專利名稱：一種復(fù)方紅景天制劑的制備方法及其抗氧化活性的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明所屬醫(yī)藥產(chǎn)品研究開發(fā)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及一種復(fù)方紅景天制劑的制備方法及其抗氧化活性。
背景技術(shù)：
紅景天Iihodiola rosea是景天科多年生草木或灌木植物，生長在海拔800—— 2500米高寒無污染地帶的珍稀野生植物。由于其生長環(huán)境惡劣，如缺氧、低溫干燥、狂風(fēng)、 受紫外線照射、晝夜溫差大，因而具有很強的生命力和特殊的適應(yīng)性。為亞洲地區(qū)常用傳統(tǒng)藥材，紅景天主要以根和根莖入藥，全株也可入藥。[紅景天水煎劑、紅景天提取物和紅景天苷有抗疲勞作用。紅景天能降低心臟的負荷，改善心臟功能，可增強缺血心臟的泵血功能，加快血流，在一定程度上糾正因缺血引起的心臟血流動力學(xué)的紊亂。紅景天有抗缺氧作用、降血糖作用、降血脂作用、抗衰老作用、提高免疫功能、抗腫瘤作用；紅景天有抗貧血和促白細胞增生的作用，紅景天有適應(yīng)原樣作用，能恢復(fù)運動疲勞，提高運動成績；能改善運動員的心肺機能，顯著提高運動時的最大耗氧量和分鐘通氣量，增加血紅蛋白含量，提高比賽成績；對肝損傷的保護作用；抗放射作用，紅景天對高紅癥與急性高山反應(yīng)具有防治功效；抗病毒作用，紅景天能顯著增加冷適應(yīng)過程中紅細胞膜中超氧化物歧化酶(SOD)活性， 抗氧化作用增強；紅景天能顯著提高血氧水平，增強腦干網(wǎng)狀系統(tǒng)的興奮性，可以增強大腦機能，并可使其向年輕化的方向轉(zhuǎn)化；紅景天能健腦益智，對長期記憶力有明顯提高，在疲勞情況下能減少工作差錯，提高工作量，提高效率及持久力；預(yù)防高原反應(yīng)，抗不良刺激。可調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能增強機體對外界刺激的抵抗力。柴胡為傘形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.或狹葉柴胡Bupleurum scorzoner-ifolium ffilld.的干燥根。苦，微寒。歸肝、膽經(jīng)。疏散退熱，舒肝，升陽。用于感冒發(fā)熱，寒熱往來，瘧疾，胸脅脹痛，月經(jīng)不調(diào)，子官脫垂，脫肛。柴胡其成分主要含柴胡皂苷，甾醇，揮發(fā)油，黃酮、多元醇、植物留醇、香豆素、脂肪油和多糖等。現(xiàn)代藥理研究表明，柴胡具有解熱、抗炎抗肝損傷、抗輻射損傷，促進免疫功能，體外有抗結(jié)核菌作用。紫球藻(Porphyridium cruentum)是屬于紅藻門的一種單細胞紅藻，在生長過程中能大量合成胞外硫酸酯多糖、藻膽蛋白和多不飽和脂肪酸等生物活性物質(zhì)。紫球藻藻紅蛋白占藻膽蛋白84%，其中以B-藻紅蛋白含量最多。藻紅蛋白用途廣泛，它既可作為天然色素應(yīng)用于食品、化妝品、染料等工業(yè)，又可制成熒光試劑用于臨床醫(yī)學(xué)診斷和免疫化學(xué)及生物工程等領(lǐng)域，藻紅蛋白還是一種具有開發(fā)潛力的光敏劑，用于腫瘤的光動力治療。紫球藻的胞外硫酸化多糖抗病毒特性突出，具有抗腫瘤、抗過敏、抗氧化、降血脂、調(diào)血脂等功能。因此，綜合開發(fā)紫球藻藻紅蛋白、多糖和藻粉系列產(chǎn)品，社會經(jīng)濟效益明顯。人體在生命活動的氧化代謝過程中會不斷產(chǎn)生各種自由基，體內(nèi)過多自由基對生物大分子造成損傷，導(dǎo)致細胞和組織的結(jié)構(gòu)和功能減退，并對機體的衰老過程產(chǎn)生影響，最終導(dǎo)致疾病的發(fā)生。而人工合成的抗氧化劑具有一定的毒性和致癌作用。所以評價和篩選具有強抗氧化活性的天然植物已成為醫(yī)學(xué)、生物學(xué)和食品科學(xué)研究的新趨勢。采用典型的體外抗氧化體系，以抗壞血酸為對照，評價復(fù)方紅景天制劑的抗氧化活性，為更好的開發(fā)利用復(fù)方紅景天資源為抗氧化活性產(chǎn)品，提供理論依據(jù)。DPPH 法DPPH 為 1，1_ 二苯基 _2_ 三硝基苯胼(1，l-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical2, 2-Diphenyl-l-(2,4,6-trinitrophenyl) hydrazyl) DPPH 法于 1958 年被提出，廣泛用于測定食品的抗氧化能力。此法是根據(jù)DPPH自由基有單電子，在517nm處有一強吸收， 其醇溶液呈紫色的特性。當(dāng)有自由基清除劑存在時，由于與其單電子配對而使其吸收逐漸消失，其褪色程度與其接受的電子數(shù)量成定量關(guān)系，因而可用分光光度計進行快速定量分析。

發(fā)明內(nèi)容
1. 一種具有抗氧化作用的復(fù)方紅景天制劑的制備方法，其特征在于包括以下過程(1)原料藥的重量配比為紅景天9g_12g、柴胡6g_9g、紫球藻10g_20g ；(2)將紅景天和柴胡加入8-10倍量70%乙醇室溫下浸提8-10h，再密封超聲 30min，溫度為30°C，功率為80W，然后用紗布過濾，濾渣再分別用6倍量與4倍量70%的乙醇重復(fù)提取各一次，過濾，得濾液；(3)將⑵中的濾液合并，回收乙醇，得到紅景天、柴胡提取物；(4)將紫球藻用5000r/min離心機離心lOmin，然后懸浮于pH7. 4,50mmol/L的磷酸緩沖液中，進行超聲破碎，破碎5s，間隔5s，20次，用lOOOOr/min高速冷凍離心機離心 15min，得上清液，冷凍干燥，得干燥物；(5)將中的干燥物與(3)中的紅景天、柴胡提取物混合均勻，得復(fù)方紅景天制劑。2.將復(fù)方紅景天制劑進行試驗，該制劑具有抗氧化作用根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明中的“ ％，，是重量百分比。
具體實施例方式本發(fā)明所述的涉及一種復(fù)方紅景天制劑的制備方法及其抗氧化活性包括以下實施例，下面的實施例可進一步說明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實施例1 1. 一種具有抗氧化作用的復(fù)方紅景天制劑的制備方法，其特征在于包括以下過程(1)原料藥的重量配比為紅景天9g、柴胡6g、紫球藻IOg ；(2)將紅景天和柴胡加入8倍量70%乙醇室溫下浸提8，再密封超聲30min，溫度為30°C，功率為80W，然后用紗布過濾，濾渣再分別用6倍量與4倍量70%的乙醇重復(fù)提取各一次，過濾，得濾液；(3)將⑵中的濾液合并，回收乙醇，得到紅景天、柴胡提取物；(4)將紫球藻用5000r/min離心機離心lOmin，然后懸浮于pH7. 4，50mmol/L的磷酸緩沖液中，進行超聲破碎，破碎5s，間隔5s，20次，用lOOOOr/min高速冷凍離心機離心 15min，得上清液，冷凍干燥，得干燥物；
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(5)將中的干燥物與(3)中的紅景天、柴胡提取物混合均勻，得復(fù)方紅景天制劑。2.將復(fù)方紅景天制劑進行試驗，該制劑具有抗氧化作用實施例2 1. 一種具有抗氧化作用的復(fù)方紅景天制劑的制備方法，其特征在于包括以下過程(1)原料藥的重量配比為紅景天12g、柴胡9g、紫球藻20g ；(2)將紅景天和柴胡加入10倍量70%乙醇室溫下浸提10h，再密封超聲30min，溫度為30°C，功率為80W，然后用紗布過濾，濾渣再分別用6倍量與4倍量70%的乙醇重復(fù)提取各一次，過濾，得濾液；(3)將⑵中的濾液合并，回收乙醇，得到紅景天、柴胡提取物；(4)將紫球藻用5000r/min離心機離心lOmin，然后懸浮于ρΗ7· 4，50mmol/L的磷酸緩沖液中，進行超聲破碎，破碎5s，間隔5s，20次，用lOOOOr/min高速冷凍離心機離心 15min，得上清液，冷凍干燥，得干燥物；(5)將中的干燥物與(3)中的紅景天、柴胡提取物混合均勻，得復(fù)方紅景天制劑。2.將復(fù)方紅景天制劑進行試驗，該制劑具有抗氧化作用一種復(fù)方紅景天制劑的的抗氧化試驗1復(fù)方紅景天制劑對DPPH清除率的測定1.1 DPPH溶液的制備精密稱定DPPH樣品0. Olg,加入無水乙醇定容至250ml容量瓶中，得到DPPH溶液， 濃度為 0. (Mmg/ml。1. 2樣品溶液的制備精密稱取復(fù)方紅景天制劑0. 4g置于50ml具塞容量瓶中，加入適量的蒸餾水，密封超聲30min，待其溶解完全后，再加入蒸餾水定容至50ml，得到樣品母溶液，濃度為8mg/ml， 備用。在樣品母溶液中，用移液槍精密移取體積為0. 003125,0. 00625,0. 0125,0. 025,0. 05， 0. 1,0. 2,0. 4ml的樣品母液，用蒸餾水定容于IOml容量瓶中得到濃度為0. 0025,0. 005， 0. 01，0. 02，0. 04，0. 08，0. 16，0. 32mg/ml 的樣品溶液。1. 3樣品對DPPH的清除作用準(zhǔn)確移取不同濃度的樣品溶液分別與DPPH溶液和無水乙醇溶液等體積混合于不同試管中，搖勻，在黑暗中放置30min，在515nm下測定其吸光度值分別為AjPAj。另取蒸餾水與DPPH溶液等體積混合于試管中，測得吸光度值為A。其中以蒸餾水和無水乙醇混合為空白對照試驗。并按下面公式計算清除率。清除率=(A-Ai+AJ)/AX100%2復(fù)方紅景天制劑對羥自由基清除率的測定2. 1樣品溶液的制備精密稱取復(fù)方紅景天制劑0. 25g置于50ml具塞容量瓶中，加入適量的蒸餾水，密封超聲30min，待其溶解完全后，定容至刻度，得到樣品母溶液，備用。在樣品母溶液中，用移液槍精密移取體積為 5 μ 1，10 μ 1，20 μ 1，40 μ 1，80 μ 1，160 μ 1，320 μ 1，640 μ 1 的樣品母液，用蒸餾水定容于IOml容量瓶中得到濃度為0. 0025,0. 005,0.01,0. 02,0. 04,0. 08， 0. 16，0. 32mg/ml的樣品溶液。2. 2試劑的制備稱取0. 2032g甲基紫用去離子水定容于IOOml容量瓶中，備用。用鹽酸調(diào)Tris緩沖溶液PH為5，備用。取30%的H2A溶液1. OmL，用去離子水定容于IOOmL容量瓶中，備用。 稱取0. 0695gFeS04 · 7H20用水定容于50mL容量瓶中，備用(現(xiàn)用現(xiàn)配)。2.3羥自由基· OH的產(chǎn)生及測定取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris緩沖液lmL，按順序放入IOmL的刻度管中。并
用去離子水定容至刻度，搖勻靜置三十分鐘，記為A578。取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris緩沖液lmL，F(xiàn)e2+溶液lmL，H2O2溶液ImL按順序放入IOmL的刻度管中。并用去離子水定容至刻度，搖勻靜置三十分鐘，記為A00取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris緩沖液lmL，不同濃度梯度的待測液2mL，F(xiàn)e2+溶液lmL，H2O2溶液ImL按順序放入IOmL的刻度管中。并用去離子水定容至刻度，搖勻靜置三十分鐘。平行三次，記為As。以去離子水做空白實驗，用721紫外分光光度計在578的波長下測定其吸光度。2. 4羥自由基· OH清除率的計算利用公式清除率<% = (As-A0)/(A578-A0) X100%,得出樣品提取液對羥自由基的清除率。
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3復(fù)方紅景天制劑的抗氧化結(jié)果
3. 1復(fù)方紅景天制劑對DPPH和羥自由基的清除率
見表1。
表1復(fù)方紅景天制劑對DPPH和羥自由基的清除率結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種具有抗氧化作用的復(fù)方紅景天制劑的制備方法，其特征在于包括以下過程(1)原料藥的重量配比為紅景天9g-12g、柴胡6g-9g、紫球藻10g-20g；(2)將紅景天和柴胡加入8-10倍量70%乙醇室溫下浸提8-10h，再密封超聲30min，溫度為30°C，功率為80W，然后用紗布過濾，濾渣再分別用6倍量與4倍量70%的乙醇重復(fù)提取各一次，過濾，得濾液；(3)將O)中的濾液合并，回收乙醇，得到紅景天、柴胡提取物；(4)將紫球藻用5000r/min離心機離心lOmin，然后懸浮于pH7.4,50mmol/L的磷酸緩沖液中，進行超聲破碎，破碎k，間隔k，20次，用lOOOOr/min高速冷凍離心機離心15min， 得上清液，冷凍干燥，得干燥物；(5)將中的干燥物與(3)中的紅景天、柴胡提取物混合均勻，得復(fù)方紅景天制劑。
2.如權(quán)利要求1中所述的一種復(fù)方紅景天制劑的用途，其特征在于制備抗氧化作用藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明所屬醫(yī)藥產(chǎn)品研究開發(fā)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及一種復(fù)方紅景天制劑的制備方法及其抗氧化活性。將紅景天、柴胡加入70％乙醇室溫下浸提，再超聲30min，溫度為30℃，功率為80W，過濾，濾渣再分別用6倍量與4倍量70％的乙醇重復(fù)提取各一次，過濾，得濾液；將濾液合并，回收乙醇，得到紅景天、柴胡提取物；將紫球藻用5000r/min離心機離心10min，然后懸浮于pH7.4，50mmol/L的磷酸緩沖液中，進行超聲破碎，用高速冷凍離心機離心，得上清液，冷凍干燥，得干燥物，將此干燥物與紅景天、柴胡提取物混合均勻，得復(fù)方紅景天制劑。本發(fā)明產(chǎn)品具有抗氧化作用。
文檔編號A61P39/06GK102512484SQ20121000995
公開日2012年6月27日 申請日期2012年1月1日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月1日
發(fā)明者侯欣池, 張崇禧, 張成城, 鄭友蘭 申請人:山東大學(xué)威海分校