專利名稱：一種鴉蔥總提取物及其在制備治療肝炎或保肝藥物中的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及藥物領域，特別涉及一種鴉蔥總提取物及其在制備治療肝炎或保肝藥物中的用途。
背景技術：
肝臟是人體最大、機能最復雜的重要代謝器官，其對于糖、脂質、蛋白質、維生素、 激素、膽汁等物質代謝中，均有重要作用；同時肝臟還有分泌、排泄、生物轉化等方面的功能；肝臟也是機體重要的屏蔽器官，其解毒功能對機體有重要保護作用，因此當肝功能損傷時會導致代謝障礙，并影響其他臟器功能，嚴重時則危及生命。肝炎是嚴重危害人類健康的疾病之一，它主要是由以侵害肝臟為主的一組病原體所致。目前，以病毒性肝炎為主，已明確病毒性肝炎至少有五個型，其中乙型病毒性肝炎是全球病毒性肝炎中的重點防治傳染病，尤其在發展中國家，也包括中國，不僅其發病率和流行率高，而且造成的影響特別嚴重，病人預后差，大多數病人轉為慢性，可能發展成肝硬化、 肝癌等。其中乙型肝炎具有廣泛的傳染性，是全球性感染性疾病。肝炎特別是乙肝，目前難以根治，治療上還沒有特效藥。現有技術中對于肝炎的治療一般采用中、西醫藥品治療的方法進行，西醫比較好的辦法是使用干擾素等藥物治療，但其成本高，一般患者承受不了，另外藥物存在明顯的毒副作用；我國傳統中醫中藥對肝炎的治療目前也有比較好的藥物，其優點是價格比較低廉，患者容易接受，同時這類藥物的毒副作用比較小，但其治療周期長，效果緩慢。除肝炎以外，在我國患有其他肝臟疾病的患者罹患率同樣甚高，據國家統計資料顯示，慢性肝病及肝硬化為是大死亡原因的第六位，且每年死亡人數在三千人以上，且該數值仍在繼續攀升中。因此研發出可有效保護肝臟并可應用于預防或治療肝臟相關疾病的藥物，實為當務之急。鴉蔥為菊科植物korzonera austriaca Wild的干燥全草。五月 六采挖、曬干。 本品全長10 40厘米。根粗壯，倒圓錐狀，直徑約3厘米。莖多數，簇生于根頸頂端，不分枝，光滑無毛，莖基被稠密褐色的纖維狀撕裂的鞘狀殘遺。基生葉線形，基部鞘狀擴大，鞘內被稠密的棉毛，邊緣平，基部邊緣有棉毛；莖生葉少數，1 3枚，鱗片狀。頭狀花序單生莖頂。其在中藥上的功能與主治為消炎散腫、解毒接骨、利尿；主治癰瘡、淋病、婦女帶下、乳腺炎等癥。鴉蔥作為傳統藏藥(藏名巴多拉)，全草入藥，文獻報道鴉蔥全草含有倍半萜類，三萜類，香豆素類，黃酮類等化合物。李泉妙、王廣樹等人研究了鴉蔥中黃酮苷類化合物的提取分離及其結構鑒定(李泉妙，王廣樹；鴉蔥中黃酮苷類成分的提取分離與結構鑒定 [J]；吉林大學學報(醫學版)；2010年01期)，但未對其有效部位總提取物的藥理作用做出進一步闡述。另外在其他相關文獻中，也未見對鴉蔥總提取物在治療肝炎和保肝作用中的報道和說明。

發明內容
本發明的目的是為了提供一種用于制備治療肝炎和保護肝臟藥物的鴉蔥總提取物。為了解決上述技術問題，本發明所提供的技術方案為一種鴉蔥總提取物，總黃酮質量百分含量為50% 80%，制備方法為步驟1)將鴉蔥全草碎成粉末，用30% 95%乙醇提取，濃縮得到乙醇浸膏；步驟2、將所述乙醇浸膏上大孔樹脂柱進行層析；步驟幻用蒸餾水洗脫后，再用30% 95%的醇水溶液洗脫樹脂柱得到洗脫液，收集并濃縮干燥洗脫液至粉末狀，得到鴉蔥總提取物。在本發明的實施例中采用大孔吸附樹脂對鴉蔥全草進行分離純化，得到鴉蔥總提取物。大孔吸附樹脂(macroporou absorption resin)是由聚合單體和交聯劑、致孔劑、 分散劑等添加劑經聚合反應制備而成的一類有機高聚物吸附劑。從吸附性能來說，它具有理化性質穩定，不溶于酸、堿及有機溶劑，選擇性較好，不受無機物影響眾多優點。就自身特性而言，它具有比表面積較大、交換速度較快、機械強度高、對被提取物污染小、熱穩定好等特點。與其它分離技術相比，它具有提高有效成分的相對含量、產品不吸潮、生產周期短、樹脂再生方便、可重復使用等優點，因而近幾年在天然產物的分離純化中被廣泛應用。該大孔吸附樹脂預處理方法為取一定量的大孔樹脂，用95%乙醇浸泡24h ^h，濕法裝柱，用95%醇洗脫，至洗脫液與蒸餾水混合不顯渾濁為止，用蒸餾水洗去乙醇， 將大孔樹脂倒出，室溫晾干。本發明利用30% 95%的醇水溶液洗脫樹脂柱，收集并濃縮醇洗液得到鴉蔥總提取物。利用30% 95%的醇水溶液提取和洗脫樹脂柱的兩個過程，所得到的物質中鴉蔥總提取物的含量基本一致，其差別在于濃度越高所需要的制備時間越短，因此其藥效也
基本一致。作為優選，本發明采用70%的乙醇水溶液洗脫樹脂柱，收集并濃縮乙醇洗液得到鴉蔥總提取物。本發明將所得到的鴉蔥總提取物經真空干燥，與醫學上可接收的載體按常規方法制成固體或液體藥物劑型。在本發明的實施例中，發明人對制備的鴉蔥總提取物進行了小鼠急性毒性試驗。 在預備試驗中，小鼠灌胃大劑量鴉蔥總提取物亦不致死，不能測出半數致死量。為了了解小鼠對鴉蔥總提取物的毒性反應情況，為進一步的保肝試驗提供安全用藥參考數據，采用最大耐受量試驗。發明人進行了小鼠的急性最大劑量耐受試驗，觀察鴉蔥總提取物給予小鼠后所產生的毒性反應和死亡情況，為安全用藥提供一定的參考資料。實驗結果表明，在試驗期內其小鼠活動正常，毛發色澤，攝食及排泄正常，七日內各組小鼠都無死亡，七日后剖殺小鼠，肉眼觀察小鼠臟器，未見異常現象。在本發明的一個實施例中，發明人建立了四氯化碳急性肝損傷模型，考察了四氯化碳致小鼠急性肝損傷和四氯化碳致大鼠急性肝損傷的生化指標。實驗分六個組正常組、 四氯化碳模型組、陽性藥物組(聯苯雙酯)、低劑量組、中劑量組、高劑量組，對實驗數據采
4用組間T檢驗，結果表明鴉蔥總提取物具有明顯的保肝活性。模型組與正常組有極顯著性差異，說明造模成功。而中劑量組、高劑量組與模型組相比較，均有極顯著性差異。中劑量組、高劑量組與陽性藥物組比較，發現鴉蔥總提取物的保肝活性明顯優于聯苯雙酯陽性藥物組。因此，鴉蔥具有顯著的保肝活性，具有極大的開發價值。在本發明的一個實施例中，發明人檢測了鴉蔥總提取物對DPPH自由基的清除作用。DPPH是1，1- 二苯基_2_苦胼基自由基的簡稱。它在有機溶劑中是一種穩定的自由基，其乙醇溶液呈深紫色，具有單一電子，故能夠接受一個電子或是氫離子，在波長為 517nm處附近有強吸收峰。有自由基清除劑存在時，DPPH的單電子被捕捉而使其顏色變淺， 在517nm處的吸光度值下降，且下降程度呈線性關系，因此可借紫外-可見分光光度儀來檢測DPPH自由基被捕捉的情形，從而評價試驗樣品的抗氧化能力。實驗結果表明，鴉蔥總提取物對DPPH自由基的清除作用IC5tl為30ug/ml，說明鴉蔥提取物的自由基清除能力強，證明了鴉蔥總提取物的保肝活性。在本發明的一個實施例中，發明人檢測了鴉蔥總提取物對細胞內HBV DNA合成的抑制作用。鴉蔥總提取物在乙型肝炎病素(HBV)DNA克隆傳染人肝癌細胞的2. 2. 15細胞中培養8天。實驗結果表明，其對HBV DNA的半數抑制濃度為IC5tl為3. (Mug^mL-1。陽性藥 Iumol -L"1的拉米夫定(3TC)對HBV DNA的抑制率為70. 2士4. 5%。證明了鴉蔥總提取物對乙型肝炎病素有較好的抑制作用。


圖1為對照品鴉蔥黃酮苷B的標準曲線。
具體實施例方式本發明公開了一種鴉蔥總提取物及其在制備治療肝炎或保肝藥物中的用途，本領域技術人員可以借鑒本文內容，適當改進工藝參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明。本發明的方法及應用已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本發明內容、精神和范圍內對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本發明技術。本發明提供的技術方案為一種鴉蔥總提取物，總黃酮質量百分含量為50% 80%，制備方法為步驟1)將鴉蔥全草碎成粉末，用30% 95%乙醇提取，濃縮得到乙醇浸膏；步驟2、將所述乙醇浸膏上大孔樹脂柱進行層析；步驟幻用蒸餾水洗脫后，再用30% 95%的醇水溶液洗脫樹脂柱得到洗脫液，收集并濃縮干燥洗脫液至粉末狀，得到鴉蔥總提取物。為了使本領域的技術人員更好地理解本發明的技術方案，下面結合具體實施例對本發明作進一步的詳細說明。實施例1 鴉蔥總提取物的制備取一定量的大孔樹脂，用95%乙醇浸泡Mh，濕法裝柱，用95%醇洗脫，至洗脫液與蒸餾水(1 幻混合不顯渾濁為止。用蒸餾水洗去乙醇，將大孔樹脂倒出，室溫晾干。
將鴉蔥全草粉碎成粉末，用50%的乙醇提取，即得鴉蔥乙醇浸膏。將鴉蔥乙醇浸膏上預處理過的大孔樹脂柱，先用蒸餾水沖洗蛋白質、多糖等水溶性雜質，再用70%的乙醇水溶液洗脫，收集并濃縮干燥洗脫液至粉末狀，得到總提取物。實施例2 鴉蔥總提取物的制備取一定量的大孔樹脂，用95%乙醇浸泡Mh，濕法裝柱，用95%醇洗脫，至洗脫液與蒸餾水(1 幻混合不顯渾濁為止。用蒸餾水洗去乙醇，將大孔樹脂倒出，室溫晾干。將鴉蔥全草粉碎成粉末，用70 %的乙醇提取，即得鴉蔥乙醇浸膏。將浸膏分散于水中，用乙醚萃取，水層揮去乙醚后將鴉蔥乙醇浸膏上預處理過的大孔樹脂柱，先用蒸餾水沖洗蛋白質、多糖等水溶性雜質，再用30%的乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液并濃縮干燥至粉末狀，得總提取物。實施例3 鴉蔥總提取物的制備取一定量的大孔樹脂，用95%乙醇浸泡Mh，濕法裝柱，用95%醇洗脫，至洗脫液與蒸餾水(1 幻混合不顯渾濁為止。用蒸餾水洗去乙醇，將大孔樹脂倒出，室溫晾干。將鴉蔥全草粉碎成粉末，用95 %的乙醇提取，即得鴉蔥乙醇浸膏。將浸膏分散于水中，用石油醚萃取，水層揮去乙醚后將鴉蔥乙醇浸膏上預處理過的大孔樹脂柱，先用蒸餾水沖洗蛋白質、多糖等水溶性雜質，再用95 %的乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液并濃縮干燥至粉末狀，得總提取物。實施例4 鴉蔥總提取物的制備取一定量的大孔樹脂，用95%乙醇浸泡Mh，濕法裝柱，用95%醇洗脫，至洗脫液與蒸餾水(1 幻混合不顯渾濁為止。用蒸餾水洗去乙醇，將大孔樹脂倒出，室溫晾干。將鴉蔥全草粉碎成粉末，用30 %的乙醇提取，即得鴉蔥乙醇浸膏。將浸膏分散于水中，用石油醚萃取，水層揮去乙醚后將鴉蔥乙醇浸膏上預處理過的大孔樹脂柱，先用蒸餾水沖洗蛋白質、多糖等水溶性雜質，再用50%的甲醇水溶液洗脫，收集洗脫液并濃縮干燥至粉末狀，得總提取物。實施例5 鴉蔥總提取物的制備取一定量的大孔樹脂，用95%乙醇浸泡Mh，濕法裝柱，用95%醇洗脫，至洗脫液與蒸餾水(1 幻混合不顯渾濁為止。用蒸餾水洗去乙醇，將大孔樹脂倒出，室溫晾干。將鴉蔥全草粉碎成粉末，用60 %的乙醇提取，即得鴉蔥乙醇浸膏。將浸膏分散于水中，用石油醚萃取，水層揮去乙醚后將鴉蔥乙醇浸膏上預處理過的大孔樹脂柱，先用蒸餾水沖洗蛋白質、多糖等水溶性雜質，再用60%的甲醇水溶液洗脫，收集洗脫液并濃縮干燥至粉末狀，得總提取物。實施例6 鴉蔥總提取物中黃酮的含量測定1鴉蔥有效部位總黃酮含量測定方法1.1儀器、試劑及材料1. 1. 1 儀器AR1530電子天平(美國)101-L-S電熱恒溫鼓風干燥箱(上海躍進醫療器械廠)TP150超聲提取器(天鵬電子新技術(上海)有限公司)8302型恒溫水浴鍋鞏義市英峪予華儀器廠
Agilent8453紫外可見分光光度計(美國)紫外分光光度儀UVmini-1240(日本島津)RE-52A旋轉蒸發儀(上海亞榮生化儀器廠)SHB-IIIA循環水式多用真空泵(上海豫康科教儀器設備有限公司)1.1. 2試劑及材料本實驗藥材采于通化地區。經吉林大學藥學院生藥教研室張靜敏教授鑒定為鴉蔥對照品鴉蔥黃酮苷B(自制)，如式I所示，
權利要求
1.一種鴉蔥總提取物，其特征在于，總黃酮質量百分含量為50% 80%，制備方法為步驟1)將鴉蔥全草碎成粉末，用30% 95%乙醇提取，濃縮得到乙醇浸膏；步驟2、將所述乙醇浸膏上大孔樹脂柱進行層析；步驟幻用蒸餾水洗脫后，再用30% 95%的醇水溶液洗脫樹脂柱得到洗脫液，收集并濃縮干燥洗脫液至粉末狀，得到鴉蔥總提取物。
2.根據權利要求1所述的鴉蔥總提取物，其特征在于，步驟1)所述乙醇為50%乙醇。
3.根據權利要求1所述的鴉蔥總提取物，其特征在于，步驟幻所述乙醇浸膏還包括上一步驟之后經過乙醚或石油醚萃取過程得到的乙醇浸膏。
4.根據權利要求1所述的鴉蔥總提取物，其特征在于，步驟幻所述大孔樹脂柱為經過預處理后的大孔樹脂柱。
5.根據權利要求3所述的鴉蔥總提取物，其特征在于，所述預處理包括取大孔樹脂，用 95%乙醇浸泡24h ^h，濕法裝柱，用95%醇洗脫，至洗脫液與蒸餾水混合不顯渾濁為止， 用蒸餾水洗大孔樹脂，室溫晾干。
6.根據權利要求1所述的鴉蔥總提取物，其特征在于，步驟幻所述醇水溶液為70%的乙醇水溶液。
7.如權利要求1所述鴉蔥總提取物在制備治療肝炎藥物中的用途。
8.如權利要求1所述鴉蔥總提取物在制備保護肝臟藥物中的用途。
9.一種藥物制劑，其特征在于，包含權利要求1 6任意一項所述鴉蔥總提取物以及醫學上可以接受的載體。
全文摘要
本發明公開了一種鴉蔥總提取物及其在制備治療肝炎或保肝藥物中的用途，該總提取物的制備方法為1)將鴉蔥全草碎成粉末，用30％～95％乙醇提取，濃縮得到乙醇浸膏；2)將所述乙醇浸膏上大孔樹脂柱進行層析；3)用蒸餾水洗脫后，再用30％～95％的醇水溶液洗脫樹脂柱得到洗脫液，收集并濃縮干燥洗脫液至粉末狀，得到鴉蔥總提取物。本發明還詳細闡述了鴉蔥總提取物在制備治療肝炎和保肝藥物中的新用途，為這兩類治療藥物的制備上市提供了可能。
文檔編號A61K36/28GK102274262SQ20111025523
公開日2011年12月14日 申請日期2011年8月31日 優先權日2011年8月31日
發明者劉銀燕, 周小平, 孫薇, 張沐新, 楊曉虹, 楊錦竹, 王廣樹, 王艷, 陳滴 申請人:吉林大學