專利名稱：一株飼用糞腸球菌及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物菌株，特別是涉及一株糞腸球菌菌株及其取代抗生素在禽、畜養(yǎng)殖中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
乳酸菌是腸道常居菌群。動(dòng)物服用乳酸菌后，可以改變腸道內(nèi)菌群環(huán)境，產(chǎn)生多種抑菌因子，抑制有害菌繁殖，提高動(dòng)物機(jī)體免疫力。乳酸菌通過(guò)粘附素與腸粘膜細(xì)胞緊密結(jié)合，在腸粘膜表面定植占位，成為生理屏障的主要組成部分，從而達(dá)到恢復(fù)宿主抵抗力，修復(fù)腸道菌群屏障、治愈腸道疾病的作用。國(guó)內(nèi)外對(duì)乳酸菌作用效果的實(shí)驗(yàn)報(bào)道不計(jì)其數(shù)，乳酸菌是動(dòng)物機(jī)體有益菌的觀點(diǎn)受到廣泛贊同。Barrow (Barrow PA, Brooker BE, Fuller R, Newport MJ. The attachment of bacteria to the gastric epithelium of pig and its importance in the microecology of the intestine. J Appl Bacterio，1980，48 :147-154)給仔豬飼喂乳桿菌可顯著降低腸道中大腸桿菌的數(shù)量° Rada(Behling RG. Competitive Exclusion of salmonella enteritidis in chicks by treatment with a single culture plus dietary lactose. Int J food Microbiol,1994,22 :1_9)禾口Behling(Pollman DS,Danielson DM,Wren WB,Peo ER, Shahani KM. Influence of Lactobacillus acidophilus inoculum on gnotobiotic and conventional pigs. J Anim Sci，1980,51 :6四_637)報(bào)道用乳桿菌可減少禽類消化道內(nèi)大腸桿菌和沙門氏菌的定植。Simon(2001)對(duì)國(guó)外已有報(bào)道進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果表明益生素在減少仔豬和犢牛的腹瀉發(fā)病率方面效果顯著。Pergidon等(Simon 0, Jadamus A, Vahjen W. Probiotic Feed Additives-Effectiveness and Expected Modes of Action. J AnimFeed Sci，2001，10 (Suppl)，1 :51-67)報(bào)道，口服乳酸菌后，對(duì)巨噬細(xì)胞的β -半乳糖甙酶活性、巨噬細(xì)胞的吞噬活性等具有顯著的激活和促進(jìn)作用。當(dāng)異物侵入機(jī)體時(shí)，免疫細(xì)胞被乳酸菌激活，增強(qiáng)了機(jī)體對(duì)異物產(chǎn)生抗體的作用。Pollman(Sorrels KM, Speck ML. Inhibition of Salmonella gallinarum by Culture Filtrates of Leuconostoc citrovorum. J Dairy Sci, 1970,53 =237-243)給無(wú)菌仔豬口服嗜酸乳桿菌后引起白細(xì)胞數(shù)和血清總蛋白數(shù)(主要是球蛋白)濃度提高。Herich(Pergidon G，Nader de Macias ME, Alvarez S, Oliver G, Pesce De Ruiz Holgado AA. Systemic augmentation of the immune response in mice by feeding fermented milks with Lactobacillus casei and Lactobacillus acidophilus. Immunol, 1988,63 :17-23)報(bào)道，飼喂干酪乳桿菌后仔豬白細(xì)胞總數(shù)和嗜中性細(xì)胞數(shù)顯著增加。SorrelsCJuven BJ, Meinersman RJ, Stern NT. Antagonidtic effect of Lactobacijli and prdiococci to control intestinal colonization by human enteropathogons in live poultry. J Appli Bacteri,1991,70 95-103)報(bào)道，明串珠菌(Leuconostocci trovorum)代謝產(chǎn)生的乙酸和乳酸對(duì)沙門氏菌有抑菌效果，其中乙酸起了主要作用。Juven(Herich RjRevajova V,Levkut M. The effect of Lactobacillus paracasei and raftiloseP95Upon the non-specific immune responseof piglets. Food agric immunol，2002，14 :171-179)報(bào)道乳酸菌產(chǎn)生過(guò)氧化氫或細(xì)菌素類物質(zhì)，對(duì)有害菌有殺菌作用。因此，利用益生菌抑制動(dòng)物體內(nèi)的有害菌繁殖，提高動(dòng)物機(jī)體免疫力已在禽、畜養(yǎng)殖中發(fā)揮重要作用。糞腸球菌(Enterococcus faecalis)又稱糞鏈球菌，根據(jù)最新的分類規(guī)則，糞腸球菌(Enterococcus faecalis)屬腸球菌屬。與屎腸球菌一樣，糞腸球菌同屬人和動(dòng)物腸道中正常的有益菌群，早在1994年就是我國(guó)農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)使用的微生物品種之一，也是1989年美國(guó)食品及藥品管理局(FDA)公布了可以用作飼料添加劑的42種微生物之一。專利文獻(xiàn)CN 101067120A公開了一株添加到食品中用于治療人類胃病的糞腸球菌，CN 1948464A公開了一種利用糞腸球菌生產(chǎn)L-瓜氨酸的方法，CN 101352198A公開了一種禽類糞腸球菌發(fā)酵混合飼料的制備方法、CN 101701201A公開了一株用于生產(chǎn)酪胺(對(duì)羥基-β-苯乙胺)的糞腸球菌，CN 101792726Α公開了一株能夠吸附霉菌毒素的糞腸球菌。上述專利文獻(xiàn)中公開的糞腸球菌均為研究糞腸球菌抗膽鹽和胃酸的性質(zhì)及其在仔豬飼料中的應(yīng)用方法，沒(méi)有涉及其抑菌效果的研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一株對(duì)致病菌具有抑制作用的可用于制備飼料和飼料添加劑的糞腸球菌。本發(fā)明所提供的糞腸球菌菌株(Enterococcus faecalis)的名稱為SBD，該菌株已于2011年05月16日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為 CGMCC No. 4848。糞腸球菌(Enterococcusfaecal is) SBD CGMCC No. 4848 是革蘭氏陽(yáng)性菌，顯微鏡下觀察呈球形，不形成芽孢；在MRS瓊脂平板上生長(zhǎng)良好，4 形成圓整、光滑、隆起、灰白色露滴樣、直徑0. 5-lmm大小、菌落；兼性厭氧生長(zhǎng)，生長(zhǎng)溫度范圍10°C -50°C，最適生長(zhǎng)溫度30°C -40°C ；生長(zhǎng)酸堿度范圍pH 4-10，最適pH值為6. 5 ；部分生化特性如表1所示表1 糞腸球菌(Enterococcus faecalis) SBD CGMCC No. 4848 的部分生化特性
權(quán)利要求
1.糞腸球菌(Enterococcusfaecal is) SBD CGMCC No. 4848。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的糞腸球菌(Enterococcusfaecal is) SBD CGMCC No. 4848，其特征在于糞腸球菌(Enterococcus faecal is) SBD CGMCC No. 4848是革蘭氏陽(yáng)性菌，顯微鏡下觀察呈球形，不形成芽孢；在MRS瓊脂平板上生長(zhǎng)良好，4 形成圓整、光滑、隆起、灰白色露滴樣、直徑0. 5-lmm大小、菌落；兼性厭氧生長(zhǎng)，生長(zhǎng)溫度范圍10°C _50°C，最適生長(zhǎng)溫度30°C-40°C ；生長(zhǎng)酸堿度范圍pH 4-10，最適pH值為6.5。
3.根據(jù)權(quán)利要求1 所述的糞腸球菌(Enterococcus faecal is) SBD CGMCC No. 4848， 其特征在于糞腸球菌(Enterococcus faecal is) SBD CGMCC No. 4848對(duì)金黃色葡萄球菌 (SA)、傷寒沙門氏菌(ST 04Hi)、豬源產(chǎn)腸毒素型大腸桿菌E. coli 0139和豬源致病大腸桿菌(E. coliC83524、E. coliC83529、Ε. coliC83905)均有較強(qiáng)的抑制作用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的糞腸球菌(Enterococcusfaecal is) SBD CGMCC No. 4848，其特征在于糞腸球菌(Enterococcus faecal is) SBD CGMCC No. 4848 可耐受 pH 2. 5 合成胃液60min ；最高耐受膽鹽濃度為2. 0% (質(zhì)量百分比濃度)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的糞腸球菌(Enterococcusfaecal is) SBD CGMCC No. 4848，其特征在于糞腸球菌(Enterococcus faecal is) SBD CGMCC No. 4848對(duì)復(fù)達(dá)欣、美滿霉片、苯唑青霉素、四環(huán)素、卡那霉素、慶大霉素、強(qiáng)力霉素和丁胺卡那霉素不敏感。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的糞腸球菌(Enterococcusfaecal is) SBD CGMCC No. 4848，其特征在于糞腸球菌(Enterococcus faecal is) SBD CGMCC No. 4848 對(duì) Ε. coliC83905 感染有良好的免疫預(yù)防效果，飼喂糞腸球菌(Enterococcusfaecalis)SBD CGMCCNo. 4848能有效降低小鼠受大腸桿菌攻毒時(shí)的發(fā)病率和死亡率。
7.一種糞腸球菌(Enterococcus faecal is) SBD CGMCC No. 4848微生態(tài)菌劑，其活性成分為糞腸球菌(Enterococcus faecal is) SBD CGMCC No. 4848。
8.一種制備權(quán)利要求7所述的糞腸球菌(Enterococcus faecal is) SBD CGMCCNo. 4848 微生態(tài)菌劑的方法，包括以下步驟1)配制YPD液體培養(yǎng)基酵母浸粉10g/L、葡萄糖20g/L、蛋白胨20g/L，調(diào)節(jié)pH6. 5， 115°C 滅菌 20min ；2)從斜面中接一環(huán)糞腸球菌(Enterococcusfaecal is) SBD CGMCC No. 4848 到 YPD 液體培養(yǎng)基中，37°C靜置培養(yǎng)10-24h，再按(體積/體積百分比)的接種量進(jìn)行兩級(jí)培養(yǎng)，每級(jí)培養(yǎng)時(shí)間為10-Mh，37°C靜置培養(yǎng)，培養(yǎng)結(jié)束后，得到糞腸球菌(Enterococcus faecal is) SBD CGMCC No. 4848 微生態(tài)菌劑。
9.權(quán)利要求7或8所述的微生態(tài)菌劑在制備飼料添加劑或獸藥中的應(yīng)用，可取代抗生
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于所述微生態(tài)菌劑的使用方法為將微生態(tài)菌劑按107-108CFU/Kg體重/天的量添加到禽、畜飲用水或飼料中。
全文摘要
本發(fā)明公開了糞腸球菌(Enterococcus faecalis)SBD CGMCC No.4848，是革蘭氏陽(yáng)性菌，顯微鏡下觀察呈球形，不形成芽孢；在MRS瓊脂平板上生長(zhǎng)良好，48h形成圓整、光滑、隆起、灰白色露滴樣、直徑0.5-1mm大小、菌落；兼性厭氧生長(zhǎng)，生長(zhǎng)溫度范圍10℃-50℃，最適生長(zhǎng)溫度30℃-40℃；生長(zhǎng)酸堿度范圍pH 4-10，最適pH值為6.5。由該菌株制成的菌劑無(wú)毒無(wú)害，耐胃液，耐膽鹽，對(duì)多種有害菌有很強(qiáng)的抑制作用，可廣泛應(yīng)用到禽、畜養(yǎng)殖業(yè)(直接添加到動(dòng)物日糧或飲用水中即可)中，可增強(qiáng)動(dòng)物抗病能力，有望成為飼用抗生素的替代物，并且能夠明顯提高斷奶仔豬的平均增重，降低料肉比，還能改善禽、畜生存環(huán)境，應(yīng)用前景廣闊。
文檔編號(hào)A61P31/04GK102277325SQ20111023071
公開日2011年12月14日 申請(qǐng)日期2011年8月12日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月12日
發(fā)明者付生慧, 唐澤華, 張東曉, 方莉玉, 梁運(yùn)祥, 沈中艷, 游偉, 趙述淼, 雷紅升 申請(qǐng)人:北京金泰得生物科技股份有限公司