，久瀉寧顆粒中、高劑量組可顯著升高IL-2(P<0.05P<0.01);久瀉寧顆粒中劑量組可顯著降低TNF-a(P<0.05)。具體參照圖1和圖2所示。4.3久瀉寧顆粒對UC模型大鼠免疫球蛋白的影響表3久瀉寧顆粒對UC大鼠IgG、IgM的影響G±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>注t檢驗，與正常對照組比較，**P<0.01;與UC模型組比較，"<0.05，AAP<0.01;與陽性對照組比較，'P<0.05，**P<0.01。表3結果顯示UC模型組與正常對照組比較，UC模型組IgG、IgM均升高，差異有顯著意義(P<0.05P<0.01)。藥物治療組與UC模型組比較，久瀉寧顆粒中、高劑量組可顯著降低IgG水平(P<0.05P<0.01);久瀉寧顆粒中劑量組可顯著降低IgM水平(P<0.01)。與久瀉寧湯藥陽性對照組比較，久瀉寧中劑量組可顯著降低IgG、IgM水平(P<0.05P<0.01)。4.4久瀉寧顆粒對UC模型大鼠補體C3、C4的影響表4久瀉寧顆粒對UC大鼠C3、C4的影響G±S)組另U鼠數(只)劑量(g/kg)C3(g/L)C4(g/L)正常對照組90.051±0.0220.020±0.008uc模型組80.101±0.043*0.052±0.026*陽性對照組9120.139±0.0710.076±0.043低劑量組97.50.123±0.0430.043±0.030中劑量組9150.155±0.071*0.067±0.030高劑量組10.300.137±0.0370.082±0.028*注t檢驗，與正常對照組比較，*P<0.05;與UC模型組比較，AP<0.05.表4結果顯示UC模型組與正常對照組比較，UC模型組C3、Q均升高，差異有顯著意義(P<0.05)。藥物治療組與UC模型組比較，久瀉寧中劑量組可顯著升高C3水平(P<0.05);久瀉寧高劑量組可顯著升高C4水平(P<0.05)。4.5久瀉寧顆粒對UC模型大鼠一氧化氮(NO)的影響表5久瀉寧顆粒對UC大鼠NO的影響(；±S)組另'J鼠數(只)劑量(g/kg)恥(umol/L)正常對照組96.68±1.01UC模型組819.72±3.53**陽性對照組91226.98±1.83"低劑量組97.521.72±4.27中劑量組91522.85±4.98高劑量組103027.11±5.05"注t檢驗，與正常對照組比較，**P<0.01;與UC模型組比較，<()01。表5結果顯示UC模型組與正常對照組比較，UC模型組NO升高，差異非常顯著(P<0.01)。藥物治療組與UC模型組比較，陽性對照組和久瀉寧顆粒高劑量組可非常顯著升高NO水平(P<0.01)。4.6久瀉寧顆粒對UC模型大鼠結腸重量的影響表6久瀉寧顆粒對UC大鼠結腸重量的影響(；±S)組別鼠數(只)劑量(g/kg)結腸(g)正常對照組90.49±0.11uc模型組81.50±0.69**陽性對照組9121.57±0.21低劑量組97.51.22±0.26中劑量組9151.06±0.32"高劑量組10301.29±0.33注t檢驗，與正常對照組比較，**P<0.01;與UC模型組比較，AP<0.05;與陽性對照組比較，'P<0.05。表6結果顯示UC模型組與正常對照組比較，結腸重量明顯增加，差異非常顯著22(P<0.01)。藥物治療組與UC模型組比較，久瀉寧顆粒中劑量組可顯著降低結腸重量(P<0.05)。與陽性對照組比較，久瀉寧顆粒中劑量組可顯著降低結腸重量(P<0.05)。4.7久瀉寧顆粒對UC模型大鼠結腸組織的影響光鏡下病理切片觀察正常對照組大鼠結腸粘膜上皮完整，連續，腺體排列規則，結構清楚。UC模型組大鼠結腸粘膜脫落，潰瘍明顯。陽性對照組可見腺體結構出現，一層上皮組織蓋住潰瘍。久瀉寧顆粒低劑量組可見兩邊上皮組織向中間愈合。久瀉寧顆粒中劑量組上皮組織基本完整，腺體排列欠規則，潰瘍基本愈合。久瀉寧顆粒高劑量組上皮組織基本完整，腺體排列較規則，潰瘍基本愈合。(見圖3_圖10)權利要求一種治療潰瘍性結腸炎的中成藥顆粒劑的制備工藝，其特征在于，它包括以下制備步驟(1)揮發油提取工藝按照重量份數比取砂仁4-8份、防風4-8份、荷葉15-25份三味藥材粉碎后，加2.5-7.5倍體積量的水，不浸泡，直接進行4-10小時的揮發油提取，提取揮發油后，剩余濾液A；(2)煎煮液提取工藝按照重量份數比取白芍10-15份、淮山藥25-35份、黨參15-20份、野麻草25-35份、甘草3-8份、白術10-15份六味藥材，將其中一味藥材淮山藥的10％磨為細粉，淮山藥的剩余90％與其余五味藥材混合后，浸泡30-90分鐘，之后加水煎煮1-5次，每次煎煮1-2小時，每次加入的水的數量是浸泡前藥材的4-12倍體積量，將每次煎煮所得濾液合并得到濾液B；(3)揮發油的包合工藝將步驟(1)提取的揮發油用其6-12倍體積量的95％乙醇溶解后，加入體積量為揮發油的8-12倍的β-環糊精45-60℃飽和溶液中，先恒溫攪拌1-2小時，再靜置18-28小時，接著抽濾后將濾渣低溫干燥得到白色干燥粉末；(4)濃縮將濾液A和濾液B合并后，加95％的乙醇稀釋至含醇量為70％，靜置18-28小時，抽濾后得到濾液，水浴濃縮后恒溫干燥得干固物，在干固物內加入β-環糊精及步驟(2)制得的淮山藥細粉，β-環糊精及淮山藥細粉的總和量為干固物重量的1-1.5倍，之后噴霧干燥得到干燥粉末；(5)制成顆粒劑將步驟(3)和(4)得到的干燥粉末合并，混合均勻，干壓制粒，分裝，包裝，質檢，獲得成品。2.根據權利要求1所述的治療潰瘍性結腸炎的中成藥顆粒劑的制備工藝，其特征在于步驟(1)中，三味藥材的重量份數比為砂仁6份、防風6份、荷葉20份，加入的水的數量是該步驟所述的三味藥材的5倍體積量，揮發油提取的時間為7小時。3.根據權利要求1所述的治療潰瘍性結腸炎的中成藥顆粒劑的制備工藝，其特征在于步驟(2)中，六味藥材的重量份數比為白芍15份、淮山藥30份、黨參20份、野麻草30份、甘草5份、白術10份，浸泡時間為60分鐘，煎煮次數為3次，每次煎煮時間為1.5小時，每次煎煮時加入的水的數量是該步驟浸泡前藥材的8倍體積量。4.根據權利要求1所述的治療潰瘍性結腸炎的中成藥顆粒劑的制備工藝，其特征在于步驟(3)中，所述乙醇的體積量為揮發油的9倍；所述P-環糊精飽和溶液的溫度為55t:，體積量為揮發油的10倍；恒溫攪拌時間為1.5小時，靜置時間為24小時。5.根據權利要求1所述的治療潰瘍性結腸炎的中成藥顆粒劑的制備工藝，其特征在于步驟(4)中，靜置時間為24小時，e-環糊精及淮山藥細粉的總和量為干固物重量的1.2倍。全文摘要本發明涉及一種治療潰瘍性結腸炎的中成藥顆粒劑的制備工藝，其特征在于，它包括以下制備步驟揮發油提取工藝、煎煮液提取工藝、揮發油的包合工藝、濃縮及制成顆粒劑。本發明所述的制備工藝能較好的保持藥物療效，使本發明制作的中成藥顆粒劑達到甚至優于中藥湯劑的治療效果。文檔編號A61K36/88GK101745069SQ20101010323公開日2010年6月23日申請日期2010年1月29日優先權日2010年1月29日發明者阮時寶申請人:阮時寶