本發明屬于一種植物多糖的提取方法，尤其涉及一種從中藥材枸杞中提取多糖的方法。

背景技術：

枸杞子(lycium chinense mill)為茄科植物，是我國傳統的藥食兼用的名貴中藥材，能滋補肝腎、益精明目。枸杞提取物主要活性成分為一種水溶性多糖，即枸杞多糖(LBP，Lycium barbarum polysaccharides)，該多糖是一種蛋白多糖，分子量為22～25kD，由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖6種單糖成分組成，具有增強免疫力、抗腫瘤、防衰老、降血壓、降血糖和抗疲勞方面的藥理作用，具有廣闊的開發前景。枸杞多糖既可以作為藥物使用，也可以作為食品加工。

現有提取純化枸杞多糖的方法有水提法，酶解法，微波法等，水提法提取過程需要多次浸提，操作時間長，提取率低，并且費時費料。酶解法提取成本較高，不利于工業化大規模生產。微波技術在提取時間方面不宜過長，功率不宜太高，會降低反應的活化能，使分子之間形成新的作用力，導致多糖分子溶出受阻。枸杞多糖進一步純化大多應用Sevage法除蛋白，柱層析等，但其工藝繁瑣，有機溶劑用量多，能耗大。

目前使用的枸杞多糖有效成分含量低，含色素、蛋白質和小分子雜質等，枸杞多糖含量不穩定，因此急需找到一種有效成分含量高，工藝簡單，枸杞多糖含量穩定的枸杞多糖提取物的制備方法。

技術實現要素：

本發明所要解決的問題是提供一種枸杞多糖提取物的制備方法，該方法克服目前制得的枸杞多糖含量低，枸杞多糖純化工藝長、能耗高、污染大的缺點，制備得到的枸杞多糖提取物有效成分含量高，枸杞多糖含量穩定、療效高。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案如下：一種枸杞多糖提取物的制備方法，所述方法包括以下步驟：

(1)堿提：取干燥枸杞，加入6～8倍干燥枸杞質量的pH為10～12的堿水，75～85℃浸提2～3次，每次1～2小時，合并得到提取液，調pH至中性，將提取液濃縮成比重為1.08～1.10的浸膏；

(2)醇沉1：將步驟(1)所得浸膏加入質量分數為90～95％乙醇進行醇沉，上清濃縮回收乙醇；

(3)醇沉2：將步驟(2)所得沉淀加水復溶，再加入質量分數為90～95％乙醇進行醇沉，上清濃縮回收乙醇，沉淀待揮去乙醇，加水溶解，冷凍干燥，即得所述枸杞多糖提取物。

上述技術方案中，所述步驟(1)中，所述堿水為氫氧化鈉水溶液。

上述技術方案中，所述步驟(3)制得的枸杞多糖提取物枸杞多糖含量大于等于30％。

作為優選，步驟(1)中，浸提溫度為75℃。

作為優選，步驟(2)中，加入的乙醇的質量分數為95％。

與現有技術相比，本發明的技術方案具有如下優點：利用堿水浸提斷裂糖肽鍵的原理分離得到枸杞多糖，再通過兩次醇沉獲得高含量枸杞多糖，含量穩定、療效高，制備工藝簡單。

具體實施方式

下面結合實施例，對本發明的具體實施方式作進一步詳細描述。以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。

實施例1

一種枸杞多糖提取物的制備方法，包括如下步驟：

(1)堿提1：取干燥枸杞200g，加入1600g的pH為12的NaOH水溶液，在75℃浸提2小時，過濾，得第一濾液和枸杞殘渣；

(2)堿提2：在步驟(1)所得枸杞殘渣中加入1200g的pH為12的NaOH水溶液，在75℃浸提1小時，過濾，得第二濾液；

(3)濾液濃縮：將步驟(1)所得第一濾液與步驟(2)所得第二濾液合并，得提取液，調pH至中性，濃縮成比重為1.08的浸膏；

(4)醇沉1：在步驟(3)所得浸膏中加入質量分數為95％乙醇進行醇沉，上清濃縮回收乙醇。

(5)醇沉2：將步驟(4)所得沉淀加水復溶，加質量分數為95％乙醇再次醇沉，上清濃縮回收乙醇，沉淀待揮去乙醇，加水溶解，冷凍干燥，制得的提取物枸杞多糖含量為31.1％。

本案例中枸杞多糖含量由下述公式計算得出：枸杞多糖含量(％)＝(提取物中枸杞多糖質量)/(枸杞多糖提取物質量)×100％。

本案例中枸杞多糖含量按照苯酚-硫酸法測定得出，具體如下：

(1)標準曲線的繪制：準確吸取D-葡萄糖標準使用液0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ml，置于25ml比色管中，補水至2.0ml，加入質量分數為5％苯酚硫酸溶液1.0ml，在漩渦混勻器上混勻，小心加入濃硫酸10ml，在漩渦混勻器上小心混勻，置沸水浴中加熱2分鐘，取出，冷卻至室溫，用分光光度計在485nm波長處以試劑空白為參比，1cm比色皿測定吸光值。以D-葡萄糖質量為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線。

(2)樣品含量的測定：

a.樣品提取：稱取混合均勻的固體樣品1.0～2.0g，置于100ml容量瓶，加水80ml左右，于沸水浴中加熱1小時，冷卻至室溫后補水加水至刻度，混勻后過濾，棄去初濾液，收集余下濾液供沉淀粗多糖。

b.沉淀粗多糖：準確吸取上述濾液5.0ml，置于50ml離心管中，加入無水乙醇20ml，混勻，于4℃冰箱靜止4小時以上，以4000r/min離心5min，棄去上清液，殘渣用數毫升質量分數為80％乙醇溶液洗滌，離心后棄去上清液，反復操作3次。殘渣用水溶解并定容至10～25ml。

c.樣品測定：準確吸取上液適量置于25ml比色管中，補水加至2.0ml，于485nm波長下測定吸光度值，從標準曲線上求出枸杞多糖含量。

實施例2

一種枸杞多糖提取物的制備方法，包括如下步驟：

(1)堿提1：取干燥枸杞200g，加入1600g的pH為10的NaOH水溶液，在75℃浸提2小時，過濾，得第一濾液和枸杞殘渣；

(2)堿提2：在步驟(1)所得枸杞殘渣中加入1200g的pH為10的NaOH水溶液，在75℃浸提1小時，過濾，得第二濾液；

(3)濾液濃縮：將步驟(1)所得第一濾液與步驟(2)所得第二濾液合并，得提取液，調pH至中性，濃縮成比重為1.20的浸膏；

(4)醇沉1：在步驟(3)所得浸膏中加入質量分數為95％乙醇進行醇沉，上清濃縮回收乙醇。

(5)醇沉2：將步驟(4)所得沉淀加水復溶，加質量分數為95％乙醇再次醇沉，上清濃縮回收乙醇，沉淀待揮去乙醇，加水溶解，冷凍干燥，制得的提取物枸杞多糖含量為30.2％。

提取物中枸杞多糖含量計算方法同上一案例。

以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明技術原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護范圍。