專利名稱：治療肝損傷的參味護(hù)肝片及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物，特別是一種治療肝損傷的藥物組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
目前世界各地各種類型的病毒性肝炎、化學(xué)性肝損傷和肝硬化的發(fā)病率較高，尤其在發(fā)展中國家發(fā)病率更高。我國是病毒性肝炎的高發(fā)區(qū)，藥物、毒物引起的肝損傷在我國很普遍，而且日益增多。尤其是病毒性肝炎，不但嚴(yán)重影響病人的健康，而且構(gòu)成對其他健康者的威脅。因此，肝病的防治問題已成為全世界醫(yī)藥界共同關(guān)注的重要問題。大多數(shù)肝病患者主要是依靠藥物治療，某些西藥的毒性物質(zhì)需要肝臟代謝消除， 這無疑是在治療肝病的同時又傷害肝臟，成為化學(xué)性肝損傷的另一誘因。因此，采用中藥治療，可以從預(yù)防入手，兼顧保健功能，可以滿足廣大患者身體健康的保健需要。因此，開發(fā)出一種在臨床上治療病毒性肝炎、化學(xué)性肝損傷和肝硬化等肝損傷性疾病的藥物，對于減少肝病的危害具有現(xiàn)實意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人從中醫(yī)治療肝病的基本原則出發(fā)，通過大量的試驗研究，由人參、白芍、 樹舌、五味子、當(dāng)歸、甘草等六味中藥組方，經(jīng)過合理的加工、提取，制成用于治療病毒性肝炎、化學(xué)性肝損傷、肝硬化的藥物組合物。該藥物組合物的藥理作用較好、無毒副作用。同時本發(fā)明還提供了臨床適用的劑型的制備方法。本發(fā)明的治療方案是基于中醫(yī)藥理論，針對肝病發(fā)病機理的認(rèn)識而確定的治療原則，同時參考了現(xiàn)代藥理學(xué)研究成果，篩選出具有滋補肝腎、養(yǎng)血柔肝、益氣養(yǎng)陰、活血止痛等功能的天然中藥，并按照中醫(yī)治則及組方原則，而開發(fā)的新型藥物組合物。在藥理研究中治療效果明顯。本發(fā)明是以以下的方法實現(xiàn)的
本發(fā)明治療肝損傷的藥物組合物是由下述原料制成的
人參 80-150g,白芍 120-240g,樹舌 160_300g，五味子 80_150g，當(dāng)歸 80_150g，甘草 60-90go本發(fā)明治療肝損傷的藥物組合物，各原料的最佳配比為
人參120g,白芍180g，樹舌240g，五味子120g，當(dāng)歸120g，甘草80g。本發(fā)明臨床應(yīng)用的藥物劑型的制備方法，包括以下步驟
⑴將人參加水煎煮兩次，每次1 2小時，煎液濾過，濾液合并，通過DlOl大孔吸附樹脂，水洗脫至無色，再用60%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇后得到人參總皂苷提取物。⑵將樹舌加水煎煮3次，每次2 3小時，煎液濾過，濾液合并，減壓濃縮至相對密度為1. 05 1. 08之間，加入乙醇使含醇量達(dá)到75%，靜置12小時，離心除去乙醇溶液，濾渣加入75%的乙醇反復(fù)洗滌，即獲得樹舌多糖提取物。(3)將白芍、五味子兩味藥材混合，粉碎，加70%乙醇回流提取3次，每次1 2小時，合并提取液，靜置48小時，吸取上清液，減壓回收乙醇，即得白芍五味子提取物。⑷將當(dāng)歸、甘草兩味藥材加水煎煮兩次，每次1 2小時，煎液濾過，濾液合并，減壓濃縮，即得當(dāng)歸甘草提取物。(5)將制備的人參皂苷提取物、樹舌多糖提取物、白芍五味子提取物和當(dāng)歸甘草提取物混合，按照藥劑學(xué)的制劑方法，加入輔料適量，制成不同的劑型。本發(fā)明其特征在于臨床上用于肝損傷的治療和預(yù)防。利用本發(fā)明生產(chǎn)的藥物的藥理藥效參味護(hù)肝片對肝損傷的治療作用一、材料與方法
1.實驗動物
Wistar大鼠，體重120_150g，雌雄各半。購于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心。清潔級健康昆明種小鼠，體重18_22g，雌雄各半。購于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心。2.藥品與試劑
參味護(hù)肝片黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院自制肝加欣吉林通化方大藥業(yè)有限公司丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑盒上海長征公司草氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑盒上海長征公司四氯化碳上海試劑三廠 D-半乳糖sigma公司環(huán)磷酰胺江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司 Hank' s洗液長沙歐邁生物科技有限公司 1640培養(yǎng)液長沙歐邁生物科技有限公司 ConA :sigma
3.儀器設(shè)備
全自動生化分析儀，低速冷凍離心機，光學(xué)顯微鏡，油鏡，自動血球分析儀，酶標(biāo)儀，超凈工作臺，恒溫培養(yǎng)箱
4.統(tǒng)計方法
所有數(shù)據(jù)以 ±S表示，組間比較用t檢驗。二、參味護(hù)肝片對CCL4致大鼠慢性肝損傷的影響 1.分組及給藥
將60只大鼠隨機分為六組正常組、模型組、肝加欣組(390mg/kg)、參味護(hù)肝片高劑量組(3%ig/kg以下簡稱高劑量組)、參味護(hù)肝片中劑量組(17mg/kg以下簡稱中劑量組)和參味護(hù)肝片低劑量組(8. 5mg/kg以下簡稱低劑量組)。各給藥組每日灌胃給藥一次，正常組和模型組給予同體積蒸餾水，連續(xù)給藥三個月。同時，除正常組外，其余各組每周二次30%CCL4 (2ml/kg)橄欖油溶液灌胃，連續(xù)三個月。2.觀察指標(biāo)
三個月后禁食M小時，動物摘眼球取血，取離心血清測定谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨
4酶(AST)，結(jié)果見表1。
3.實驗結(jié)果
表1參味護(hù)肝片對CCL4致大鼠慢性肝損傷ALT、AST的影響
組別齊 D 量(mg/kg)例數(shù)(只)ALT (U/L)AST (U/L)空白組1054. 8 ±12. 72**152. 4±37. 91**模型組10158. 1±22. 44304. 3±72. 97高劑量組341086. 3 ±8. 98**229. 4±43. 41*中劑量組1710116. 2±5. 86*256. 5±46. 32低劑量組8. 510127. 8±8. 95*261. 9±40. 61肝加欣組3901090. 5 ±9. 63**225. 4±63. 62*
注與正常組比*Ρ<0· 05，**P<0. 01
由表1結(jié)果可見，對血清ALT的影響，模型組與空白組比較差異極顯著(P<0. 01)，提示造模成功；與模型組比較高劑量組和肝加欣組能顯著降低ALT的含量(P<0. 01)；與模型組比較中劑量組和低劑量組差異也有意義(P<0. 05)。對血清AST的影響，模型組與空白組比較差異極顯著(P<0. 01)，提示造模成功；與模型組比較高劑量組和肝加欣組能顯著降低 AST的含量(P<0. 05);與模型組比較中劑量組和低劑量組對血清AST也處于較低水平，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。三、參味護(hù)肝片對D-氨基半乳糖所致小鼠急性肝損傷的影響 1.分組及給藥
將60只小鼠隨機分為六組正常組、模型組、肝加欣組(545mg/kg)、高劑量組(48mg/ kg)、中劑量組(2%ig/kg)和低劑量組(iang/kg)。各給藥組每日灌胃給藥一次，正常組和模型組給予同體積蒸餾水，連續(xù)給藥7天。2.觀察指標(biāo)
第6天晚間11點禁食，不禁水，于第7天早6點灌胃給藥，2小時后造模。造模方法 除空白組外，其余各組腹腔注射0. 1%(0. 3ml/10g)D-氨基半乳糖，禁食10小時之后摘取眼球取血，取離心血清測定谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)，結(jié)果見表2。3.實驗結(jié)果
表2參味護(hù)肝片對D-氨基半乳糖致小鼠急性肝損傷的影響
組別齊 D 量(mg/kg)例數(shù)(只)ALT (U/L)AST (U/L)空白組1029. 80±11. 71**100. 40±18. 91**模型組1061. 17±12. 41198. 39±12. 97高劑量組481027. 28 ±6. 98**109. 44±13. 41**中劑量組241034. 26 ±5. 98**132. 54±16. 32**低劑量組121038. 85 ±8. 95**131. 49±10. 61**肝加欣組5451032. 44 ±4. 63**105. 43±13. 62**
注與正常組比#P<0. 01
由表2結(jié)果可見，對血清ALT的影響，模型組與空白組比較差異極顯著(P<0. 01 )，提示造模成功；與模型組比較各給藥組均能顯著降低ALT的含量(P<0. 01)，但給藥組之間沒有統(tǒng)計學(xué)意義。對血清AST的影響，模型組與空白組比較差異極顯著(P<0. 01)，提示造模成功；與模型組比較各給藥組均能顯著降低AST的含量(P<0. 01)，但給藥組之間沒有統(tǒng)計學(xué)
眉、ο 四、參味護(hù)肝片對小鼠免疫功能的影響 (一)對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響1.分組及給藥
將60只小鼠隨機分為六組正常組、模型組、肝加欣組(545mg/kg)、高劑量組(48mg/ kg)、中劑量組(2%ig/kg)和低劑量組(iang/kg)。各給藥組每日灌胃給藥一次，正常組和模型組給予同體積蒸餾水，連續(xù)給藥7天。2.觀察指標(biāo)
給藥第3天每只小鼠腹腔注射5%可溶性淀粉1ml，第7天給藥后每只小鼠腹腔注射1% 雞紅細(xì)胞懸液0.細(xì)1，廣1. 后斷錐處死小鼠。固定在桌面上，腹部消毒后腹腔注射生理鹽水1ml，按摩腹腔，沿腹部中央將皮膚剪一小口，上下撕開，暴露腹膜，輕提腹膜剪一小口，吸取約0. 2ml腹腔液滴于載玻片上水平涂片，將玻片放在濕盒內(nèi)，置37°C溫箱孵育30min，取出，用生理鹽水淋洗，自然晾干后，用Giemsa-wright染液染5min，再用生理鹽水淋洗，晾干后，油鏡下觀察，計數(shù)200個巨噬細(xì)胞中吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)。結(jié)果見表3。吞噬指數(shù)=(被吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)/200個吞噬細(xì)胞)/2
吞噬百分率=(吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞總數(shù)/200個吞噬細(xì)胞)*100% 3.實驗結(jié)果
表3參味護(hù)肝片對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響
權(quán)利要求
1.一種治療肝損傷的藥物組合物，其特征在于，藥物組合物是由下述原料制成的藥劑 人參 80-150g,白芍 120-240g,樹舌 160_300g，五味子 80_150g，當(dāng)歸 80_150g，甘草 60_90g。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療肝損傷的藥物組合物，其特征在于，各原料的最佳配比為人參120g,白芍180g，樹舌240g，五味子120g，當(dāng)歸120g，甘草80g。
3.根據(jù)權(quán)利要求1、2所述的治療肝損傷的藥物組合物的用途，其特征在于該藥物組合物在臨床上用于治療病毒性肝炎、化學(xué)性肝損傷和肝硬化等肝損傷性疾病。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2所述的治療肝損傷的藥物組合物的制備方法，其特征在于，它具體由以下步驟組成⑴將人參加水煎煮兩次，每次1 2小時，煎液濾過，濾液合并，通過DlOl大孔吸附樹脂，水洗脫至無色，再用60%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇后得到人參總皂苷提取物。
5.⑵將樹舌加水煎煮3次，每次2 3小時，煎液濾過，濾液合并，減壓濃縮至相對密度為1. 05 1. 08之間，加入乙醇使含醇量達(dá)到75%，靜置12小時，離心除去乙醇溶液，濾渣加入75%的乙醇反復(fù)洗滌，即獲得樹舌多糖提取物。
6.⑶將白芍、五味子兩味藥材混合，粉碎，加70%乙醇回流提取3次，每次1 2小時， 合并提取液，靜置48小時，吸取上清液，減壓回收乙醇，即得白芍五味子提取物。
7.⑷將當(dāng)歸、甘草兩味藥材加水煎煮兩次，每次1 2小時，煎液濾過，濾液合并，減壓濃縮，即得當(dāng)歸甘草提取物。
8.(5)將制備的人參皂苷提取物、樹舌多糖提取物、白芍五味子提取物和當(dāng)歸甘草提取物混合，按照藥劑學(xué)的制劑方法，加入輔料適量，制成不同的劑型。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療肝損傷的藥物組合物及制備方法和制藥用途。本發(fā)明的藥物組合物在臨床上用于治療病毒性肝炎、化學(xué)性肝損傷和肝硬化等肝損傷性疾病。該藥物組合物是由人參、白芍、樹舌、五味子、當(dāng)歸、甘草等中藥材，經(jīng)過合理的提取、精制后，與藥用輔料組成的各類口服制劑。本發(fā)明的配方合理、安全有效、工藝先進(jìn)、使用方便，適用于長期服用。經(jīng)藥理學(xué)試驗證明，該制劑對CCL4致大鼠慢性肝損傷和D-氨基半乳糖致小鼠急性肝損具有保護(hù)作用，并有降酶的作用；能夠促進(jìn)大鼠膽汁的分泌；明顯提高小鼠細(xì)胞免疫及體液免疫功能，不僅可以作為肝損傷患者較好的輔助治療，也可以作為正常人群的保健用品而被長期服用。
文檔編號A61K36/71GK102512511SQ20121000400
公開日2012年6月27日 申請日期2012年1月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月9日
發(fā)明者劉玉婕, 姜海, 舒尊鵬, 董培良, 韓華 申請人:姜海, 董培良, 韓華