專利名稱：紫景天在制備治療腫瘤藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及ー種中藥材新用途，即紫景天在制備治療腫瘤藥物中的應用。
背景技術：
在現有技術中，紫景天為景天科(Crassulaceae)植物紫八寶Hylotelephiurn週 仏.ノ的全草,又名紫八寶,景天科。多年生草本。塊根多數,胡蘿卜狀。莖
直立，單生或少數聚生，高16 70cm。葉互生,卵狀長圓形至長圓形,長2 7cm,寬O. 5 3cm,先端急尖，鈍，上部葉無柄，基部圓，下部葉基部楔形，邊緣有不整齊牙齒。花序傘房狀，花密生，花梗長4mm ;萼片5，卵狀披針形，長2mm，先端尖，基部合生；花瓣5，紫紅色，長圓狀披針形，長5 6mm，急尖，自中部向外反折；雄蕊10，與花瓣稍同長；鱗片5，線狀匙形，長Imm,先端稍寬,有缺刻；心皮5,直立,橢圓狀披針形,長6mm,兩端漸狹,花柱短。瞢莢果。種 子小，卵狀橢圓形，長1mm，褐色花期7 8月，果期9月。生于海拔420 1550m的山坡草原上或林下陰濕山溝邊。分布于新疆阿勒泰、遼寧、吉林、黑龍江。紫景天在《中國長白山藥用植物彩色圖志》有記載(作者嚴仲鎧李萬林，出版社人民衛生出版社，出版時間1997年10月)。《特種經濟動植物》2008年第8期刊登了王海娟、李海洋文章“紫景天的栽培利
田，，
川 ο中國發明專利說明書公布了〈紫景天總黃酮及其提取方法和藥物用途〉發明專利申請，申請號CN201010621895. 2 申請日2010.12.31申請公布號CN102068482A申請公布日2011.05.25。紫景天總黃酮在制備治療或預防復發性ロ瘡、口腔潰瘍和牙周炎的藥物中的應用。具有清熱解毒，收斂止血，消腫生肌的功能。用于治療或預防復發性ロ瘡、口腔潰瘍、牙周炎及相關口腔疾病。上述文獻均沒有報導紫景天在制備治療腫瘤藥物中的應用。

發明內容
本發明的目的是針對上述不足而提供一種紫景天新的醫藥用途，即紫景天在制備治療腫瘤藥物中的應用。本發明的技術解決方案是紫景天在制備治療腫瘤藥物中的應用。所述的腫瘤是指肺癌。紫景天制備方法步驟如下取紫景天的干燥根及根莖切段，分別加8、8、6倍量的水煎煮三次，每次lh，合并煎液、濃縮制得。以紫景天為原料，采用常規提取方法提取有效部位即可。最后做成的藥物劑型可以是制藥行業常用劑型。可以加上常用的藥物載體(如賦形劑或輔料)，如可以制成片劑、膠囊劑(軟膠囊劑)、顆粒劑、ロ服液、散劑、丸劑、液體制劑或其它常規制劑，不限于此。本發明的優點是本項目通過采用系統預試法(試管反應與薄層層析)與LC-MS聯用技術，對紫景天進行化學成分分析，確定了其主要化學成分(多糖類、黃酮類、強心苷、香豆素類、蒽醌類等化學成分)或化合物結構類型。并完成了紫景天抗腫瘤活性部位的確定。在前期預試實驗的基礎上，用水醇法提取，提取液減壓回收こ醇至無醇味后，依次用石油醚、こ酸こ酯和正丁醇溶劑萃取，得到相應的有機溶劑萃取物和水溶性部分。在細胞水平上評價了各部位對腫瘤細胞的抑制作用，確定了紫景天抗腫瘤的活性部位。并進一歩對紫景天水煎液進行了體內抗腫瘤實驗，表明紫景天具有一定的抗腫瘤活性。對紫景天日后成品藥物開發利用、臨床提供了科學依據。下面將結合實驗例對本發明的內容作進ー步詳細描述確認。


圖I是Fr-I對Lewis肺癌細胞細胞毒性線性關系。圖2是Fr-3對Lewis肺癌細胞細胞毒性實驗線性關系圖。
圖3是Fr-4對Lewis肺癌細胞細胞毒性實驗線性關系圖。圖4是Fr-5對Lewis肺癌細胞細胞毒性實驗線性關系圖。
具體實施例方式實驗例Iー紫景天抗腫瘤有效部位篩選 § I. I樣品制備
制得紫景天5個部位，分別標號為Fr-1、Fr-2、Fr-3, Fr-4, Fr-5,制備過程如下
Fr-I代表紫景天水煎液，取紫景天的干燥根及根莖O. 5kg (切成1cm，備用)，分別加8、8、6倍量的水煎煮三次，每次lh，合并煎液濃縮至IOOOml制得。Fr-2代表紫景天的醇提液。取紫景天的干燥根及根莖O. 5kg (切成1cm，備用)，加95%的こ醇分別回流提取lh、lh，合并回流液制得。Fr-3、Fr_4、Fr_5分別代表紫景天提取液減壓回收こ醇至無醇味后，依次用石油醚、こ酸こ酯和正丁醇溶劑萃取，萃取四次，每次萃取試劑用量為原溶劑量的一半。§1.2 細胞株
Lewis肺癌細胞，由中國醫學科學院藥物研究所腫瘤中心提供，置于37°C、飽和濕度、5% CO2培養箱中用DMEM培養。§ I. 3試藥及器材
10%胎牛血清HyClone公司；
低溫冰箱美國REVCO公司；
低溫高速離心機=Kendro儀器公司；
磁力攪拌器=KIKA出品；
冷凍干燥機北京博醫康實驗儀器有限公司；
離心機I-B SIGMA公司；
回旋振蕩器HY-5 :國華公司；
CO2 培養箱SANYO ；
超凈工作臺哈爾濱市東聯公司；
MH-I型微量振蕩器江蘇海門市其林貝爾儀器制造有限公司；
酶標儀久宇鑫泰生物技術有限公司；
微量移液器=Eppendorf公司。
§ I. 4實驗方法(MTT法)
1.4. I MTT溶液的配制
稱取O. 5 gMTT，溶于100 mL的磷酸緩沖液(PBS)中，用O. 22 μ m微孔濾膜除菌，4°C避
光保存。I. 4. 2 MTT 操作步驟
I、接種細胞用含10%胎小牛血清的RPMI培養液配成單個細胞懸液，以每孔5X IO4個細胞接種到96孔板，每孔體積100 μ L02、加藥用適宜的溶劑溶解藥物(水溶性的藥物要濾過除菌，脂溶性的藥物即用DMSO溶解的藥物，DMSO終濃度要低于O. 1%，否則會對細胞產生毒性作用)稀釋成不同的濃度加入到板孔內，每個濃度設3個孔，另設加細胞和培養液不加藥的3孔為對照組。3、培養細胞將培養板放入CO2孵箱，37°C、飽和濕度、5% CO2條件下培養3天。4、呈色培養3天后，每孔加MTT溶液15 μ L，繼續孵育4 h，終止培養，小心吸棄孔內培養上清液。每孔加100 yLDMSO，振蕩10 min，使結晶物充分溶解。5、比色選擇適宜的波長(參考文獻選擇570nm)，在酶標儀上測定各孔A值，記錄結果。6、細胞增殖抑制率=(A對照-A藥物)/A對照X 100%。7、IC5tl值的計算，采用下述表格中的數據，在Excel中分別以濃度和抑制率為橫縱坐標做散點圖，導出回歸方程，設定I (抑制率)等于50時的X值即為IC5tl值，単位mg/mL。§ I. 5實驗結果
表I Fr-I對Lewis肺癌細胞毒性實驗結果
權利要求
1.紫景天在制備治療腫瘤藥物中的應用。
2.按照權利要求I所述的應用，其特征在于所述的腫瘤是指肺癌。
3.紫景天制備方法，其特征在于步驟如下取紫景天的干燥根及根莖切段，分別加8、8、6倍量的水煎煮三次，每次lh，合并煎液、濃縮制得。
全文摘要
本發明涉及一種中藥材新用途，即紫景天在制備治療腫瘤藥物中的應用。本項目通過采用系統預試法與LC-MS聯用技術，對紫景天進行化學成分分析，確定了其主要化學成分或化合物結構類型。并完成了紫景天抗腫瘤活性部位的確定。在前期預試實驗的基礎上，用水醇法提取，提取液減壓回收乙醇至無醇味后,依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇溶劑萃取，得到相應的有機溶劑萃取物和水溶性部分。在細胞水平上評價了各部位對腫瘤細胞的抑制作用，確定了紫景天抗腫瘤的活性部位。并進一步對紫景天水煎液進行了體內抗腫瘤實驗，表明紫景天具有一定的抗腫瘤活性。對紫景天日后成品藥物開發利用、臨床提供了科學依據。
文檔編號A61P35/00GK102824398SQ20121035236
公開日2012年12月19日 申請日期2012年9月21日 優先權日2012年9月21日
發明者張海豐, 滕坤, 孫健, 董艷輝, 孫仁爽, 車環宇, 姜瑞平 申請人:通化師范學院