專利名稱：一種提高豬瘟活疫苗產品效價的生產工藝的制作方法
技術領域：
本發明涉及獸用醫藥生物領域，特別涉及一種提高豬瘟活疫苗產品效價的生產工藝。
背景技術：
豬瘟是由豬瘟病毒引起的一種高度接觸性、致死性的豬傳染病，在世界上很多國家和地區均有發生，是養豬業的一種毀滅性傳染病，給畜牧業生產帶來了嚴重的經濟損失。世界動物衛生組織將豬瘟列為法定通報性疫病，我國將其劃為一類動物傳染病。20世紀50年代中國首創了舉世聞名的豬瘟兔化弱毒疫苗(C株)，該疫苗毒株系豬瘟石門系強毒通過兔子體內傳代400多代而篩選出來。C株是一株非常安全的弱毒疫苗，對各種年齡和品種的豬都沒有副作用，并且有良好的免疫效力，它能同時誘導體液免疫和細胞免疫應答，對不同 基因型的豬瘟病毒株均能提供有效的免疫保護。免疫母豬通過母乳可對仔豬提供被動免疫保護，但過高水平的母源抗體會影響仔豬對C株疫苗的主動免疫應答。隨后創制了不同的疫苗制造工藝，如豬瘟家兔脾淋組織疫苗、乳兔組織苗、牛體反應組織苗和細胞培養苗等。由于家兔脾淋組織疫苗保持了 C株的安全性、免疫原性和遺傳穩定性的優點備受廣大養豬戶的青睞。但由于其成本高、產量低，受到外界影響因素多。所以在上個世紀主要用于其它豬瘟疫苗生產工藝的種毒制備，對脾淋組織疫苗的產業化生產工藝研究相對比較少。目前的生產工藝還是停留在19世紀60代時的生產工藝。這種生產工藝主要存在以下兩方面的問題1)半成品保存的時間短，在_15°C時，保存期不超過15天并且病毒效價的損耗大，特別是夏季大兔存欄量少，長途運輸熱應激大，影響產品品質，生產困難；2)目前的產品效價只能達到150個兔體感染量。臨床使用往往加大頭份，造成副反應大。

發明內容
本發明的目的在于通過接種時采用豬瘟病毒專用保護劑來稀釋種毒，種毒進入兔體能夠快速在靶細胞定植和擴繁，提高毒價；通過用專用的脾淋組織保護劑來降低豬瘟病毒的損耗，延長半成品的保存期，從而提聞廣品的效價和品質，提供一種提聞豬痕活疫苗廣品效價的生產工藝。為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案一種提高豬瘟活疫苗產品效價的生產工藝，其包括以下步驟I)選兔選用體重I. 5-3. Okg的健康家兔，接種前測溫觀察3天以上，需體溫正常；2)生產毒種繁殖a.接種將豬瘟兔化弱毒凍干毒種用豬瘟病毒專用保護劑制成20-50倍稀釋的乳齊U，每兔耳靜脈注射0. 5-2mL ；b.測溫兔接種24h后，每隔6_8h測體溫一次；c.生產毒種收獲選擇定型熱反應兔，體溫下降開始24h內剖殺，以無菌操作采取脾臟，_15°C冷凍保存脾臟作為生產毒種；d.生產毒種鑒定按照《中華人民共和國獸用生物制品規程》的要求進行鑒定；3)豬瘟活疫苗的制備a.接種將生產毒種用豬瘟病毒專用保護劑制成20-50倍稀釋的乳劑，每兔耳靜脈注射ImL ；b.測溫操作同步驟2)中的b ;c.半成品收獲選擇定型熱或輕型熱反應兔，體溫下降開始24h內剖殺，以無菌操作采取脾臟和淋巴，即得半成品；d.半成品保存在半成品中按每千克加入200_300mL脾淋組織專用保護劑后，于-15°C以下冷凍保存；保存時間不超過60天； 4)配苗、分裝及凍干在無菌操作下，將半成品稱重、剪碎后，加入5%蔗糖牛奶保護劑，于同一容器內混合研磨，過濾除去殘渣，加入穩定劑和抗生素，充分攪勻，置2-8°C處理2-3h后，定量分裝；每頭份含脾臟和淋巴組織毒不少于0. Olg，分裝后迅速進行冷凍真空干燥后即得成品。5)成品檢測按照《中華人民共和國獸用生物制品規程》的要求進行檢測。進一步，所述的豬瘟病毒專用保護劑為甘氨酸2. 5-4%，精氨酸0. 5-1. 25%，谷氨酸I. 25-2. 5%，其余為水。進一步，所述的脾淋組織專用保護劑為鹿糖5-10%，蛋白胨5-6%，硫脲4%，明膠0. 5-0. 8%，谷氨酸2. 5-5%，其余為水。本發明采用以上技術方案，通過接種時采用豬瘟病毒專用保護劑來稀釋種毒，種毒進入兔體能夠快速在靶細胞定植和擴繁，提高毒價；通過用專用的脾淋組織保護劑來降低豬瘟病毒的損耗，延長半成品的保存期，從而提高產品的效價和品質，使半成品的保存期從原來的15天，延長到了 60天，成品的效價從原來的150個兔體感染量提高到900個兔體
感染量。
具體實施例方式本發明的技術方案為一種提高豬瘟活疫苗產品效價的生產工藝，其包括以下步驟I)選兔選用體重I. 5-3. Okg的健康家兔，接種前測溫觀察3天以上，需體溫正常；2)生產毒種繁殖a.接種將豬瘟兔化弱毒凍干毒種用豬瘟病毒專用保護劑制成20-50倍稀釋的乳齊U，每兔耳靜脈注射0. 5-2mL ；b.測溫兔接種24h后，每隔6_8h測體溫一次；c.生產毒種收獲選擇定型熱反應兔，體溫下降開始24h內剖殺，以無菌操作采取脾臟，_15°C冷凍保存脾臟作為生產毒種；d.生產毒種鑒定按照《中華人民共和國獸用生物制品規程》的要求進行鑒定；3)豬瘟活疫苗的制備a.接種將生產毒種用豬瘟病毒專用保護劑制成20-50倍稀釋的乳劑，每兔耳靜脈注射ImL ；b.測溫操作同步驟2)中的b ;c.半成品收獲選擇定型熱或輕型熱反應兔，體溫下降開始24h內剖殺，以無菌操作采取脾臟和淋巴，即得半成品；d.半成品保存在半成品中按每千克加入200_300mL脾淋組織專用保護劑后，于-15°C以下冷凍保存；保存時間不超過60天； 4)配苗、分裝及凍干在無菌操作下，將半成品稱重、剪碎后，加入5%蔗糖牛奶保護劑，于同一容器內混合研磨，過濾除去殘渣，加入穩定劑和抗生素，充分攪勻，置2-8°C處理2-3h后，定量分裝；每頭份含脾臟和淋巴組織毒不少于0. Olg，分裝后迅速進行冷凍真空干燥后即得成品。5)成品檢測按照《中華人民共和國獸用生物制品規程》的要求進行檢測。進一步，所述的豬瘟病毒專用保護劑為甘氨酸2. 5-4%，精氨酸0. 5-1. 25%，谷氨酸I. 25-2. 5%，其余為水。進一步，所述的脾淋組織專用保護劑為鹿糖5-10%，蛋白胨5-6%，硫脲4%，明膠
0.5-0. 8%，谷氨酸2. 5-5%，其余為水。下面將結合具體實施例對本發明進一步說明實施例I一種提高豬瘟活疫苗產品效價的生產工藝，其包括以下步驟I)選兔選用體重I. 5-3. Okg的健康家兔，接種前測溫觀察3天以上，需體溫正常；2)生產毒種繁殖a.接種將豬瘟兔化弱毒凍干毒種用豬瘟病毒專用保護劑制成20倍稀釋的乳劑，每兔耳靜脈注射0. 5mL ；b.測溫兔接種24h后，每隔6h測體溫一次；c.生產毒種收獲選擇定型熱反應兔，體溫下降開始24h內剖殺，以無菌操作采取脾臟，_15°C冷凍保存脾臟作為生產毒種；d.生產毒種鑒定按照《中華人民共和國獸用生物制品規程》的要求進行鑒定；3)豬瘟活疫苗的制備a.接種將生產毒種用豬瘟病毒專用保護劑制成20倍稀釋的乳劑，每兔耳靜脈注射 ImL ；b.測溫操作同步驟2)中的b ;c.半成品收獲選擇定型熱或輕型熱反應兔，體溫下降開始24h內剖殺，以無菌操作采取脾臟和淋巴，即得半成品；表I為將半成品稀釋一定的倍數后，檢測其豬瘟兔化弱毒病毒含量，采用同樣的方法，不同之處在于豬瘟兔化弱毒凍干毒種和生產種毒用生理鹽水稀釋，比較用兩種溶劑稀釋種毒對半成品效價的影響。表I豬瘟病毒專用保護劑組與生理鹽水組半成品效檢結果
權利要求
1.一種提高豬瘟活疫苗產品效價的生產工藝，其特征在于其包括以下步驟 1)選兔選用體重I.5-3. Okg的健康家兔，接種前測溫觀察3天以上，需體溫正常； 2)生產毒種繁殖 a.接種將豬瘟兔化弱毒凍干毒種用豬瘟病毒專用保護劑制成20-50倍稀釋的乳劑，每兔耳靜脈注射0. 5-2mL ； b.測溫兔接種24h后，每隔6-8h測體溫一次； c.生產毒種收獲選擇定型熱反應兔，體溫下降開始24h內剖殺，以無菌操作采取脾臟，_15°C冷凍保存脾臟作為生產毒種； d.生產毒種鑒定按照《中華人民共和國獸用生物制品規程》的要求進行鑒定； 3)豬瘟活疫苗的制備 a.接種將生產毒種用豬瘟病毒專用保護劑制成20-50倍稀釋的乳劑，每兔耳靜脈注射ImL ；b.測溫操作同步驟2)中的b ; c.半成品收獲選擇定型熱或輕型熱反應的兔子，體溫下降開始24h內剖殺，以無菌操作采取脾臟和淋巴，即得半成品； d.半成品保存在半成品中按每千克加入200-300mL脾淋組織專用保護劑后，于-15°C以下冷凍保存；保存時間不超過60天； 4)配苗、分裝及凍干在無菌操作下，將半成品稱重、剪碎后，加入5%蔗糖牛奶保護齊U，于同一容器內混合研磨，過濾除去殘渣，加入穩定劑和抗生素，充分攪勻，置2-8°C處理2-3h后，定量分裝；每頭份含脾臟和淋巴組織毒不少于0. Olg,分裝后迅速進行冷凍真空干燥后即得成品。
5)成品檢測按照《中華人民共和國獸用生物制品規程》的要求進行檢測。
2.根據權利要求I所述的一種提高豬瘟活疫苗產品效價的生產工藝，其特征在于所述的豬瘟病毒專用保護劑為甘氨酸2. 5-4%，精氨酸0. 5-1. 25%，谷氨酸I. 25-2. 5%，其余為水。
3.根據權利要求I所述的一種提高豬瘟活疫苗產品效價的生產工藝，其特征在于所述的脾淋組織專用保護劑為蔗糖5-10%，蛋白胨5-6%，硫脲4%，明膠0. 5-0. 8%，谷氨酸2. 5-5%，其余為水。
全文摘要
本發明涉及一種提高豬瘟活疫苗產品效價的生產工藝，包括選兔，生產毒種繁殖，豬瘟活疫苗的制備，配苗、分裝及凍干和成品檢驗幾個步驟。通過接種時采用豬瘟病毒專用保護劑來稀釋種毒，種毒進入兔體能夠快速在靶細胞定植和擴繁，提高毒價；通過用專用的脾淋組織保護劑來降低豬瘟病毒的損耗，延長半成品的保存期，從而提高產品的效價和品質，使半成品的保存期從原來的15天，延長到了60天，成品的效價從原來的150個兔體感染量提高到900個兔體感染量。
文檔編號A61K39/187GK102973931SQ20121047441
公開日2013年3月20日 申請日期2012年11月21日 優先權日2012年11月21日
發明者林志坤, 吳潤生, 江興華 申請人:福州大北農生物技術有限公司