專利名稱：一種動物用免疫增強劑的制備方法及應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種動物用免疫增強劑的制備方法及應用，屬于獸醫生物制品技術領域。
背景技術：
畜禽養殖業的迅猛發展，尤其是集約化飼養規模的日益擴大，使得疾病預防的問題愈加重要。疫苗接種是預防疾病的最基本、最有效的方法。但是由于各種原因，目前很多疫苗的免疫效果還不是十分理想，不能對動物提供完全的保護。為了提高疫苗的免疫效果，人們進行了大量的工作，如通過濃縮抗原提高抗原含量、提高抗原的免疫原性、優化制苗エ藝、采用優質佐劑、優化免疫程序等等來提高疫苗的免疫質量，通過使用免疫增效劑、減少各種有毒有害物質對免疫系統的傷害、提供良好的飼養條件、采用合理的用藥程序來增強動物機體的免疫應答能力。其中，研究開發新型高效動物用免疫增強劑(佐劑)是提高免 疫效果的主要方法之一。佐劑又稱免疫增強劑或免疫調節劑，是指先于抗原或與抗原同時注入動物體內，能非特異性改變或增強機體對該抗原的免疫應答的ー類物質。目前佐劑的品種較多，按照來源可分為無機佐劑，如氫氧化鋁，明礬等；有機佐劑，微生物及其產物如短小桿菌、百日咳桿菌、內毒素等；合成佐劑，如人工合成的雙鏈多聚核苷酸(雙鏈多聚腺苷酸、尿苷酸)、左旋咪唑、異丙肌苷等；油佐劑，如弗氏佐劑、礦物油佐劑等。上述佐劑中，有的雖然已經研究成功應用于人類如胸腺素和干擾素，但是價格較為昂貴，不可能用于動物。目前動物用疫苗所用佐劑主要還是以油佐劑、氫氧化鋁鋁膠佐劑為主，通過延長疫苗在注射部位的停留時間發揮佐劑效應，還沒有直接通過增強動物機體自身的免疫應答能力的佐劑來提高免疫效果。草分枝桿菌(Mycobacterium phlei)是分枝桿菌中的ー種，其中分枝桿菌胞壁酰ニ肽(MDP)具有很強的免疫治療作用，草分枝桿菌多糖MPS在免疫調節、抑制病毒復制方面有很好效果(周莉婷，趙晶晶等，分枝桿菌多糖免疫調節劑研究進展，藥物生物技木，2011. 18(2) :176-179)。經免疫學實驗證明滅活的草分枝桿菌進入人體后，T淋巴細胞受到刺激,釋放出多種淋巴因子,如IL-2、IL-4、TNF、IFN和MAF、MIF、MCF、MMF等，這些因子作用于單核-巨噬細胞系統，使之向病灶部位聚集、活化，對病原菌進行吞噬、殺傷和清除；同吋，自然殺傷(NK)細胞、B淋巴細胞也活化、增多，IgM、IgG増加或趨于正常，持久地介入機體的免疫過程，不斷的調節細胞及體液免疫系統發揮免疫功能，從而增強機體免疫能力(陳孝治，烏體林斯注射液，中國新藥雜志，2000，9 (9) =644-645)。草分枝桿菌是一種非致病性微生物，単獨使用或與疫苗同時使用時沒有毒性，通過提高宿主自身的免疫應答能力來提增強免疫力，安全可靠。草分枝桿菌發酵方便、成本低廉，便于臨床大面積推廣使用
發明內容
本發明的目的是制備一種動物用免疫增強劑，一方面可以非特異性的提高動物的免疫能力，另一方面用其作為疫苗的佐劑成分，可以使動物用疫苗的免疫效果更確實，將動物疫苗免疫水平提高到一個新的高度，減少疾病發生，具有直接的經濟效益和社會效益。使用本發明涉及的免疫增強劑能夠1)增強動物免疫力，提高成活率和增重率；2)將動物用滅活疫苗的保護性抗體產生時間提前5 7天，使得動物免疫空白期更短，產生更好的免疫保護效果；本發明最關鍵的一點是，添加草分枝桿菌的禽流感滅活疫苗(H9亞型)，能使接種該疫苗的動物產生保護性抗體的時間提前5 7天。由于油乳劑滅活疫苗一般在免疫后10天開始產生抗體，14天血清中能檢測到抗體，21 28天達到保護性水平，而肉雞由于生長太快，免疫系統發育不完善，對抗原的免疫應答能力差，產生抗體更慢，抗體水平更低(馬磊等，淺談影響肉雞免疫力下降的因素，家禽科學，2007，(11) :27-28)。草分枝桿菌動物用免疫增強劑使用后，肉雞免疫后14天即可產生保護性抗體，大大縮小了免疫空白期，降低了養殖中疾病發生的風險。本發明中選用草分枝桿菌作為動物用疫苗佐劑，從調動機體免疫機能方面著手，增強了免疫效果，彌補了疫苗免疫中禽流感沒有活疫苗做基礎免疫的缺 憾，減少了整個養殖周期禽流感的發病率，具有直接的經濟效益和社會效益。本發明主要技術方案在于本發明的一種動物用免疫增強劑，主要成分是草分枝桿菌(Mycobacteriumphlei)培養物的純化制品；該動物用免疫增強劑主要是將草分枝桿菌發酵培養，通過滅活、濃縮、純化、均質等工序制備而成；該一種動物用免疫增強劑的應用，可以單獨使用，用于非特異性的增強動物機體免疫能力，其使用劑量為按照動物體重計算，每公斤體重注射草分枝桿菌菌體I 20mg ;該免疫增強劑可按照每毫升疫苗中添加0. 032 0. 8mg草分枝桿菌菌體的量添加到動物用滅活疫苗中混合均勻，按照疫苗的常規劑量進行免疫。
具體實施例方式I.菌株來源本發明涉及到的草分枝桿菌(Mycobacterium phlei)AS 4. 1180菌株購于北京市朝陽區北辰西路I號院3號中國科學院微生物研究所中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，編號CGMCC AS 4. 1180(中國微生物菌種保藏管理委員會，中國菌種目錄，1992版，機械工業出版社，1992，p285)。2.動物用免疫增強劑的制備方法動物用免疫增強劑的制備，是將編號為CGMCC AS 4. 1180草分枝桿菌(Mycobacterium phlei)發酵培養,通過滅活、濃縮、純化等工序制成草分枝桿菌菌體。具體制備步驟(I)種子培養將草分枝桿菌(Mycobacterium phlei) CGMCC AS 4. 1180株置于種子罐中進行培養，37°C通氣培養，pH值為7. 0，培養時間為3 4天，得到發酵用種子液；種子罐中的培養基配方酵母提取粉Ig 5g，濃縮麥芽汁(購自濟南雙麥啤酒物資有限公司)2ml IOml,葡萄糖5g 50g,磷酸氫二銨Ig 4g,磷酸氫二鉀0. 5g Ig,注射用水加至1000ml。(2)發酵培養為了得到活性最佳的草分枝桿菌，選擇在細菌生長的對數期終止發酵，進行滅活，本發明對草分枝桿菌的培養時間進行了篩選試驗。草分枝桿菌在液體培養基中培養72h后，每隔24h用血球計數板計數，在顯微鏡下測定細菌濃度，結果見下表I :表I草分枝桿菌的培養時間篩選試驗
權利要求
1.一種動物用免疫增強劑，其特征在于該免疫增強劑主要成分是編號為AS 4. 1180的草分枝桿菌(Mycobacterium phlei)培養物的純化制品,該草分枝桿菌購自北京市朝陽區北辰西路I號院3號中國科學院微生物研究所中國普通微生物保藏管理中心，編號=CGMCCAS 4. 1180。
2.權利要求I所述一種動物用免疫增強劑的制備方法，其特征是將編號為CGMCCAS4.1180草分枝桿菌(Mycobacterium phlei)發酵培養,通過滅活、濃縮、純化、均質等工序制備而成。
3.權利要求I所述一種動物用免疫增強劑的應用，其特征是可以單獨使用，用于非特異性的增強動物機體免疫能力，其使用劑量為按照動物體重計算，每公斤體重注射草分枝桿菌(Mycobacterium phlei)菌體 I 20mg。
4.權利要求I所述一種動物用免疫增強劑的應用，其特征是該免疫增強劑可按照每毫升疫苗中添加0. 032 0. 8mg草分枝桿菌(Mycobacterium phlei)菌體的量添加到動物用滅活疫苗中混合均勻，按照疫苗的常規劑量進行免疫。
全文摘要
本發明涉及一種動物用免疫增強劑的制備方法及應用。本發明的技術方案為將草分枝桿菌發酵培養，通過滅活、濃縮、提純、均質等工序制備成一種動物用免疫增強劑。可以單獨使用，用于非特異性的增強動物的機體免疫能力，也可以作為動物用疫苗的佐劑成分使用。本發明所提供的方法，既能增強動物的機體免疫能力，提高動物的生產性能；又使疫苗的免疫效果更確實，具有直接的經濟效益和社會效益。
文檔編號A61P37/04GK102764434SQ201210057420
公開日2012年11月7日 申請日期2012年3月7日 優先權日2012年3月7日
發明者劉紅娟, 張廣, 徐龍濤, 李秀娟, 李金波, 王蕾, 鮑海忠 申請人:齊魯動物保健品有限公司