專利名稱：一種復方丹參制劑的制備方法及其抗氧化活性的制作方法
技術領域：
本發明所屬醫藥產品研究開發技術領域。本發明涉及一種復方丹參制劑的制備方法及其抗氧化活性。
背景技術：
丹參為雙子葉植物唇形科Labiatae鼠尾草屬植物丹參Silvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖。苦，微寒。歸心、肝經。活血調經，祛瘀止痛，涼血消癰，清心除煩，養血安神。主治月經不調，經閉痛經，癥瘕積聚，胸腹刺痛，熱痹疼痛，瘡瘍腫痛，心煩不眠；肝脾腫大，心絞痛。根主含脂溶性的二萜類成分和水溶性的酚酸成分，還含黃酮類，三萜類，甾醇等。現代藥理證明丹參具有降血脂、強心、擴張冠脈，增加心肌血流量抗血栓形成、改善微循環、促進組織的修復與再生。淫羊藿為小檗科植物淫羊藿(Epimedium brevicornum Maxim.)、箭葉淫羊藿 (Epimedium sagittatum Maxim.)、柔毛淫羊藿(Epimedium pubescens Maxim·)、或卓月鮮淫羊藿(Epimedium koreanum Nakai)的干燥葉。辛、甘，溫。歸肝、腎經。補腎陽，強筋骨，祛風濕。用于陽痿遺精，筋骨痿軟，風濕痹痛，麻木拘攣；更年期高血壓。淫羊藿含淫羊藿苷(icariin)、淫羊藿次苷(icarisoside)等，朝鮮淫羊藿含淫羊藿苷、淫羊藿新苷 (印加6(10&如^、8、(、03等.箭葉淫羊藿含淫羊藿苷、脫水淫羊藿苷元-3-0-α -鼠李糖苷，淫羊藿苷元-3-0-α -鼠李糖苷，槲皮素等。現代藥理試驗證明淫羊藿具有雄性激素樣作用、有增加冠脈流量、耐缺氧、保護心肌缺血、降壓等作用、可增強網狀內皮系統的吞噬能力、促進骨質生長，尚有抗衰老、抗疲勞、抗病毒等作用。紫球藻(Porphyridium cruentum)是屬于紅藻門的一種單細胞紅藻，在生長過程中能大量合成胞外硫酸酯多糖、藻膽蛋白和多不飽和脂肪酸等生物活性物質。紫球藻藻紅蛋白占藻膽蛋白84%，其中以B-藻紅蛋白含量最多。藻紅蛋白用途廣泛，它既可作為天然色素應用于食品、化妝品、染料等工業，又可制成熒光試劑用于臨床醫學診斷和免疫化學及生物工程等領域，藻紅蛋白還是一種具有開發潛力的光敏劑，用于腫瘤的光動力治療。紫球藻的胞外硫酸化多糖抗病毒特性突出，具有抗腫瘤、抗過敏、抗氧化、降血脂、調血脂等功能。因此，綜合開發紫球藻藻紅蛋白、多糖和藻粉系列產品，社會經濟效益明顯。人體在生命活動的氧化代謝過程中會不斷產生各種自由基，體內過多自由基對生物大分子造成損傷，導致細胞和組織的結構和功能減退，并對機體的衰老過程產生影響，最終導致疾病的發生。而人工合成的抗氧化劑具有一定的毒性和致癌作用。所以評價和篩選具有強抗氧化活性的天然植物已成為醫學、生物學和食品科學研究的新趨勢。采用典型的體外抗氧化體系，以抗壞血酸為對照，評價復方丹參制劑的抗氧化活性，為更好的開發利用復方丹參資源為抗氧化活性產品，提供理論依據。DPPH 法DPPH 為 1，1_ 二苯基 _2_ 三硝基苯胼(1，l-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical2, 2-Diphenyl-l-(2,4,6-trinitrophenyl) hydrazyl) DPPH 法于 1958 年被提出，廣泛用于測定食品的抗氧化能力。此法是根據DPPH自由基有單電子，在517nm處有一強吸收，
3其醇溶液呈紫色的特性。當有自由基清除劑存在時，由于與其單電子配對而使其吸收逐漸消失，其褪色程度與其接受的電子數量成定量關系，因而可用分光光度計進行快速定量分析。

發明內容
1. 一種具有抗氧化作用的復方丹參制劑的制備方法，其特征在于包括以下過程(1)原料藥的重量配比為丹參9g_12g、淫羊藿6g_9g、紫球藻10g_20g ；(2)將丹參和淫羊藿加入8-10倍量70%乙醇室溫下浸提8-10h，再密封超聲 30min，溫度為30°C，功率為80W，然后用紗布過濾，濾渣再分別用6倍量與4倍量70%的乙醇重復提取各一次，過濾，得濾液；(3)將⑵中的濾液合并，回收乙醇，得到丹參、淫羊藿提取物；(4)將紫球藻用5000r/min離心機離心lOmin，然后懸浮于pH7. 4,50mmol/L的磷酸緩沖液中，進行超聲破碎，破碎5s，間隔5s，20次，用lOOOOr/min高速冷凍離心機離心 15min，得上清液，冷凍干燥，得干燥物；(5)將(4)中的干燥物與C3)中的丹參、淫羊藿提取物混合均勻，得復方丹參制劑。2.將復方丹參制劑進行試驗，該制劑具有抗氧化作用根據本發明，本發明中的“ ％，，是重量百分比。
具體實施例方式本發明所述的涉及一種復方丹參制劑的制備方法及其抗氧化活性包括以下實施例，下面的實施例可進一步說明本發明，但不以任何方式限制本發明。實施例1 1. 一種具有抗氧化作用的復方丹參制劑的制備方法，其特征在于包括以下過程(1)原料藥的重量配比為丹參9g、淫羊藿6g、紫球藻IOg ；(2)將丹參和淫羊藿加入8倍量70%乙醇室溫下浸提8，再密封超聲30min，溫度為30°C，功率為80W，然后用紗布過濾，濾渣再分別用6倍量與4倍量70%的乙醇重復提取各一次，過濾，得濾液；(3)將⑵中的濾液合并，回收乙醇，得到丹參、淫羊藿提取物；(4)將紫球藻用5000r/min離心機離心lOmin，然后懸浮于pH7. 4，50mmol/L的磷酸緩沖液中，進行超聲破碎，破碎5s，間隔5s，20次，用lOOOOr/min高速冷凍離心機離心 15min，得上清液，冷凍干燥，得干燥物；(5)將(4)中的干燥物與C3)中的丹參、淫羊藿提取物混合均勻，得復方丹參制劑。2.將復方丹參制劑進行試驗，該制劑具有抗氧化作用實施例2 1. 一種具有抗氧化作用的復方丹參制劑的制備方法，其特征在于包括以下過程(1)原料藥的重量配比為丹參12g、淫羊藿9g、紫球藻20g ；(2)將丹參和淫羊藿加入10倍量70%乙醇室溫下浸提10h，再密封超聲30min，溫度為30°C，功率為80W，然后用紗布過濾，濾渣再分別用6倍量與4倍量70%的乙醇重復提取各一次，過濾，得濾液；
(3)將⑵中的濾液合并，回收乙醇，得到丹參、淫羊藿提取物；(4)將紫球藻用5000r/min離心機離心lOmin，然后懸浮于ρΗ7· 4，50mmol/L的磷酸緩沖液中，進行超聲破碎，破碎5s，間隔5s，20次，用lOOOOr/min高速冷凍離心機離心 15min，得上清液，冷凍干燥，得干燥物；(5)將(4)中的干燥物與(3)中的丹參、淫羊藿提取物混合均勻，得復方丹參制劑。2.將復方丹參制劑進行試驗，該制劑具有抗氧化作用一種復方丹參制劑的的抗氧化試驗1復方丹參制劑對DPPH清除率的測定1.1 DPPH溶液的制備精密稱定DPPH樣品0. Olg,加入無水乙醇定容至250ml容量瓶中，得到DPPH溶液， 濃度為 0. (Mmg/ml。1. 2樣品溶液的制備精密稱取復方丹參制劑0. 4g置于50ml具塞容量瓶中，加入適量的蒸餾水，密封超聲30min，待其溶解完全后，再加入蒸餾水定容至50ml，得到樣品母溶液，濃度為8mg/ml，備用。在樣品母溶液中，用移液槍精密移取體積為0. 003125，0. 00625,0. 0125,0. 025,0. 05， 0. 1，0. 2，0.細1的樣品母液，用蒸餾水定容于IOml容量瓶中得到濃度為0. 0025，0. 005， 0. 01，0. 02，0. 04，0. 08，0. 16，0. 32mg/ml 的樣品溶液。1. 3樣品對DPPH的清除作用準確移取不同濃度的樣品溶液分別與DPPH溶液和無水乙醇溶液等體積混合于不同試管中，搖勻，在黑暗中放置30min，在515nm下測定其吸光度值分別為AjPAj。另取蒸餾水與DPPH溶液等體積混合于試管中，測得吸光度值為A。其中以蒸餾水和無水乙醇混合為空白對照試驗。并按下面公式計算清除率。清除率=(A-Ai+AJ)/AX100%2復方丹參制劑對羥自由基清除率的測定2. 1樣品溶液的制備精密稱取復方丹參制劑0. 25g置于50ml具塞容量瓶中，加入適量的蒸餾水，密封超聲30min，待其溶解完全后，定容至刻度，得到樣品母溶液，備用。在樣品母溶液中，用移液槍精密移取體積為 5 μ 1，10 μ 1，20 μ 1，40 μ 1，80 μ 1，160 μ 1，320 μ 1，640 μ 1 的樣品母液， 用蒸餾水定容于IOml容量瓶中得到濃度為0. 0025,0. 005,0. 01,0. 02,0. 04,0. 08,0. 16， 0. 32mg/ml的樣品溶液。2. 2試劑的制備稱取0. 2032g甲基紫用去離子水定容于IOOml容量瓶中，備用。用鹽酸調Tris緩沖溶液PH為5，備用。取30%的H2A溶液1. OmL，用去離子水定容于IOOmL容量瓶中，備用。 稱取0. 0695gFeS04 · 7H20用水定容于50mL容量瓶中，備用(現用現配)。2.3羥自由基· OH的產生及測定取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris緩沖液lmL，按順序放入IOmL的刻度管中。并
用去離子水定容至刻度，搖勻靜置三十分鐘，記為A578。取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris緩沖液lmL，Fe2+溶液lmL，H2O2溶液ImL按順序放入IOmL的刻度管中。并用去離子水定容至刻度，搖勻靜置三十分鐘，記為A00
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取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris緩沖液lmL，不同濃度梯度的待測液2mL，Fe2+溶液lmL，H2O2溶液ImL按順序放入IOmL的刻度管中。并用去離子水定容至刻度，搖勻靜置三十分鐘。平行三次，記為As。以去離子水做空白實驗，用721紫外分光光度計在578的波長下測定其吸光度。2. 4羥自由基· OH清除率的計算利用公式清除率<% = (As-A0)/(A578-A0) X100%,得出樣品提取液對羥自由基的清除率。3復方丹參制劑的抗氧化結果3. 1復方丹參制劑對DPPH和羥自由基的清除率見表1。表1復方丹參制劑對DPPH和羥自由基的清除率結果
權利要求
1.一種具有抗氧化作用的復方丹參制劑的制備方法，其特征在于包括以下過程(1)原料藥的重量配比為丹參9g-12g、淫羊藿6g-9g、紫球藻10g-20g；(2)將丹參和淫羊藿加入8-10倍量70%乙醇室溫下浸提8-10h，再密封超聲30min，溫度為30°C，功率為80W，然后用紗布過濾，濾渣再分別用6倍量與4倍量70%的乙醇重復提取各一次，過濾，得濾液；(3)將O)中的濾液合并，回收乙醇，得到丹參、淫羊藿提取物；(4)將紫球藻用5000r/min離心機離心lOmin，然后懸浮于pH7.4,50mmol/L的磷酸緩沖液中，進行超聲破碎，破碎k，間隔k，20次，用lOOOOr/min高速冷凍離心機離心15min， 得上清液，冷凍干燥，得干燥物；(5)將中的干燥物與(3)中的丹參、淫羊藿提取物混合均勻，得復方丹參制劑。
2.如權利要求1中所述的一種復方丹參制劑的用途，其特征在于制備抗氧化作用藥物中的應用。
全文摘要
本發明所屬醫藥產品研究開發技術領域。本發明涉及一種復方丹參制劑的制備方法及其抗氧化活性。將丹參、淫羊藿加入70％乙醇室溫下浸提，再超聲30min，溫度為30℃，功率為80W，過濾，濾渣再分別用6倍量與4倍量70％的乙醇重復提取各一次，過濾，得濾液；將濾液合并，回收乙醇，得到丹參、淫羊藿提取物；將紫球藻用5000r/min離心機離心10min，然后懸浮于pH7.4，50mmol/L的磷酸緩沖液中，進行超聲破碎，用高速冷凍離心機離心，得上清液，冷凍干燥，得干燥物，將此干燥物與丹參、淫羊藿提取物混合均勻，得復方丹參制劑。本發明產品具有抗氧化作用。
文檔編號A61P39/06GK102512498SQ20121000995
公開日2012年6月27日 申請日期2012年1月1日 優先權日2012年1月1日
發明者侯欣池, 張崇禧, 張成城, 鄭友蘭 申請人:山東大學威海分校