專利名稱：一種抗腫瘤的植物提取組合物及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于生物制藥技術領域，具體涉及一種抗腫瘤的植物提取組合物及其制備方法和應用。
背景技術：
腫瘤是危害人類健康最嚴重的一類常見病、多發病，最常見的治療方法是手術、化療和放療，而化療因毒副作用大，影響患者生活質量。近年來，中醫藥治療腫瘤稱為獨特療法，中醫認為瘀血阻滯、痰濕凝聚、熱毒內蘊、正氣虧虛是導致腫瘤的病機，根據腫瘤的病因病機、發生發展規律，中藥抗癌治療主要有扶正固本、清熱解毒、活血化瘀、軟堅散結四個基本法則。中藥治療腫瘤的機制主要是對腫瘤細胞的直接抑制和殺滅作用、抑制腫瘤血管生成、抑制端粒酶活性、誘導細胞分化、調節細胞信號傳導、抗微管作用、免疫增強作用、逆轉 多藥耐藥作用等。中藥應用歷史悠久、價格低廉、藥源廣泛、療效好、低毒性等優勢，在腫瘤治療中的前景也將越來越廣。小百部為百合科天門冬屬植物羊齒天門冬filicimus Buch. -Ham. exD. Don的塊根，味甘、苦，性平，具有潤肺止咳、殺蟲止癢的功效，用于治療肺癆久咳、痰中帶血、疥癬瘙癢等癥?，F代藥理研究表明，小百部具有較強的抗腫瘤活性，超過同屬抗癌藥用植物蘆筍，是一種具有良好開發前景的天然藥物。小百部的小百部苷甲、小百部苷B等6個皂苷類化合物對人肺腺癌A-549和乳腺癌MCF-7腫瘤細胞株均有不同程度的生長抑制活性。黃鵪菜又名野芥菜，為菊科黃鵪菜屬植物黃鵪菜的全草，始載于《食物本草》，主要分布在我國、日本、朝鮮、蒙古及俄羅斯。味甘、微苦，性涼，具有清熱解毒、利尿消腫、止痛的功效，用于治療感冒、咽痛、乳腺炎、結膜炎、瘡癤、尿路感染、白帶、風濕性關節炎，是民間常用中草藥，應用廣泛。黃鵪菜中主要含有黃酮類化合物，近年來發現，黃鵪菜屬植物的水提液和醇提液具有體外抗癌和抗病毒的效果，同時還具有清除羥基自由基和脂質自由基的作用。半枝蓮為唇形科黃岑屬植物半枝蓮Scutellaria barbata D. Don (S. rivularisWall.的全草，又名狹葉韓信草、并頭草、牙刷草等，最早見于《外科正宗》，味辛、苦，性寒，具有清熱解毒、止血、消腫的功效，主治熱毒癰腫，咽喉疼痛，肺癰腸癰，瘰疬，蛇毒咬傷，跌打損傷，各種出血，水腫，腹水及癌癥。現代臨床應用治療癌癥、肝炎、感染等。近年來的研究表明，半枝蓮主要通過抗突變、抑制腫瘤細胞的增殖、誘導腫瘤細胞的凋亡、增強機體的免疫力、抗氧化以及截斷腫瘤細胞的營養供給等而發揮抗腫瘤作用。半枝蓮的主要生理活性物質為黃酮類化合物，半枝蓮全草含多種黃酮，其中以木犀草素和芹菜素抗腫瘤活性最為明顯，有廣泛的應用前景。半枝蓮水提液有增強癌癥患者的免疫功能，與化療同用有增效作用，并且可以防止因放療引起的白細胞減少。黃苗是豆科植物蒙古黃I Astragalus membranaceus (Fisch. ) Bge. var.mongholicus (Bge. )Hsiao Astragalus membranaceus (Fisch. )Bge.的干燥根，具有補氣升陽、益衛固表、利水消腫等功效，是扶正固本藥，能提高化療療效，減輕毒副反應，促進機體對癌細胞的免疫作用，黃芪含有多種有效成分，如多糖、蛋白質、生物堿、氨基酸、苷類、黃酮類等。其中多糖的免疫活性尤為突出，黃芪多糖能促進巨噬細胞NO合成，并能顯著增強小鼠腹腔巨噬細胞對黑色素瘤細胞的殺傷作用，可明顯增強機體非特異性免疫功能，調節細胞免疫和體液免疫趨于正常?？梢婞S芪有明顯的抗腫瘤作用，其機制可能是通過機體免疫功能實現的。目前，利用小百部提取物、黃鵪菜提取物、半枝蓮提取物和黃芪提取物的中藥組合物相互作用、配伍組方，制備用于抗腫瘤方面的藥物，尚未見報道。

發明內容
為滿足臨床需要，擴大用藥品種，更好地治療癌癥，提供一種抗腫瘤的植物提取組合物及其制備方法和應用。所述的一種抗腫瘤的植物提取組合物，其特征在于它由下列重量百分比的原料 藥制成小百部提取物20-45%、黃鵪菜提取物15-35%、半枝蓮提取物20-40%、黃芪提取物5-20%，所述的小百部提取物由下列方法制備得到取小百部粗粉，加0. 3-0. 5%淀粉酶或纖維素酶酶解2-3天，加6-10倍量55%乙醇溫浸I天，過濾得提取液，濃縮所得浸膏加水分散，用水飽和正丁醇萃取3-4次，萃取液加丙酮沉淀，沉淀物干燥得小百部提取物；所述的黃鵪菜提取物由下列方法制備得到將黃鵪菜粉碎，加5-8倍量熱水超聲提取2-3次，每次提取1-2小時，合并提取液過AB-8大孔吸附樹脂柱層析，用0-50%乙醇梯度洗脫，50%乙醇洗脫液加0. 3-0. 5%藥用活性炭加熱回流，趁熱過濾，濾液濃縮，噴霧干燥得黃鵪菜提取物；所述的半枝蓮提取物由下列方法制備得到將半枝蓮藥材粉碎，平均置于5個串聯的提取裝置中，加入15-20倍量75%食用乙醇作為提取溶媒采用連續逆流法提取2次，每次提取3小時，合并提取液，回收乙醇，離心取上清液在卷式膜分離設備中依次進行微濾、超濾，操作壓力為0. 2MPa，所得透過液上DlOl大孔吸附樹脂柱，先以水洗脫雜質，再用60%食用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮、噴霧干燥得半枝蓮提取物；所述的黃芪提取物由下列方法制備得到將黃芪粉末加5-10倍量水微波輔助提取2次，提取溫度為50-55°C，過濾合并提取液，過HPD100大孔吸附樹脂柱，收集下注液，先用水洗至無糖反應，再用60%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液濃縮至無醇，加等體積正丁醇萃取，萃取液濃縮、干燥得黃芪皂苷，將下注液和水洗液合并，濃縮，加乙醇沉淀，濾出沉淀，噴霧干燥得黃芪多糖，合并黃芪皂苷和黃芪多糖得黃芪提取物。所述的組合物，其中各原料藥的用量為小百部提取物35%、黃鵪菜提取物20%、半枝蓮提取物35%、黃芪提取物10%。所述的一種抗腫瘤的植物提取組合物的制備方法，其特征在于該藥物組合物和藥學上可接受的載體制備成任何一種常用的口服制劑，所述的口服制劑是膠囊劑、顆粒劑、口服液、丸劑或片劑。本發明植物提取組合物可采用現有制藥領域中的常規方法生產，需要的時候可以添加各種藥學上可接受的載體。所述的載體包括藥學領域常規的稀釋劑、賦形劑、填充劑、黏合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑等。本發明根據中醫藥理論，主要通過清熱解毒和增強人體自身的免疫能力從而達到抗腫瘤的效果，無毒副作用。其腫瘤抑制率為74. 26% (P < 0. 01)，抑制率與現有抗癌藥物環磷酰胺相當，但毒性明顯低于環磷酰胺。本發明采用的組方配伍合理，原料均來自天然植物，同時本發明提供的中藥組合物的制備方法，可操作性強，尤其是根據各味中藥有效成分化學性質涉及提取工藝，所得提取物有效成分含量高，具有藥效高、臨床用量少等優點，且工藝穩定，適合工業大生產。
具體實施例方式 以下通過實施例和實驗例來進一步說明本發明。實施例I :
I、組方小百部提取物35kg、黃鵪菜提取物20kg、半枝蓮提取物35kg、黃芪提取物IOkg02、制法
(1)小百部提取物取小百部粗粉，加0.5%淀粉酶酶解2天，加10倍量55%乙醇溫浸I天，過濾得提取液，濃縮所得浸膏加水分散，用水飽和正丁醇萃取4次，萃取液加丙酮沉淀，沉淀物真空干燥得小百部提取物，備用；
(2)黃鵪菜提取物將黃鵪菜粉碎，加6倍量熱水超聲提取3次，每次提取I.5小時，合并提取液過AB-8大孔吸附樹脂柱層析，用0-50%乙醇梯度洗脫，50%乙醇洗脫液加0. 5%藥用活性炭加熱回流，趁熱過濾，濾液濃縮，噴霧干燥得黃鵪菜提取物，備用；
(3)半枝蓮提取物將半枝蓮藥材粉碎，平均置于5個串聯的提取裝置中，加入15倍量75%食用乙醇作為提取溶媒采用連續逆流法提取2次，每次提取3小時，合并提取液，回收乙醇，離心取上清液在卷式膜分離設備中依次進行微濾、超濾，操作壓力為0. 2MPa，所得透過液上DlOl大孔吸附樹脂柱，先以水洗脫雜質，再用60%食用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮、噴霧干燥得半枝蓮提取物，備用；
(4)黃芪提取物將黃芪粉末加10倍量水微波輔助提取2次，提取溫度為55°C，過濾合并提取液，過HPD100大孔吸附樹脂柱，收集下注液，先用水洗至無糖反應，再用60%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液濃縮至無醇，加等體積正丁醇萃取，萃取液濃縮、干燥得黃芪皂苷，將下注液和水洗液合并，濃縮，加乙醇沉淀，濾出沉淀，噴霧干燥得黃芪多糖，合并黃芪皂苷和黃芪多糖得黃芪提取物，備用；
(5)合并步驟(I)得到的小百部提取物、步驟(2)得到的黃鵪菜提取物、步驟(3)得到的半枝蓮提取物和步驟(4)得到的黃芪提取物，粉碎成細粉，加入硬脂酸鎂，混合均勻，灌裝膠囊。實施例2:
I、組方小百部提取物30kg、黃鵪菜提取物15kg、半枝蓮提取物40kg、黃芪提取物15kg。2、制法
(1)小百部提取物取小百部粗粉，加0.5%纖維素酶酶解2天，加8倍量55%乙醇溫浸I天，過濾得提取液，濃縮所得浸膏加水分散，用水飽和正丁醇萃取3次，萃取液加丙酮沉淀，沉淀物真空干燥得小百部提取物，備用；
(2)黃鵪菜提取物將黃鵪菜粉碎，加5倍量熱水超聲提取3次，每次提取I.0小時，合并提取液過AB-8大孔吸附樹脂柱層析，用0-50%乙醇梯度洗脫，50%乙醇洗脫液加0. 3%藥用活性炭加熱回流，趁熱過濾，濾液濃縮，噴霧干燥得黃鵪菜提取物，備用；
(3)半枝蓮提取物將半枝蓮藥材粉碎，平均置于5個串聯的提取裝置中，加入18倍量75%食用乙醇作為提取溶媒采用連續逆流法提取2次，每次提取3小時，合并提取液，回收乙醇，離心取上清液在卷式膜分離設備中依次進行微濾、超濾，操作壓力為0. 2MPa，所得透過液上DlOl大孔吸附樹脂柱，先以水洗脫雜質，再用60%食用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮、噴霧干燥得半枝蓮提取物，備用；
(4)黃芪提取物將黃芪粉末加5倍量水微波輔助提取2次，提取溫度為55°C，過濾合并提取液，過HPD100大孔吸附樹脂柱，收集下注液，先用水洗至無糖反應，再用60%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液濃縮至無醇，加等體積正丁醇萃取，萃取液濃縮、干燥得黃芪皂苷，將下注液和水洗液合并，濃縮，加乙醇沉淀，濾出沉淀，噴霧干燥得黃芪多糖，合并黃芪皂苷和黃芪多糖得黃芪提取物，備用；
(5)合并步驟(I)得到的小百部提取物、步驟(2)得到的黃鵪菜提取物、步驟(3)得到 的半枝蓮提取物和步驟(4)得到的黃芪提取物，粉碎成細粉，加入醇水溶解，過濾，按常規工藝灌裝成口服液。實施例3:
I、組方小百部提取物45kg、黃鵪菜提取物25kg、半枝蓮提取物25kg、黃芪提取物20kg。2、制法
(1)小百部提取物取小百部粗粉，加0.4%纖維素酶酶解3天，加6倍量55%乙醇溫浸I天，過濾得提取液，濃縮所得浸膏加水分散，用水飽和正丁醇萃取4次，萃取液加丙酮沉淀，沉淀物真空干燥得小百部提取物，備用；
(2)黃鵪菜提取物將黃鵪菜粉碎，加8倍量熱水超聲提取2次，每次提取2.0小時，合并提取液過AB-8大孔吸附樹脂柱層析，用0-50%乙醇梯度洗脫，50%乙醇洗脫液加0. 4%藥用活性炭加熱回流，趁熱過濾，濾液濃縮，噴霧干燥得黃鵪菜提取物，備用；
(3)半枝蓮提取物將半枝蓮藥材粉碎，平均置于5個串聯的提取裝置中，加入20倍量75%食用乙醇作為提取溶媒采用連續逆流法提取2次，每次提取3小時，合并提取液，回收乙醇，離心取上清液在卷式膜分離設備中依次進行微濾、超濾，操作壓力為0. 2MPa，所得透過液上DlOl大孔吸附樹脂柱，先以水洗脫雜質，再用60%食用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮、噴霧干燥得半枝蓮提取物，備用；
(4)黃芪提取物將黃芪粉末加8倍量水微波輔助提取2次，提取溫度為55°C，過濾合并提取液，過HPD100大孔吸附樹脂柱，收集下注液，先用水洗至無糖反應，再用60%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液濃縮至無醇，加等體積正丁醇萃取，萃取液濃縮、干燥得黃芪皂苷，將下注液和水洗液合并，濃縮，加乙醇沉淀，濾出沉淀，噴霧干燥得黃芪多糖，合并黃芪皂苷和黃芪多糖得黃芪提取物，備用；
(5)合并步驟(I)得到的小百部提取物、步驟(2)得到的黃鵪菜提取物、步驟(3)得到的半枝蓮提取物和步驟(4)得到的黃芪提取物，粉碎成細粉，加入適量微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉，混合均勻，濕法制粒，干燥，加滑石粉、硬脂酸鎂，按常規片劑制備工藝制成片劑。實施例4:
I、組方小百部提取物40kg、黃鵪菜提取物35kg、半枝蓮提取物20kg、黃芪提取物5kg。
2、制法
(1)小百部提取物取小百部粗粉，加0.3%淀粉酶酶解3天，加8倍量55%乙醇溫浸I天，過濾得提取液，濃縮所得浸膏加水分散，用水飽和正丁醇萃取3次，萃取液加丙酮沉淀，沉淀物真空干燥得小百部提取物，備用；
(2)黃鵪菜提取物將黃鵪菜粉碎，加7倍量熱水超聲提取2次，每次提取I.0小時，合并提取液過AB-8大孔吸附樹脂柱層析，用0-50%乙醇梯度洗脫，50%乙醇洗脫液加0. 3%藥用活性炭加熱回流，趁熱過濾，濾液濃縮，噴霧干燥得黃鵪菜提取物，備用；
(3)半枝蓮提取物將半枝蓮藥材粉碎，平均置于5個串聯的提取裝置中，加入16倍量75%食用乙醇作為提取溶媒采用連續逆流法提取2次，每次提取3小時，合并提取液，回收乙醇，離心取上清液在卷式膜分離設備中依次進行微濾、超濾，操作壓力為0. 2MPa，所得透過液上DlOl大孔吸附樹脂柱，先以水洗脫雜質，再用60%食用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮、噴霧干燥得半枝蓮提取物，備用； (4)黃芪提取物將黃芪粉末加6倍量水微波輔助提取2次，提取溫度為55°C，過濾合并提取液，過HPD100大孔吸附樹脂柱，收集下注液，先用水洗至無糖反應，再用60%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液濃縮至無醇，加等體積正丁醇萃取，萃取液濃縮、干燥得黃芪皂苷，將下注液和水洗液合并，濃縮，加乙醇沉淀，濾出沉淀，噴霧干燥得黃芪多糖，合并黃芪皂苷和黃芪多糖得黃芪提取物，備用；
(5)合并步驟(I)得到的小百部提取物、步驟(2)得到的黃鵪菜提取物、步驟(3)得到的半枝蓮提取物和步驟(4)得到的黃芪提取物，粉碎成細粉，加入適量微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉，混合均勻，濕法制粒，干燥，加硬脂酸鎂，按常規顆粒劑制備工藝制成顆粒劑。實施例5
I、組方小百部提取物20kg、黃鵪菜提取物30kg、半枝蓮提取物30kg、黃芪提取物20kg。2、植物提取組合物制劑的制備方法同實施例I。實施例6
I、組方小百部提取物40kg、黃鵪菜提取物25kg、半枝蓮提取物25kg、黃芪提取物IOkg02、植物提取組合物制劑的制備方法同實施例I。實施例7 :本發明植物提取組合物急性毒性實驗
1、材料
藥物實施例I植物提取組合物，自制。動物昆明種小鼠12只，雌雄各半，體重20_30g、
2、方法
將小鼠隨機分為3組，禁食12小時后分別灌胃給予0. 2g/ml本發明植物提取組合物膠囊制劑10、20、40ml/kg體重，給藥劑量為2、4、8g/kg，連續觀察2天，未見明顯毒性反應。3、結論
本實驗中未出現死亡，推測本發明植物提取組合物膠囊劑毒性較低，故進行最大耐受
量試驗。實施例8 :本發明植物提取組合物最大耐受試驗1、材料
藥物實施例I植物提取組合物，自制。動物昆明種小鼠24只，雌雄各半，體重20_30g、
2、方法
取健康昆明種小鼠，禁食12小時，按10g/kg給藥劑量和40ml/kg的給藥體積灌胃給予本發明植物提取組合物膠囊制劑。灌胃后密切觀察小鼠的毒性反應和死亡情況，4小時后，改為每天觀察一次，連續觀察14天。灌胃給予本發明植物提取組合物膠囊制劑后，4小時內未見異常變化，14天內，小鼠毛色、飲食、體重、行為活動都無異常變化。觀察結束后，脫頸處死小鼠解剖，觀察心、肝、肺、腎等組織，均未見異常變化。
3、結論小鼠灌胃給予本發明植物組合物膠囊制劑的最大耐受量為10g/kg，根據動物間等效劑量換算(即小鼠與人)，小鼠標準體重是20g，承認標準體重是60kg，換算結果得人臨床用藥劑量是0. 81mg/kg0實施例9 :本發明植物提取組合物抗腫瘤藥效學研究一對S18tl實體瘤生長的影響
I材料與方法
I.I材料
藥物實施例I植物提取組合物，自制；環磷酰胺，0. 2g/瓶，購自江蘇恒瑞醫藥股份有限公司。動物昆明種小鼠，雌性，體重18±2g，由南京中醫藥大學提供。細胞株SarComa 180腹水型瘤株(S180)，由中國科學院上海藥物研究所提供。2、方法
取50只小鼠，均皮下接種S18tl瘤液，次日隨機分成5組，每組10只，分別為空白對照組、陽性對照組、本發明組合物低劑量組、本發明組合物中劑量組、本發明組合物高劑量組，稱體重。腹腔注射給藥，每次依次，連續10天，停藥次日稱體重，初四動物，剝離皮下瘤塊，稱瘤重，并計算抑瘤率。3、結果
本發明植物提取組合物對小鼠S18tl皮下荷瘤有明顯的抑制作用，抑瘤率為68. 32-74. 26%,結果見表 I。抑瘤率(％) = (I-治療組平均瘤重/空白對照組平均瘤重)X%
表I 本發明植物提取組合物對S18tl皮下荷瘤小鼠的抑瘤作用(n=10，X 土S) ____
組別I給藥劑量(mg/kg)I瘤重(g)I抑瘤率(％)
空白對照組—_2. 02±0. 21—
陽性對照組30_0. 85±0. 1757.92
本發明組合物低劑量組1000_0. 64±0. 1468.32**
本發明組合物中劑量組20000. 58±0. 2371.29**
本發明組合物高劑量組|4000Id. 52±0. 25卜4. 26**
注與陽性對照組相比，*P < 0. 05，#P < 0. 01。
權利要求
1.一種抗腫瘤的植物提取組合物及其制備方法和應用，其特征在于它由下列重量百分比的原料藥制成小百部提取物20-45%、黃鵪菜提取物15-35%、半枝蓮提取物20_40%、黃芪提取物5-20%，所述的小百部提取物由下列方法制備得到取小百部粗粉，加O. 3-0. 5%淀粉酶或纖維素酶酶解2-3天，加6-10倍量55%乙醇溫浸I天，過濾得提取液，濃縮所得浸膏加水分散，用水飽和正丁醇萃取3-4次，萃取液加丙酮沉淀，沉淀物干燥得小百部提取物；所述的黃鵪菜提取物由下列方法制備得到將黃鵪菜粉碎，加5-8倍量熱水超聲提取2-3次，每次提取1-2小時，合并提取液過AB-8大孔吸附樹脂柱層析，用0-50%乙醇梯度洗脫，50%乙醇洗脫液加O. 3-0. 5%藥用活性炭加熱回流，趁熱過濾，濾液濃縮，噴霧干燥得黃鵪菜提取物；所述的半枝蓮提取物由下列方法制備得到將半枝蓮藥材粉碎，平均置于5個串聯的提取裝置中，加入15-20倍量75%食用乙醇作為提取溶媒采用連續逆流法提取2次，每次提取3小時，合并提取液，回收乙醇，離心取上清液在卷式膜分離設備中依次進行微濾、超濾，操作壓力為O. 2MPa，所得透過液上DlOl大孔吸附樹脂柱，先以水洗脫雜質，再用60%食用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮、噴霧干燥得半枝蓮提取物；所述的黃芪提取物由下列方法制備得到將黃芪粉末加5-10倍量水微波輔助提取2次，提取溫度為50-55°C，過濾合并提取液，過HPD100大孔吸附樹脂柱，收集下注液，先用水洗至無糖反應，再用60%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液濃縮至無醇，加等體積正丁醇萃取，萃取液濃縮、干燥得黃芪皂苷，將下注液和水洗液合并，濃縮，加乙醇沉淀，濾出沉淀，噴霧干燥得黃芪多糖，合并黃芪皂苷和黃芪多糖得黃芪提取物。
2.如權利要求I所述的組合物，其中各原料藥的用量為小百部提取物35%、黃鵪菜提取物20%、半枝蓮提取物35%、黃芪提取物10%。
3.如權利要求1、2所述的組合物，其特征是該藥物組合物和藥學上可接受的載體制備成任何一種常用的口服制劑，所述的口服制劑是膠囊劑、顆粒劑、口服液、丸劑或片劑。
全文摘要
本發明涉及一種抗腫瘤的植物提取組合物及其制備方法和應用，該植物提取物組合物由重量百分比20-45%小百部提取物、15-35%黃鵪菜提取物、20-40%半枝蓮提取物和5-20%黃芪提取物制成。經藥理實驗表明，本發明提供的植物提取組合物具有的功能，主治。另外，本發明提供的植物提取物組合物制劑的制備方法，質量可控、有效成分含量高、適合工業化生產。
文檔編號A61K36/8965GK102824526SQ20121037332
公開日2012年12月19日 申請日期2012年9月27日 優先權日2012年9月27日
發明者蘇劉花 申請人:南京澤朗農業發展有限公司