專利名稱：透明質(zhì)酸納米硒及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種透明質(zhì)酸納米硒及其制備方法和用途，特指具有抗腫瘤作用的透明質(zhì)酸納米硒，屬納米醫(yī)藥材料技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
硒是生物體中谷胱甘肽過氧化物酶(GPx)、磷脂氫谷胱甘肽過氧化物酶(PHGPx)、5_脫碘酶(ID)活性中心關(guān)鍵的組成元素，參與體內(nèi)過氧物及碘的代謝，調(diào)節(jié)生物體內(nèi)碘的水平及自由基水平。硒作為一種人體必需微量元素，具有清除自由基、防癌、抗衰老、保護肝臟、抗輻射、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤等多方面活性，因此，硒在保健食品和醫(yī)藥領(lǐng)域中占有重要地位。然而，硒的營養(yǎng)劑量和毒性劑量之間范圍較窄，因此開發(fā)高效低毒的硒制劑成為現(xiàn)代研究的熱點課題之一。研究證實與無機硒和有機硒相比，納米硒不僅更易被人體吸收和利用，而且生物毒性更低、安全性更高，具有更高的生物活性。透明質(zhì)酸是糖胺聚糖的一種，由β -N-乙酰氨基葡糖和D-葡糖醛酸單糖的重復結(jié)構(gòu)組成的線性多糖，是構(gòu)成細胞外基質(zhì)和細胞間質(zhì)的主要成分，在維持細胞外基質(zhì)的結(jié)構(gòu)和調(diào)節(jié)細胞內(nèi)活動等方面有著重要的作用。作為蛋白聚糖的核心，透明質(zhì)酸的作用主要有保護和潤滑關(guān)節(jié)、促進血管生成及促進傷口愈合等，透明質(zhì)酸在人體軟組織中的生物相容性好。鑒于其黏彈性和生物相容性，透明質(zhì)酸可作為一種載體與其他藥物反應(yīng)形成結(jié)合物，具有控釋和靶向作用。中國專利申請?zhí)?01110084034. X公開了 “一種硫酸軟骨素納米硒及其制備方法”，該發(fā)明以硫酸軟骨素為載體，制備出粒徑在30-200 nm的納米硒顆粒；申請?zhí)?01110151696.4公開了 “一種納米硒顆粒及其制備方法”，采用血紅蛋白、亞硒酸鈉、輔酶QlO和玉米粉混合,反應(yīng)得到粒徑在50-100 nm的納米硒顆粒,納米硒顆粒中的硒的質(zhì)量百分含量為1%-10%;專利“液相維生素C復合的納米單質(zhì)硒及其制備與保存方法”(公開號為CN 100998603A)提供了一種不需要任何模板劑，僅需維生素C還原亞硒酸鈉得到的液相維生素C復合的納米單質(zhì)硒，粒徑26-93 nm，產(chǎn)物可以在2_10°C下在水溶液中以溶膠形態(tài)保存；周艷暉等以蔗糖作為表面修飾劑制備納米硒溶膠，納米硒在溶膠中的粒徑分布在47-177 nm (暨南大學學報(自然科學版)，2010，31 (I) : 72-74) 0然而上述專利和文獻的制備方法仍存在一些不足，如粒徑范圍寬、分散性不良或穩(wěn)定性差等。有關(guān)采用透明質(zhì)酸為載體制備納米硒的方法至今未見國內(nèi)外報道，也未見相應(yīng)專利公開。

發(fā)明內(nèi)容
基于以上背景技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種透明質(zhì)酸納米硒的制備方法，制備出粒徑小、粒徑范圍窄，分散性好和穩(wěn)定性好的球形透明質(zhì)酸納米硒，用于人們抗腫瘤的輔助治療或營養(yǎng)保健。針對上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案一種透明質(zhì)酸納米硒，是以透明質(zhì)酸為載體，亞硒酸鈉為原料，在室溫條件下采用抗壞血酸為還原劑制備的紅色納米硒。
—種透明質(zhì)酸納米硒，以透明質(zhì)酸為載體，抗壞血酸為還原劑，形成球狀粒徑在50-70nm的紅色納米硒，其中硒的質(zhì)量分數(shù)在O. 659Γ2. 2%。上述一種透明質(zhì)酸納米硒的制備方法，包括以下步驟
取O. 19Tl% (質(zhì)量比)的透明質(zhì)酸溶液和O. lmol/1亞硒酸鈉溶液混合，在室溫下磁力攪拌12 h，按亞硒酸鈉和抗壞血酸的摩爾比值為1:2 1:6緩慢滴加一定體積O. I mol/1抗壞血酸溶液繼續(xù)攪拌，溶液顏色由無色變?yōu)榧t色，直至顏色不再發(fā)生改變；在去離子水中透析48 h，真空冷凍干燥即得紅色透明質(zhì)酸納米硒粉末。其中透明質(zhì)酸溶液和亞硒酸鈉溶液的體積比為100 :1。上述一種透明質(zhì)酸納米硒的用途，用于治療抗腫瘤藥物。采用本發(fā)明的方法可以制備出粒徑小、粒徑范圍窄，分散性好的球形透明質(zhì)酸納米硒，在室溫下一個月仍可以保持穩(wěn)定，該反應(yīng)條件溫和，操作簡單，是一種綠色環(huán)保的合成方法。


圖I為透明質(zhì)酸納米硒的掃描電鏡分析結(jié)果；
圖2和圖3所示為透明質(zhì)酸納米硒溶液在透射電鏡下的分析結(jié)果。
具體實施例方式 為了更清楚地說明本發(fā)明內(nèi)容，用具體實施例說明如下，具體實施例不限定本發(fā)明內(nèi)容范圍。用電感耦合等離子發(fā)射光譜儀(ICP)測得透明質(zhì)酸納米硒中硒元素的含量。透明質(zhì)酸納米硒的制備 實施例I
取100 ml 1%的透明質(zhì)酸溶液(分子量為1.06X 106 Da)和I ml O. I mol/1的亞硒酸鈉溶液，在室溫下磁力攪拌12 h，緩慢滴加緩慢滴加12 ml O. lmol/1抗壞血酸溶液繼續(xù)攪 拌，溶液顏色由無色變?yōu)榧t色，直至顏色不再發(fā)生改變。在去離子水中透析48 h，真空冷凍干燥得到紅色透明質(zhì)酸納米硒粉末I. 0590 g。由電感耦合等離子發(fā)射光譜儀(ICP)測得透明質(zhì)酸納米硒中硒元素的含量為I. 4%。
實施例2
取100 ml O. 25%的透明質(zhì)酸溶液(分子量為I. 06 X IO6 Da)和I ml O. I mol/1的亞硒酸鈉溶液，在室溫下磁力攪拌12 h，緩慢滴加緩慢滴加4 ml O. lmol/1抗壞血酸溶液繼續(xù)攪拌，溶液顏色由無色變?yōu)榧t色，直至顏色不再發(fā)生改變。在去離子水中透析48 h，真空冷凍干燥得到紅色透明質(zhì)酸納米硒粉末O. 2510 g。由電感耦合等離子發(fā)射光譜儀(ICP)測得透明質(zhì)酸納米硒中硒元素的含量為2. 2%。
實施例3
取100 ml O. 1%的透明質(zhì)酸溶液(分子量為1.06X 106 Da)和I ml O. I mol/1的亞硒酸鈉溶液，在室溫下磁力攪拌12 h，緩慢滴加2 ml O. lmol/1抗壞血酸溶液繼續(xù)攪拌，溶液顏色由無色變?yōu)榧t色，直至顏色不再發(fā)生改變。在去離子水中透析48 h，真空冷凍干燥得到紅色透明質(zhì)酸納米硒粉末O. 1013 g。由電感耦合等離子發(fā)射光譜儀(ICP)測得透明質(zhì)酸納米硒中硒元素的含量為O. 65%。
對于所制備的透明質(zhì)酸納米硒，對其結(jié)構(gòu)和抗腫瘤活性做進一步的介紹。I.透明質(zhì)酸納米硒的形態(tài)和粒徑
圖I為透明質(zhì)酸納米硒的掃描電鏡分析結(jié)果，可以看出，采用透明質(zhì)酸為載體，抗壞血酸為還原劑的方法產(chǎn)生了大量的透明質(zhì)酸納米硒顆粒，粒徑小，分散性好。如圖2和圖3所示為透明質(zhì)酸納米硒溶液在透射電鏡下的分析結(jié)果，可見透明質(zhì)酸納米硒成規(guī)則的球形，粒徑大小為50-70nm。·
透明質(zhì)酸納米硒抗腫瘤活性試驗
I材料與試劑 1.1動物
ICR小鼠，雌性，體重20±2g，清潔級，購于揚州大學比較醫(yī)學中心，合格證編號SCXK (蘇)2007-0001。實驗前飼養(yǎng)3d，飼養(yǎng)溫度為24 ± I °C，濕度為55 - 60%。I. 2藥品與試劑
透明質(zhì)酸納米硒實驗室自制(采用實施例2中制備的透明質(zhì)酸納米硒，經(jīng)ICP-AES測定，硒元素的含量為2. 2%)
5-氟尿嘧啶天津金耀氨基酸有限公司國藥準字H12020959 生理鹽水湖南科倫制藥有限公司，國藥準字H51021158 超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒南京建成生物工程研究所 1.3統(tǒng)計方法
數(shù)據(jù)用SPSS16. O統(tǒng)計軟件進行處理。結(jié)果用± s表示，多組間差異采用單因素方差分析(One-way AN0VA)。P < O. 05 有統(tǒng)計學意義。2實驗方法
2. I小鼠H印G-2肝癌腹水瘤模型的建立
取體重20土2g的昆明小鼠2 3只，腹腔接種O. 2 ml HepG-2腹水瘤瘤株，定期每7 9天傳一代。取腹腔傳代7天且生長良好的!fepG-2腹水瘤小鼠，脫頸椎處死，75 %乙醇消毒動物皮膚，在無菌條件下，剪開小鼠腹腔，吸取生長良好的腹水，觀察腹水顏色(腹水為乳白色無絮狀沉淀物者為佳，血性腹水則不可用)并用臺盼藍染色法觀察活細胞數(shù)(活細胞數(shù)>98 %);腹水用生理鹽水稀釋，吹打混勻，細胞計數(shù)板計數(shù)，調(diào)整細胞數(shù)為2 X IO7個活細胞/mL ;取40只小鼠，右側(cè)腋下接種H印G-2腫瘤細胞，建立小鼠H印G-2肝癌腹水瘤模型。2. 2 分組
取10只未造模的小鼠，為空白對照組，40只H印G-2腫瘤小鼠隨機分組，每組10只，共
4組!fepG-2腫瘤模型對照組、5-氟尿嘧啶陽性對照組、透明質(zhì)酸納米硒高劑量組、透明質(zhì)酸納米硒低劑量組。2.3給藥劑量設(shè)計
表I為各給藥組的給藥劑量，各組給藥10天。
表I給藥劑量
權(quán)利要求
1.一種透明質(zhì)酸納米硒，其特征在于以透明質(zhì)酸為載體，抗壞血酸為還原劑，形成球狀粒徑在50-70nm的紅色納米硒，其中硒的質(zhì)量分數(shù)在O. 659Γ2. 2%。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種透明質(zhì)酸納米硒的制備方法，其特征在于按照以下步驟進行取質(zhì)量濃度O. 1°/Γ %的透明質(zhì)酸溶液和O. lmol/1亞硒酸鈉溶液混合，在室溫下磁力攪拌12 h，按亞硒酸鈉和抗壞血酸的摩爾比值為1:2 1:6緩慢滴加一定體積O. I mol/1抗壞血酸溶液繼續(xù)攪拌，溶液顏色由無色變?yōu)榧t色，直至顏色不再發(fā)生改變；在去離子水中透析48 h，真空冷凍干燥即得紅色透明質(zhì)酸納米硒粉末。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種透明質(zhì)酸納米硒的制備方法，其特征在于其中透明質(zhì)酸溶液和亞硒酸鈉溶液的體積比為100 :1。
4.權(quán)利要求I所述的一種透明質(zhì)酸納米硒的用途，用于治療抗腫瘤藥物。
全文摘要
本發(fā)明公開了透明質(zhì)酸納米硒及其制備方法和用途，屬納米醫(yī)藥材料技術(shù)領(lǐng)域。該發(fā)明以透明質(zhì)酸為載體，亞硒酸鈉為原料，在室溫條件下采用抗壞血酸為還原劑制備得到紅色球形的透明質(zhì)酸納米硒，粒徑50-70nm。采用本發(fā)明方法制備的透明質(zhì)酸納米硒具有粒徑小、粒徑范圍窄，分散性好等優(yōu)點，在室溫下一個月仍可以保持穩(wěn)定，且反應(yīng)條件溫和，操作簡單，是一種綠色環(huán)保的合成方法，克服了現(xiàn)有制備方法存在的一些不足，如粒徑范圍寬、分散性不良或穩(wěn)定性差等。該透明質(zhì)酸納米硒對植入小鼠體內(nèi)的HepG-2肝癌腹水瘤細胞的生長有顯著抑制作用，可作為抗腫瘤輔助藥物或提高機體免疫功能的保健品。
文檔編號A61K33/04GK102921015SQ20121040798
公開日2013年2月13日 申請日期2012年10月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月24日
發(fā)明者仰榴青, 任月娜, 吳向陽, 趙婷, 茆廣華, 鄒燁, 鄭大恒, 馮偉偉, 朱洋 申請人:江蘇大學