專利名稱：一種甜葉菊酚類提取物與降糖活性及其在制備降血糖制品中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬食品醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種甜葉菊酚類提取物及其制備工藝，降糖活性以及在制備降血糖制品中的應(yīng)用
背景技術(shù)：
甜葉菊(Stevia rebaudiana Bertoni)屬菊科甜菊屬多年生草本植物，原產(chǎn)于巴拉圭東北部與巴西接壤的阿曼拜山脈，當(dāng)?shù)鼐用癜阉鳛樘鹚庯嬘靡延幸话俣嗄甑臍v史， 甜葉菊葉的水浸液治療糖尿病也是當(dāng)?shù)亟灾某ＷR(shí)。70年代，日本就有用甜葉菊治療糖尿病。我國(guó)學(xué)者對(duì)對(duì)甜葉菊治療糖尿病作用進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其具有降血糖、尿糖及改善 “三多”癥狀的作用，總有效率達(dá)86%。80年代，國(guó)內(nèi)外學(xué)者均相繼通過藥理試驗(yàn)證明甜葉菊具有有較強(qiáng)而持久地降壓作用。我國(guó)科研單位及醫(yī)院，以甜葉菊為主要藥味配制的藥物， 用于高血壓病人的治療，在治療期間停用一切降壓藥與鎮(zhèn)靜藥，結(jié)果降壓總有效率幾乎達(dá) 100%。其中顯效占85%，高血壓病人常見的頭昏、耳鳴、口干、失眠等癥狀均得到改善。文獻(xiàn)報(bào)道甜葉菊中主要含有甜菊苷類成分，且已被作為甜味劑進(jìn)行廣泛應(yīng)用。申請(qǐng)人通過研究確定了其所含的酚類成分，如4，5-雙咖啡酰奎寧酸等咖啡鞣質(zhì)類成分；咖啡酸、阿魏酸等其他酚類成分；和/或黃酮類成分，如槲皮苷等。申請(qǐng)人通過建立簡(jiǎn)便易行經(jīng)濟(jì)的制備方法分離富集甜葉菊酚類提取物，并對(duì)其降血糖活性進(jìn)行了考察，發(fā)現(xiàn)其具有顯著的降糖活性，為甜葉菊酚類提取物的制備，并為其在制備降血糖制品中的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)，亦為甜葉菊綜合應(yīng)用開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種甜葉菊酚類提取物，本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供甜葉菊酚類提取物的制備方法及工藝，本發(fā)明的第三個(gè)目的在于提供其質(zhì)量檢測(cè)方法，本發(fā)明的第四個(gè)目的在于提供甜葉菊酚類提取物的降糖活性，本發(fā)明的第五個(gè)目的在于提供甜葉菊酚類提取物的制品及其在藥品、食品領(lǐng)域的應(yīng)用。本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的步驟1 取甜葉菊藥材，溶劑回流提取；步驟2 色譜法純化；該甜葉菊酚類提取物中總酚含量為5 100% ；該甜葉菊酚類提取物中總酚含量?jī)?yōu)選為20 100%。將以上所得提取物，加入常規(guī)輔料，按常規(guī)的制劑工藝制成藥劑學(xué)可接受的任意常規(guī)劑型，包括膠囊劑、片劑、丸劑、口服液體制劑、注射劑、顆粒劑、凝膠劑、緩釋劑。上述提取物，可作為輔料或添加劑，加至食品、飲料及其他制品中，制成可接受的任意常規(guī)制品。上述步驟1中，甜葉菊藥材用30 95%乙醇回流提取2 3次，每次提取1 2小時(shí)，合并提取液，減壓回收溶劑至干，得甜葉菊乙醇提取物。上述步驟2中，將步驟1所得乙醇提取物加水分散溶解，以甜葉菊藥材計(jì)，上樣液濃度為0. 08 0. 25g/ml，通過大孔吸附樹脂，上樣量以生藥量計(jì)為與0. 10 0. 50g/ml，吸附流速為2 9BV/h，樹脂柱徑高比為1 3 10，用0 20%乙醇洗脫1 4BV進(jìn)行除雜，棄去，用20 60%乙醇洗脫3 6BV，洗脫流速為2 9BV/h，收集乙醇洗脫液，回收溶劑，干燥，即得甜葉菊酚類提取物。上述步驟2中，用20 60%乙醇洗脫后，再用65 90%乙醇洗脫3 6倍樹脂體積，洗脫流速為2 9BV/h。收集65 90%乙醇洗脫液，回收溶劑，殘留物減壓干燥，即得甜菊苷類成分。上述步驟2中所用大孔吸附樹脂優(yōu)選為AB-8、HPD-400、HPD-826型等弱極性或中等極性大孔吸附樹脂。本發(fā)明甜葉菊酚類提取物主要包括酚類物質(zhì)，如異綠原酸及其衍生物等咖啡鞣質(zhì)類成分、其他分類成分、和/或黃酮類成分。甜葉菊酚類提取物中異綠原酸及其衍生物等咖啡鞣質(zhì)類成分百分含量的總和為5 100% (w/w)。本發(fā)明甜葉菊酚類提取物為甜葉菊經(jīng)乙醇、或其他醇類、稀醇、或其他有機(jī)溶劑或水提取再通過大孔吸附樹脂或其他色譜方法，如聚酰胺色譜法等，或溶劑法，如溶劑萃取法等純化得到，經(jīng)降血糖藥效實(shí)驗(yàn)表明，具有顯著的降血糖作用。實(shí)驗(yàn)例甜葉菊酚類提取物降血糖活性研究1實(shí)驗(yàn)材料1. 1藥物與試劑甜葉菊酚類提取物由甜葉菊提取制備，即本專利所述甜葉菊酚類提取物，褐色粉末。四氧嘧啶購自SIGMA公司，批號(hào)100956780，淡粉色粉末狀。葡萄糖廣西梧州制藥，批號(hào)100806。鹽酸二甲雙胍中美上海施貴寶制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20023370，批號(hào) 1107077。1. 2 動(dòng)物ICR小鼠，SPF級(jí)，雌雄各半，體重18 22g，由維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，許可證號(hào)SCXK (京)2006-0009飼料購自北京科澳協(xié)力公司，每天喂食1次。1.3 儀器血糖測(cè)試儀美國(guó)強(qiáng)生穩(wěn)豪型AneTouchUltra，血糖試紙強(qiáng)生穩(wěn)豪型血糖試紙OneTouchUltra，2試驗(yàn)方法2.1對(duì)四氧嘧啶所致糖尿病小鼠模型的影響造模ICR小鼠80只，雌雄各半，初始體重18 22g，適應(yīng)性喂養(yǎng)2天。禁食(不禁水)1 !后，尾靜脈注射四氧嘧啶70mg/kg，72小時(shí)后尾部取血，用血糖儀測(cè)禁食不禁水6 1 后的空腹血糖值，篩選空腹血糖> 11. lmmol/L的小鼠100只作為糖尿病模型小鼠。分組將糖尿病模型小鼠按血糖值隨機(jī)分為5組①酚類高劑量組(960mg/kg)，②酚類低劑量組(M0mg/kg)，③模型對(duì)照組，④二甲雙胍對(duì)照組200mg/kg，⑤正常對(duì)照組白苷高劑量組(960mg/kg)，每組不少于10只動(dòng)物，雌雄各半。按10ml/kg灌胃給藥，每天1 次，連續(xù)給藥21天。指標(biāo)測(cè)定(1)食量和飲水量測(cè)定給藥期間，每天稱體重，每周測(cè)食量和飲水量。 (2)糖耐量測(cè)定給藥第21天，禁食不禁水6 12h，取血測(cè)定血糖作為服糖前的血糖值，立即灌胃葡萄糖2. 5g/kg，測(cè)定給糖后1小時(shí)，2小時(shí)及3小時(shí)的血糖值。統(tǒng)計(jì)方法對(duì)各試驗(yàn)組測(cè)定血糖值取均值，采用SAS軟件對(duì)上述結(jié)果進(jìn)行組間 Student' t檢驗(yàn)判定顯著性差異。3 結(jié)果3.1對(duì)四氧嘧啶所致糖尿病小鼠模型的影響造模后，試驗(yàn)各組小鼠血糖值與正常對(duì)照比較，均有顯著性的升高，表明四氧嘧啶造成的糖尿病模型成功。糖尿病小鼠給予試藥治療后，血糖值有逐步下降趨勢(shì)，給藥21天后，以酚類試藥組，在劑量M0-960mg/kg時(shí)血糖值顯著性差異明顯，與模型對(duì)照組比較有生物學(xué)統(tǒng)計(jì)意義，且尤其以酚類高劑量組，與其他試藥組藥效對(duì)比，有顯著性差異；相同實(shí)驗(yàn)條件下，陽性對(duì)照藥二甲雙胍也顯示出顯著性的降糖作用，表明酚類試藥組對(duì)四氧嘧啶造成的胰島β 細(xì)胞損傷而引起的實(shí)驗(yàn)性高血糖具有降糖作用。結(jié)果見表1。糖耐量試驗(yàn)結(jié)果如表2，二甲雙胍有效地抑制了葡萄糖灌胃后血糖的升高(P <0. 001),酚類組在2小時(shí)及3小時(shí)血糖水平出現(xiàn)了顯著性下降，表明試藥能顯著抑制葡萄糖負(fù)荷糖尿病小鼠的血糖值升高，具有顯著的降糖作用。表1試藥對(duì)糖尿病小鼠血糖的影響(歹:tS)
權(quán)利要求
1.一種具有降血糖作用的甜葉菊酚類提取物，其特征在于該提取物的制備方法包括如下步驟步驟1 取甜葉菊藥材，溶劑回流提取；步驟2 色譜法純化；該甜葉菊酚類提取物中總酚酸含量為5 100%。
2.如權(quán)利要求1所述的甜葉菊酚類提取物，其特征在于步驟1中，甜葉菊藥材用30 95%乙醇回流提取2 3次，每次提取1 2小時(shí)，合并提取液，減壓回收溶劑至干，得甜葉菊乙醇提取物。
3.如權(quán)利要求1所述的甜葉菊酚類提取物，其特征在于步驟2中，將步驟1所得乙醇提取物加水分散溶解，以甜葉菊藥材計(jì)，上樣液濃度為0. 08 0. 25g/ml，通過大孔吸附樹脂或聚酰胺或其它色譜柱，上樣量以生藥量計(jì)為與0. 10 0. 50g/ml，吸附流速為2 9BV/h， 樹脂柱徑高比為1 3 10，用0 20%乙醇洗脫1 4BV進(jìn)行除雜，棄去，用20 60% 乙醇洗脫3 6BV，洗脫流速為2 9BV/h，收集乙醇洗脫液，回收溶劑，干燥，即得甜葉菊酚類提取物。
4.如權(quán)利要求1 3任一所述的甜葉菊酚類提取物，其特征在于加入常規(guī)輔料，按常規(guī)的制劑工藝制成藥劑學(xué)可接受的任意常規(guī)劑型，包括膠囊劑、片劑、丸劑、口服液體制劑、注射劑、顆粒劑、凝膠劑、緩釋劑。
5.如權(quán)利要求1 3任一所述的甜葉菊酚類提取物，其特征在于可作為輔料或添加劑， 加至食品、飲料及其他制品中，制成可接受的任意常規(guī)制品。
6.如權(quán)利要求1 3任一所述的甜葉菊酚類提取物的制備方法，其特征在于步驟1中， 甜葉菊藥材用30 90%乙醇回流提取2 3次，每次提取1 2小時(shí)，合并提取液，減壓回收溶劑至干，得甜葉菊乙醇提取物。
7.如權(quán)利要求1 3任一所述的甜葉菊酚類提取物的制備方法，將步驟1所得乙醇提取物加水分散溶解，以甜葉菊藥材計(jì)，上樣液濃度為0. 08 0. 25g/ml，通過大孔吸附樹脂， 上樣量以生藥量計(jì)為與0. 10 0. 50g/ml，吸附流速為2 9BV/h，樹脂柱徑高比為1 3 10，用0 20%乙醇洗脫1 4BV進(jìn)行除雜，棄去，用20 60%乙醇洗脫3 6BV，洗脫流速為2 9BV/h，收集乙醇洗脫液，回收溶劑，干燥，即得甜葉菊酚類提取物。
8.如權(quán)利要求6 7所述的甜葉菊提取物的制備方法，其特征在于可同時(shí)制備甜菊苷類成分，該類成分主要包含有甜菊苷、斯替維伯苷、萊鮑迪苷A、B、C、D、E、F和杜爾可苷A及其衍生物等，甜菊苷類成分轉(zhuǎn)移率為5 100%。
9.如權(quán)利要求7所述的甜葉菊酚類提取物的制備方法，其特征在于步驟2中所用大孔吸附樹脂為AB-8、HPD-400、HPD-826型等弱極性或中等極性大孔吸附樹脂。
10.如權(quán)利要求1 3任一所述的甜葉菊酚類提取物在制備降血糖制品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種甜葉菊酚類提取物與降糖活性及其在制備降血糖制品中的應(yīng)用。本發(fā)明甜葉菊酚類提取物通過溶劑加熱回流提取，再通過色譜法分離純化得到甜葉菊酚類提取物；該甜葉菊酚類提取物具有顯著的降血糖，可以制備成任何常用制品。
文檔編號(hào)A61P3/10GK102512473SQ20121000996
公開日2012年6月27日 申請(qǐng)日期2012年1月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月13日
發(fā)明者姜艷艷, 彭平, 石任兵 申請(qǐng)人:石任兵