專利名稱：一種治療造影劑腎病的組合藥物的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥組合藥物，具體地說，是一種治療造影劑腎病的中藥組合藥物。
背景技術：
造影劑腎病(contrast-inducednephropathy, CIN)是指由碘造影劑(contrastmedia, CM)的使用而引起的腎病，主要表現為急性腎功能衰竭(acute renal failure,ARF)。近年研究表明腎小管上皮細胞凋亡參與了 CIN病理過程，并被認為是CM致腎損害和腎功能衰竭的主要原因。CIN在祖國醫學并無相應病名，但由于其主要表現為急性腎功能衰竭，因而可以歸屬為“關格”、“溺毒”的范疇。現在已經明確，在高危人群，比如70歲以上老年人或者慢性腎病、糖尿病、高血壓患者，使用含碘造影劑后容易導致CIN發生，從病理學改變的角度，主要表現為造影劑使用后直接導致腎血管痙攣性收縮、血液流變性失常進而降低腎臟血流，導致腎臟血流“盜血”效應，即血流從相對缺血的髓質流向皮質，加重了腎髓質缺血。中國專利文獻CN1325094C公開了一種治療尿毒癥及腎陽虛、腎衰竭的藥物及其制備方法，由黃芪、川芎、丹參和大黃構成，具有溫補脾腎，活血化瘀，滲濕泄濁的功能。中國專利文獻CN101181466B公開了一種治療腎病的中藥劑，由冬蟲夏草、黃芪、甘草、大黃、五味子、海藻、生地、熟地、川芎、麝香、牛黃、何首烏、淮山藥、西洋參和當歸組成，具有補氣陰不礙濕、清熱解毒不傷正的功效，治療效果顯著。譚倩等公開了治療造影劑腎病的中藥處方，由生大黃、生牡蠣、丹參、蒲公英和六月雪組成，適用于濕熱濁毒的關格患者，大黃、炮附子、牡蠣、丹參和蒲公英，適用于寒濕濁毒內結和有寒熱錯雜證候的關格患者(詳見譚倩等.造影劑腎病的中醫藥防治[J].家庭醫學，2010: .)這些藥物往往藥味數較多，不便于制備使用，目前臨床上關于一種藥味數較少且療效顯著的治療造影劑腎病的組合藥物還未見報道。

發明內容
本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種治療造影劑腎病的中藥組合藥物。本發明的再一的目的是，提供一種治療造影劑腎病的中藥組合藥物的應用。為實現上述目的，本發明采取的技術方案是一種治療造影劑腎病的中藥組合藥物，所述的中藥組合藥物由以下重量份的原料藥制成制大黃1-3份、川芎1份。所述的中藥組合藥物由以下重量份的原料藥制成制大黃1份、川芎1份。所述的中藥組合藥物由以下重量份的原料藥制成制大黃2份、川芎1份。所述的中藥組合藥物由以下重量份的原料藥制成制大黃3份、川芎1份。為實現上述第二個目的，本發明采取的技術方案是所述的中藥組合藥物在制備治療造影劑腎病的藥物中的應用。
本發明優點在于
本發明的中藥組合藥物，其配伍符合中藥“君臣佐使”原則，經藥效學實驗驗證，能有效保護CIN模型大鼠的腎功能，表現出較好的防治CIN的效應，機制研究發現能通過抑制Caspase3表達進而拮抗大鼠腎小管上皮細胞凋亡來保護大鼠腎功能。藥味數較少，毒副作用小，成本較低，適于長期服用。本發明為治療造影劑腎病提供了一種新的中藥組合物，具有很好的應用前景。


附圖1是光鏡下各組大鼠腎臟病理形態學改變(HE，X200)。附圖2是TUNEL法檢測各組大鼠腎小管上皮細胞凋亡(X 400)，A 正常組TUNEL染色，B 模型組TUNEL染色，C 中藥組合藥物高劑量組TUNEL染色，D 中藥組合藥物低劑量組TUNEL染色，E 各組凋亡指數(Al)分析(**表示與A組相比p<0. 01, ##表示與B組相比ρ<0· 01，+表示與C組相比ρ<0· 05)。附圖3是western印跡法測定各組腎組織Caspasd蛋白表達，**表示與A組比較ρ<0· 01，##表示與B組比較ρ<0· 01。
具體實施例方式下面結合附圖對本發明提供的具體實施方式
作詳細說明。一種治療造影劑腎病的中藥組合藥物，所述的中藥組合藥物由以下重量份的原料藥制成制大黃1-3份、川芎1份。實施例1中藥組合藥物的制備(一)制大黃1份，川芎1份，常規方法煎煮。實施例2中藥組合藥物的制備(二)制大黃2份，川芎1份，常規方法煎煮。實施例3中藥組合藥物的制備(三)制大黃3份，川芎1份，常規方法煎煮。實施例4中藥組合藥物的制備(四)制大黃1. 2份，川芎1份，常規方法煎煮。實施例5中藥組合藥物的制備(五)制大黃1. 4份，川芎1份，常規方法煎煮。實施例6中藥組合藥物的制備(六)制大黃1. 6份，川芎1份，常規方法煎煮。實施例7中藥組合藥物的制備(七)制大黃1. 8份，川芎1份，常規方法煎煮。實施例8中藥組合藥物的制備(八)制大黃2. 2份，川芎1份，常規方法煎煮。實施例9中藥組合藥物的制備(九)制大黃2. 4份，川芎1份，常規方法煎煮。實施例10中藥組合藥物的制備(十)制大黃2. 6份，川芎1份，常規方法煎煮。實施例11中藥組合藥物的制備(i^一)制大黃2. 8份，川芎1份，常規方法煎煮。需要說明的是，實施例1-11所述的常規方法煎煮是中藥湯劑常規的制作方法，即將所述的原料藥加水煎煮成湯劑。實施例12一、材料和方法
1.動物和試劑雄性SD大鼠32只，體重200士20g，由中科院上海實驗動物中心提供。夕肖炎痛、L—NAME (L—NAME，艮口 #u_Nitro_L_arginine methyl ester hydrochloride,分子式為 C7H15N5O4 ‘ HCl,是 NOS (nitric oxide synthase)的非選擇性抑制物)、NAC(N-acetylcysteine)均購自Sigma公司，造影劑Iohexol購自通用電氣藥業(上海)公司。TUNEL試劑盒為美國Roche產品，Caspase3多克隆抗體購自Cell Signaling公司。2.動物模型的建立及分組隨機分為4組，每組8只A組為正常組，B組為模型組，C組為中藥組合藥物高劑量組，D組為中藥組合藥物低劑量組。其中B-C-D三組均按照文獻制備CIN模型，具體方法如下尾靜脈注射10 mg/kg消炎痛；15min后注射10 mg/kg L-NAME ;15min 后注射 2 g iodine/kg Wiohexol (350 mg iodine/ml) ；A 組注射等量PBS液。本發明的中藥組合物水煎液(參照實施例2所述的方法制備)濃縮成每毫升含生藥2. 25g，C、D組于造模前7天每日灌胃中藥組合物水煎液，灌胃量分別為成人標準體重(60kg)常規用量50和20倍。3.腎功能和組織形態學檢測
3. 1.腎功能檢測造模后24h處死動物，尾靜脈采血，分離血清，由全自動生化分析儀測定血清肌酐、尿素氮。3.2.腎組織形態學檢測大鼠乙醚麻醉，腹正中切開，取雙腎，左腎分別戊二醛+鋨酸固定及放入-80°C冰箱，用于western印跡檢測；右腎經多聚甲醛固定后，乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切片，用于HE染色及TUNEL檢測。3. 3.細胞凋亡檢測按照美國羅氏公司(Roche)產品說明書進行，步驟包括腎組織常規固定，石蠟包埋后切片5 μ m，常規脫蠟、水合，Proteinase K工作液處理，加TUNEL反應液，加converter-POD，加底物DAB顯色系統，光鏡下觀察，細胞核呈棕黃色的為凋亡細胞。在細胞凋亡區域，隨機選取5個視野(x200)，以腎小管上皮細胞凋亡陽性細胞數占腎小管上皮細胞總數的百分比作為腎小管上皮細胞凋亡指數(Al)。同時設陰性對照。3. 4. western印跡檢測caspasd蛋白表達組織塊稱重、粉碎，裂解液裂解，考馬斯亮藍法測定蛋白濃度。上樣、電泳、轉膜(IOOmA 40分鐘)，放入到麗春紅染色劑中染色5min，觀察蛋白轉移效果，將轉移成功的轉移膜浸入5%脫脂奶粉封閉液中，37°C封閉池；加一抗4°C過夜，加辣根過氧化酶標記的二抗室溫反應lh，用ECL化學發光法檢測，χ線片顯影成像，將顯色條帶掃描至計算機中，以beta-actin為內參，Gel-Pro凝膠分析軟件半定量分析。4.統計學分析計量資料數據以5 士 s表示，組間差異用單因素方差分析。用
SPSS15. O統計軟件進行統計學分析。二、結果1.本發明的中藥組合藥物水煎液對CIN大鼠腎功能的影響如表1所示造模后MhB組大鼠出現了腎損傷，表現為kr、BUN均較A組明顯升高(p<0. 01)；而C、D組雖都不能將Scr和BUN完全恢復正常，但均能有效防止造模導致的腎功能減退，其中在降低Scr方面C組較D組更強，與B組相比ρ分別<0. 01和<0. 05 ；在降低BUN方面，C、D組效果相近，與B組相比均P<0. 01。
表1腎功能檢查(i 士S)
權利要求
1.一種治療造影劑腎病的中藥組合藥物，其特征在于，所述的中藥組合藥物由以下重量份的原料藥制成制大黃1-3份、川芎1份。
2.根據權利要求1所述的中藥組合藥物，其特征在于，所述的中藥組合藥物由以下重量份的原料藥制成制大黃1份、川彎1份。
3.根據權利要求1所述的中藥組合藥物，其特征在于，所述的中藥組合藥物由以下重量份的原料藥制成制大黃2份、川彎1份。
4.根據權利要求1所述的中藥組合藥物，其特征在于，所述的中藥組合藥物由以下重量份的原料藥制成制大黃3份、川芎1份。
5.根據權利要求1-4任一所述的中藥組合藥物在制備治療造影劑腎病的藥物中的應用。
全文摘要
本發明涉及一種治療造影劑腎病(CIN)的中藥組合藥物，所述的中藥組合藥物由以下重量份的原料藥制成制大黃1-3份、川芎1份。本發明還提供這種中藥組合藥物的應用。本發明優點在于本發明的中藥組合藥物，其配伍符合中藥“君臣佐使”原則，經藥效學實驗驗證，能有效保護CIN模型大鼠的腎功能，表現出較好的防治CIN的效應，機制研究發現能通過抑制Caspase3表達進而拮抗大鼠腎小管上皮細胞凋亡來保護大鼠腎功能。藥味數較少，毒副作用小，成本較低，適于長期服用。本發明為治療CIN提供了一種新的中藥組合物，具有很好的應用前景。
文檔編號A61P13/12GK102552431SQ201210035909
公開日2012年7月11日 申請日期2012年2月17日 優先權日2012年2月17日
發明者龔學忠 申請人:上海市中醫醫院