中藥有效成分免疫增強作用及新型免疫增強劑的研究的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明以黃芪、黨參、淫羊藿、甘草四種中藥為研究對象，針對各中藥有效成分的理化性質，采取最適提取方法對其成分進行提取；以REV誘導的免疫抑制雞為實驗模型，通過體外篩選、體內篩選與中藥成分兩兩組合的復方制劑進行實驗，確定具有免疫增強作用的中藥成分，并測定該免疫增強劑對試驗雞生產性能的影響與免疫器官指數，為中藥免疫增強劑的研究與應用推廣提供依據。
【專利說明】中藥有效成分免疫增強作用及新型免疫增強劑的研究
【技術領域】
[0001]中藥有效成分免疫增強作用及新型免疫增強劑的研究，屬于藥物學領域。
【背景技術】
[0002]畜禽傳染病一直是危害畜牧業(yè)發(fā)展的首要問題，尤其是病毒性傳染病，迄今尚無有效的治療方法，疫苗預防仍是最重要的措施。但由于環(huán)境因素、使用方法、使用時間、機體狀態(tài)、免疫抑制病等諸多方面的影響，多數疫苗只有與免疫增強劑配合使用才能發(fā)揮良好的防疫效果，但目前國內外廣泛使用的油乳類、鋁膠類等化學性免疫增強劑常有副作用大、局部刺激強、致癌、制備和使用麻煩或不能足夠提高弱抗原的免疫原性等弊端。因此，研制高效、低毒的新型免疫增強劑已成為亟待解決的問題。中獸藥是在獨特中獸醫(yī)理論指導之下用于防治動物疾病，具有天然性、多能性、低毒副、不易產生有害殘留和耐藥性等優(yōu)點，被動物臨床廣泛應用，為保障我國畜牧業(yè)健康發(fā)展發(fā)揮了重要作用。研究表明，許多中藥成分具有免疫增強作用，作為免疫增強劑具有顯著的優(yōu)勢。
[0003]現代醫(yī)學研究成果表明，中草藥含有多糖類、有機酸類、生物堿類、甙類和揮發(fā)油類等，這些物質在動物機體內通過全面調整和充分發(fā)揮機體自身具有的免疫功能和適應力，而起到防病治病的作用。其中，多糖是中草藥的重要組成成分，其功能主要表現為以下幾個方面:①激活免疫細胞。②影響補體系統(tǒng)。③誘生細胞因子的產生；甙類化合物，如人參皂甙、黃芪甙、淫羊藿甙、柴胡皂苷等對免疫均有影響。
[0004]雖然中藥免疫增強劑的研究和應用越來越普遍，但目前無論是國內或國外研究均存在下列問題:①缺乏評價免疫增強劑的動物模型或標準。②多數免疫增強劑是一些根據傳統(tǒng)工藝生產的粗制劑。③免疫增強劑的研究，主要停留在中藥對畜禽免疫系統(tǒng)功能指標上的改變，而從微觀上闡述其機制報道的卻不多。④許多中藥或其活性成分對機體的免疫功能呈現雙向調節(jié)作用，既能增強動物機體的免疫功能，又能抑制免疫功能。只有更加深刻地認清中草藥免疫藥理作`用機理，才能為臨床篩選和合理用藥提供保證。

【發(fā)明內容】

[0005]本發(fā)明選擇黃芪、黨參、淫羊藿、甘草四種中藥為研究對象。其中，黃芪的主要活性成分為黃芪多糖，研究表明，黃芪多糖可以增強雞巨噬細胞的吞噬能力，提高淋巴細胞轉化率等；黨參、甘草具有促進細胞因子產生的作用，具有抗病毒，增強殺傷細胞、自然殺傷細胞殺傷活性，調節(jié)體液免疫和細胞免疫的功能；淫羊藿的活性成分為淫羊藿多糖、淫羊藿黃酮與淫羊藿苷，均具有顯著的免疫活性，在抗腫瘤、抗氧化、提高機體免疫功能方而發(fā)揮重要作用，并對疫苗具有免疫輔助效果。該研究以海蘭褐雛雞為動物模型，系統(tǒng)研究了四種中藥有效成分組成的單方、復方制劑以及不同含量情況下的免疫調節(jié)作用，篩選出作用較好的中藥成分和組方，為中藥免疫增強劑的研制提供了依據。
【具體實施方式】[0006]首先是對實驗動物的選擇，該課題所用實驗動物為150只I日齡海蘭褐公雞，購自泰安市東岳種禽場，試驗前用相應ELISA抗體檢測試劑盒(IDEXX公司產品)檢測REV抗體陽性率< 2.3%。將其隨機分為15組。I組為健康組，不接種REV ；2-15組為接種REV組，I日齡大腿內側肌肉接種REV病毒稀釋液(500TCID50/只)。各組試驗雞均按常規(guī)方式飼養(yǎng)與接種疫苗。
[0007]其次，本課題選擇增強免疫作用較好的黃芪、黨參、淫羊藿、甘草四種中藥作為研究對象，針對各中藥有效成分的理化性質，采用水煮沸提取法，分別將各試驗中藥加8倍量的自來水浸泡過夜,煮沸2小時后過濾，濾渣再加5倍量自來水煮沸2小時過濾，合并兩次濾液，煮沸去水濃縮至含中藥材lg/ml，得中藥提取物H、D、Y、G (以各中藥漢語拼音第一個字母表ττΟ。
[0008]再次，對提取的中藥成分進行體外與體內篩選試驗。體外篩選的具體方法為:將4種濃度的H、D、Y、G中藥成分分別加入到培養(yǎng)的雞脾臟淋巴細胞中，培養(yǎng)48h后，用MTT法測定淋巴細胞增殖的變化。根據濃度試驗結果，選出各藥的適宜濃度，進一步比較它們作用的差異；體內篩選試驗的具體方法為:90只11日齡雛雞，隨機均分為9組，試驗組分別肌肉注射高、低劑量的四種中藥成分，對照組注射同量生理鹽水，每天I次，連續(xù)3天；14日齡用新城疫IV系弱毒疫苗首免，28日齡二免。分別在35、42、49和56日齡心臟采血、測定T淋巴細胞增殖的動態(tài)變化。根據試驗結果，結合體外試驗研究結果篩選出可作為新型免疫增強劑的候選中藥。
[0009]第四，研究復方中藥成分的免疫增強作用，將H、D、Y、G四種中藥成分分別兩兩組合成多個復方，注射13日齡雛雞，連續(xù)3天，在末次注射同時用ND-1V系苗免疫，然后分別在免疫后第7、14、21、28天每組隨機翅靜脈采血5只，檢測ND-HI抗體效價。
[0010]第五，研究中藥免疫增強劑對雞生產性能指標的影響，試驗期間，每天早晨對各組試驗雞以籠為單位進行稱重，并記錄各試驗組雞的每天耗料量，試驗結束后分別計算總增重、平均日增重、平均日料消耗和料重比。
[0011]第六，研究中藥免疫增強劑對雞免疫器官增重的影響，于試驗結束后，各組試驗雞剖殺取胸腺、法氏囊和脾臟等免疫器官，稱取胸腺、法氏囊和脾臟重量，計算免疫器官指數。
【權利要求】
1.本研究以REV誘導的免疫抑制雞為免疫增強劑免疫抑制模型，為免疫增強劑的評價提供理論依據。
2.通過具有免疫增強效果的中藥制劑，提高或恢復免疫抑制動物的抗體水平，為免疫抑制性疾病和人類 的免疫缺陷疾病進行有意義的探索。
【文檔編號】A61K36/484GK103768134SQ201210402544
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2012年10月22日 優(yōu)先權日:2012年10月22日
【發(fā)明者】不公告發(fā)明人 申請人:國華