專利名稱：風濕定滴丸提取物和風濕定滴丸及其生產方法
技術領域：
本發明涉及醫藥技術領域，是一種風濕定滴丸提取物和風濕定滴丸及其生產方法。
背景技術：
風濕病是一種嚴重危害人類健康的常見病、多發病，被列為臨床疑難雜癥，該病被稱為“活著的癌癥”。其特征是慢性的炎性關節病變，并伴有全身多個系統受累。未經系統治療的風濕病可反復遷延多年，最終導致關節畸形、功能喪失，給患者造成很大痛苦。數據顯示，全球風濕病患者約4億，是醫學領域中最為龐大的一類疾患。據我國調查，我國各類風濕發病率達到沈.7%，國內市場藥品需求每年超過300億。目前臨床上治療風濕、類風濕性關節炎的藥物主要包括留體(如地塞米松、氫化可的松等)和非留體(如雙氯芬酸、塞來昔布等)兩類抗炎藥，以及改善癥狀的藥物。雖然可供使用的抗炎藥物很多，但均存在著較嚴重的副作用。留體類抗炎藥有產生激素依賴性、免疫抑制及影響全身代謝的副作用。非甾體類抗炎藥由于可阻斷花生四烯酸形成前列腺素，故對腎及胃腸粘膜有損傷作用。特異的C0X-2抑制劑曾一度被認為克服了上述缺點，但后續研究發現C0X-2誘導表達具有胃粘膜保護作用，C0X-2抑制劑會加重已有的胃腸粘膜損傷。更為嚴重的是，美國Merck公司在臨床觀察中發現了 C0X-2抑制劑羅非昔布(萬絡)在心血管方面的安全性問題，并已召回該藥物。因此，在治療風濕、類風濕性關節炎的臨床治療方面，開發療效好、毒性低、避免上述副作用的新型復方抗炎、鎮痛藥物勢在必行。風濕定滴丸處方來自衛生部藥品標準中藥成方制劑第十二冊“風濕定片”(標準編號WS3-B-2^7-97)，由八角楓、白芷、徐長卿和甘草四味中藥組成，臨床用于活血通絡，除痹止痛，用于風濕性關節炎，類風濕關節炎，頸肋神經痛，坐骨神經痛等，臨床療效確切。但是，原制劑存在很多缺點①其生產工藝欠合理。白芷及部分徐長卿以粉末入藥，有效成分難以溶出，生物利用度低；其余二味藥也只是簡單加水合提，造成有效成分提取不充分和有效成分大量流失。②制劑穩定性差。原制劑把徐長卿的揮發油丹皮酚只是簡單地噴灑在顆粒上，隨著放置時間的延長，丹皮酚揮發較為嚴重，造成制劑中丹皮酚的含量差異很大。③ 日服用量較大。原制劑一次口服4片，患者的順應性差。④處方中含八角楓毒性藥材，作為治療風濕性疾病的中藥復方，長期用藥存在臨床安全隱患。⑤質量標準落后。原劑型質量標準只收載了薄層的定性鑒別，缺乏有效的定量控制方法，難以對生產、貯藏過程中產品的質量狀況進行有效監控。致使風濕定片未被廣大患者所接受。在制劑方面，由于制備技術等原因，大多數藥物的口服制劑，服用后均存在著溶散時限長、溶出度低、吸收較差、肝腸首過效應和生物利用度較低等問題，從而影響藥效的發揮，也直接影響著治療效果。另外，常規的口服劑型，如片劑、膠囊等，在制備過程中由于有制粒的工藝，因此會產生較大的粉塵污染，一定程度上會對工作人員的身體造成危害，同時也會給環境造成一定污染。再者，常規口服制劑的生產工藝復雜，生產成本較高，從而使患者的用藥成本也隨之提高，不利于提高廣大患者的就醫能力，也不利于提高社會的總體健康水平。本發明遵循原方功能主治，采用現代中藥研究的技術手段，對原方進行系統深入的研究，研制出現代中藥風濕定滴丸。它的優勢在于明確了有效成分，提高了有效成分的純度和利用度，增強了療效，減少了服用劑量；去掉了毒性成分，降低了毒副作用；建立了多個成分的高效液相測定方法，增強了質量控制手段；采用了包合技術，增強揮發成分的穩定性，便于放置和儲存；利用固體分散技術，建立了滴丸新劑型，縮短起效時間，提高了生物利用度。綜上所述，使本發明所涉及的風濕定滴丸具有三效(速效、高效、長效)、三小(服用劑量小、毒性小、副作用小)、五方便(生產方便、貯存方便、運輸方便、攜帶方便、使用方便)的優點，符合現代中藥理論的基本要求。

發明內容
本發明的目的是克服了上述現有技術之不足，給人們提供一種風濕定滴丸提取物和風濕定滴丸及其生產方法。所得風濕定提取物含有水楊苷、丹皮酚、歐前胡素、甘草苷純度和含量都較高，該提取物的生產方法易操作。所得風濕定滴丸具有活血通絡，祛風除濕， 清腫止痛之功效，用于治療關節腫脹、屈伸不利、麻木僵硬、肌肉酸痛及風濕性與類風濕性關節炎，效果顯著，該風濕定滴丸的生產方法易操作。本發明特征在于本發明的風濕定滴丸提取物，由以下原料制成，其原料重量百分比為八角楓80% 至90%，徐長卿7%至11%，白芷1%至6%，甘草0.5%至3%。風濕定滴丸提取物按下述步驟得到 (1)取所需量的八角楓，粉碎，過篩，放入提取罐中，加15至40倍量的水或30%至 50%的乙醇回流提取1至3次，每次1至3小時，合并提取液，過濾，減壓濃縮至每Iml濃縮液含0. 8至1. 2g八角楓藥材；取4BV至8BV上述濃縮液，過AB_8、DlOl、HPD100, HPD400、 HPD600、HPD^6中的一種或一種以上的大孔吸附樹脂，樹脂徑高比為1 6至1 12，吸附速度為1至4BV/h，吸附時間為4至8小時后，以1至4BV/h流速進行洗脫，先用2至5BV的水洗柱除去水溶性雜質，再用3至6BV 30%的乙醇洗脫，收集醇洗脫液，減壓濃縮至20°C相對密度為1. 05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得八角楓提取物；(2)取所需量的徐長卿，粉碎，過孔徑0. 300至0. 600mm篩后，放入揮發油提取罐中，加20至40倍量的水，每kg藥材加50至80g的NaCL，浸潤1至2小時后，水蒸氣蒸餾提取1至3小時，收集餾出物，于4°C冷藏M小時，過濾，得結晶物，在過濾的濾液中再加入 0. lg/ml氯化鈉重蒸餾，重蒸收集餾液直至澄清為止，4°C冷藏M小時，過濾，得結晶物，合并兩次結晶物，在35至40°C干燥即得每千克藥材提取質量為10至15g丹皮酚結晶；稱取1 份量丹皮酚結晶，用8至12份量的乙醇溶解后，加入25至45°C 6至10份量β -環糊精的飽和溶液中，超聲0. 5至2小時至包合物形成，冷藏M小時析晶，抽濾得包合物，用少量蒸餾水洗滌，置干燥箱中45°C以下干燥，得包合物粉末，即為徐長卿提取物；(3)取所需量的白芷和甘草，粉碎，過篩，混勻，放入提取罐中，加10至20倍量的 60%至90%的乙醇回流提取1至3次，每次1至3小時，合并提取液，過濾，減壓濃縮至每 Iml濃縮液含0. 7至1. Og白芷和甘草混合藥材；取3BV至7BV上述濃縮液，過D101、AB-8、HPDl00A, HPD400、HPD600、HPD750中的一種或一種以上的大孔吸附樹脂，樹脂徑高比為 1 7至1 12，吸附速度為1至4BV/h，吸附時間為6至10小時后，以1至4BV/h流速進行洗脫，先用3至6BV的水洗柱除去水溶性雜質，再用2至5BV 30%乙醇、3至6BV 50%乙醇分別洗脫，合并乙醇洗脫液，減壓濃縮至20°C相對密度為1. 05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得白芷和甘草提取物；(4)將上述八角楓提取物、徐長卿提取物和白芷和甘草提取物混合均勻，即得含有 1. 536% 至 5. 132% 水楊苷、10. 372% M 16. 665% 丹皮酚、0. 044% 至 0. 159% 歐前胡素和 0. 101%至0. 910%甘草苷的風濕定滴丸提取物。風濕定滴丸提取物的生產方法，其特征在于按下述步驟進行(1)取所需量的八角楓，粉碎，過篩，放入提取罐中，加15至40倍量的水或30%至 50%的乙醇回流提取1至3次，每次1至3小時，合并提取液，過濾，減壓濃縮至每Iml濃縮液含0. 8至1. 2g八角楓藥材；取4BV至8BV上述濃縮液，過AB_8、DlOl、HPD100, HPD400、 HPD600、HPD^6中的一種或一種以上的大孔吸附樹脂，樹脂徑高比為1 6至1 12，吸附速度為1至4BV/h，吸附時間為4至8小時后，以1至4BV/h流速進行洗脫，先用2至5BV的水洗柱除去水溶性雜質，再用3至6BV 30%的乙醇洗脫，收集醇洗脫液，減壓濃縮至20°C相對密度為1. 05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得八角楓提取物；(2)取所需量的徐長卿，粉碎，過孔徑0. 300至0. 600mm篩后，放入揮發油提取罐中，加20至40倍量的水，每kg藥材加50至80g的NaCL，浸潤1至2小時后，水蒸氣蒸餾提取1至3小時，收集餾出物，于4°C冷藏M小時，過濾，得結晶物，在過濾的濾液中再加入
0.lg/ml氯化鈉重蒸餾，重蒸收集餾液直至澄清為止，4°C冷藏M小時，過濾，得結晶物，合并兩次結晶物，在35至40°C干燥即得每千克藥材提取質量為10至15g丹皮酚結晶；稱取1 份量丹皮酚結晶，用8至12份量的乙醇溶解后，加入25至45°C 6至10份量β -環糊精的飽和溶液中，超聲0. 5至2小時至包合物形成，冷藏M小時析晶，抽濾得包合物，用少量蒸餾水洗滌，置干燥箱中45°C以下干燥，得包合物粉末，即為徐長卿提取物；(3)取所需量的白芷和甘草，粉碎，過篩，混勻，放入提取罐中，加10至20倍量的 60%至90%的乙醇回流提取1至3次，每次1至3小時，合并提取液，過濾，減壓濃縮至每 Iml濃縮液含0. 7至1. Og白芷和甘草混合藥材；取3BV至7BV上述濃縮液，過D101、AB-8、 HPDl00A, HPD400、HPD600、HPD750中的一種或一種以上的大孔吸附樹脂，樹脂徑高比為 1 7至1 12，吸附速度為1至4BV/h，吸附時間為6至10小時后，以1至4BV/h流速進行洗脫，先用3至6BV的水洗柱除去水溶性雜質，再用2至5BV 30%乙醇、3至6BV 50%乙醇分別洗脫，合并乙醇洗脫液，減壓濃縮至20°C相對密度為1. 05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得白芷和甘草提取物；(4)將上述八角楓提取物、徐長卿提取物和白芷和甘草提取物混合均勻，即得含有
1.536% 至 5. 132% 水楊苷、10. 372% M 16. 665% 丹皮酚、0. 044% 至 0. 159% 歐前胡素和 0. 101%至0. 910%甘草苷的風濕定滴丸提取物。本發明的風濕定滴丸，其特征在于按原料重量比組成，風濕定滴丸提取物與藥用基質聚乙二醇的重量比為1 1.5至1 4.5。風濕定滴丸的生產方法，其特征在于按下述步驟得到按上述重量比稱取藥用基質聚乙二醇，將其放于75°C至100°C水預鍋上完全熔融后，加入風濕定滴丸提取物，攪拌混勻后，倒入滴丸機料槽中，攪拌，使藥液溫度達65至 90°C，保溫25至35分鐘后，在8至12厘米的滴距下，以35滴/分鐘至55滴/分鐘的速度滴入冷卻液中，待滴丸完全冷凝收縮成型后，取出，用甩油機去除滴丸表面冷卻液，即得。所述冷卻液為二甲基硅油或液體石蠟或甲基硅油或植物油。本發明的效果本發明遵循原方功能主治，采用現代中藥研究的技術手段，對原方進行系統深入的研究，研制出現代中藥風濕定滴丸。由于它具有較高純度和含量的水楊苷、丹皮酚、歐前胡素、甘草苷，因此它的優勢在于明確了有效成分，提高了有效成分的純度和利用度，增強了療效，減少了服用劑量；去掉了毒性成分，降低了毒副作用；建立了多個成分的高效液相測定方法，增強了質量控制手段；采用了包合技術，增強揮發成分的穩定性，便于放置和儲存；利用固體分散技術，建立了滴丸新劑型，縮短起效時間，提高了生物利用度；綜上所述，使本發明所涉及的風濕定滴丸具有三效(速效、高效、長效)、三小(服用劑量小、毒性小、副作用小)、五方便(生產方便、貯存方便、運輸方便、攜帶方便、使用方便)的優點，符合現代中藥理論的基本要求。本發明具有活血通絡，祛風除濕，清腫止痛作用，適用于治療關節腫脹、屈伸不利、麻木僵硬、肌肉酸痛及風濕性與類風濕性關節炎。


圖1為水楊苷對照品測定的色譜圖。圖2為水楊苷樣品測定的色譜圖。圖3為丹皮酚對照品測定的色譜圖。圖4為丹皮酚樣品測定的色譜圖。圖5為波長為300nm處歐前胡素和甘草苷混合對照品測定的色譜圖。圖6為波長為276nm處歐前胡素和甘草苷混合對照品測定的色譜圖。圖7為波長為300nm處歐前胡素和甘草苷混合樣品測定的色譜圖。圖8為波長為276nm處歐前胡素和甘草苷混合樣品測定的色譜圖。
具體實施例方式實施例1 該風濕定滴丸提取物其組分按原料重量百分比組成為八角楓80%，徐長卿 11%,白芷6%，甘草3%。實施例2 該風濕定滴丸提取物其組分按原料重量百分比組成為八角楓85%，徐長卿9%， 白芷4%，甘草2%。實施例3 該風濕定滴丸提取物其組分按原料重量百分比組成為八角楓90%，徐長卿7%， 白芷2.5%，甘草0.5%。實施例4:該風濕定滴丸提取物其組分按原料重量百分比組成為八角楓90%，徐長卿8%， 白芷1%，甘草1%。
上述實施例1至4可通過以下生產方法得到實施例5 取所需量的八角楓，粉碎，過篩，放入提取罐中，加20倍量的水回流提取3次，每次 1小時，合并提取液，過濾、減壓濃縮至每Iml濃縮液含0. Sg八角楓藥材。取5BV上述濃縮液,過48-8、0101、朋0100、朋0400、朋0600、朋0擬6中的一種或一種以上的大孔吸附樹脂， 樹脂徑高比為1 8，吸附速度為!3BV/h，吸附時間為5小時后，以2BV/h流速進行洗脫，先用 3BV的水洗柱除去水溶性雜質，再用4BV 30%的乙醇洗脫，收集醇洗脫液，減壓濃縮至20°C 相對密度為1. 05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得八角楓提取物。取所需量的徐長卿，粉碎，過孔徑0. 300mm篩后，放入揮發油提取罐中，加25倍量的水，每kg藥材加65g的NaCL， 浸潤1小時后，水蒸氣蒸餾提取2小時，收集餾出物，于4°C冷藏M小時，過濾，得結晶物， 在濾液中再加入0. lg/ml氯化鈉重蒸餾，重蒸收集餾液直至澄清為止，4°C冷藏M小時，過濾，得結晶物，合并兩次結晶物，在35至40°C干燥得每千克藥材提取質量為10至15g丹皮酚結晶；稱取1份量丹皮酚結晶，用10份量的乙醇溶解后，加入30°C 8份量β-環糊精的飽和溶液中，超聲1小時至包合物形成，冷藏M小時析晶，抽濾得包合物，用少量蒸餾水洗滌，置干燥箱中45°C以下干燥，得包合物粉末，即為徐長卿提取物。取所需量的白芷和甘草， 粉碎，過篩，混勻，放入提取罐中，加14倍量的75%的乙醇回流提取2次，每次1. 5小時，合并提取液，過濾、減壓濃縮至每Iml濃縮液含1. Og混合藥材。取4BV上述濃縮液，過D101、 AB-8、HPDl00A, HPD400、HPD600、HPD750中的一種或一種以上的大孔吸附樹脂，樹脂徑高比為1 10，吸附速度為2BV/h，吸附時間為6小時后，以2BV/h流速進行洗脫，先用4BV的水洗柱除去水溶性雜質，再用3BV 30%乙醇、5BV 50%乙醇分別洗脫，合并乙醇洗脫液，減壓濃縮至20°C相對密度為1. 05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得白芷和甘草提取物。將上述八角楓提取物、徐長卿提取物和白芷和甘草提取物混合均勻，即得含有1. 536%至5. 132% 水楊苷、10. 372%至16. 665%丹皮酚、0. 044%至0. 159%歐前胡素和0. 101%至0. 910%甘草苷的風濕定滴丸提取物。將該風濕定滴丸提取物用甲醇適量稀釋后測定，其中水楊苷、丹皮酚、歐前胡素和甘草苷的轉移率分別為78^^87^^80%和65%。實施例6 取所需量的八角楓，粉碎，過篩，放入提取罐中，加30倍量的30%的乙醇回流提取 2次，每次2小時，合并提取液，過濾、減壓濃縮至每Iml濃縮液含Ig八角楓藥材。取6BV上述濃縮液，過AB-8、D101、HPD100、HPD400、HPD600、HPD^6中的一種或一種以上的大孔吸附樹脂，樹脂徑高比為1 6，吸附速度為lBV/h，吸附時間為6小時后，以lBV/h流速進行洗脫，先用4BV的水洗柱除去水溶性雜質，再用5BV 30%的乙醇洗脫，收集醇洗脫液，減壓濃縮至20°C相對密度為1. 05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得八角楓提取物。取所需量的徐長卿，粉碎，過孔徑0. 400mm篩后，放入揮發油提取罐中，加20倍量的水，每kg藥材加55g 的NaCL，浸潤2小時后，水蒸氣蒸餾提取3小時，收集餾出物，于4°C冷藏M小時，過濾，得結晶物，在濾液中再加入0. lg/ml氯化鈉重蒸餾，重蒸收集餾液直至澄清為止，4°C冷藏M 小時，過濾，得結晶物，合并兩次結晶物，在35至40°C干燥即得每千克藥材提取質量為10至 15g丹皮酚結晶；稱取1份量丹皮酚結晶，用11份量的乙醇溶解后，加入35°C 9份量β-環糊精的飽和溶液中，超聲1. 5小時至包合物形成，冷藏M小時析晶，抽濾得包合物，用少量蒸餾水洗滌，置干燥箱中45°C以下干燥，得包合物粉末，即為徐長卿提取物。取所需量的白芷和甘草，粉碎，過篩，混勻，放入提取罐中，加16倍量的80%的乙醇回流提取3次，每次1 小時，合并提取液，過濾、減壓濃縮至每Iml濃縮液含0. Sg混合藥材。取5BV上述濃縮液， 過D101、AB-8、HPDl00A, HPD400、HPD600、HPD750中的一種或一種以上的大孔吸附樹脂，樹脂徑高比為1 8，吸附速度為lBV/h，吸附時間為7小時后，以3BV/h流速進行洗脫，先用 5BV的水洗柱除去水溶性雜質，再用5BV 30%乙醇、4BV 50%乙醇分別洗脫，合并乙醇洗脫液，減壓濃縮至20°C相對密度為1. 05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得白芷和甘草提取物。將上述八角楓提取物、徐長卿提取物和白芷和甘草提取物混合均勻，即得含有1.536% 至5. 132%水楊苷、10. 372%至16. 665%丹皮酚、0. 044%至0. 159%歐前胡素和0. 101%至 0. 910%甘草苷的風濕定滴丸提取物。將該風濕定滴丸提取物用甲醇適量稀釋后測定，其中水楊苷、丹皮酚、歐前胡素和甘草苷的轉移率分別為74^^89^^77%和69%。實施例7 取所需量的八角楓，粉碎，過篩，放入提取罐中，加40倍量的50%的乙醇回流提取 3次，每次3小時，合并提取液，過濾、減壓濃縮至每Iml濃縮液含1. 2g八角楓藥材。取8BV 上述濃縮液，過AB-8、DlOl、HPD100, HPD400、HPD600、HPD826中的一種或一種以上的大孔吸附樹脂，樹脂徑高比為1 11，吸附速度為4BV/h，吸附時間為8小時后，以4BV/h流速進行洗脫，先用5BV的水洗柱除去水溶性雜質，再用6BV 30%的乙醇洗脫，收集醇洗脫液，減壓濃縮至20°C相對密度為1. 05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得八角楓提取物。取所需量的徐長卿，粉碎，過孔徑0. 500mm篩后，放入揮發油提取罐中，加25倍量的水，每kg藥材加80g的NaCL，浸潤2小時后，水蒸氣蒸餾提取3小時，收集餾出物，于4°C冷藏M小時，過濾，得結晶物，在濾液中再加入0. lg/ml氯化鈉重蒸餾，重蒸收集餾液直至澄清為止，4°C冷藏M小時，過濾，得結晶物，合并兩次結晶物，在35至40°C干燥即得每千克藥材提取質量為 10至15g丹皮酚結晶；稱取1份量丹皮酚結晶，用12份量的乙醇溶解后，加入40°C 10份量 β -環糊精的飽和溶液中，超聲0. 5小時至包合物形成，冷藏M小時析晶，抽濾得包合物，用少量蒸餾水洗滌，置干燥箱中45°C以下干燥，得包合物粉末，即為徐長卿提取物。取所需量的白芷和甘草，粉碎，過篩，混勻，放入提取罐中，加15倍量的85%的乙醇回流提取3次，每次2. 5小時，合并提取液，過濾、減壓濃縮至每Iml濃縮液含0. 7g混合藥材。取7BV上述濃縮液,過D101、AB-8、HPDl00A, HPD400、HPD600、HPD750中的一種或一種以上的大孔吸附樹脂，樹脂徑高比為1 12，吸附速度為4BV/h，吸附時間為10小時后，以2BV/h流速進行洗脫，先用3BV的水洗柱除去水溶性雜質，再用2BV 30%乙醇、3BV 50%乙醇分別洗脫，合并乙醇洗脫液，減壓濃縮至20°C相對密度為1.05至1.20的稠膏或制成干膏粉，即得白芷和甘草提取物。將將上述八角楓提取物、徐長卿提取物和白芷和甘草提取物混合均勻，即得含有1. 536%至5. 132%水楊苷、10. 372%至16. 665%丹皮酚、0. 044%至0. 159%歐前胡素和 0. 101%至0.910%甘草苷的風濕定滴丸提取物。將該風濕定滴丸提取物用甲醇適量稀釋后測定，其中水楊苷、丹皮酚、歐前胡素和甘草苷的轉移率分別為80^^85^^75%和75%。實施例8 取所需量的八角楓，粉碎，過篩，放入提取罐中，加15倍量的水回流提取3次，每次 1小時，合并提取液，過濾、減壓濃縮至每Iml濃縮液含0. 9g八角楓藥材。取6. 5BV上述濃縮液,過AB-8、DlOl、HPD100, HPD400、HPD600、HPD826中的一種或一種以上的大孔吸附樹脂，樹脂徑高比為1 8，吸附速度為lBV/h，吸附時間為6小時后，以lBV/h流速進行洗脫，先用3BV的水洗柱除去水溶性雜質，再用5BV 30%的乙醇洗脫，收集醇洗脫液，減壓濃縮至 20°C相對密度為1. 05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得八角楓提取物。取所需量的徐長卿，粉碎，過孔徑0. 600mm篩后，放入揮發油提取罐中，加35倍量的水，每kg藥材加75g的 NaCL,浸潤2小時后，水蒸氣蒸餾提取2小時，收集餾出物，于4°C冷藏M小時，過濾，得結晶物，在濾液中再加入0. lg/ml氯化鈉重蒸餾，重蒸收集餾液直至澄清為止，4°C冷藏M小時， 過濾，得結晶物，合并兩次結晶物，在35至40°C干燥即得每千克藥材提取質量為10至15g 丹皮酚結晶；稱取1份量丹皮酚結晶，用8份量的乙醇溶解后，加入25°C 6份量β-環糊精的飽和溶液中，超聲2小時至包合物形成，冷藏M小時析晶，抽濾得包合物，用少量蒸餾水洗滌，置干燥箱中45°C以下干燥，得包合物粉末，即為徐長卿提取物。取所需量的白芷和甘草，粉碎，過篩，混勻，放入提取罐中，加20倍量的60%的乙醇回流提取3次，每次1小時，合并提取液，過濾、減壓濃縮至每Iml濃縮液含0. 9g混合藥材。取3BV上述濃縮液，過D101、 AB-8、HPDl00A, HPD400、HPD600、HPD750中的一種或一種以上的大孔吸附樹脂，樹脂徑高比為1 7，吸附速度為4BV/h，吸附時間為7小時后，以2BV/h流速進行洗脫，先用5BV的水洗柱除去水溶性雜質，再用4BV 30%乙醇、4BV 50%乙醇分別洗脫，合并乙醇洗脫液，減壓濃縮至20°C相對密度為1. 05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得白芷和甘草提取物。將上述八角楓提取物、徐長卿提取物和白芷和甘草提取物混合均勻，即得含有1. 536%至5. 132% 水楊苷、10. 372%至16. 665%丹皮酚、0. 044%至0. 159%歐前胡素和0. 101%至0. 910%甘草苷的風濕定滴丸提取物。將該風濕定滴丸提取物用甲醇適量稀釋后測定，其中水楊苷、丹皮酚、歐前胡素和甘草苷的轉移率分別為85^^80^^82%和80%。對上述所得風濕定滴丸提取物中水楊苷、丹皮酚、歐前胡素和甘草苷的檢測分析方法如下。實驗藥物水楊苷對照品(購置美國sigma公司)，丹皮酚、歐前胡素和甘草苷對照品(均購于中國藥品生物制品檢定所)I.水楊苷的測定色譜條件與系統適應性試驗采用Shim-pack vp-ODS C18 (150_Χ 4. 6謹，5 μ m)， 柱溫為25°C;以乙腈-水(7 93)為流動相，流速為l.OmL/min;檢測波長為沈9nm。理論塔板數以水楊苷計算不低于4000。對照品溶液精密稱取水楊苷對照品適量，加甲醇溶解并定容，制成ImL含75 μ g 的溶液，即得。供試品溶液精密稱取風濕定滴丸提取物0. 2g，置IOmL量瓶中，甲醇稀釋至刻度， 搖勻，溶解，過0. 45 μ m濾膜，即得。樣品含量測定分別精密吸取對照品與供試品溶液各20μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。II.丹皮酚的測定色譜條件與系統適應性試驗采用Shim-pack vp-ODS C18(150mmX4. 6mm, 5 μ m), 柱溫為25°C ；以甲醇-水G5 55)為流動相，流速為1. OmL/min ；檢測波長為274nm。理論塔板數以水楊苷計算不低于3000。對照品溶液精密稱取丹皮酚對照品適量，加無水乙醇溶解并定容，制成ImL含 25 μ g的溶液，即得。
供試品溶液精密稱取風濕定滴丸提取物0. 2g，置25mL量瓶中，用無水乙醇稀釋 至刻度，搖勻，超聲 20min (250ff,50kHz,45°C )后冷藏 12h，離心(12000r/min、3min)，精密吸
取上清液，即得。樣品含量測定分別精密吸取對照品與供試品溶液各10iU，注入液相色譜儀，測 定，即得。III.歐前胡素和甘草苷的同時測定色譜條件與系統適應性試驗采用Shim-pack vp-ODS C18 (250mmX4. 6mm, 4. 6 u m)，柱溫35°C，檢測波長為雙波長276nm(檢測甘草苷)、300nm(檢測歐前胡素)，流 速0. 6ml/min，梯度洗脫，程序如下梯度洗脫3min 甲醇水=45 556min 甲醇水=55 458min 甲醇水=65 35理論塔板數以歐前胡素和甘草苷分別計算不低于2500、3000。對照品溶液精密稱取歐前胡素和甘草苷對照品適量，加甲醇溶解并定容，制成 ImL含200ii g、180ii g的溶液，即得。供試品溶液精密稱取風濕定滴丸提取物0. 2g，置IOmL量瓶中，甲醇稀釋至刻度， 搖勻，溶解，過0. 45 y m濾膜，即得。樣品含量測定分別精密吸取對照品與供試品溶液各10iU，注入液相色譜儀，測 定，即得。結果，風濕定滴丸提取物中水楊苷占總浸膏量的1.536% 5. 132%、丹皮酚浸 膏量的10. 372% 16. 665%、歐前胡素浸膏量的0. 044% 0. 159%、甘草苷浸膏量的 0. 101% 0. 910%。實施例9 該風濕定滴丸及其生產方法如下風濕定滴丸提取物IOg藥用基質PEG4000，40g化料溫度70°C油浴溫度上限90°C下限85°C底盤溫度上限90°C下限85°C 制冷溫度上限15°C下限10°C冷卻劑ニ甲基硅油滴距8cm ；滴速35士3滴/min具體生產方法稱取要用基質PEG4000量為40g，于70°C水浴鍋上完全熔融后，カロ 入風濕定滴丸提取物10g，攪拌混勻后，倒入滴丸機裝料槽中，攪拌、保溫25分鐘后，在8cm 的滴距下，以35滴/min的速度滴入ニ甲基硅油冷卻液中，待滴丸完全收縮冷凝成型后，取 出，用甩油機除去滴丸表面冷卻液，即得。實施例10 該風濕定滴丸及其生產方法如下風濕定滴丸提取物IOg藥用基質PEG4000，30g化料溫度75°C油浴溫度上限85°C下限80°C底盤溫度上限85°C下限80°C 制冷溫度上限15°C下限10°C冷卻劑液體石蠟滴距10cm ；滴速45士3滴/min具體生產方法稱取要用基質PEG4000量為30g，于75°C水浴鍋上完全熔融后，カロ入風濕定滴丸提取物10g，攪拌混勻后，倒入滴丸機裝料槽中，攪拌、保溫30分鐘后，在IOcm 的滴距下，以45滴/min的速度滴入二甲基硅油冷卻液中，待滴丸完全收縮冷凝成型后，取 出，用甩油機除去滴丸表面冷卻液，即得。實施例11 該風濕定滴丸及其生產方法如下風濕定滴丸提取物10g藥用基質PEG4000，20g化料溫度80°C油浴溫度上限70°C下限65°C底盤溫度上限70°C下限65°C 制冷溫度上限15°C下限10°C冷卻劑植物油滴距12cm ；滴速55士3滴/min具體生產方法稱取要用基質PEG4000量為20g，于80°C水浴鍋上完全熔融后，力口 入風濕定滴丸提取物10g，攪拌混勻后，倒入滴丸機裝料槽中，攪拌、保溫25分鐘后，在12cm 的滴距下，以55滴/min的速度滴入二甲基硅油冷卻液中，待滴丸完全收縮冷凝成型后，取 出，用甩油機除去滴丸表面冷卻液，即得。實施例12 該風濕定滴丸及其生產方法如下風濕定滴丸提取物10g藥用基質PEG4000，25g化料溫度85°C油浴溫度上限75°C下限70°C底盤溫度上限75°C下限70°C 制冷溫度上限10°C下限5°C冷卻劑甲基硅油滴距11cm;滴速50士3滴/min具體生產方法稱取要用基質PEG4000量為25g，于85°C水浴鍋上完全熔融后，力口 入風濕定滴丸提取物10g，攪拌混勻后，倒入滴丸機裝料槽中，攪拌、保溫30分鐘后，在Ilcm 的滴距下，以50滴/min的速度滴入二甲基硅油冷卻液中，待滴丸完全收縮冷凝成型后，取 出，用甩油機除去滴丸表面冷卻液，即得。實施例13 該風濕定滴丸及其生產方法如下風濕定滴丸提取物10g藥用基質PEG4000，35g化料溫度90°C油浴溫度上限80°C下限75°C底盤溫度上限80°C下限75°C 制冷溫度上限5°C下限0°C冷卻劑二甲基硅油滴距9cm ；滴速55士3滴/min具體生產方法稱取要用基質PEG4000量為35g，于90°C水浴鍋上完全熔融后，力口 入風濕定滴丸提取物10g，攪拌混勻后，倒入滴丸機裝料槽中，攪拌、保溫35分鐘后，在9cm 的滴距下，以55滴/min的速度滴入二甲基硅油冷卻液中，待滴丸完全收縮冷凝成型后，取 出，用甩油機除去滴丸表面冷卻液，即得。上述風濕定滴丸經藥效學試驗，其在抗炎、鎮痛方面的作用結果如下(一)抗炎作用1.1對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響NIH種小鼠50只，隨機分組，每組10只，正常 對照組、阿司匹林組、風濕定滴丸低劑量組、中劑量組、高劑量組，除正常對照組外，各組均 0. 2ml/10g,灌胃給藥3d，正常對照組灌予等量容積蒸餾水，末次給藥Ih后，將二甲苯涂于 小鼠右耳前后兩面，50 u 1/只，2h后將小鼠頸椎脫臼處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用8mm打孔器分別在同一部位打下圓耳片，稱重，計算腫脹度(以兩耳質量之差為腫脹度指標)，結果進行統計學處理(如表1)。實驗結果表明，風濕定高劑量組和阿司匹林組動物的腫脹度與正常對照組比較，差異有統計學意義(P < 0. 05)。1. 2對大鼠棉球肉芽腫的影響取雄性大鼠60只，隨機分組，每組12只，分別為正常對照組、地塞米松組、風濕定滴丸低劑量組、中劑量組、高劑量組。試驗時，烏來糖深度麻醉， 無菌操作，將兩個高溫高壓消毒的20mg脫脂棉球分別植入大鼠兩側腋窩皮下，棉球形狀應和植人部位一樣。術后連續給藥7d,正常對照組灌予等量容積蒸餾水。第8天脫白處死大鼠，取出棉球，置60%烤箱烤至恒重，減去棉球原質量，即為肉芽腫質量，肉芽腫質量以g表示，比較各組肉芽腫質量(如表2)。實驗結果表明，風濕定滴丸各劑量組和地塞米松組動物在抑制棉球肉芽腫脹與正常對照組比較，具有顯著性差異(P < 0. 05)。提示，風濕定滴丸對慢性炎癥有顯著的抑制作用，具有明顯抗炎作用。(二)鎮痛作用2. 1對熱刺激致痛的影響(熱板法)NIH小鼠，雌性，使用智能熱板儀重復測定小鼠正常痛閾值兩次，選取基礎痛閾在5 30s之間的小鼠，取后兩次痛閾平均值作為該鼠給藥前的基礎痛閾值。將動物隨機分為正常對照組，阿司匹林組，風濕定滴丸低劑量組、中劑量組和高劑量組，每組10只。每組按o.ani/iog，灌胃給藥，正常對照組給蒸餾水。于藥后 30、60、120min分別測小鼠痛閾值計算痛閾提高百分率，比較組間差異。如60s仍無反應，將小鼠取出，以免燙傷，其痛閾值以60s計算。結果用t檢驗進行統計學處理(如表3)。結果表明，與正常對照組比較，風濕定滴丸各劑量組和阿司匹林組給藥后30min，痛閾提高百分率差異無統計學意義(P >0.05)；藥后60min，中劑量組與阿司匹林組痛閾提高百分率具有顯著性差異(P < 0. 05)；藥后120min，風濕定滴丸各劑量組和阿司匹林組的痛閾提高百分率與正常對照組比較，具有顯著性差異(P < 0. 05)。2.2對化學刺激致痛的影響(甲醛致痛)NIH小鼠，雌雄各半，SPF級，隨機分為正常對照組，阿司匹林組，風濕定滴丸低劑量組、中劑量組和高劑量組，每組10只，各組按 0. aiil/10g，連續灌胃給藥3d，l次/d，正常對照組灌予等容積蒸餾水。末次給藥lh，各組小鼠左后足跆皮下注射2. 5%甲醛生理鹽水溶液0. 05ml/只，立即計時，分別記錄給藥后5min 和30min內小鼠舔左后足累積時間，比較各組差異(如表4)。結果表明，與正常對照組比較，風濕定滴丸高劑量組可明顯減少給藥后5min內舔足累計時間(P < 0. 05)；阿司匹林組也具有顯著性差異(P < 0. 01)。各組對給藥后30min內舔足累計時間均無顯著性差異(P > 0. 05)。2. 3對電刺激致痛的影響(大鼠尾電刺激法)SD大鼠，雌雄各半，隨機分為正常對照組，阿司匹林組，滴丸低劑量組、中劑量組、高劑量組。除正常對照組外，各組動物按 lml/100g給藥，連續灌胃給藥5d，1次/d，正常對照組灌予等容積蒸餾水。末次給藥Ih后， 將動物的尾巴放在電極上，使用生物機能實驗系統，采用連續連續電刺激模塊，程控方式， 0.05mA/s的速度增加電流。以動物的嘶叫為標準斷開電流，記錄當時的電流強度(mA)(如表5)。結果表明，風濕定滴丸高劑量組和阿司匹林組動物在電刺激實驗中忍受的電流強度與正常對照組比較，具有顯著性差異(P < 0. 05)。2. 4對機械致痛的影響(大鼠尾尖部壓痛法)SD大鼠，雌雄各半，隨機分為正常對照組，阿司匹林組，獨一味滴丸低劑量組、中劑量組、高劑量組。除正常對照組外，各組動物按lml/100g給藥，連續灌胃給藥5d，l次/d，末次給藥Ih后，將動物的尾尖部放在壓片上， 接通電流，壓片上的壓塊不斷移動，逐漸增加壓片的壓強。以動物的嘶叫為標準斷開電流， 記錄當時的壓塊的移動距離(cm)(如表6)。結果表明，風濕定滴丸高劑量組和阿司匹林組在壓尾致痛實驗中忍受壓強的程度與正常對照組比較，具有顯著性差異(P < 0. 05)。藥效學試驗結果表明，本發明風濕定滴丸具有明顯抗炎作用(二甲苯致炎法和棉球肉芽腫法)和鎮痛作用(熱板法、甲醛致痛、大鼠尾電刺激法和大鼠尾尖部壓痛法)，并呈現量效關系方式，本試驗為風濕定滴丸用于臨床抗炎、鎮痛提供了重要的藥效學依據。上述風濕定滴丸經毒理學研究，其結果如下急性毒理學實驗單次小鼠灌胃(ig)風濕定滴丸，劑量約為臨床用藥劑量的700 倍，連續觀察15天，小鼠活動未見明顯異常，也無動物死亡。長期毒性試驗風濕定滴丸高中低三個劑量，約為臨床劑量的20、60、180倍，連續灌胃(ig)給藥小鼠12周，無明顯毒性反應，也未見遲發性毒性反應。上述風濕定滴丸經臨床研究，其結果如下風濕定滴丸具有活血通絡，祛風除濕，清腫止痛作用，用于治療關節腫脹、屈伸不利、麻木僵硬、肌肉酸痛及風濕性與類風濕性關節炎。經300例臨床試驗研究，顯效率為 90. 8%,總有效率為99. 5%0本發明工藝生產的風濕定滴丸，組方科學，配伍嚴謹，經藥效學、毒理學及臨床研究，表明該藥具有較高的臨床療效，未發現明顯的不良反應，安全穩定，質量可控，工藝先進，檢測手段科學。表1風濕定滴丸對二甲苯致小鼠耳廓腫脹度的影響G 土 s， g)
權利要求
1.一種風濕定滴丸提取物，其特征在于由以下原料制成，其原料重量百分比為八角楓 80%至90%,徐長卿7%至11%,白芷1%至6%,甘草0. 5%至3%。
2.根據權利要求1所述的風濕定滴丸提取物，其特征在于該風濕定滴丸提取物按下述步驟得到(1)取所需量的八角楓，粉碎，過篩，放入提取罐中，加15至40倍量的水或30%至50% 的乙醇回流提取1至3次，每次1至3小時，合并提取液，過濾，減壓濃縮至每Iml濃縮液含0.8 至 1. 2g 八角楓藥材；取 4BV 至 8BV 上述濃縮液，過 AB-8、D101、HPD100、HPD400、HPD600、 HPD826中的一種或一種以上的大孔吸附樹脂，樹脂徑高比為1:6至1:12，吸附速度為1至 4BV/h,吸附時間為4至8小時后，以1至4BV/h流速進行洗脫，先用2至5BV的水洗柱除去水溶性雜質，再用3至6BV 30%的乙醇洗脫，收集醇洗脫液，減壓濃縮至20°C相對密度為1.05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得八角楓提取物；(2)取所需量的徐長卿，粉碎，過孔徑0.300至0. 600mm篩后，放入揮發油提取罐中，加 20至40倍量的水，每kg藥材加50至80g的NaCL，浸潤1至2小時后，水蒸氣蒸餾提取1至 3小時，收集餾出物，于4°C冷藏M小時，過濾，得結晶物，在過濾的濾液中再加入0. lg/ml 氯化鈉重蒸餾，重蒸收集餾液直至澄清為止，4°C冷藏M小時，過濾，得結晶物，合并兩次結晶物，在35至40°C干燥即得每千克藥材提取質量為10至15g丹皮酚結晶；稱取1份量丹皮酚結晶，用8至12份量的乙醇溶解后，加入25至45°C 6至10份量β-環糊精的飽和溶液中，超聲0. 5至2小時至包合物形成，冷藏M小時析晶，抽濾得包合物，用少量蒸餾水洗滌，置干燥箱中45°C以下干燥，得包合物粉末，即為徐長卿提取物；(3)取所需量的白芷和甘草，粉碎，過篩，混勻，放入提取罐中，加10至20倍量的60%至 90%的乙醇回流提取1至3次，每次1至3小時，合并提取液，過濾，減壓濃縮至每Iml濃縮液含0.7至l.Og白芷和甘草混合藥材；取3BV至7BV上述濃縮液，過D101、AB_8、HPD100A、 HPD400、HPD600、HPD750中的一種或一種以上的大孔吸附樹脂，樹脂徑高比為1:7至1:12， 吸附速度為1至4BV/h，吸附時間為6至10小時后，以1至4BV/h流速進行洗脫，先用3至 6BV的水洗柱除去水溶性雜質，再用2至5BV 30%乙醇、3至6BV 50%乙醇分別洗脫，合并乙醇洗脫液，減壓濃縮至20°C相對密度為1. 05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得白芷和甘草提取物；(4)將上述八角楓提取物、徐長卿提取物和白芷和甘草提取物混合均勻，即得含有 1. 536% 至 5. 132% 水楊苷、10. 372% 至 16. 665% 丹皮酚、0. 044% 至 0. 159% 歐前胡素和 0. 101% 至0. 910%甘草苷的風濕定滴丸提取物。
3.—種風濕定滴丸提取物的生產方法，其特征在于按下述步驟進行(1)取所需量的八角楓，粉碎，過篩，放入提取罐中，加15至40倍量的水或30%至50% 的乙醇回流提取1至3次，每次1至3小時，合并提取液，過濾，減壓濃縮至每Iml濃縮液含0.8 至 1. 2g 八角楓藥材；取 4BV 至 8BV 上述濃縮液，過 AB-8、D101、HPD100、HPD400、HPD600、 HPD826中的一種或一種以上的大孔吸附樹脂，樹脂徑高比為1:6至1:12，吸附速度為1至 4BV/h,吸附時間為4至8小時后，以1至4BV/h流速進行洗脫，先用2至5BV的水洗柱除去水溶性雜質，再用3至6BV 30%的乙醇洗脫，收集醇洗脫液，減壓濃縮至20°C相對密度為1.05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得八角楓提取物；(2)取所需量的徐長卿，粉碎，過孔徑0.300至0. 600mm篩后，放入揮發油提取罐中，加20至40倍量的水，每kg藥材加50至80g的NaCL，浸潤1至2小時后，水蒸氣蒸餾提取1至 3小時，收集餾出物，于4°C冷藏M小時，過濾，得結晶物，在過濾的濾液中再加入0. lg/ml 氯化鈉重蒸餾，重蒸收集餾液直至澄清為止，4°C冷藏M小時，過濾，得結晶物，合并兩次結晶物，在35至40°C干燥即得每千克藥材提取質量為10至15g丹皮酚結晶；稱取1份量丹皮酚結晶，用8至12份量的乙醇溶解后，加入25至45°C 6至10份量β -環糊精的飽和溶液中，超聲0. 5至2小時至包合物形成，冷藏24小時析晶，抽濾得包合物，用少量蒸餾水洗滌，置干燥箱中45°C以下干燥，得包合物粉末，即為徐長卿提取物；(3)取所需量的白芷和甘草，粉碎，過篩，混勻，放入提取罐中，加10至20倍量的60%至 90%的乙醇回流提取1至3次，每次1至3小時，合并提取液，過濾，減壓濃縮至每Iml濃縮液含0.7至l.Og白芷和甘草混合藥材；取3BV至7BV上述濃縮液，過D101、AB_8、HPD100A、 HPD400、HPD600、HPD750中的一種或一種以上的大孔吸附樹脂，樹脂徑高比為1:7至1:12， 吸附速度為1至4BV/h，吸附時間為6至10小時后，以1至4BV/h流速進行洗脫，先用3至 6BV的水洗柱除去水溶性雜質，再用2至5BV 30%乙醇、3至6BV 50%乙醇分別洗脫，合并乙醇洗脫液，減壓濃縮至20°C相對密度為1. 05至1. 20的稠膏或制成干膏粉，即得白芷和甘草提取物；(4)將上述八角楓提取物、徐長卿提取物和白芷和甘草提取物混合均勻，即得含有 1. 536% 至 5. 132% 水楊苷、10. 372% 至 16. 665%丹皮酚、0. 044% 至 0. 159% 歐前胡素和 0. 101% 至0. 910%甘草苷的風濕定滴丸提取物。
4.一種根據權利要求1或2或3所述風濕定滴丸提取物為原料之一的風濕定滴丸，其特征在于按原料重量比組成，風濕定滴丸提取物與藥用基質聚乙二醇的重量比為1:1. 5至 1:4. 5。
5.一種根據權利要求4所述風濕定滴丸的生產方法，其特征在于按下述步驟得到按上述重量比稱取藥用基質聚乙二醇，將其放于75°C至100°C水預鍋上完全熔融后，加入風濕定滴丸提取物，攪拌混勻后，倒入滴丸機料槽中，攪拌，使藥液溫度達65至90°C，保溫25 至35分鐘后，在8至12厘米的滴距下，以35滴/分鐘至55滴/分鐘的速度滴入冷卻液中， 待滴丸完全冷凝收縮成型后，取出，用甩油機去除滴丸表面冷卻液，即得。
6.一種根據權利要求5所述風濕定滴丸的生產方法，其特征在于所述冷卻液為二甲基硅油或液體石蠟或甲基硅油或植物油。
全文摘要
本發明涉及一種風濕定滴丸提取物和風濕定滴丸及其生產方法，其特征在于風濕定滴丸提取物由以下原料制成，其原料重量百分比為八角楓80%至90%，徐長卿7%至11%，白芷1%至6%，甘草0.5%至3%，由八角楓提取物、徐長卿提取物和白芷和甘草提取物混合均勻，即得含有1.536%至5.132%水楊苷、10.372%至16.665%丹皮酚、0.044%至0.159%歐前胡素和0.101%至0.910%甘草苷的風濕定滴丸提取物。按風濕定滴丸提取物與藥用基質聚乙二醇的重量比為1:1.5至1:4.5生產成風濕定滴丸。經藥效學試驗結果表明，本發明風濕定滴丸具有活血通絡，祛風除濕，清腫止痛之功效，用于治療關節腫脹、屈伸不利、麻木僵硬、肌肉酸痛及風濕性與類風濕性關節炎，效果顯著，具有速效、高效、長效，服用劑量小、毒性小、副作用小，生產方便、貯存方便、運輸方便、攜帶方便、使用方便的優點。
文檔編號A61K36/484GK102293816SQ201110250010
公開日2011年12月28日 申請日期2011年8月26日 優先權日2011年8月26日
發明者卓馨, 曹穩根, 段紅, 翟科峰, 高貴珍 申請人:宿州學院