專利名稱：一種用于防治缺血再灌注損傷的組合物的制作方法
技術領域：
本發明屬于醫藥技術領域，涉及一種用于防治缺血再灌注損傷的組合物。
背景技術：
近年來，隨著休克治療的進步以及動脈搭橋術、溶栓療法、經皮腔內冠脈血管成形術、心臟外科體外循環、心肺腦復蘇，斷肢再植和器官移植等方法的建立和推廣應用，使許多組織器官缺血后重新得到血液再灌注。多數情況下，缺血后再灌注可使組織器官功能得到恢復，損傷的結構得到修復，患者病情好轉康復；但有時缺血后再灌注.不僅不能使組織、器官功能恢復，反而加重組織、器官的功能障礙和結構損傷。這種在缺血基礎上恢復血流后組織損傷反而加重，甚至發生不可逆性損傷的現象稱為缺血-再灌注損傷(ischemiareperfusion injury, IRI)。如何減輕或避免IRI已成為近年倍受關注的問題。通過建立實驗模型，研究藥物和缺血預處理干預來減輕或防止臟缺血再灌注損傷具有十分重要的臨 床應用意義。促紅細胞生成素(hemopoietin，EP0)是由腎臟和肝臟分泌的一種激素樣物質，能夠促進紅細胞生成。近年來學者們發現EPO有抑制細胞凋亡、抑制炎癥反應、誘導缺血耐受等功能，對各組織臟器(如腦、心臟、腎、肺、腸等)的缺血再灌注損傷均有保護作用。在缺血再灌注組織中，EPO與其受體結合通過絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)、JAK2/NF k B和磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K/Akt)等細胞內路徑發揮調節細胞凋亡的作用。硒(Selenium，Se)是人體必需的微量元素，它的生物學功能主要是作為谷胱甘肽過氧化酶、硫氧還蛋白還原酶、脫碘酶、硒蛋白P和W等酶或蛋白的活性中心或必要組成成份發揮其抗氧化功能。

發明內容
本發明解決的問題在于提供一種用于防治缺血再灌注損傷的組合物及其應用，該組合物對缺血再灌注損傷發揮良好的協同保護作用。本發明是通過以下技術方案來實現一種用于防治缺血再灌注損傷的組合物，將EPO與硒按照EPO :硒=1萬IU 28. 5 7310. 6 iig的比例組合。進一步，EPO與硒按照EPO :硒=1萬IU 456 U g的比例組合。所述的硒是以亞硒酸鹽或硒代硫酸鹽的形式與EPO進行組合。所述的亞硒酸鹽為亞硒酸鈉或亞硒酸氫鈉，所述的硒代硫酸鹽為硒代硫酸鈉。所述的硒是以亞硒酸鈉的形式與EPO進行組合，EPO與亞硒酸鈉的組合比例為EPO :亞硒酸鈉=1 萬 IU IOOOu g0一種用于防治缺血再灌注損傷的注射液，在IOOmL注射液中包括3(Tl00萬IU的EP0、3(Tl00mg的亞硒酸鈉、0. 5 2g人血白蛋白、0. 2 0. 6g氯化鈉和l(T50mmol/L枸櫞酸鹽緩沖液;PH為6. 0 7.0。
所述的防治缺血再灌注損傷的注射液，在IOOmL注射液中包括100萬IU的ΕΡ0、IOOmg的亞硒酸鈉、Ig人血白蛋白、O. 4g氯化鈉、l(T50mmol/L枸櫞酸鹽緩沖液。一種防治缺血再灌注損傷的注射液的制備方法，包括以下步驟將30 100萬IU的EPO用l(T50mmol/L枸櫞酸鹽緩沖液溶解，再加入3(Tl00mg亞硒酸鈉，攪拌溶解，然后加入O. 5^2g人血白蛋白和O. 2^0. 6g氯化鈉，充分攪拌混勻，調整體積至IOOmL,并調節pH至6. (Γ7. O,過濾除菌，最后灌封。所述的防治缺血再灌注損傷的組合物用于預防或治療缺血再灌注損傷的藥物的制備的應用。與現有技術相比，本發明具有以下有益的技術效果本發明提供的用于防治缺血再灌注損傷的組合物，是將EPO和硒進行組合，進行組合之后在術前進行注射，能夠降低血漿中的BUN的水平，顯示出改善腎缺血再灌注損傷 所致的腎功能，減輕腎小管損傷，并且可改善腎缺血再灌注損傷所致的腎功能和腎臟的病理學改變，說明二者合用對缺血再灌注損傷具有保護作用，為缺血再灌注損傷的防治開辟新的途徑。本發明提供的用于防治缺血再灌注損傷的組合物，該復方組合可EPO和亞硒酸鈉的降糖作用相互協同，EPO和亞硒酸鈉的器官組織保護作用相互加強，對缺血再灌注損傷具有協同保護作用。其中EPO的保護作用更明顯，是主藥；亞硒酸鈉是輔藥，二者合用的療效明顯優于EPO或亞硒酸鈉單用。


圖I為EPO和亞硒酸鈉對缺血再灌注所致大鼠血漿尿素氮(BUN)水平的影響。圖2為EPO和亞硒酸鈉對缺血再灌注所致大鼠腎臟皮質損傷的保護作用(HE染色，X400)。A，假手術組；B，缺血再灌注組；C，EPO組；D，亞硒酸鈉組；E，EPO+亞硒酸鈉小劑量組；F，EPO+亞硒酸鈉中劑量組；G，EPO+亞硒酸鈉大劑量組。
具體實施例方式本發明提供一種防治缺血再灌注損傷的藥物組合物，是將EPO與硒進行復方組合，并進一步制成注射液，EPO的器官保護作用和硒的抗氧化作用是EPO和硒二者組方合理性的基礎。該復方組合可改善腎缺血再灌注損傷所致的腎功能，EPO和亞硒酸鈉的降糖作用相互協同，復方EPO硒注射液的腎功能保護作用強于二者單用。下面結合具體的實施例對本發明做進一步的詳細說明，所述是對本發明的解釋而不是限定。I、EPO與硒組合物的組合配比及其對缺血再灌注損傷的保護作用I. IEPO與硒的組合基礎EPO因其促進紅細胞生成作用，在臨床上主要用于嚴重貧血。近年來學者們發現EPO還有非促紅細胞生成作用，如抑制細胞凋亡、抑制炎癥反應、誘導缺血耐受等功能，對各組織臟器(如腦、心臟、腎、肺、腸等)的缺血再灌注損傷均有保護作用。硒是人體必需的微量元素，其抗氧化功能使得硒可能成為缺血再灌注損傷聯合用藥的備選藥。亞硒酸鈉是用于硒缺乏癥和日常補硒的藥物。將EPO與硒進行復方組合，有可能會起到更好的缺血再灌注損傷防治的效果，其中EPO的器官保護作用和硒的抗氧化作用是EPO和硒二者組方合理性的基礎。I. 2EP0與硒的組合對缺血再灌注損傷的保護的驗證I. 2. I以腎的缺血再灌注作為具體的缺血再灌注模型，動物模型的復制如下健康雄性昆明種小鼠，體重18 22g，每組10只，由西安交通大學醫學院實驗動物中心提供。腹腔注射20%烏拉坦溶液進行麻醉，行腹部手術仰臥位固定，消毒。做腹部切口，暴露雙側腎臟，切除右側腎臟，鈍性分離左側腎周組織，用無損傷動脈夾夾閉左側腎蒂，造成左腎缺血。60min后，松開動脈夾實行再灌注(肉眼可見腎臟由暗紅色變為鮮紅，表明再灌注成功)。再灌注4h后經摘眼球取血處死。I. 2. 2EP0與硒的組合及處理的動物分組涉及到EPO與硒的組合，具體的EPO采用重組人紅細胞生成素(rhEPO，recombinant human erythropoietin),而硒是以亞硒酸鹽或硒代硫酸鹽的形式與EPO進行 組合，通常亞硒酸鹽為亞硒酸鈉或亞硒酸氫鈉，所述的硒代硫酸鹽為硒代硫酸鈉。所述的亞硒酸鹽或硒代硫酸鹽都是為了能夠提供硒與EPO的組合，并沒有其他實質的區別。具體的采用亞硒酸鈉來進行組合，并進一步采用權重配比組方研究，確定EPO和亞硒酸鈉的最佳配比比例。利用均勻設計表，選取EPO給藥量與亞硒酸鈉(硒78. 96 ;亞硒酸鈉172. 94)給藥量兩個因素各設6個水平，選用U6 (64)均勻設計表進行試驗(具體如表I所示)。給藥方式術前3天腹腔注射，I次/d，連續3d，隨后進行缺血再灌注手術處理。觀測指標摘眼球取血，離心后取血漿，檢測血漿尿素氮(BUN)水平。表I.均勻設計組方試驗方案
組另IJEPO(IUAg)亞砸酸鈉(μ g/kg)
EPO+Se 12550
EP0+Se (2)250400
EP0+Se ③50025
EP0+Se ④ ο200
EP0+Se 2000 Π
EP0+Se 4000IOO3) EPO和亞硒酸鈉注射液的復方組合及其制備方法根據中國藥典2010年版二部中重組人促紅素注射液(CH0細胞)的處方以及表I中EPO與硒組合物的組方配比，設計復方EPO和亞硒酸鈉注射液的復方組合及其制備方法。具體的設計如表2所示表2復方EPO和亞硒酸鈉注射液的復方組合
權利要求
1.一種用于防治缺血再灌注損傷的組合物，其特征在于，是將EPO與硒按照EPO :硒=1萬IU 28. 5 7310. 6 iig的比例組合。
2.如權利要求I所述的用于防治缺血再灌注損傷的組合物，其特征在干，EPO與硒按照EPO :硒=1萬IU 400^500 u g的比例組合。
3.如權利要求I所述的防治缺血再灌注損傷的藥物組合物，其特征在于，所述的硒是以亞硒酸鹽或硒代硫酸鹽的形式與EPO進行組合。
4.如權利要求3所述的防治缺血再灌注損傷的藥物組合物，其特征在于，所述的亞硒酸鹽為亞硒酸鈉或亞硒酸氫鈉，所述的硒代硫酸鹽為硒代硫酸鈉。
5.如權利要求I所述的防治缺血再灌注損傷的藥物組合物，其特征在于，所述的硒是以亞硒酸鈉的形式與EPO進行組合，EPO與亞硒酸鈉的組合比例為EPO 亞硒酸鈉=1萬IU IOOOu go
6.一種用于防治缺血再灌注損傷的注射液，其特征在于，在IOOmL注射液中包括30^100萬IU的EP0、3(Tl00mg的亞硒酸鈉、0. 5 2g人血白蛋白、0. 2 0. 6g氯化鈉、l(T50mmol/L枸櫞酸鹽緩沖液;pH為6. 0 7. O。
7.如權利要求6所述的防治缺血再灌注損傷的注射液，其特征在于，在IOOmL注射液中包括100萬IU的EPO、IOOmg的亞硒酸鈉、Ig人血白蛋白、0. 4g氯化鈉、l(T50mmol/L枸櫞酸鹽緩沖液。
8.ー種防治缺血再灌注損傷的注射液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟將30^100萬IU的EPO用l(T50mmOl/L枸櫞酸鹽緩沖液溶解，再加入3(Tl00mg亞硒酸鈉，攪拌溶解，然后加入0. 5^2g人血白蛋白和0. 2^0. 6g氯化鈉，充分攪拌混勻，調整體積至IOOmL,并調節PH至6. (T7. 0，過濾除菌，最后灌封。
9.權利要求I所述的防治缺血再灌注損傷的組合物用于預防或治療缺血再灌注損傷的藥物的制備的應用。
全文摘要
本發明公開了一種用于防治缺血再灌注損傷的組合物，該組合物，是將促紅細胞生成素(EPO)與硒按照EPO︰硒=1萬IU︰28.5~7310.6μg的比例組合。EPO的器官保護作用和硒的抗氧化作用是EPO和硒二者組方合理性的基礎。該復方組合對缺血再灌注損傷具有協同保護作用，體現在腎臟方面為降低血漿BUN水平，減輕腎小管損傷，改善腎臟病理性變化；其中EPO的作用更明顯，是主藥；亞硒酸鈉作用較EPO小，是輔藥；二者合用的療效明顯優于EPO或亞硒酸鈉單用。
文檔編號A61K38/18GK102755637SQ20121014261
公開日2012年10月31日 申請日期2012年5月9日 優先權日2012年5月9日
發明者侯蘭, 劉璐, 劉超, 吳芳, 曾愛國, 王冰, 袁秉祥, 陳莉娜 申請人:西安交通大學