專利名稱：一種茄科酸漿屬植物有效部位的制備方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從中藥中提取有效部位的制備和應(yīng)用領(lǐng)域，特別涉及一種茄科酸漿屬植物有效部位的制備方法及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
茄科(Solanaceae)酸漿屬(Physalis)植物全世界約120種，大多數(shù)分布在美洲熱帶及溫帶地區(qū)，少數(shù)分布在歐亞大陸及東南亞。我國(guó)有7種，其中2種為變種，分別為酸漿 (P. alkekengi L.)、 t'j丁 [P. alkekengi L. var. franchetii (Mast. )Makino] ( $禾中)、/]、 酸菜(P. minima L.)、苦藤(P. angulata L.)、毛苦藤(P. angulata L. var. illosa Bonati) (變種)、毛酸漿(P. pubescens L.)、燈籠果(P.peruxiana L.)。茄科酸漿屬植物其根、全草及果實(shí)均可入藥，成熟果實(shí)可生食，味微酸，香味濃郁，果色鮮亮，是營(yíng)養(yǎng)元素較為豐富的水果蔬菜，酸漿果紅素還可用作食品著色劑。茄科酸漿屬植物具有清熱解毒、利咽、化痰、利尿作用，用于咽痛音 ，痰熱咳嗽，小便不利等癥狀，同時(shí)外治天皰瘡、濕疹，是常用的清熱解毒藥，歷代本草多有記載。《神農(nóng)本草經(jīng)》中記載有“酸漿，味酸平，主熱煩滿，定志益氣， 利水道，產(chǎn)難，吞其實(shí)，立產(chǎn)，一名醋漿，生川澤”。掛金燈為茄科酸漿屬植物，在我國(guó)許多地方有分布，掛金燈中含有幾十種酸漿苦味素類化合物，其基本結(jié)構(gòu)為13，14-裂環(huán)-16，24-環(huán)麥角留烷。迄今為止，對(duì)茄科酸漿屬中含有酸漿苦味素類化合物有效部位的報(bào)道甚少。雖然有文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)茄科酸漿屬植物進(jìn)行了一系列常規(guī)的提取分離，并且得到一系列酸漿苦味素類化合物，但其并沒有能夠提供一種性能穩(wěn)定、藥理活性好，且技術(shù)操作科學(xué)合理的茄科酸漿屬植物有效部位的制備方法。目前在提取溶劑上，文獻(xiàn)“錦燈籠的活性成分及質(zhì)量評(píng)價(jià)研究”(張初航；錦燈籠的活性成分及質(zhì)量評(píng)價(jià)研究[D]；沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)；2009年第沈卷第10期)公開了中藥錦燈籠化學(xué)成分的分離與鑒定，包括采用乙醇提取，硅膠柱色譜分離純化，根據(jù)理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)鑒定了 3個(gè)酸漿苦味素類化合物。其中，提取溶劑采用含乙醇質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為70% 的乙醇水溶液，雖然該提取溶劑也能提取出部分的酸漿苦味素類化合物，但其屬于小極性成分，不能較完全提取有效部位活性成分，對(duì)有效部位的提取效果不佳，存在著技術(shù)缺陷。文獻(xiàn)“中藥掛金燈中酸漿苦味素類化合物的分離以及抗增殖活性”(Reiko Sunayama, Masanori Kuroyanagi, et al. Physalin and Neophysalins from Physalis alkekengi var.francheti and their differentiation inducing activity. Phytochemistry 1993 ；34 :529-533.)公開了中藥掛金燈中酸漿苦味素類化合物的分離以及抗增殖活性，包括采用甲醇提取，柱色譜分離純化，根據(jù)波譜數(shù)據(jù)鑒定了 5個(gè)酸漿苦味素類化合物，并進(jìn)行了抗增殖活性測(cè)試。其中，提取溶劑采用質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為100%的甲醇，雖然該提取溶劑能夠更充分提取出大部分的酸漿苦味素類化合物，但其毒性大，不適合工業(yè)化生產(chǎn)，存在著技術(shù)缺陷。在萃取溶劑方面，文獻(xiàn)“中藥掛金燈中黃酮和留體類成分的分離以及其抗NO效應(yīng)，，(Qiu L, Zhao F，Jiang ZH, Chen LX, Zhao Q，Liu HX, et al. Steroids and f lavonoidsfrom Physalis alkekengi var. franchetii and their inhibitory effects on nitric oxide production. J Nat Prod 2008 ；71 :642-646.)公開了從中藥掛金燈中分離甾體和黃酮以及其抗炎活性，包括采用乙醇提取，乙酸乙酯萃取，柱色譜分離純化，根據(jù)波譜數(shù)據(jù)鑒定了 15個(gè)酸漿苦味素類化合物，并進(jìn)行了抗炎活性測(cè)試。其中，萃取時(shí)，采用乙酸乙酯作為萃取溶劑，雖然該萃取溶劑也能將酸漿苦味素類化合物從提取液中萃取出來，但其萃取液中包含了一些易溶于乙酸乙酯的極性略大的非酸漿苦味素類化學(xué)成分，其萃取的酸漿苦味素類活性成分不夠集中，含量不夠高，存在著技術(shù)缺陷。在柱層析洗脫體系方面，文獻(xiàn)“錦燈籠果實(shí)化學(xué)成分的研究”(梁慧；錦燈籠果實(shí)化學(xué)成分的研究；中華中醫(yī)藥學(xué)刊；2007年第25卷第8期)公開了錦燈籠果實(shí)化學(xué)成分采用石油醚-丙酮體系洗脫分離的研究，包括采用含乙醇質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為70%的乙醇水溶液提取以及采用石油醚-丙酮體系進(jìn)行柱色譜梯度洗脫，根據(jù)波譜數(shù)據(jù)鑒定了 2個(gè)酸漿苦味素類化合物。其中，柱色譜采用的洗脫體系為石油醚-丙酮體系，雖然采用石油醚-丙酮體系進(jìn)行柱色譜梯度洗脫也能達(dá)到對(duì)酸漿苦味素類化合物分離的作用，但該洗脫體系，洗脫范圍太大，不能夠使有效部位集中于洗脫溶劑中從而不能形成一種穩(wěn)定的有效部位，存在著技術(shù)缺陷。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種茄科酸漿屬植物有效部位的制備方法，工藝操作簡(jiǎn)單，能夠提取性能穩(wěn)定、藥理活性好的茄科酸漿屬植物有效部位。一種茄科酸漿屬植物有效部位的制備方法，包括以下步驟1)提取使用提取溶劑對(duì)藥材提取，得到提取液；所述的藥材為茄科酸漿屬植物的果實(shí)、根莖、宿萼中的至少一種；2)柱層析將步驟1)得到的提取液濃縮，加水溶解，再分別用極性由小到大的萃取溶劑進(jìn)行萃取，得到萃取液，萃取液經(jīng)濃縮后上正相柱用洗脫溶劑進(jìn)行洗脫；收集洗脫液，干燥，得到茄科酸漿屬植物有效部位；所述的萃取溶劑至少包括二氯甲烷；所述的洗脫溶劑至少包括由體積比為20 35 1的二氯甲烷和甲醇組成的洗脫溶劑。萃取溶劑可以選用多種，但至少要包括二氯甲烷。二氯甲烷極性小于現(xiàn)有技術(shù)中的乙酸乙酯，不但能夠?qū)⑶芽扑釢{屬植物有效部位的酸漿苦味素類成分完全從提取液中萃取，而且也能夠去除一些易溶于乙酸乙酯的極性略大的非酸漿苦味素類化學(xué)成分，從而使茄科酸漿屬植物有效部位的酸漿苦味素類活性成分更加集中，含量更高。洗脫溶劑有比較嚴(yán)格的要求，并對(duì)體積比也有限定，該洗脫溶劑洗脫能力強(qiáng)，從而能保證得到性能穩(wěn)定、藥理活性好的茄科酸漿屬植物有效部位。為了取得更好的發(fā)明效果，以下作為本發(fā)明的優(yōu)選步驟1)中，所述的藥材為掛金燈植物的宿萼，價(jià)格便宜，并且易大量獲取。所述的提取溶劑為水、醇中的一種或兩種，這些提取溶劑使用安全、廉價(jià)，并具有較好的提取效果。更優(yōu)選地，所述的提取溶劑為含乙醇質(zhì)量百分?jǐn)?shù)95%的乙醇水溶液。該提取溶劑的性質(zhì)非常適合于提取茄科酸漿屬植物的果實(shí)、根莖、宿萼中的至少一種，能夠更加完全地獲取茄科酸漿屬植物有效部位的活性成分，具有更好的提取效果。每次加入相對(duì)于藥材重量的6 10倍重量的提取溶劑，在90°C 100°C加熱提取，每次提取的時(shí)間為池 池，提取2 3次。在這樣的提取條件下，不但節(jié)省了藥材和提取溶劑的使用量，而且能充分將藥材中的茄科酸漿屬植物有效部位提取，提高了提取率。步驟2)中，所述的萃取溶劑為石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇、含乙醇質(zhì)量百分?jǐn)?shù)95%的乙醇水溶液、水中的兩種以上，萃取時(shí)按極性大小依次使用單一溶劑進(jìn)行萃取。溶劑的極性由小到大排列依次為石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇、含乙醇質(zhì)量百分?jǐn)?shù)95%的乙醇水溶液、水。進(jìn)一步優(yōu)選，所述的萃取溶劑為石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇，萃取時(shí)按極性大小依次使用單一溶劑等體積進(jìn)行萃取。根據(jù)相似相容原理，分別通過上述萃取溶劑萃取，以使步驟1)中提取液濃縮加水溶解后的溶液按照極性由小到大分離，通過薄層色譜(TLC)檢識(shí)茄科酸漿屬植物有效部位黃色斑點(diǎn)絕大多數(shù)集中于二氯甲烷萃取液中，其他溶劑主要是為了進(jìn)一步提取茄科酸漿屬植物有效部位或者除去其他極性物質(zhì)使得提取到更高純度的茄科酸漿屬植物有效部位，從而使茄科酸漿屬植物有效部位的酸漿苦味素類活性成分更加集中，含量更高。因此，進(jìn)一步優(yōu)選，可選擇將二氯甲烷萃取的萃取液經(jīng)濃縮后得到的濃縮物上正相柱，其余的可以忽略，從而減少提取成本。所述的正相柱所用的填料為氧化鋁或100 200目的柱層層析硅膠。所述的洗脫溶劑包括由體積比為100 1的二氯甲烷和甲醇組成的洗脫溶劑、由體積比為50 1的二氯甲烷和甲醇組成的洗脫溶劑、由體積比為30 1的二氯甲烷和甲醇組成的洗脫溶劑、由體積比為25 1的二氯甲烷和甲醇組成的洗脫溶劑、由體積比為 10 1的二氯甲烷和甲醇組成的洗脫溶劑、由體積比為5 1的二氯甲烷和甲醇組成的洗脫溶劑、由體積比為2 1的二氯甲烷和甲醇組成的洗脫溶劑和由體積比為1 1的二氯甲烷和甲醇組成的洗脫溶劑，并按極性由小到大依次進(jìn)行梯度洗脫。采用由二氯甲烷和甲醇組成的洗脫溶劑，并按極性由小到大依次進(jìn)行梯度洗脫，該洗脫體系洗脫能力強(qiáng)，并且通過薄層色譜(TLC)檢識(shí)茄科酸漿屬植物有效部位幾乎全部位于由體積比為30 1的二氯甲烷和甲醇組成的洗脫溶劑及由體積比為25 1的二氯甲烷和甲醇組成的洗脫溶劑洗脫后的洗脫液中，使得茄科酸漿屬植物有效部位的酸漿苦味素類活性成分更加集中，含量更高。所述的制備方法制備的茄科酸漿屬植物有效部位，是來源于酸漿屬植物的藥物活性成分，主要為酸漿苦味素類化合物，其基本結(jié)構(gòu)為13，14-裂環(huán)-16，24-環(huán)麥角留烷，其具體結(jié)構(gòu)可參照現(xiàn)有文獻(xiàn)(參考文獻(xiàn)張初航；錦燈籠的活性成分及質(zhì)量評(píng)價(jià)研究[D]；沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)；2009年第洸卷第 10 期。Qiu L，Zhao F, Jiang ZH, Chen LX, Zhao Q，Liu HX, et al. Steroids and flavonoids from Physalis alkekengi var. franchetii and their inhibitory effects on nitric oxide production. J Nat Prod 2008 ；71 :642-6.)。所述的制備方法制備的茄科酸漿屬植物有效部位在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。 該茄科酸漿屬植物有效部位對(duì)乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)、人肝癌細(xì)胞(HepG2)、人胃癌細(xì)胞 (SGC7901)、人宮頸癌細(xì)胞(Hela)具有很好的抑制作用。以MTT比色法對(duì)茄科酸漿屬植物有效部位進(jìn)行抗腫瘤作用的篩選，結(jié)果顯示，本發(fā)明的茄科酸漿屬植物有效部位(主要為酸漿苦味素類化合物)在濃度為20ug/mL時(shí)處理腫瘤細(xì)胞系如乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)、人肝癌細(xì)胞(HepG2)、人胃癌細(xì)胞(SGC7901)、人宮頸癌細(xì)胞(Hela)能夠明顯抑制腫瘤細(xì)胞增殖，而對(duì)正常人外周血多形核白細(xì)胞(PMN)抑制作用較小。上述細(xì)胞株可采用市售產(chǎn)品，如可采用美國(guó)模式培養(yǎng)物集存庫(kù)ATCC(American type culture collection)的各種細(xì)胞株。本發(fā)明茄科酸漿屬植物有效部位可與市售或者常用的載體結(jié)合，用于制備預(yù)防或者/和治療腫瘤的藥物。所述的藥物可以為片劑、粉針劑等形式。所述的茄科酸漿屬植物有效部位制成片劑，由以下重量份的原料制成茄科酸漿屬植物有效部位50份；黏合劑2 10份；羧甲淀粉鈉6 14份；淀粉12 20份；硬脂酸鎂0. 5 1. 5份；所述的黏合劑由含羥丙甲纖維素的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為 10%的羥丙甲纖維素水溶液和含淀粉的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為4% 10%的淀粉漿按照重量比3 10混合而成。該片劑對(duì)乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)、人肝癌細(xì)胞0fepG2)、人胃癌細(xì)胞(SGC7901)、人宮頸癌細(xì)胞(Hela) 具有很好的抑制作用，對(duì)正常人外周血多形核白細(xì)胞(PMN)抑制作用較小。本發(fā)明茄科酸漿屬植物有效部位，當(dāng)在治療上進(jìn)行施用(給藥)時(shí)，可提供不同的效果。通常，可將本發(fā)明茄科酸漿屬植物有效部位配制于無毒的、惰性的和藥學(xué)上可接受的水性載體介質(zhì)中，其中，PH通常約為5 8，較佳的pH約為6 8，pH值可隨被配制物質(zhì)的性質(zhì)以及待治療的病癥而有所變化。配制好的藥物可以通過常規(guī)途徑進(jìn)行給藥，其中包括 (但并不限于)肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、皮內(nèi)或局部給藥。這類載體介質(zhì)包括(但并不限于) 鹽水、緩沖液、葡萄糖、水、甘油、乙醇及其組合。藥物制劑應(yīng)與給藥方式相匹配。本發(fā)明茄科酸漿屬植物有效部位可以被制成針劑形式，例如用生理鹽水或含有葡萄糖和其他輔劑的水溶液通過常規(guī)方法進(jìn)行制備。諸如片劑和膠囊之類的藥物，也可通過常規(guī)方法進(jìn)行制備。 藥物如針劑溶液片劑和膠囊宜在無菌條件下制造。藥物活性成分的給藥量是治療有效量， 例如每天1 μ g/kg體重 2000mg/kg體重。此外，本發(fā)明茄科酸漿屬植物有效部位還可與其他治療劑一起使用。當(dāng)本發(fā)明茄科酸漿屬植物有效部位被用作藥物時(shí)，可將治療有效劑量的茄科酸漿屬植物有效部位施用于哺乳動(dòng)物，其中該治療有效劑量通常至少約10微克/千克體重，而且在大多數(shù)情況下不超過約8毫克/千克體重，較佳地該劑量是約10微克/千克體重 約 1毫克/千克體重。當(dāng)然，具體劑量還應(yīng)考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫(yī)師技能范圍之內(nèi)的。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明提供的茄科酸漿屬植物有效部位，來源于酸漿屬植物的藥物活性成分，主要為酸漿苦味素類化合物，生理活性強(qiáng)，能夠大體上代表傳統(tǒng)藥材的功效，并且具有質(zhì)量可控、劑量小、使用方便等優(yōu)點(diǎn)，有別于傳統(tǒng)中藥的粗、大、黑的落后面貌。本發(fā)明茄科酸漿屬植物有效部位的制備方法，首次分離出了茄科酸漿屬植物有效部位，主要為酸漿苦味素類化合物，并利用提取溶劑的提取、溶劑的萃取和過柱分離法，得到了純度較高的酸漿苦味素類化合物。本發(fā)明茄科酸漿屬植物有效部位的制備方法操作簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低，適于工業(yè)化生產(chǎn)。


圖1為實(shí)施例1制備的掛金燈有效部位的高效液相色譜圖。
具體實(shí)施例方式
以下通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的內(nèi)容作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但不應(yīng)將實(shí)施例理解為對(duì)本發(fā)明的限制。在不脫離本發(fā)明上述思想情況下，根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)知識(shí)和常規(guī)手段作出的各種替換手段或變更，均包含在本發(fā)明之內(nèi)。實(shí)施例11)提取將掛金燈藥材的宿萼在60°C干燥證，得到干燥的掛金燈藥材的宿萼，取 IOKg干燥的掛金燈藥材的宿萼，每次加入相對(duì)于藥材重量6倍的含乙醇質(zhì)量百分?jǐn)?shù)95 %的乙醇水溶液(即乙醇水溶液60Kg)，在90°C回流提取，每次提取的時(shí)間為3h，總共提取3次 (乙醇水溶液總計(jì)180Kg)，合并提取液。2)柱層析將步驟1)得到的提取液減壓濃縮至近干，得稠浸膏837g，加入IL的水溶解，然后分別用IL的石油醚、IL的二氯甲烷、IL的乙酸乙酯、IL的正丁醇進(jìn)行萃取，分別得到石油醚萃取液、二氯甲烷萃取液、乙酸乙酯萃取液、正丁醇萃取液，通過薄層色譜(TLC) 檢識(shí)掛金燈有效部位黃色斑點(diǎn)基本上集中于二氯甲烷萃取液中，對(duì)二氯甲烷萃取液進(jìn)行濃縮，得二氯甲烷部位浸膏160g，上填料為150目的柱層層析硅膠的正相柱，然后分別使用多個(gè)不同的洗脫溶劑進(jìn)行洗脫，各個(gè)洗脫溶劑都由二氯甲烷和甲醇組成且體積都為6L，各個(gè)洗脫溶劑中二氯甲烷和甲醇的體積比分別為100 1,50 1,30 1,25 1 10 1,5 1,21, 1 1，并按極性由小到大依次進(jìn)行梯度洗脫。薄層色譜(TLC)檢識(shí)掛金燈有效部位黃色斑點(diǎn)集中于二氯甲烷和甲醇的體積比為30 1的洗脫溶劑的洗脫液及二氯甲烷和甲醇的體積比為25 1的洗脫溶劑的洗脫液中，收集洗脫液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在60°C旋蒸25min， 即得掛金燈有效部位33. 4g。取實(shí)施例1制備的掛金燈有效部位0. 15g，用ImL的甲醇溶解，離心，取上清液進(jìn)行Agilent 1100HPLC分析，液相色譜條件流速0. 5mL/min，紫外吸收波長(zhǎng)230nm，洗脫體系乙腈-水，洗脫條件0 60min，乙腈的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為10% 100%，其高效液相色譜如圖1所示。實(shí)施例21)提取將掛金燈藥材的宿萼在60°C干燥證，得到干燥的掛金燈藥材的宿萼，取 IOKg干燥的掛金燈藥材的宿萼，每次加入相對(duì)于藥材重量8倍的含乙醇質(zhì)量百分?jǐn)?shù)95 %的乙醇水溶液(即乙醇水溶液80Kg)，在100°C回流提取，每次提取的時(shí)間為池，總共提取2次 (乙醇水溶液總計(jì)160Kg)，合并提取液。2)柱層析將步驟1)得到的提取液減壓濃縮至近干，得稠浸膏850g，加入IL的水溶解，然后分別用IL的石油醚、IL的二氯甲烷、IL的乙酸乙酯、IL的正丁醇進(jìn)行萃取，分別得到石油醚萃取液、二氯甲烷萃取液、乙酸乙酯萃取液、正丁醇萃取液，通過薄層色譜(TLC) 檢識(shí)掛金燈有效部位黃色斑點(diǎn)基本上集中于二氯甲烷萃取液中，對(duì)二氯甲烷萃取液進(jìn)行濃縮，得二氯甲烷部位浸膏172g，上氧化鋁正相柱，然后分別使用多個(gè)不同的洗脫溶劑進(jìn)行洗脫，各個(gè)洗脫溶劑都由二氯甲烷和甲醇組成且體積都為6L，各個(gè)洗脫溶劑中二氯甲烷和甲醇的體積比分別為 100 1,50 1,30 1,25 1 10 1,5 1,2 1,1 1，并按極性由小到大依次進(jìn)行梯度洗脫。薄層色譜(TLC)檢識(shí)掛金燈有效部位黃色斑點(diǎn)集中于二氯甲烷和甲醇的體積比為30 1的洗脫溶劑的洗脫液及二氯甲烷和甲醇的體積比為25 1 的洗脫溶劑的洗脫液中，收集洗脫液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在60°C旋蒸25min，即得掛金燈有效部位 37g。實(shí)施例31)提取將掛金燈藥材的宿萼在60°C干燥證，得到干燥的掛金燈藥材的宿萼， 取IOKg干燥的掛金燈藥材的宿萼，每次加入相對(duì)于藥材重量10倍的水(即水IOOKg)，在 100°c回流提取，每次提取的時(shí)間為2h，總共提取2次(水總計(jì)200Kg)，合并提取液。2)柱層析將步驟1)得到的提取液減壓濃縮至近干，得稠浸膏820g，加入IL的水溶解，然后分別用IL的石油醚、IL的二氯甲烷、IL的乙酸乙酯、IL的正丁醇進(jìn)行萃取，分別得到石油醚萃取液、二氯甲烷萃取液、乙酸乙酯萃取液、正丁醇萃取液，通過薄層色譜(TLC) 檢識(shí)掛金燈有效部位黃色斑點(diǎn)基本上集中于二氯甲烷萃取液中，對(duì)二氯甲烷萃取液進(jìn)行濃縮，得二氯甲烷部位浸膏144g，上填料為150目的柱層層析硅膠的正相柱，然后分別使用多個(gè)不同的洗脫溶劑進(jìn)行洗脫，各個(gè)洗脫溶劑都由二氯甲烷和甲醇組成且體積都為6L，各個(gè)洗脫溶劑中二氯甲烷和甲醇的體積比分別為100 1,50 1,30 1,25 :1:10: 1， 5 1,2 1,1 1，并按極性由小到大依次進(jìn)行梯度洗脫。薄層色譜(TLC)檢識(shí)掛金燈有效部位黃色斑點(diǎn)集中于二氯甲烷和甲醇的體積比為30 1的洗脫溶劑的洗脫液及二氯甲烷和甲醇的體積比為25 1的洗脫溶劑的洗脫液中，收集洗脫液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在60°C旋蒸25min，即得掛金燈有效部位^g。實(shí)施例4 (茄科酸漿屬植物有效部位的體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn))取對(duì)數(shù)期的細(xì)胞每孔1 X IO4接種于96孔板上，每孔加入200 μ L的DMEM培養(yǎng)基， 1 后，棄上清液，然后在3個(gè)復(fù)孔中加入實(shí)施例2制備的掛金燈有效部位(每孔4 μ g)，為有效部位給藥組；在3個(gè)復(fù)孔中加入阿霉素(每孔4 μ g，碧云天試劑公司)，為阿霉素給藥組；在3個(gè)復(fù)孔中加入二甲基亞砜(每孔4 μ g)，為空白組；培養(yǎng)24h后，棄上清液。分別向阿霉素給藥組、有效部位給藥組和空白組中加入帶MTT的溶液50 μ L培養(yǎng)4h，MTT的溶液由MTT (噻唑藍(lán)，碧云天試劑公司)溶解在磷酸緩沖液(PBS，pH = 7. 3)中形成，MTT濃度為 0. 5mg/mL，再向各孔分別加入100 μ L 二甲基亞砜(DMSO)，振蕩lh，于酶標(biāo)儀上570nm處測(cè) OD (光密度 optical density)值。分別對(duì)乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)、人肝癌細(xì)胞0fepG2)、人胃癌細(xì)胞(SGC7901)、人宮頸癌細(xì)胞(Hela)和正常人外周血多形核白細(xì)胞(PMN)進(jìn)行了試驗(yàn)，上述細(xì)胞株均購(gòu)置ATCC， 具體結(jié)果如表1所示。根據(jù)表1的結(jié)果顯示，加藥(掛金燈有效部位)后(20yg/mL)，腫瘤細(xì)胞活性明顯下降，對(duì)正常人外周血多形核白細(xì)胞(PMN)抑制作用較小。其中，增殖抑制率％=(空白組OD值-加藥組OD值)/空白組OD值。表 權(quán)利要求
1.一種茄科酸漿屬植物有效部位的制備方法，包括以下步驟1)提取使用提取溶劑對(duì)藥材提取，得到提取液；所述的藥材為茄科酸漿屬植物的果實(shí)、根莖、宿萼中的至少一種；2)柱層析將步驟1)得到的提取液濃縮，加水溶解，再分別用極性由小到大的萃取溶劑進(jìn)行萃取，得到萃取液，萃取液經(jīng)濃縮后上正相柱用洗脫溶劑進(jìn)行洗脫；收集洗脫液，干燥，得到茄科酸漿屬植物有效部位；所述的萃取溶劑至少包括二氯甲烷；所述的洗脫溶劑至少包括由體積比為20 35 1的二氯甲烷和甲醇組成的洗脫溶劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的茄科酸漿屬植物有效部位的制備方法，其特征在于，步驟1) 中，所述的藥材為掛金燈植物的宿萼。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的茄科酸漿屬植物有效部位的制備方法，其特征在于，步驟1) 中，所述的提取溶劑為水、醇中的一種或兩種。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的茄科酸漿屬植物有效部位的制備方法，其特征在于，所述的提取溶劑為含乙醇質(zhì)量百分?jǐn)?shù)95%的乙醇水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的茄科酸漿屬植物有效部位的制備方法，其特征在于，步驟1) 中，每次加入相對(duì)于藥材重量的6 10倍重量的提取溶劑，在90°C 100°C加熱提取，每次提取的時(shí)間為 池，提取2 3次。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的茄科酸漿屬植物有效部位的制備方法，其特征在于，所述的萃取溶劑包括石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇，萃取時(shí)按極性大小依次使用單一溶劑等體積進(jìn)行萃取。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的茄科酸漿屬植物有效部位的制備方法，其特征在于，步驟2) 中，所述的正相柱所用的填料為氧化鋁或100 200目的柱層層析硅膠。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的茄科酸漿屬植物有效部位的制備方法，其特征在于，所述的洗脫溶劑包括由體積比為100 1的二氯甲烷和甲醇組成的洗脫溶劑、由體積比為50 1 的二氯甲烷和甲醇組成的洗脫溶劑、由體積比為30 1的二氯甲烷和甲醇組成的洗脫溶劑、由體積比為25 1的二氯甲烷和甲醇組成的洗脫溶劑、由體積比為10 1的二氯甲烷和甲醇組成的洗脫溶劑、由體積比為5 1的二氯甲烷和甲醇組成的洗脫溶劑、由體積比為 21的二氯甲烷和甲醇組成的洗脫溶劑和由體積比為11的二氯甲烷和甲醇組成的洗脫溶劑，并按極性由小到大依次進(jìn)行梯度洗脫。
9.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項(xiàng)所述的制備方法制備的茄科酸漿屬植物有效部位在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的茄科酸漿屬植物有效部位制成片劑，由以下重量份的原料制成茄科酸漿屬植物有效部位50份；黏合劑2 10份；羧甲淀粉鈉6 14份；淀粉12 - 20 份；硬脂酸鎂0. 5 1. 5份所述的黏合劑由含羥丙甲纖維素的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為 10%的羥丙甲纖維素水溶液和含淀粉的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為4% 10%的淀粉漿按照重量比3 10混合而成。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種茄科酸漿屬植物有效部位的制備方法，包括1)使用提取溶劑對(duì)藥材提取，得到提取液；藥材為茄科酸漿屬植物的果實(shí)、根莖、宿萼中的至少一種；2)將提取液濃縮，加水溶解，再分別用極性由小到大的萃取溶劑進(jìn)行萃取，得到萃取液，經(jīng)濃縮后上正相柱用洗脫溶劑進(jìn)行洗脫；收集洗脫液，干燥，得到茄科酸漿屬植物有效部位；萃取溶劑至少包括二氯甲烷；所述的洗脫溶劑至少包括由體積比為20～35∶1的二氯甲烷和甲醇組成的洗脫溶劑。該制備方法操作簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低，適于工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明方法制備的茄科酸漿屬植物有效部位，生理活性強(qiáng)，并且具有質(zhì)量可控、劑量小、使用方便等優(yōu)點(diǎn)，可用于制備抗腫瘤藥物。
文檔編號(hào)A61K36/81GK102379973SQ20111034283
公開日2012年3月21日 申請(qǐng)日期2011年11月3日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月3日
發(fā)明者季龍, 袁永雷, 馬忠俊 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)