專利名稱：一種豬圓環病毒2型亞單位疫苗及其制備方法和其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及到獸用生物制品技術領域，具體涉及一種豬圓環病毒2型亞單位疫苗及其制備方法和其應用。
背景技術：
豬圓環病毒2型(Porcine circovirus type 2, PCV2)是斷奶仔豬多系統衰竭綜合征(PMWS)的主要病原，該病以免疫抑制和斷奶仔豬多系統衰竭為特征，病豬主要表現生長發育不良、貧血、呼吸困難、腹瀉、衰弱、增重遲緩、淋巴結腫大等臨床癥狀。自1991年在加拿大豬群中爆發PMWS以來，PMWS已給全世界養豬業造成極大的經濟損失。PCV2不但可以引發斷奶仔豬多系統的衰竭，還能夠使感染豬的免疫功能受到損害，導致機體抵抗力下降，引起繼發感染，加重病情。此外，PCV2還與母豬繁殖障礙、增生性壞死性肺炎、豬皮炎腎 病綜合征和豬呼吸道疾病綜合征等病癥相關。近年來，我國豬群也有PMWS流行，所造成的危害十分嚴重。疫苗免疫是控制PCV2感染及其相關疾病的重要手段。目前，國內生產的疫苗為全病毒滅活疫苗，如文獻CN101240264A公開了一種全病毒滅活疫苗，但PCV2在體外細胞內增殖能力弱，培養難度較大，病毒最終滴度低，提供的病毒抗原含量有限，制備高質量PCV2疫苗需要濃縮病毒抗原，這將直接導致疫苗生產成本高昂，不能滿足動物疫苗質優價廉的實際要求。文獻CN101180406A、CN101884787A和CN101358182A均公開了用重組桿狀病毒表達PCV2 0RF2基因編碼的Cap蛋白，并將其用于制備PCV2疫苗，其中，所描述的重組桿狀病毒都只含有一個啟動子，且未優化其生產工藝條件，致使生產獲得的病毒蛋白產率及質量均較低，且所表達的目的基因有其它多余序列(如6XHis標簽、分泌性信號肽等)的修飾，不利于表達的外源蛋白形成病毒樣顆粒(virus-like particles, VLPs),這些重組桿狀病毒構建技術策略存在表達的目的蛋白免疫原性部分喪失的缺陷。此外，由于該亞單位疫苗的佐劑和免疫刺激物等因素影響，其實踐中的免疫效果并不佳。因此，急需研制一種產率更高、免疫原性及免疫效果更佳的PCV2亞單位疫苗及其制備方法和其所制備的疫苗組合物。

發明內容
本發明的目的在于提供一種重組桿狀病毒轉移載體，所述載體是分別在pFastBacDual轉移載體的PlO啟動子和Ppolh啟動子(多角體蛋白啟動子)之后各插入一個拷貝的PCV2 Cap蛋白編碼基因0RF2。在本發明的一個優選技術方案中，所述的PCV2 Cap蛋白編碼基因0RF2是完整的、未經修飾的PCV2b 0RF2。在本發明的一個優選技術方案中，所述的PCV2 Cap蛋白編碼基因0RF2的核苷酸序列如SEQ ID NO 1所示。在本發明的一個優選技術方案中，所述PCV2 Cap蛋白編碼基因0RF2分別通過BamHI/Hind III 和 Kpn I/Xho I 雙酶切插入 pFastBac Dual 轉移載體中。
在本發明的一個優選技術方案中，所述重組桿狀病毒轉移載體為pFastBacDual_20RF2。本發明的另一目的在于提供一種豬圓環病毒2型亞單位疫苗生產用毒株的制備方法，包括如下步驟
(I)獲得本發明所述的重組桿狀病毒轉移載體pFastBac Dual_20RF2 ；(2)同源重組，產生重組桿狀病毒DNA ；(3)包裝，產生表達PCV2衣殼蛋白的重組桿狀病毒。在本發明的一個優選技術方案中，所述的同源重組是將步驟(I)所述的重組桿狀病毒轉移載體轉化進含穿梭載體Bacmid的大腸桿菌感受態細胞DHlOBac中，產生重組桿狀
病毒DNA。在本發明的一個優選技術方案中，所述的包裝是將步驟(2)產生的重組桿狀病毒DNA感染sf9細胞，包裝出重組桿狀病毒。本發明的另一目的在于提供一種重組桿狀病毒，由本發明所述的豬圓環病毒2型亞單位疫苗生產用毒株的制備方法制得。在本發明的一個優選技術方案中，所述重組桿狀病毒為rBac_20RF2。本發明的另一目的在于提供一種豬圓環病毒2型亞單位疫苗的制備方法，包括如下步驟(I)獲得本發明制備的重組桿狀病毒；(2)培養宿主細胞，接種步驟(I)的重組桿狀病毒；(3)滅活病毒；(4)分離純化重組PCV2 Cap蛋白；(5)用純化的重組PCV2 Cap蛋白制備亞單位疫苗。在本發明的一個優選技術方案中，所述的步驟(2)包括利用生物反應器無血清培養基懸浮培養sf9細胞作為宿主細胞，按感染復數(MOI)為O. 001-10的量接種步驟(I)所述的重組桿狀病毒后，繼續培養，使PCV2 Cap蛋白在sf9細胞中高效表達。在本發明的一個優選技術方案中，所述生物反應器的培養參數設定為pH6. 0-6. 5，溫度25-30°C，溶氧30_80%，攪拌速度50_250rpm，優選所述生物反應器的培養參數設定為PH6. 2，溫度27°C，溶氧50%，攪拌速度100_180rpm。在本發明的一個優選技術方案中，所述步驟(2)包括將細胞經過5L-50L培養體積逐級放大培養后，于50L生物反應器培養并接種所述重組桿狀病毒；或者，將細胞經過5L-50L-500L培養體積逐級放大培養后，于500L生物反應器培養并接種所述重組桿狀病毒。在本發明的一個優選技術方案中，所述步驟(2 )采用批式培養方法、分批補料培養方法、半連續灌注培養方法或連續灌注培養方法的任一種或其組合。在本發明的一個優選技術方案中，所述步驟(2)采用分批補料培養方法。在本發明的一個優選技術方案中，所述步驟(3)包括向細胞培養液中加入二乙烯亞胺(BEI)滅活劑滅活所述的重組桿狀病毒，并可選的，在滅活結束后使用硫代硫酸鈉中和過量的BEI。在本發明的一個優選技術方案中，所述步驟(4)包括收集步驟(3)滅活后的細胞培養物，通過離心或中空纖維過濾除去細胞碎片，得到含有PCV2 Cap蛋白的細胞培養上清。在本發明的一個優選技術方案中，所述步驟(5)包括對步驟(4)純化的重組PCV2Cap蛋白進行定量，加入佐劑，制備疫苗。在本發明的一個優選技術方案中，所述的亞單位疫苗包括不低于8 μ g/ml的重組PCV2Cap 蛋白。在本發明的一個優選技術方案中，所述的亞單位疫苗還包括適量的防腐劑。在本發明的一個優選技術方案中，所述的亞單位疫苗還包括免疫刺激復合物或QuilA皂苷的任一種，優選所述免疫刺激復合物由Quil A皂苷、膽固醇和磷脂組成，其中，Quil A阜苷膽固醇磷脂的質量比為1:1:1。在本發明的一個優選技術方案中，所述的亞單位疫苗還包括適量的佐劑。 在本發明的一個優選技術方案中，所述佐劑選自水性佐劑、油性佐劑、納米佐劑或緩釋佐劑的任一種或其組合，優選所述的水性佐劑選自氫氧化鋁膠佐劑，賽比克Gel OlST佐劑或Carbopol 971P NF佐劑的任一種或其組合。在本發明的一個優選技術方案中，每頭份所述的亞單位疫苗包括不低于8yg/ml 的 PCV2 Cap 蛋白，10% (v/v)的賽比克 Gel 01 ST 佐劑、O. 1% 的 Carbopol 971P NF 佐劑、lmg/ml的氫氧化招膠佐劑的任一種,組成為50 μ g/ml Quil A阜苷、50 μ g/ml膽固醇和50 μ g/ml磷脂的免疫刺激復合物或50 μ g/ml Quil A皂苷的任一種，按疫苗最終體積計，含量不聞于O. 01%的硫柳萊。本發明的另一目的在于提供一種豬圓環病毒2型亞單位疫苗，利用本發明所述重組桿狀病毒制備得到。本發明的另一目的在于提供一種豬圓環病毒2型亞單位疫苗，由本發明所述的制備方法制備得到。在本發明的一個優選技術方案中，每頭份所述的亞單位疫苗包括不低于Syg/ml 的 PCV2 Cap 蛋白，50 μ g/ml Quil A 皂苷。在本發明的一個優選技術方案中，每頭份所述疫苗組合物的組成包括不低于8 μ g/ml 的 PCV2 Cap 蛋白，10% (v/v)的賽比克 Gel 01 ST 佐劑、O. 1% 的 Carbopol 971PNF佐劑、lmg/ml的氫氧化招膠佐劑的任一種,組成為50 μ g/ml Quil A阜苷、50 μ g/ml膽固醇和50 μ g/ml磷脂的免疫刺激復合物或50 μ g/ml Quil A皂苷的任一種，按疫苗最終體積計，含量不聞于O. 01%的硫柳萊。本發明的另一目的在于提供本發明所述的重組桿狀病毒轉移載體在制備PCV2重組Cap蛋白或PCV2亞單位疫苗中的應用。本發明的另一目的在于提供本發明所述的重組桿狀病毒在制備PCV2重組Cap蛋白或PCV2亞單位疫苗中的應用。在本發明的一個優選技術方案中，所述的PCV2重組Cap蛋白或PCV2亞單位疫苗用于預防由豬圓環病毒2型(PCV-2)感染引起的斷奶仔豬多系統衰竭綜合征。為了清楚表述本發明的保護范圍，本發明對下述術語進行如下界定本發明所述的免疫刺激復合物由Quil A皂苷、膽固醇和磷脂組成，其中，Quil A皂苷膽固醇磷脂的質量比為1:1:1，該復合物能形成一種具有較高活性的脂質小泡，又是一種全新的抗原遞呈系統，對機體有免疫增強作用，具有佐劑和抗原遞呈的雙重功能，可產生“全面”免疫應答的效力，并長期增強特異性抗體應答。本發明所述的“每頭份”是指每頭豬每次免疫的劑量。本發明所述的賽比克Gel 01 ST佐劑(購自法國S印pic公司)，主要含有高分子的丙烯酸酯聚合物。本發明所述的Carbopol 971P NF佐劑(購自美國Noveon公司)，主要含有丙烯酸鍵合烯丙基蔗糖。除非另有說明，本發明所述的百分比為液體與液體之間的百分比時為體積/體積百分比，當百分比為液體與固體之間的百分比時為體積/重量百分比，當百分比為固體與液體之間的百分比時為重量/體積百分比，其余為重量/重量百分比。與現有技術相比，本發明具有下述優點I、經試驗驗證，本發明采用中國流行的PCV2b亞型的編碼Cap蛋白的基因序列可針對性地用于預防中國流行的豬圓環病毒??；2、本發明所述重組桿狀病毒含有雙啟動子(多角體蛋白啟動子和PlO啟動子)，可表達雙拷貝的Cap蛋白編碼基因，顯著提高了蛋白的表達效率；并且，插入的外源基因所表達的Cap蛋白不含多余序列，能有效形成病毒樣顆粒(VLPs)，提高了表達蛋白的免疫原性，且生產的抗原含量高；3、本發明的制備方法利用生物反應器、大規模無血清懸浮培養sf9昆蟲細胞，并將其用于制備豬圓環病毒2型亞單位疫苗，顯著提高了豬圓環病毒2型亞單位疫苗的病毒蛋白產率及質量，所制得的疫苗組合物具有免疫效果穩定、持久、安全性高等優點；4、本發明制備的豬圓環病毒2型亞單位疫苗具有良好的安全性和免疫效力，能夠對豬抵抗圓環病毒2型感染提供良好的免疫保護；5、本發明提供的應用生物反應器豬圓環病毒2型亞單位疫苗的制備方法，具有設備占地面積小、生產規模大、生產效率高，并可實現生產自動化控制和工業化生產等優點。


圖I本發明的重組桿狀病毒轉移載體構建流程圖。圖2本發明的重組桿狀病毒構建流程圖。圖3單拷貝、雙拷貝重組bacmid PCR鑒定圖。
其中圖3A :雙拷貝重組bacmid鑒定；1、陰性對照；2、3、marker ;4、PUC M13F/R引物鑒定結果。圖4本發明的PCV2亞單位疫苗制備工藝流程圖。圖5本發明表達的Cap蛋白形成病毒樣顆粒(VLPs)電鏡圖片。
具體實施例方式以下將結合實施例具體說明本發明，本發明的實施例僅用于說明本發明的技術方案，并非限定本發明的實質。實施例I重組桿狀病毒的構建使用Bac-to-Bac系統構建重組桿狀病毒，根據GENBANK公布的基因序列(NCBI登陸號EU340257. I)設計以下引物
PlTCTGGATCCATGACGTATCCAAGGAGGCGP2 GCGAAGCTTTAAGGGTTAAGTGGGGGGTCP3 TCTCTCGAGATGACGTATCCAAGGAGGCGP4 GCGGGTACCTAAGGGTTAAGTGGGGGGTC以PCV2b株病毒0RF2序列為模板(該模板根據已公布的PCV2b 0RF2序列登陸號EU340257. I合成獲得)，P1，P2擴增PCV2 0RF2基因，并將該基因克隆入pMD_19T載體中，獲得重組載體PMD-19T-0RF2-1，以PCV2b株病毒0RF2序列為模板，P3，P4擴增PCV20RF2基因，并將該基因克隆入PMD-19T載體中，獲得重組載體pMD-19T-0RF2-2。通過BamH I和Hind III雙酶切pMD_19T-0RF2_l，將0RF2基因克隆入轉移載體pFastBac Dual中，構建載體pFastBac Dual_0RF2 ；通過Kpn I和Xho I雙酶切PMD-19T-0RF2-2,將0RF2基因克隆入轉移載體pFastBac Dual_0RF2中，構建包含雙拷 貝0RF2基因的重組轉移載體pFastBac Dual_20RF2，將該重組轉移載體轉化大腸桿菌DHlOBac，獲得插入雙拷貝0RF2基因的重組質粒bacmid-20RF2 (PUC M13 F/R引物鑒定bacmid結果見圖3A)，將該重組質粒bacmid_20RF2轉染入昆蟲細胞Sf9中，獲得重組桿狀病毒rBac-20RF2 (0RF2序列如SEQ ID NO 1所述)，擴增重組桿狀病毒rBac_20RF2作為種毒備用。將重組轉移載體pFastBac Dual_0RF2轉化大腸桿菌DHlOBac，獲得插入單拷貝0RF2基因的重組質粒bacmid-0RF2，將該重組質粒bacmid_0RF2轉染入昆蟲細胞Sf9中，獲得重組桿狀病毒rBac-0RF2(0RF2序列如SEQ ID NO : I所述)，擴增重組桿狀病毒rBac_0RF2備用(PUC M13 F/R引物鑒定bacmid結果見圖3B)。實施例2昆蟲細胞的生物反應器無血清懸浮培養及Cap蛋白的表達定量在IOOOml搖瓶中無菌培養Sf9昆蟲細胞3_4天，待濃度長到3_5X 106cells/ml，活力大于95%時，將細胞接種到5L的生物反應器中，接種濃度為3-8X105cells/ml。當細胞濃度達到3-5X106cells/ml時，將細胞接種到50L生物反應器中，待細胞長至濃度為3-5X106cells/ml，接種到500L生物反應器中，待細胞濃度達到2_8X 106cells/ml時，接種重組病毒rBac-20RF2或rBac-0RF2，感染復數(MOI)為O. 001-10，反應器培養條件為pH6. 0-6. 5、溫度25-27°C、溶氧30_80%、攪拌速度100_180rpm?？紤]到細胞培養的最適條件，優選的PH6. 2、細胞培養階段溫度設定27°C、溶氧50%、攪拌速度100-180rpm。在感染之后繼續培養5-9天后，加入終濃度為5mmol/L的BEI，37°C作用24h后，加lmol/L Na2S2O3至終濃度5mmol/L終止滅活。通過離心或中空纖維過濾的方法收獲細胞培養上清，置2-8°C保存疫苗原液。制備的疫苗抗原中所含的Cap蛋白通過ELISA定量檢測。用包被緩沖液稀釋純化的捕獲抗體兔抗PCV2-Cap蛋白多抗至合適濃度，每孔100μ 1，4°C過夜，PBST洗滌三次，1%BSA封閉I小時。加入不同濃度的抗原標準品(通過CsCl密度梯度離心純化的形成病毒樣顆粒VLPs的Cap蛋白)和梯度稀釋待檢樣品，37°C孵育I小時，PBST洗三次。每孔加入檢測抗體-抗PCV2 Cap蛋白的單克隆抗體，37°C孵育I小時，PBST洗三次。每孔加入二抗-HRP標記的羊抗鼠IgG，37°C孵育I小時，PBST洗三次。TMB顯色10分鐘，2MH2S04終止反應。酶標儀讀數，通過標準曲線計算待檢樣品中Cap蛋白的量。使用三種不同MOI (0. 01、0. 1、1)接種兩種不同的病毒，分別于接種后7-11天取
樣定量分析培養上清中的目的蛋白含量，結果見表I。
表I不同感染復數接種兩種病毒蛋白表達量(μ g/ml)分析
權利要求
1.一種重組桿狀病毒轉移載體，所述載體是分別在pFastBac Dual轉移載體的PlO啟動子和Ppolh啟動子(多角體蛋白啟動子)之后各插入一個拷貝的PCV2 Cap蛋白編碼基因0RF2，優選所述的PCV2 Cap蛋白編碼基因0RF2是完整的、未經修飾的PCV2b 0RF2，更優選所述PCV2 Cap蛋白編碼基因0RF2分別通過BamH I/Hind III和Kpn I/Xho I雙酶切插A pFastBac Dual轉移載體中。
2.如權利要求I所述的重組桿狀病毒轉移載體，其特征在于，所述的PCV2Cap蛋白編碼基因0RF2的核苷酸序列如SEQ ID NO :I所示。
3.如權利要求1-2任一項所述的重組桿狀病毒轉移載體，其特征在于，所述重組桿狀病毒轉移載體為pFastBac Dual_20RF2。
4.一種豬圓環病毒2型亞單位疫苗生產用毒株的制備方法，包括如下步驟 (O獲得如權利要求1-5任一項所述的重組桿狀病毒轉移載體； (2)同源重組，產生重組桿狀病毒DNA； (3)包裝，產生表達PCV2衣殼蛋白的重組桿狀病毒。
5.如權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)所述的同源重組是將步驟(I)所述的重組桿狀病毒轉移載體轉化進含穿梭載體Bacmid的大腸桿菌感受態細胞DHlOBac中，產生重組桿狀病毒DNA。
6.如權利要求4或5所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)所述的包裝是將步驟(2)產生的重組桿狀病毒DNA轉染sf9細胞，包裝出重組桿狀病毒。
7.—種重組桿狀病毒，由權利要求4-6任一項所述的方法制備得到，優選所述重組桿狀病毒為rBac_20RF2。
8.一種豬圓環病毒2型亞單位疫苗的制備方法，包括如下步驟 (1)獲得權利要求9所述的重組桿狀病毒； (2)培養宿主細胞，接種步驟(I)的重組桿狀病毒； (3)滅活病毒； (4)分離純化重組PCV2Cap蛋白； (5)用純化的重組PCV2Cap蛋白制備亞單位疫苗。
9.如權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述的步驟(2)包括利用生物反應器無血清培養基懸浮培養Sf9細胞作為宿主細胞，按感染復數(MOI)為O. 001-10的量接種步驟(I)所述的重組桿狀病毒后，繼續培養，使PCV2 Cap蛋白在sf9細胞中高效表達。
10.如權利要求9所述的制備方法，其特征在于，生物反應器的培養參數設定為PH6. 0-6. 5、溫度25-30°C、溶氧30_80%、攪拌速度50_250rpm，優選生物反應器的培養參數設定為PH6. 2，溫度27°C，溶氧50%，攪拌速度100_180rpm。
11.如權利要求8-10任一項所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)包括將細胞經過5L-50L培養體積逐級放大培養后，于50L生物反應器培養并接種所述重組桿狀病毒；或者，將細胞經過5L-50L-500L培養體積逐級放大的培養后，于500L生物反應器培養并接種所述重組桿狀病毒。
12.如權利要求8-11任一項所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)采用批式培養方法、分批補料培養方法、半連續灌注培養方法或連續灌注培養方法的任一種或其組合進行培養，優選為分批補料培養方法進行培養。
13.如權利要求8-12任一項所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)包括向細胞培養液中加入BEI滅活劑滅活所述的重組桿狀病毒，并在滅活結束后使用硫代硫酸鈉中和過量的BEI。
14.如權利要求8-13任一項所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)包括收集步驟(3)滅活后的細胞培養物，通過離心或中空纖維過濾除去細胞碎片，得到含有PCV2Cap蛋白的細胞培養上清。
15.如權利要求8-14任一項所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(5)包括對步驟(4)純化的重組PCV2Cap蛋白進行定量，加入佐劑，制備疫苗。
16.如權利要求8-15任一項所述的制備方法，其特征在于，所述的亞單位疫苗包括不低于8 μ g/ml的重組PCV2 Cap蛋白，優選所述的亞單位疫苗還包括適量的防腐劑。
17.如權利要求8-16任一項所述的制備方法，其特征在于，所述的亞單位疫苗還包括免疫刺激復合物或Quil A皂苷的任一種，其中，所述免疫刺激復合物由Quil A皂苷、膽固醇和磷脂組成，其中，Quil A皂苷膽固醇磷脂的質量比為1:1:1 ;優選所述的亞單位疫苗還包括適量的佐劑，更優選所述佐劑選自水性佐劑、油性佐劑、納米佐劑或緩釋佐劑的任一種或其組合，還優選所述的水性佐劑選自氫氧化鋁膠佐劑、賽比克Gel OlST佐劑或Carbopol 971P NF佐劑的任一種或其組合。
18.如權利要求8-17任一項所述的制備方法，其特征在于，每頭份所述的亞單位疫苗包括不低于8 μ g/ml的PCV2 Cap蛋白，10% (v/v)的賽比克Gel 01 ST佐劑、O. 1%的Carbopol 971P NF佐劑、lmg/ml的氫氧化招膠佐劑的任一種，組成為50yg/ml QuilA阜苷、50 μ g/ml膽固醇和50 μ g/ml磷脂的免疫刺激復合物或50 μ g/ml Quil A皂苷的任一種，按疫苗最終體積計，含量不高于O. 01%的硫柳汞。
19.一種豬圓環病毒2型亞單位疫苗，利用權利要求7所述重組桿狀病毒制得，或者如權利要求8-18任一項所述的方法制備得到。
20.如權利要求19所述的豬圓環病毒2型亞單位疫苗，其特征在于，每頭份所述疫苗組合物的組成包括，不低于8 μ g/ml的PCV2 Cap蛋白，10% (v/v)的賽比克Gel 01 ST佐齊[J、0. 1%的Carbopol 971P NF佐劑、lmg/ml的氫氧化招膠佐劑的任一種，組成為50 μ g/mlQuil A皂苷、50 μ g/ml膽固醇和50 μ g/ml磷脂的免疫刺激復合物或50 μ g/mlQuiI A皂苷的任一種，按疫苗最終體積計，含量不高于O. 01%的硫柳汞。
21.權利要求1-3任一項所述的重組桿狀病毒轉移載體或者權利要求7所述重組桿狀病毒在制備PCV2重組Cap蛋白或PCV2亞單位疫苗中的應用，優選所述的PCV2重組Cap蛋白或PCV2亞單位疫苗用于預防由豬圓環病毒2型感染引起的斷奶仔豬多系統衰竭綜合征。
全文摘要
本發明涉及一種豬圓環病毒2型亞單位疫苗及其制備方法和其應用，所述重組桿狀病毒含有雙啟動子(多角體蛋白啟動子和P10啟動子)，可表達雙拷貝的Cap蛋白編碼基因，顯著提高了蛋白的表達效率。并且，插入的外源基因所表達的Cap蛋白不含多余序列，能有效形成病毒樣顆粒(VLPs)，提高了表達蛋白的免疫原性，且生產的抗原含量高。本發明的豬圓環病毒2型亞單位疫苗，顯著提高了豬圓環病毒2型亞單位疫苗的蛋白產率及質量，所制得的疫苗組合物具有免疫效果穩定、持久、安全性高等優點。
文檔編號A61K39/12GK102925486SQ20121027050
公開日2013年2月13日 申請日期2012年8月1日 優先權日2011年12月26日
發明者朱薇, 熊媛媛, 漆世華, 張萍, 秦紅剛, 李偉, 廖園園, 謝紅玲, 溫文生, 王楨楨, 靖志強, 吳玉石, 韓興, 劉潔 申請人:武漢中博生物股份有限公司