專利名稱：黃連提取物與納米銀抑菌組合物的制作方法
技術領域：
本發明屬于中藥領域，尤其涉及一種中藥抑菌組合物。
背景技術：
黃連屬多年生草本，根莖黃色，常分枝，密生多數須根，為毛茛科的黃連，三角葉黃連或者云蓮的干燥根莖。其主要分布于四川、貴州、湖南、湖北、陜西南部，具有清熱燥濕，瀉火解毒的功效。鹽酸小檗堿(黃連素)是其主要的有效成分。現代藥理實驗研究表明黃連具有抗病原微生物作用，同時對金黃色葡萄球菌、大腸埃氏菌、溶血性鏈球菌、肺炎球菌、銅綠假單胞菌、腦膜炎雙球菌、痢疾桿菌、炭疽桿菌、流感病毒、乙肝病毒等都具有抑制作用。除此之外，黃連還有降血糖、抗腫瘤、抗腹瀉、利膽、抗心律失常、抗炎以及免疫調節等作用。黃連因其具有較高的藥用和保健價值，廣泛引起了人們關注。
中藥制劑濃縮液制成口服液或抑菌組合物、涂覆劑等一次用劑量大，且長期使用影響人體健康。

發明內容
針對黃連抑菌組合物一次用量大和長期使用影響人體健康問題，本發明人經過大量實驗，發現納米銀能有效增強黃連提取液抑菌性能，減少黃連抑菌劑的用量，且采用兩種低劑量的抑菌組合物，更加的安全。本發明的目的在于提供一種黃連納米銀抑菌組合物，減少黃連抑菌劑一次的用劑量和降低藥品對人體的毒性。本發明提供如下技術方案
一種抑菌組合物，含有黃連提取液、水溶性納米銀；
黃連提取液制備包括如下步驟取干藥材黃連，加水量為黃連重量的9倍，經95 °C水浴提取4 h，再經過減壓濃縮得到提取液；所得提取液經O. 22 μ m濾膜過濾。所得提取液經高效液相色譜法對黃連素進行標準定量。抑制大腸桿菌0157:H7時，黃連提取液、水溶性納米銀的體積比為26. 6 30: I。抑制藤黃微球菌時，黃連提取液、水溶性納米銀的體積比為廣1.2:1。在算體積時提取液中黃連素的含量為28 mg/mL，水溶性納米銀濃度為10 mg/mL。水溶性納米銀顆粒粒徑為3 10 nm,納米銀外表包覆兩性聚合物。水溶性納米銀粒徑為3 10 nm,外表為羧基，依照下列方法制備取22. 8 g十四烷酸溶于140 mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氫氧化鈉析出沉淀，過濾，將沉淀加入到100 mL濃度為10 mol/L水溶性的硝酸銀溶液中得到十四烷酸銀；稱取6. 7 g濃度為20 mmoL/L十四燒酸銀于100 mL燒杯中，向燒杯中加入58 mL濃度為40mmoL/L的三乙胺，80°C下電磁攪拌2 h，白色的十四烷酸銀粉末逐漸變成棕色，不溶的前體消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽濾，用丙酮洗滌沉淀數次后，真空干燥，即得到納米銀粒子粉末。依照本方法制備的水溶性納米銀顆粒與黃連提取液具有良好的協同抗菌作用。本發明還涉及上述抑菌組合物在抑制大腸桿菌0157:H7中的應用。
本發明還涉及上述抑菌組合物在抑制藤黃微球菌中的應用。本發明的有益效果是本發明水溶性納米銀的應用能有效增強黃連抑菌性能，降低黃連抑菌劑的用量，更令人意想不到的是兩種藥物的合用對抑制大腸桿菌0157:H7和藤黃微球菌起到協同作用，同時本抑菌組合物采用兩種低劑量的抑菌物質，相對于使用高劑量的黃連或者水溶性納米銀，更加的安全，可以作為安全可靠地外用涂覆劑等。


圖I黃連提取液與水溶性納米銀之比為30:1的協同抑菌。圖Ia 2 μ L納米銀對大腸桿菌0157:H7的抑制結果，圖Ib 60 μ L黃連提取液 對大腸桿菌0157:Η7的抑制結果，圖Ic 30 μ L黃連提取液與I μ L納米銀對大腸桿菌0157 :Η7的抑制結果。圖2黃連提取液與水溶性納米銀之比為26. 6:1的協同抑菌
圖2a表示的是I. 5 μ L納米銀對大腸桿菌0157:Η7的抑菌結果，圖2c表示的是40 μ L黃連提取液對大腸桿菌0157:H7的抑菌結果，圖2c表示的是O. 75 μ L納米銀、20 μ L黃連提取液混合物對大腸桿菌0157 :Η7的協同抑菌結果。圖3黃連提取液與水溶性納米銀之比為I的協同抑菌
圖3a表示的是16 μ L納米銀對藤黃微球菌的抑菌結果，圖3b表示的是16 yL黃連提取液對藤黃微球菌的抑菌結果，圖3c表示的是8 μ L納米銀、8 μ L黃連提取液對藤黃微球菌的協同抑菌結果。圖4黃連提取液與水溶性納米銀之比為5:8的協同抑菌
圖4a表示的是16 μ L納米銀對藤黃微球菌的抑菌結果，圖4b表示的是10 μ L黃連提取液對藤黃微球菌的抑菌結果，圖4c表示的是8 μ L納米銀與5 μ L黃連提取液對藤黃微球菌的協同抑菌結果。
具體實施例方式實施例I
I、黃連提取液的制備過程稱取干藥材黃連50 g，加水量為450 mL，在95 °C下提取4h，再經過真空旋轉濃縮儀濃縮得到提取液，經O. 22 μ m濾膜過濾后，最后再用高效液相色譜法測得提取液中黃連素的含量為28 mg/mL。2、水溶性銀納米顆粒制備
取22. 8 g十四烷酸溶于140 mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氫氧化鈉析出沉淀，過濾，將沉淀加入到100 mL濃度為10 mol/L水溶性的硝酸銀溶液中得到十四烷酸銀；稱取6. 7 g濃度為20 mmoL/L十四烷酸銀于100 mL燒杯中，向燒杯中加入58 mL濃度為40 mmoL/L的三乙胺，80°C下電磁攪拌2 h，白色的十四烷酸銀粉末逐漸變成棕色，不溶的前體消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽濾，用丙酮洗滌沉淀數次后，真空干燥，即得到納米銀粒子粉末。3、黃連提取液與水溶性納米銀協同抑菌作用。a細菌的培養
挑取LB瓊脂培養基上的大腸桿菌0157:H7的單菌落于10 mL LB肉湯培養基中，置于37 °C培養箱中培養16 h，再按I %的接種量接種于5 mL的LB肉湯培養基中，37 °C培養4h后。取I mL上述菌液用O. 1%的蛋白胨水連續稀釋三個梯度，最終的菌液大約為IO6 CFU/
Π Τ, ηb水溶性納米銀與黃連提取液在抑菌性能上的協同作用
分別取I mL上述已稀釋好的菌液于I. 5 mL滅菌的離心管中，向I號離心管中分別加Λ 60 μ L黃連提取液(黃連素的含量為28 mg/mL,下同)，向2號離心管中加入2 μ L濃度為10 mg/mL的水溶性納米銀，向3號離心管中加入30 μ L黃連提取液和I μ L濃度為10mg/mL水溶性納米銀，不加入任何上述抑菌劑。為保證每管液體最終體積相等，差量用O. 1%的蛋白胨水補齊。置于37 °C培養2 h。每組實驗平行三次。c平板計數
將實驗組待測液用PBS連續稀釋兩個梯度，10°、10'10_2各取出200 μ L分別均勻涂布在LB固體平板上；空白組連續稀釋四個梯度，從10_2、10_3、10_4三個梯度分別均涂布
在
LB固體平板上。平板吹干后，37°C倒置培養12 h，長出菌落后計數，以30-300個菌落形成單位(CFU)為有效的計數范圍。每毫升原菌液活菌數=平板計數*稀釋倍數*5實驗結果如下
權利要求
1.一種黃連提取物與納米銀抑菌組合物，其特征在于含有黃連提取液、水溶性納米銀；所述黃連提取液制備包括如下步驟加水量為黃連重量的9倍，提取時間為4 h，再經過減壓濃縮得到提取液；所述水溶性納米銀依照下列方法制備取22. 8 g十四烷酸溶于140mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氫氧化鈉析出沉淀，過濾，將沉淀加入到100 mL濃度為10 mol/L水溶性的硝酸銀溶液中得到十四烷酸銀；稱取6. 7 g濃度為20 mmoL/L十四燒酸銀于100 mL燒杯中，向燒杯中加入58 mL濃度為40 mmoL/L的三乙胺，80°C下電磁攪拌2 h，白色的十四烷酸銀粉末逐漸變成棕色，不溶的前體消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽濾，用丙酮洗滌沉淀數次后，真空干燥，即得到納米銀粒子粉末。
2.如權利要求I所述的抑菌組合物，其特征在于抑制大腸桿菌0157:H7時，黃連提取液、水溶性納米銀的體積比為26. 6 30: I。
3.如權利要求I所述的抑菌組合物，其特征在于抑制藤黃微球菌時，黃連提取液、水溶性納米銀的體積比為廣1.2:1。
4.如權利要求I所述的抑菌組合物，其特征在于所得提取液經O.22 μ m濾膜過濾。
5.如權利要求I所述的抑菌組合物，其特征在于所得提取液經高效液相色譜法對黃連素進行標準定量。
6.如權利要求f5任一所述抑菌組合物在抑制大腸桿菌0157 :H7中的應用。
7.如權利要求f5任一所述抑菌組合物在抑制藤黃微球菌中的應用。
全文摘要
本發明公開了黃連提取物與納米銀抑菌組合物，屬于中藥領域。抑菌組合物中黃連提取液與水溶性納米銀兩種藥物的合用對抑制大腸桿菌O157:H7、藤黃微球菌起到協同的作用。本發明的一種黃連提取物與納米銀抑菌組合物與現有的技術相比，解決了常規抑菌方法中黃連抑菌劑用量較大的問題，同時采用兩種低劑量的抑菌物質減少了微生物耐藥的發生機率、降低了其對人體的毒性，更加的安全。
文檔編號A61P31/02GK102895341SQ20121036651
公開日2013年1月30日 申請日期2012年9月28日 優先權日2012年9月28日
發明者許恒毅, 楊林, 魏華, 曲鋒, 徐鋒, 萬翠香, 熊勇華, 賴衛華 申請人:南昌大學