抗豬瘟病毒和豬圓環病毒感染的疫苗組合物及制備和應用的制作方法
【專利摘要】本發明涉及一種抗豬瘟病毒和豬圓環病毒2型感染的二聯疫苗組合物及其制備和應用。該方法將豬圓環病毒2型亞單位抗原與豬瘟病毒抗原混合凍干制成抗豬瘟病毒和豬圓環病毒2型感染二聯疫苗組合物，或以豬圓環病毒2型全病毒抗原滅活苗為稀釋液，稀釋豬瘟病毒疫苗獲得抗豬瘟病毒和豬圓環病毒2型感染二聯疫苗組合物的方式制成二聯疫苗組合物試劑盒。該二聯苗疫苗組合物不產生免疫干擾，免疫后豬瘟病毒抗原產生免疫反應加快，其保護抗體比單苗免疫后抗體提前一周達到免疫保護劑量，二聯疫苗中豬圓環病毒疫苗產生的抗體與單苗免疫效果相當。該方法制苗工藝簡單，生產效率高。經動物實驗證明，疫苗組合物效果優于單苗免疫效果，具有很大的應用價值。
【專利說明】抗豬瘟病毒和豬圓環病毒感染的疫苗組合物及制備和應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于畜類生物制藥【技術領域】，涉及一種豬用疫苗組合物，具體說來，涉及一種抗豬瘟病毒和豬圓環病毒2型感染的二聯疫苗組合物及其制備和應用。
【背景技術】
[0002]豬痕(classicalswine fever, CSF)是由豬痕病毒(classical swine fevervirus,CSFV)引起的一種嚴重危害養豬業的毀滅性傳染病。該病死亡率高達80%~90%，世界動物衛生組織(OIE)將其列為OIE疾病名錄，我國也將其列為一類傳染病。豬瘟的防制歷來是全世界豬瘟存在國非常重視的課題，為此各國都投入了大量的人力、物力，并取得了很大的成績。目前疫苗接種仍是控制豬瘟的重要手段。我國生產的豬瘟兔化弱毒疫苗有脾淋苗、乳兔組織苗、牛睪丸原代細胞苗及最近兩年發展起來的豬睪丸傳代細胞苗，這些工藝生產的豬瘟疫苗普遍存在生產工藝復雜、易受外源病毒污染、產毒滴度不高、批間差異大等缺點，給疫苗產量及質量的提高帶來困難。
[0003]豬圓環病毒(Porcine circovirus,PCV)屬于圓環病毒科(Circoviridae)圓環病毒屬(Circovirus),無囊膜,是目前發現的最小的動物病毒。豬圓環病毒現己成為全球廣泛傳播的豬病病毒，其具有流行范圍廣、各生長階段豬感染嚴重、混合感染突出等特點，PCV2在我國的流行始于2000年，在我國該病毒的陽性率也呈逐年上升的趨勢，目前在許多省份危害嚴重，給我國養豬業造成了巨大的損失，嚴重威脅了我國養豬業的發展。目前世界上研發的圓環病毒疫苗主要種類有:PCV2全病毒滅活疫苗CIRCOVAC ;PCVI_PCV2嵌合病毒滅活疫苗SuvaxynPCV2 ;桿狀病毒表達多聯疫苗CircoFLEX和PorcilisPCV。
[0004]目前免疫接種仍是我國防治豬瘟和豬圓環病毒病的重要措施。但豬用疫苗品種很多，在實際操作中，多針次、多劑量、多種免疫程序難以合理安排，既繁瑣、費時、費力、增加成本，且容易造成漏種，直接影響免疫效果。
[0005]專利CN 101277717A公開了一種對抗豬圓環病毒2型(PCV-2)的疫苗，該疫苗由至少20微克/劑量的豬圓環病毒2型(PCV-2)與0RF-2蛋白或重組0RF-2蛋白構成，其重組蛋白優選通過由桿狀病毒表達載體在昆蟲細胞中表達的方式產生。該疫苗可用于保護仔豬免受PCV-2感染(并因此對抗PMWS)。該疫苗只能防治一種病，且其亞單位抗原經乳化后保存時間短。
[0006]中國專利CN 101181637A公開了一種用細胞系生產豬瘟活疫苗的方法，該方法通過選擇細胞系作為制苗用細胞，并對制苗用細胞的傳代與培養，然后進行細胞毒種的繁殖及制苗毒液的繁殖，最后進行配苗、分裝及凍干來生產豬瘟活疫苗。該方法種毒制備過程繁瑣，可控性差，批間差異大，生產周期長，只能防治一種疾病。
[0007]因此，目前存在的問題是需要研究開發一種生產工藝簡單，疫苗質量好，可以同時防治豬瘟、豬圓環病毒病兩種傳染病，并能避免多次接種造成免疫應激反應及免疫效果降低的疫苗及其制備方法。
【發明內容】

[0008]本發明所要解決的技術問題是針對現有技術的不足，提供一種抗豬瘟病毒和豬圓環病毒2型感染的二聯疫苗組合物及其制備和應用。該二聯疫苗組合物含有圓環病毒2型抗原和豬瘟病毒抗原，可以同時防治豬瘟、豬圓環病毒病兩種傳染病，與單苗相比，該二聯疫苗組合物并沒有產生免疫干擾現象，疫苗免疫效果沒有下降，采用該二聯疫苗組合物免疫后豬瘟病毒抗原產生的免疫反應加快了，且二聯疫苗組合物中圓環病毒2型疫苗產生的抗體與單苗免疫效果相當。該二聯疫苗組合物的制苗工藝簡單，生產效率高。經動物實驗證明，該疫苗組合物的免疫效果優于單苗免疫效果，具有很大的應用價值。
[0009]為此，本發明提供了一種抗豬瘟病毒和豬圓環病毒2型感染的二聯疫苗組合物，其包含豬瘟病毒抗原和豬圓環病毒2型抗原。
[0010]在本發明的一個實施例中，在所述二聯疫苗組合物中，豬瘟病毒抗原與豬圓環病毒2型抗原的體積比為1: 2。
[0011]根據本發明，所述豬瘟病毒抗原為滅活形式、改良的活的形式或減毒形式的豬瘟病毒抗原中的一種或幾種，并且，所述豬瘟抗原選自豬瘟全病毒、含有豬瘟病毒免疫原性氨基酸序列的嵌合病毒，任何至少含豬瘟病毒免疫原性氨基酸序列的多肽或亞單位成分中一種或幾種；優選所述豬瘟病毒抗原為豬瘟病毒兔化弱毒株全病毒抗原。
[0012]本發明中，所述豬瘟病毒抗原接種豬可誘導、刺激或增強抵抗豬瘟病毒感染的免疫應答。所述二聯疫苗組合物中每劑量或每頭份(2ml)含豬瘟病毒抗原為104_°TCID5Q。
[0013]同樣，所述豬圓環病毒2型抗原為滅活形式、改良的活的形式或減毒形式的豬圓環病毒2型抗原中的一種或幾種，并且，所述豬圓環病毒2型抗原選自豬圓環病毒2型全病毒抗原，含有豬圓環病毒2型免疫原性氨基酸序列的嵌合病毒，任何至少含有豬圓環病毒2型免疫原性氨基酸序列的多肽或亞單位成分中一種或幾種。優選所述豬圓環病毒2型抗原為滅活的PCV2全病毒抗原和/或含有PCV2免疫原性氨基酸序列的多肽或亞單位成份。
[0014]本發明中，所述抗原接種豬可誘導、刺激或增強抵抗PCV2感染的免疫應答。所述二聯疫苗組合物中每劑量或每頭份(2ml)含PCV2全病毒抗原滅活前病毒含量至少為IO5-5TCID50 0優選所述二聯疫苗組合物中每劑量或每頭份(2ml)含PCV2全病毒抗原滅活前病毒含量為4.5 X IO5 tlTCID5ci~106_°TCID5(i。進一步優選所述二聯疫苗組合物中每劑量或每頭份(2ml)含PCV2全病毒抗原滅活前病毒含量為9X 105_°TCID5Q。
[0015]在本發明的一個【具體實施方式】中，所述豬圓環病毒2型抗原為PCV2SH株、PCV2LG株、PCV2DBN-SX07-2的抗原或疫苗和/或PCV2亞單位抗原。優選所述豬圓環病毒2型抗原為PCV2SH株(保藏編號為CGMCC N0.23890，公開于專利文獻CN 101240264A)和/或PCV20RF2 蛋白。
[0016]也就是說，由于PCV2基因組大小為1767bp或1768bp，不同毒株之間核苷酸序列同源性較高，均在90 %以上，因此PCV2SH株(GenBank登錄號為AY686763)、PCV2LG株(GenBank 登錄號為 HM038034)、PCV2DBN_SX07_2 (GenBank 登錄號為 HM641752)的抗原或疫苗均在本發明保護范圍之內。
[0017]所述豬圓環病毒2型0RF2蛋白為序列表`SEQ N0.1的DNA序列編碼的蛋白或序列表SEQ N0.2的氨基酸序列的蛋白或與其同源性在75%以上的氨基酸序列的蛋白。優選所述豬圓環病毒2型0RF2蛋白為與序列表SEQ N01.DNA序列編碼的蛋白或序列表SEQ N02.氨基酸序列的蛋白同源性在80%以上的氨基酸序列的蛋白。進一步優選所述豬圓環病毒2型ORF2蛋白為與序列表SEQ NOl.DNA序列編碼的蛋白或序列表SEQ N02.氨基酸序列的蛋白同源性在90%以上的氨基酸序列的蛋白。
[0018]本發明中，所述二聯疫苗組合物中豬圓環病毒2型0RF2蛋白的含量為0.5~20 μ g/頭份。優選所述二聯疫苗組合物中豬圓環病毒2型0RF2蛋白的含量為5~10 μ g/頭份。
[0019]本發明中，所述豬圓環病毒2型抗原還包含至少一種豬圓環病毒2型滅活疫苗和基因工程亞單位疫苗。所述PCV2抗原還可以選自，例如，梅里亞公司(Merial)的Circovac-PCV2 ;輝瑞公司(Pfizer)的Suvaxyn_PCV2 ;哈爾濱維科生物技術開發公司的豬圓環病毒2型滅活疫苗(LG株)；福州大北農生物技術有限公司的豬圓環病毒2型滅活疫苗(DBN-SX07株)和基因工程亞單位疫苗，如勃林格殷格翰公司(Boehringer-1ngelheim)的豬圓環病毒疫苗
【權利要求】
1.一種抗豬瘟病毒和豬圓環病毒2型感染的二聯疫苗組合物，其包含豬瘟病毒抗原和豬圓環病毒2型抗原。
2.根據權利要求1所述的二聯疫苗組合物，其特征在于: 所述豬瘟病毒抗原為滅活形式、改良的活的形式或減毒形式的豬瘟病毒抗原中的一種或幾種，并且，所述豬瘟抗原選自豬瘟全病毒、含有豬瘟病毒免疫原性氨基酸序列的嵌合病毒，任何至少含豬瘟病毒免疫原性氨基酸序列的多肽或亞單位成分中一種或幾種； 所述豬圓環病毒2型抗原為滅活形式、改良的活的形式或減毒形式的豬圓環病毒2型抗原中的一種或幾種，并且，所述豬圓環病毒2型抗原選自豬圓環病毒2型全病毒抗原,含有豬圓環病毒2型免疫原性氨基酸序列的嵌合病毒，任何至少含有豬圓環病毒2型免疫原性氨基酸序列的多肽或亞單位成分中一種或幾種。
3.根據權利要求2所述的二聯疫苗組合物，其特征在于: 所述二聯疫苗組合物中每劑量或每頭份含豬瘟病毒抗原為IO4 tlTCID5ci ； 所述二聯疫苗組合物中每劑量或每頭份含PCV2全病毒抗原滅活前病毒含量至少為105.5TCID50 ； 所述豬痕病毒抗原為豬痕病毒兔化弱毒株全病毒抗原； 所述豬圓環病毒2型抗原為滅活的PCV2全病毒抗原和/或含有PCV2免疫原性氨基酸序列的多肽或亞單位成份。
4.根據權利要求3所述的二聯疫苗組合物，其特征在于: 所述二聯疫苗組合物中每劑量或每頭份含PCV2全病毒抗原滅活前病毒含量為4.5 X 1O5.0TCID50 ~106.ciTCID50 ； 所述豬圓環病毒2型抗原為PCV2SH株、PCV2LG株、PCV2DBN-SX07-2的抗原或疫苗和/或PCV2亞單位抗原。
5.根據權利要求4所述的二聯疫苗組合物，其特征在于: 所述二聯疫苗組合物中每劑量或每頭份含PCV2全病毒抗原滅活前病毒含量為9X 1O5 0TCID50 ； 所述豬圓環病毒2型抗原為PCV2SH株和/或PCV20RF2蛋白。
6.根據權利要求5所述的二聯疫苗組合物，其特征在于: 所述豬圓環病毒2型ORF2蛋白為序列表SEQ N0.1的DNA序列編碼的蛋白或序列表SEQ N0.2的氨基酸序列的蛋白或與其同源性在75%以上的氨基酸序列的蛋白； 所述二聯疫苗組合物中豬圓環病毒2型ORF2蛋白的含量為0.5~20 μ g/頭份。
7.根據權利要求6所述的二聯疫苗組合物，其特征在于: 所述豬圓環病毒2型ORF2蛋白為與序列表SEQ NOl.DNA序列編碼的蛋白或序列表SEQN02.氨基酸序列的蛋白同源性在80%以上的氨基酸序列的蛋白； 所述二聯疫苗組合物中豬圓環病毒2型0RF2蛋白的含量為5~10 μ g/頭份。
8.根據權利要求7所述的二聯疫苗組合物，其特征在于:所述豬圓環病毒2型0RF2蛋白為與序列表SEQ N01.DNA序列編碼的蛋白或序列表SEQ N02.氨基酸序列的蛋白同源性在90%以上的氨基酸序列的蛋白。
9.一種根據權利要求1~8中任意一項所述二聯疫苗組合物的制備方法，包括配苗步驟:將豬瘟病毒抗原與豬圓環病毒2型抗原混合后進行凍干制得二聯疫苗組合物。
10.一種根據權利要求1~8中任意一項所述二聯疫苗組合物在制備抗豬瘟病毒和豬圓環病毒2型感染的二聯疫苗組合物試劑盒中的應用，其包括以豬圓環病毒2型全病毒抗原滅活苗為稀釋液，稀釋豬瘟病毒疫苗獲得抗豬瘟病毒和豬圓環病毒2型感染的二聯疫苗組合物的方式來制備抗 豬瘟病毒和豬圓環病毒2型感染的二聯疫苗組合物試劑盒。
【文檔編號】A61P31/14GK103623403SQ201210307562
【公開日】2014年3月12日 申請日期:2012年8月27日 優先權日:2012年8月27日
【發明者】張許科, 孫進忠, 白朝勇 申請人:普萊柯生物工程股份有限公司