專利名稱：翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物及其制備方法和用途，屬于藥物領域。
背景技術：
類風濕關節(jié)炎(Iiheumatiod Arthritis，簡稱RA)是一種常見的以慢性多關節(jié)炎病變?yōu)橹饕憩F(xiàn)的全身性免疫性疾病，全世界共有上億病人。據(jù)統(tǒng)計，RA國外的患病率為 1 2%，個別地區(qū)高達5% ；我國發(fā)病率約為0.74%，現(xiàn)有病人1000萬人左右。據(jù)調(diào)查表明，在正常人群中，類風濕性關節(jié)炎的發(fā)病率占正常人群的0.35%左右。本病致殘率高，未及時診治的類風濕性關節(jié)炎患者二年致殘率50%，三年致殘率達70%。而已經(jīng)患類風濕性關節(jié)炎的患者，平均壽命縮短10 15年，所以RA嚴重影響勞動能力，研制RA的治療藥物， 對于緩解該類疾病的臨床癥狀，提高病人的生存質(zhì)量，保障生產(chǎn)力，具有積極的意義。
藏藥翼首草，為川續(xù)斷科植物匙葉翼首草Pteroc^phalus hookeri (C. B. Clarke) Hoeck的干燥全草，具有清熱解毒、祛風濕、止痛功效。翼首草為藏醫(yī)常用藏藥，又名“榜姿毒烏”，為藏藥特征明顯的典型民族藥物，用藥歷史悠久，藏醫(yī)歷來將其主要用于治療風濕性等疾病，除藏醫(yī)及其密切相關的蒙醫(yī)外，中醫(yī)藥和其它傳統(tǒng)醫(yī)藥基本沒有應用翼首草的歷史。在藏醫(yī)藥理論指導下，以翼首草的臨床應用為依據(jù)，對翼首草提取物抗風濕性關節(jié)炎作用及機理進行了試驗研究，結(jié)果表明翼首草提取物抗RA作用是肯定的，對于實驗性佐劑關節(jié)炎動物模型原發(fā)性炎癥及繼發(fā)性關節(jié)炎均有較好的抗炎效果，并能減輕滑膜的病理改變，同時也有明顯的鎮(zhèn)痛作用，這與藏醫(yī)臨床以翼首草治療風濕、類風濕關節(jié)炎應用相吻合。(沈芄，藏藥翼首草抗類風濕性關節(jié)炎作用與機理研究，成都中醫(yī)藥大學，2002年.)
對翼首草的化學成分研究表明，翼首草中主要含有齊墩果烷型三萜類皂苷、環(huán)烯醚萜苷類化合物、生物堿、多糖等成分。對翼首草有效成分的研究表明，采用大鼠急性足腫脹實驗、小鼠棉球肉芽腫實驗、小鼠急性耳腫脹實驗和小鼠急性滲出實驗等方法，證明了翼首草正丁醇部位總皂苷具有顯著的抗炎活性[關昕璐，等.翼首草的抗炎作用與急毒實驗研究.北京中醫(yī)藥大學學報.2004,27 O) :71 73]。翼首草中環(huán)烯醚萜苷類的主要成分馬錢素，具有明顯的抗炎藥理作用，但其結(jié)構(gòu)類似物具有免疫增強作用。[龐偉.藏藥翼首草的研究與應用.中國民族醫(yī)藥雜志.2007，(5) :63-65]。專利申請?zhí)?00910196870. x， 該發(fā)明中提供了翼首草總皂苷有效部位提取物，其主要成分為齊墩果烷型五環(huán)三萜皂苷， 總皂苷含量50-90%，該總皂苷提取物能顯著抑制腫瘤細胞增殖，該總皂苷提取物中直接采用大孔樹脂分離得到，提取物中含有環(huán)烯醚萜苷。
綜合現(xiàn)有文獻可知，目前僅有翼首草中總皂苷及馬錢素具有抗炎鎮(zhèn)痛作用、以及總皂苷抗腫瘤的報道，還未見翼首草環(huán)烯醚萜苷治療類風濕性關節(jié)炎的相關報道。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物及其制備方法。本發(fā)明的另一目的是提供了治療類風濕性關節(jié)炎的藥物組合物及其制備方法和用途。
本發(fā)明提供了一種翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物，它來源于川續(xù)斷科植物匙葉翼首草Pteroc^phalus hookeri (C. B. Clarke) Hoeck的干燥全草，該提取物中，總環(huán)烯醚萜苷含量大于50% w/w。
其中，該提取物中，總環(huán)烯醚萜苷含量大于80% Wi
進一步地，該提取物中，總環(huán)烯醚萜苷含量為80-90% w/w。
本發(fā)明還提供了上述翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物的制備方法，它包括如下操作步驟
a、取翼首草，加水提取，濾過，濾液濃縮后，采用非極性或弱極性大孔吸附樹脂上樣，先以水洗去雜質(zhì)后，棄去洗脫液；以60-85%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液后；
b、取步驟a的乙醇洗脫液，減壓回收溶劑后，加入醋酸鉛溶液，攪拌，濾過，取濾液，濃縮后，正丁醇萃取，取正丁醇層，回收溶劑后，干燥，即得翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物。
其中，步驟a中選用D101、AB_8或HPD-300型大孔吸附樹脂；以65-75% ν/ν乙醇洗脫；步驟b中，取步驟a的乙醇洗脫液，減壓回收溶劑后，復溶于30-95% ν/ν乙醇中，加入飽和中性醋酸鉛溶液。
進一步地，步驟a中選用DlOl型大孔吸附樹脂；以70% ν/ν乙醇洗脫；步驟b中， 乙醇濃度為60-85% ν/ν。
更進一步地，步驟b中，乙醇濃度為65-75% ν/ν。
更進一步地，大孔吸附樹脂洗脫的具體操作步驟如下
將上樣液的濃度配制為0. 1-0. 2g生藥/ml，采用DlOl型大孔吸附樹脂上樣，上樣流速為UBV/h，上樣量以藥材計為藥材樹脂=(0. 5-1. 5) lw/w,以3-5BV水洗脫，流速為UBV/h，棄去洗脫液；以2-4BV的70%乙醇洗脫，洗脫流速為2-4BV/h。
優(yōu)選地，將上樣液的濃度配制為0. Ig生藥/ml，采用DlOl型大孔吸附樹脂室溫下上樣，上樣流速為2BV/h，上樣量以藥材計為藥材樹脂=1 1，以4BV水洗脫，流速為 2BV/h，棄去洗脫液；以;3BV的70%乙醇洗脫，洗脫流速為!3BV/h。
本發(fā)明還提供了上述的翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物在制備抗炎、鎮(zhèn)痛或治療類風濕性關節(jié)炎的藥物中的用途。
本發(fā)明還提供了一種治療類風濕性關節(jié)炎的藥物組合物，它是由上述的翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物為活性成分，加上藥學上常用的輔料制備而成的制劑。
本發(fā)明提供的翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物，具有明顯的抗佐劑性關節(jié)炎作用，抗炎鎮(zhèn)痛作用良好，表明該翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物能夠有效治療類風濕性關節(jié)炎，為臨床用藥提供了新的選擇。
顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
以下通過實施例形式的具體實施方式
，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術均屬于本發(fā)明的范圍。


圖1 AA大鼠后肢原發(fā)性腫脹癥狀，左為正常對照組，右為模型對照組；
圖2 AA大鼠前肢繼發(fā)性腫脹癥狀，左為正常對照組，右為模型對照組。
具體實施方式
實施例1本發(fā)明翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物的制備
取翼首草原藥材IOOOg切段，加1600ml水潤濕，再加6000ml水煎煮提取2次，每次 1. 5h,濾過，濾液濃縮，離心除去沉淀，水提物稀釋至0. Ig生藥/ml藥液，采用DlOl型大孔吸附樹脂室溫下上樣，上樣流速為2BV/h，上樣量為樹脂用量的1倍(藥材樹脂=1:1)， 以4BV水洗脫，流速為2BV/h，棄去洗脫液；以3BV的70 %乙醇洗脫，洗脫流速為!3BV/h，洗脫液減壓回收乙醇，溶于80% ν/ν乙醇中，加入過量飽和的中性醋酸鉛溶液，攪拌，使得翼首草總皂苷完全沉淀，濾過，取濾液，減壓回收乙醇至稠膏狀，加水溶解，正丁醇萃取三次， 取正丁醇液，減壓回收溶劑至稠膏狀，干燥，即得總環(huán)烯醚萜苷提取物。
以馬錢苷為對照品，采用比色法測定提取物中總環(huán)烯醚萜苷的含量，結(jié)果見表1。
表 1
樣品胃123 =總環(huán)烯醚萜苷含量占浸膏的比例(％)82.66 81.04 82.05
翼首草總環(huán)烯醚萜苷中，環(huán)烯醚萜苷含量以馬錢苷計，不應低于50% w/w，本發(fā)明中選用環(huán)烯醚萜苷含量不低于80% w/w的翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物。
本發(fā)明中，利用醋酸鉛將翼首草三萜皂苷和環(huán)烯醚萜苷分離，原理參見《中藥化學》，肖崇厚主編，上海科學技術出版社，1997年第1版，389頁，440頁。
實施例2本發(fā)明翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物的制備
取翼首草原藥材IOOOg切段，加1600ml水潤濕，再加6000ml水煎煮提取2次，每次 1. 5h,濾過，濾液濃縮，離心除去沉淀，水提物稀釋至0. Ig生藥/ml藥液，采用DlOl型大孔吸附樹脂室溫下上樣，上樣流速為2BV/h，上樣量為樹脂用量的1倍(藥材樹脂=1:1)， 以4BV水洗脫，流速為2BV/h，棄去洗脫液；以3BV的70 %乙醇洗脫，洗脫流速為!3BV/h，洗脫液減壓回收乙醇，溶于60% ν/ν乙醇中，加入過量飽和的中性醋酸鉛溶液，攪拌，使得翼首草總皂苷完全沉淀，濾過，取濾液，減壓回收乙醇至稠膏狀，加水溶解，正丁醇萃取三次， 取正丁醇液，減壓回收溶劑至稠膏狀，干燥，即得總環(huán)烯醚萜苷提取物。
實施例3本發(fā)明藥物組合物的制備
取實施例1制備的總環(huán)烯醚萜苷提取物100g，并加入適當?shù)矸郏瑵穹ㄖ屏：螅稍铮吹帽景l(fā)明藥物組合物顆粒劑。
實施例4本發(fā)明藥物組合物的制備
取實施例1制備的總環(huán)烯醚萜苷提取物50g，并加入適當微晶纖維素，混勻后，裝膠囊，即得本發(fā)明藥物組合物膠囊劑。
以下通過藥理、藥效試驗證明本發(fā)明翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物的有益效果。
試驗例1翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物的藥效研究
1.1實驗動物
健康Sprague-Dawley (SD)大鼠，清潔級，全雄，體重180 220g ；健康動物合格證號SCXK(川)2008-24，均由四川省醫(yī)學科學院實驗動物研究所生產(chǎn)提供；實驗動物飼養(yǎng)在M±2°C，黑夜和白晝各12小時交替的環(huán)境中，自由攝取干凈的食物和飲水，動物適應環(huán)境 3天后進行實驗；動物飼養(yǎng)及實驗操作過程嚴格遵守實驗動物倫理及福利的相關規(guī)則(NIH guide for the care and use of laboratory animals)。
1.2試驗用藥的配制
根據(jù)《中華人民共和國藥典》2010版及《中華人民共和國衛(wèi)生部藏藥部頒標準》記載，成人日用量為3g/60kg (以原藥材計)，因此，將翼首草環(huán)烯醚萜苷提取物B (實施例1制備)的大鼠給藥劑量調(diào)整為1250mg原生藥/kg。
1. 3藥品與試劑
尼美舒利分散片(Nimesulide)，南昌市飛弘藥業(yè)有限公司，國藥準字H20020196， 批號091010，規(guī)格0. Ig/片，成人日用劑量:0. 2g/60kg，試驗用劑量:33. 33mg/kg，實驗時采用蒸餾水稀釋配制成3. 33mg/ml的藥液備用；
吲哚美辛腸溶片(Indomethacin)，重慶科瑞制藥有限公司，國藥準字 H5002(^63，批號310001，規(guī)格25mg/片，成人日用劑量:75mg/60kg，試驗用劑量:12. 5mg/ kg，實驗時采用蒸餾水稀釋分別配制成2. 5,1. 25mg/ml的藥液備用；
% f^M (Freund' s Adjuvant Complete), Sigma Chemical, ftk 號 016K8900，規(guī)格每毫升佐劑含Img滅活結(jié)核桿菌；卡介苗凍干粉，北京生物制品研究所，批號20100413，規(guī)格60mg/支；lmg/ml的完全弗氏佐劑中再次加入一定劑量滅活的卡介菌， 制備成每毫升含IOmg滅活結(jié)核桿菌的完全弗氏佐劑，4°C冷藏保存?zhèn)溆谩?br> 角叉菜膠(Carrageenin)，SigmaChemical，批號073K0051。
1. 4統(tǒng)計方法
采用SPSS 11. 5統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以Mean士SD表示結(jié)果，數(shù)據(jù)用單因數(shù)方差分析進行組間比較，方差齊則采用LSD檢驗，方差不齊則采用Tamhane’ s T2檢驗；等級資料采用非參數(shù)檢驗進行組間比較；P < 0. 05時，認為其組間差異有顯著性。
2.對角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響
2. 1實驗方法
健康雄性SD大鼠30只，按體重隨機分為5組，分別為模型對照組、陽性對照組(吲哚美辛)和翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物B組。各組大鼠每天按設定劑量連續(xù)灌胃給藥7天， 模型對照組給予等體積溶媒。
試驗前于右后足踝關節(jié)處作標記，按足容積法測定足容積兩次，取平均值作為給藥前正常足容積；末次給藥后30min，于大鼠右后足跖部皮下注射角叉菜膠溶液0. Iml 致炎，并分別于致炎后60、120、180、240min時，同法測定各組大鼠右后足容積，以足腫脹度 (給藥后足容積-給藥前足容積)表示藥物的抗炎效應。
2. 2實驗結(jié)果
大鼠右后足注射的角叉菜膠后，足爪出現(xiàn)明顯的腫脹；與模型對照組比較，翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物B組能抑制角叉菜膠致大鼠足腫脹，表明翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物對急性炎癥有一定的抑制作用。結(jié)果見表2。
表2翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物對角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響G±s,n= 10)
權(quán)利要求
1.一種翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物，其特征在于它來源于川續(xù)斷科植物匙葉翼首草 Pterocephalus hookeri (C. B. Clarke) Hoeck的干燥全草，該提取物中，總環(huán)烯醚萜苷含量大于 50% w/wo
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物，其特征在于該提取物中，總環(huán)烯醚萜苷含量大于80% w/w。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物，其特征在于該提取物中，總環(huán)烯醚萜苷含量為80-90% w/w。
4.權(quán)利要求1-3任意一項所述翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物的制備方法，其特征在于 它包括如下操作步驟a、取翼首草，加水提取，濾過，濾液濃縮后，采用非極性或弱極性大孔吸附樹脂上樣，先以水洗去雜質(zhì)后，棄去洗脫液；以60-85%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液后；b、取步驟a的乙醇洗脫液，減壓回收溶劑后，加入醋酸鉛溶液，攪拌，濾過，取濾液，濃縮后，正丁醇萃取，取正丁醇層，回收溶劑后，干燥，即得翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于步驟a中選用D101、AB-8或HPD-300 型大孔吸附樹脂；以65-75% ν/ν乙醇洗脫；步驟b中，取步驟a的乙醇洗脫液，減壓回收溶劑后，復溶于30-95% ν/ν乙醇中，加入飽和中性醋酸鉛溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于步驟a中選用DlOl型大孔吸附樹脂； 以70% ν/ν乙醇洗脫；步驟b中，乙醇濃度為60-85% ν/ν。
7.根據(jù)權(quán)利要求4-6任意一項所述的制備方法，其特征在于大孔吸附樹脂洗脫的具體操作步驟如下將上樣液的濃度配制為0. 1-0. 2g生藥/ml，采用DlOl型大孔吸附樹脂上樣，上樣流速為UBV/h，上樣量以藥材計為藥材樹脂=(0. 5-1. 5) lw/w,以3-5BV水洗脫，流速為 UBV/h，棄去洗脫液；以2-4BV的70%乙醇洗脫，洗脫流速為2-4BV/h。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于將上樣液的濃度配制為0.Ig生藥/ ml，采用DlOl型大孔吸附樹脂室溫下上樣，上樣流速為2BV/h，上樣量以藥材計為藥材樹脂=1 1，以4BV水洗脫，流速為2BV/h，棄去洗脫液；以;3BV的70 %乙醇洗脫，洗脫流速為 3BV/h0
9.權(quán)利要求1-3任意一項所述的翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物在制備抗炎、鎮(zhèn)痛或治療類風濕性關節(jié)炎的藥物中的用途。
10.一種治療類風濕性關節(jié)炎的藥物組合物，其特征在于它是由權(quán)利要求1-3任意一項所述的翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物為活性成分，加上藥學上常用的輔料制備而成的制劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物，它來源于川續(xù)斷科植物匙葉翼首草Pterocephalus hookeri(C.B.Clarke)Hoeck的干燥全草，該提取物中，總環(huán)烯醚萜苷含量大于50％w/w。本發(fā)明還提供了該提取物的制備方法和用途。本發(fā)明提供的翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物，具有明顯的抗佐劑性關節(jié)炎作用，抗炎鎮(zhèn)痛作用良好，表明該翼首草總環(huán)烯醚萜苷提取物能夠有效治療類風濕性關節(jié)炎，為臨床用藥提供了新的選擇。
文檔編號A61K36/185GK102526141SQ201210061160
公開日2012年7月4日 申請日期2012年3月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月9日
發(fā)明者古銳, 孟憲麗, 張藝, 賴先榮 申請人:成都中醫(yī)藥大學