專利名稱：一種從動物器官提取的組合物的衍生物的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種從動物器官提取的組合物的衍生物，尤其是從動物器官提取的組合物的衍生物及其制備方法。
背景技術：
從動物器官提取的組合物一直是藥品、食品、日 用品、化妝品的重要來源。從動物器官提取的組合物的衍生物一直是藥品、食品、日用品、化妝品的重要來源。動物結締組織的肥大細胞能產生酸性粘多糖物質，其中一種叫肝素。肝素具有強抗凝作用，能抗凝、抗血栓形成和調整血脂，被作為防治深層靜脈血栓形成等血栓栓塞性疾病的首選藥物，肝素鈉還有抗炎、抗過敏、抗病毒、抗癌等多種生物學功能，能用于品、食品、日用品、化妝品。雖肝素用于臨床已有60余年的歷史，只能從動物的部分組織中提取，不能人工合成。肝素也存在著副作用較大的不足，易引起粘膜出血，會導致嚴重的顱內出血，肝素皮下注射生物利用度低，長期使用還會造成血小板減少、脂質代謝紊亂，從而限制了其藥效的發揮及臨床應用。自20世紀80年代起，科研結果表明隨著肝素分子量的降低，其抗凝血活性較快地下降，但和抗血栓功能密切相關的抗Xa活性下降相對較慢。從而研究出具有較高抗血栓活性-抗Xa活性和較低出血傾向-低抗凝血活性的肝素片斷，即后來應運而生的“低分子肝素”。研究表明，分子量2000以下的肝素片斷沒有抗Xa活性，分子量大于8000的片斷雖有較高的抗Xa活性，但抗IIa活性也較高，使抗Xa/IIa比值太低而不符合低分子肝素鈉的標準。因此藥典規定，低分子肝素鈉中要求將低于2000和高于8000的部分控制在一定范圍之內。通過對肝素類產品的作用機制的研究發現，肝素類產品主要通過與血液中抗凝血酶ΙΙΙ(ΑΤΠΙ)結合，促進ATIII對凝血因子抑制來發揮抗凝、抗血栓作用。研究發現，對凝血因子Xa的抑制與抗栓作用相關，而滅活IIa因子(凝血酶)則增加出血危險性。肝素片段與ATIII結合需要一個特定的五糖序列，抗IIa活性與肝素片段的長度有關，低于18糖的片段則沒有抑制IIa活性，而抗Xa活性則不受影響。普通肝素平均分子量為12000 15000，抗Xa活性與抗IIa活性相同，而低分子肝素平均分子量為4000 6500，抗Xa/抗IIa—般為I. 5 4，與普通肝素相比，具有較選擇性的抗栓活性和低出血危險性，但仍含有相當比例的聞分子量。低分子肝素的提取工藝有化學降解法、物理降解法、酶降解法等。酶降解法成本太高，物理降解如Y-射線因反應難以控制。目前國際市場低分子肝素主流產品均以化學降解方法制得。法碼西亞用硝酸鈉降解肝素得到達肝素鈉，賽諾菲-安萬特用亞硝酸鈉降解肝素得到納曲肝素鈣，賽諾菲-安萬特用季銨鹽化一酯化一堿降解肝素得到依諾肝素鈉。Opocrin以H2O2-CuCl2降解降解肝素得到新復先低分子肝素鈉。諾華以亞硝酸異戊酯降解肝素得到山道低分子肝素鈉。用化學降解方法生產低分子肝素也面臨如下困難。化學降解之后，會殘留氧化劑、各種有機溶劑、有害的中間產物和反應副產物。例如在亞硝酸降解之后，會殘留硼氫化鈉、亞硝酸降解過程中必然會產生對人體有致癌作用的-N-NO-基團；堿降解之后，會殘留季銨鹽、氯化芐、二氯甲烷、甲醇、苯甲醇；H2O2降解之后，會殘留有銅離子，這些殘留物必須在反應結束后予以去除。以化學法降解的低分子肝素鈉是一種混合物，包含了從分子量 為幾百到近一萬的不同片斷，還需要進行分級沉淀進行純化分離，這往往使得率降低。

發明內容
本發明的目的是提供一種從動物器官提取的組合物的衍生物，尤其是從動物器官提取的組合物的衍生物及其制備方法，其產率高、效價高、能耗低、成本低。本發明的技術方案涉及一種組合物。本發明涉及一種從動物器官提取的組合物的衍生物。動物來自于是牛、豬、羊、狗。本發明涉及一種從動物器官提取的組合物的衍生物，動物器官來自肝臟、小腸、大腸、肺。動物來自于是牛、豬、羊、狗。本發明涉及一種從動物器官提取的組合物的衍生物的制備方法。動物來自于是牛、豬、羊、狗。本發明涉及一種從動物器官提取的組合物的衍生物的制備方法，動物器官來自肝臟、小腸、大腸、肺。動物來自于是牛、豬、羊、狗。本發明涉及一種組合物的衍生物的制備方法，包括如下步驟
(1)肝臟、小腸粘膜、大腸、或、肺加入石英砂，粉碎；
(2)水解粉碎物；
(3)吸附;
(4)洗脫；
(5)沉淀；
(6)純化；
(7)干燥；
(8)水解干燥物；
(9)超濾;
(10)洗脫；
(11)沉淀；
(12)干燥。動物來自于是牛、豬、羊、狗。本發明涉及一種組合物的衍生物的制備方法，包括如下步驟
(8)水解干燥物，采用過氧化氫和銅沸石分子篩，還可以同時加入硼氫化鈉、或、EDTA。
本發明對于低分子量肝素鈉的制備方法采用如下技術方案，
一種低分子量肝素鈉的制備方法，其特征在于包括如下步驟
(1)得到純品肝素鈉；
(2)水解干燥物；
(3)超濾;
(4)洗脫；
(5)沉淀；
(6)干燥。動物來自于是牛、豬、羊、狗。
一種低分子量肝素鈉的制備方法，其特征在于包括如下步驟
(I )肝臟、小腸粘膜、大腸、或、肺加入石英砂，超微粉碎；
(2)用酶水解粉碎物，水解采用的酶制劑是纖維素酶淀粉酶脂肪酶以(I 3) ( I 2) ( I 3 )的質量份比例混合而成的混合物；
(3)離子交換纖維吸附；
(4)離子交換纖維洗脫；
(5)肝素鈉沉淀；
(6)肝素鈉純化；
(7)干燥即得純品肝素鈉；
(8)水解干燥物；
(9)超濾；
(10)洗脫；
(11)沉淀；
(12)干燥;
動物來自于是牛、豬、羊、狗。(8)水解肝素鈉干燥物，采用過氧化氫和銅沸石分子篩，還可以同時加入硼氫化鈉、或、EDTA。
一種低分子量肝素鈉的制備方法，其特征在于包括如下步驟
一種肝素鈉的提取方法，包括以下步驟
(1)100 200份肝臟、小腸粘膜、大腸、或、肺加入10 20份石英砂，超微粉碎；
(2)用酶水解粉碎混合物，水解采用的酶制劑是纖維素酶淀粉酶脂肪酶以(I 3) ( I 2) ( I 3 )的質量份比例混合而成的混合物。在反應釜中加入100 200份粉碎混合物，升溫至40 50°C，保溫10 20min，加水50 80份，加NaCL I 2份，加MgCL2 O. 01 O. 02份，控制溫度30 40°C，用堿液調pH為7 9，加酶制劑I 2份，攪拌I 2h添加沉淀劑，所述沉淀劑是選至聚合氯化鋁、堿式氯化鋁、硫酸鋁中的至少一種材料2 5份，靜置2 4h，將上層清液用100 200目濾布過濾，收集濾液；
(3)離子交換纖維吸附在帶有攪拌裝置的容器內加入100 200份由步驟(2)獲得的濾液，加入離子交換纖維4 8份，攪拌4 8h，將離子交換纖維濾出，再加離子交換纖維4 8份，攪拌4 8h，將離子交換纖維濾出，將濾出的離子交換纖維合并用水清洗I 2次；
(4)離子交換纖維洗脫
將步驟(3)回收的離子交換纖維，加入質量為I 2倍離子交換纖維質量的3 4mol/L NaCL溶液中，攪拌2 4h，過濾、收集洗脫液；再添加質量為I 2倍離子交換纖維質量的2 3mol/LNaCL溶液，攪拌2 4h，過濾，收集洗脫液；然后用與離子交換纖維質量相等質量的2 3mol/L NaCL溶液攪拌洗滌一次，收集洗液，用于下批離子交換纖維的洗脫；
(5)肝素鈉的沉淀
將步驟(4)中第I次和第2次的洗脫液合并，加入濃度為85 95%乙醇攪拌，使洗脫 液乙醇濃度達到45 50%，靜置6 12h，將沉淀肝素鈉的上清液回收，收集肝素鈉沉淀；
(6)肝素鈉的純化
將步驟(5)回收的肝素鈉沉淀用適量I 2% NaCL溶液、或/和、適量O. I O. 2%Na2SO4、或/和 、NaHSO4溶液溶解，離心分離除去不溶物，加入濃度為85 95%乙醇攪拌，使肝素鈉溶液乙醇濃度達到45 50%，靜置7 14h，過濾、收集肝素鈉沉淀，用濃度為85 95%乙醇洗滌肝素鈉沉淀I 2次，過濾，收集肝素鈉沉淀；
(7)干燥將肝素鈉在真空條件下干燥，得產品；
離子交換纖維選自強酸性陽離子交換纖維、弱酸性陽離子交換纖維、強堿性陰離子交換纖維、弱堿性陰離子交換纖維。離子交換纖維優先選自ZB-2強堿性陰離子交換纖維。離子交換纖維也可以用D 2 O 8大孔徑樹脂替換。一種低分子量肝素鈉的制備方法，其特征在于包括如下步驟
(8)水解肝素鈉干燥物，采用過氧化氫和銅沸石分子篩，還可以同時加入硼氫化鈉、或、EDTA。(9)超濾；(10)洗脫；(11)沉淀；(12)干燥；
(8) (12)具體是
干燥物(包括而不限定于采用本發明的方法制備得到的肝素鈉，還包括其他任意的肝素鈉的干燥物)加入含I 3%氯化鈉溶液攪拌至充分溶解，用鹽酸調pH2 4，用氫氧化鈉溶液調PH9. O 11. O后加入過氧化氫和銅沸石分子篩(或還可以同時加入硼氫化鈉、或、EDTA), 15 20°C保溫2 4小時，通過5000D的超濾膜濾過后，用無水乙醇沉淀后虹吸出廢濾，沉淀物加入無熱原水(含I 3%氧化鈉)溶解后，再用通過超濾膜濾過，沉淀物進行加入無熱原水(含I 3%氧化鈉)溶解后，再用通過超濾膜濾過，用無水乙醇沉淀，靜置過夜，濾干沉淀物，用無水乙醇洗滌后，真空冷凍干燥，球磨粉碎后，得低分子量肝素鈉。銅沸石分子篩的制備方法包括而不限制于，
以HZSM-5分子篩為基體，用離子交換法制備銅沸石分子篩。按照Cu (CL) 2溶液O. 01 O. 05mol/L濃度，將10 30g的HZSM-5分子篩放入I升的Cu (CL) 2溶液中，用氨水調節PH值至7. O 8. 0，在溫度為60 100°C的水浴中攪拌12 24h，真空抽濾，然后用去離子水攪拌洗漆，過濾，在80 100°C下干燥10 24h,最后在500 800°C下焙燒6 12h,制備出銅沸石分子篩，以Cu_HZSM_5表不。
本發明的優點
本發明在酶解前先將底物超微粉碎，打破其細胞結構，然后加熱加熱，再采用新的配方酶制劑，利用多酶體系使肝素與蛋白復合物解離，解離效果好，在較緩和的條件下使細胞壁變性完成酶水解過程。在過濾水解混合物之前添加沉淀劑，加入沉淀劑可將水解液中的蛋白質、腸渣等有效分離、回收，可減少吸附工序對它們的吸附，降低離子交換纖維的成本。離子交換纖維是在離子交換樹脂原理基礎上開發的一種化學性質較為穩定、機械強度較高的功能新材料。本發明是首次將離子交換纖維用于肝素鈉的提取，改進了傳統酶解工藝，工藝簡單，生產周期短，操作簡便，投資少，適合規模工業生產，肝素純度可達300 450 I U / m g，提取效率可達I億I U / 500 1000根豬小腸，提高30 40%，節鹽40 50%，節水40 50%，節能40 50%，粗蛋白回收率達60%。 采用銅沸石分子篩催化過氧化氫對肝素的裂解，能有效地縮短裂解時間，提高反應效率，大大降低銅離子的殘留。
具體實施例方式本發明可用其它不違背本發明精神或主要特征的具體形式來概述，在不脫離本發明上述主題范圍的情況下，根據本領域普通技術知識和慣用手段做出的各種變更和替換，均落入本發明的保護范圍，也不局限于本發明的具體實施方式
中。實施例I
一種肝素鈉的提取方法，其特征在于包括如下步驟
(1)豬小腸粘膜加入石英砂，超微粉碎；
(2)用酶水解粉碎物，水解采用的酶制劑是纖維素酶淀粉酶脂肪酶以
(1):(1):(1)的質量份比例混合而成的混合物；
(3)離子交換纖維吸附；
(4)離子交換纖維洗脫；
(5)肝素鈉沉淀；
(6)肝素鈉純化；
(7)干燥即得純品肝素鈉。
實施例2
一種肝素鈉的提取方法，其特征在于包括如下步驟
(I )牛小腸粘膜加入石英砂，超微粉碎；
(2)用酶水解粉碎物，水解采用的酶制劑是纖維素酶淀粉酶脂肪酶以
(1):(1):(1)的質量份比例混合而成的混合物；
(3)離子交換纖維吸附；
(4)離子交換纖維洗脫；
(5)肝素鈉沉淀；(6)肝素鈉純化；
(7)干燥即得純品肝素鈉。實施例3
一種肝素鈉的提取方法，包括以下步驟
(1)100份豬小腸粘膜加入10份石英砂，超微粉碎；
(2)用酶水解粉碎混合物，水解采用的酶制劑是里氏木霉產纖維素酶堿性淀粉酶兔胰脂肪酶，以(I) : ( I) : ( I)的質量份比例混合而成的混合物 ；
在反應釜中加入100份粉碎混合物，升溫至40°C，保溫lOmin，加水50份，加NaCL I份，加MgCL2 O. 01份，控制溫度300C，用堿液調pH為8，加酶制劑I份，攪拌Ih添加沉淀劑，所述沉淀劑是選至聚合氯化鋁2份，靜置2h，將上層清液用100目濾布過濾，收集濾液；
(3)離子交換纖維吸附
在帶有攪拌裝置的容器內加入100份由步驟(2)獲得的濾液，加入離子交換纖維4份，攪拌4h，將離子交換纖維濾出，再加離子交換纖維4份，攪拌4h，將離子交換纖維濾出，將濾出的離子交換纖維合并用水清洗I次；
(4)離子交換纖維洗脫
將步驟(3)回收的離子交換纖維，加入質量為I倍離子交換纖維質量的3mol/L NaCL溶液中，攪拌2h，過濾、收集洗脫液；再添加質量為I倍離子交換纖維質量的2mol/LNaCL溶液，攪拌2h，過濾，收集洗脫液；然后用與離子交換纖維質量相等質量的2mol/L NaCL溶液攪拌洗滌一次，收集洗液，用于下批離子交換纖維的洗脫；
(5)肝素鈉的沉淀
將步驟(4)中第I次和第2次的洗脫液合并，加入濃度為85%乙醇攪拌，使洗脫液乙醇濃度達到45%，靜置6h，將沉淀肝素鈉的上清液回收，收集肝素鈉沉淀；
(6)肝素鈉的純化
將步驟(5)回收的肝素鈉沉淀用適量I % NaCL溶液和適量O. I % Na2SO4溶液溶解，離心分離除去不溶物，加入濃度為85%乙醇攪拌，使肝素鈉溶液乙醇濃度達到45%，靜置7h，過濾、收集肝素鈉沉淀，用濃度為85%乙醇洗滌肝素鈉沉淀I次，過濾，收集肝素鈉沉淀；
(7)干燥將肝素鈉在真空條件下干燥，得產品。離子交換纖維優先選自ZB-2強堿性陰離子交換纖維。肝素純度可達350 I U / m g，提取效率可達I億I U / 1000根豬小腸，與常規肝素鈉提取法(〈豬小腸粘膜中肝素鈉提取與精制工藝研究>)相比，節鹽45%，節水45%，節能50%，粗蛋白回收率達60%。
實施例4
一種肝素鈉的提取方法，包括以下步驟
(1)100份豬小腸粘膜加入10份石英砂，超微粉碎；
(2)用酶水解粉碎混合物，水解采用的酶制劑是里氏木霉產纖維素酶堿性淀粉酶兔胰脂肪酶以(1):(1):(1)的質量份比例混合而成的混合物；
在反應釜中加入100份粉碎混合物，升溫至40°C，保溫lOmin，加水50份，加NaCL I份，加MgCL2 O. 01份，控制溫度300C，用堿液調pH為8，加酶制劑I份，攪拌Ih添加沉淀劑，所述沉淀劑是選至聚合氯化鋁2份，靜置2h，將上層清液用100目濾布過濾，收集濾液；
(3)離子交換纖維吸附
在帶有攪拌裝置的容器內加入100份由步驟(2)獲得的濾液，加入離子交換纖維4份，攪拌4h，將離子交換纖維濾出，再加離子交換纖維4份，攪拌4h，將離子交換纖維濾出，將濾出的離子交換纖維合并用水清洗I次；
(4)離子交換纖維洗脫
將步驟(3)回收的離子交換纖維，加入質量為I倍離子交換纖維質量的3mol/L NaCL溶液中，攪拌2h，過濾、收集洗脫液；再添加質量為I倍離子交換纖維質量的2mol/LNaCL溶液，攪拌2h，過濾，收集洗脫液；然后用與離子交換纖維質量相等質量的2mo l/L NaCL溶液攪拌洗滌一次，收集洗液，用于下批離子交換纖維的洗脫；
(5)肝素鈉的沉淀
將步驟(4)中第I次和第2次的洗脫液合并，加入濃度為85%乙醇攪拌，使洗脫液乙醇濃度達到45%，靜置6h，將沉淀肝素鈉的上清液回收，收集肝素鈉沉淀；
(6)肝素鈉的純化
將步驟(5)回收的肝素鈉沉淀用適量I % NaCL溶液溶解，離心分離除去不溶物，加入濃度為85%乙醇攪拌，使肝素鈉溶液乙醇濃度達到45%，靜置7h，過濾、收集肝素鈉沉淀，用濃度為85%乙醇洗滌肝素鈉沉淀I次，過濾，收集肝素鈉沉淀；
(7)干燥將肝素鈉在真空條件下干燥，得產品。離子交換纖維優先選自ZB-2強堿性陰離子交換纖維。肝素純度可達450 I U / m g，提取效率可達I億I U / 500根豬小腸，與常規肝素鈉提取法(〈豬小腸粘膜中肝素鈉提取與精制工藝研究 >)相比，節鹽50%，節水40%，節能40%，粗蛋白回收率達60%。
實施例5
一種肝素鈉的提取方法，包括以下步驟
(1)200份牛小腸粘膜加入20份石英砂，超微粉碎；
(2)用酶水解粉碎混合物,水解采用的酶制劑是絲狀真菌菌株fujikuroi產纖維素酶堿性β_淀粉酶兔胰脂肪酶以(3) : (2) : ( 3)的質量份比例混合而成的混合物；
在反應釜中加入200份粉碎混合物，升溫至50°C，保溫20min，加水80份，加NaCL 2份，加MgCL2 O. 02份，控制溫度37°C，用堿液調pH為9，加酶制劑2份，攪拌2h添加沉淀劑，所述沉淀劑是硫酸鋁5份，靜置4h，將上層清液用200目濾布過濾，收集濾液；
(3)離子交換纖維吸附
在帶有攪拌裝置的容器內加入200份由步驟(2)獲得的濾液，加入離子交換纖維8份，攪拌8h，將離子交換纖維濾出，再加離子交換纖維8份，攪拌8h，將離子交換纖維濾出，將濾出的離子交換纖維合并用水清洗I 2次；
(4)離子交換纖維洗脫
將步驟(3)回收的離子交換纖維，加入質量為2倍離子交換纖維質量的4mol/L NaCL溶液中，攪拌4h，過濾、收集洗脫液；再添加質量為2倍離子交換纖維質量的3mol/LNaCL溶液，攪拌4h，過濾，收集洗脫液；然后用與離子交換纖維質量相等質量的3mol/L NaCL溶液攪拌洗滌一次，收集洗液，用于下批離子交換纖維的洗脫；
(5)肝素鈉的沉淀
將步驟(4)中第I次和第2次的洗脫液合并，加入濃度為95%乙醇攪拌，使洗脫液乙醇濃度達到50%，靜置12h，將沉淀肝素鈉的上清液回收，收集肝素鈉沉淀；
(6)肝素鈉的純化
將步驟(5)回收的肝素鈉沉淀用適量2% NaCL溶液和適量O. 2% NaHSO4溶液溶解，離心分離除去不溶物，加入濃度為95%乙醇攪拌，使肝素鈉溶液乙醇濃度達到50%，靜置14h，過濾、收集肝素鈉沉淀，用濃度為95%乙醇洗滌肝素鈉沉淀2次，過濾，收集肝素鈉沉淀； (7)干燥將肝素鈉在真空條件下干燥，得產品。離子交換纖維優先選自ZB-2強堿性陰離子交換纖維。肝素純度可達400 I U / m g，提取效率可達I億I U / 1000根豬小腸，與常規肝素鈉提取法(〈豬小腸粘膜中肝素鈉提取與精制工藝研究 >)相比，節鹽40%，節水40%，節能40%，粗蛋白回收率達60%。
實施例6
一種肝素鈉的提取方法，包括以下步驟
(I ) 200份牛小腸粘膜加入20份石英砂，超微粉碎；
(2)用酶水解粉碎混合物，水解采用的酶制劑是綠色木霉F—U V產纖維素酶堿性β_淀粉酶地霉脂肪酶以(3) : (2) : ( 3)的質量份比例混合而成的混合物；
在反應釜中加入200份粉碎混合物，升溫至50°C，保溫20min，加水80份，加NaCL 2份，加MgCL2 O. 02份，控制溫度37°C，用堿液調pH為9，加酶制劑2份，攪拌2h添加沉淀劑，所述沉淀劑是硫酸鋁5份，靜置4h，將上層清液用200目濾布過濾，收集濾液；
(3)離子交換纖維吸附
在帶有攪拌裝置的容器內加入200份由步驟(2)獲得的濾液，加入離子交換纖維8份，攪拌8h，將離子交換纖維濾出，再加離子交換纖維8份，攪拌8h，將離子交換纖維濾出，將濾出的離子交換纖維合并用水清洗I 2次；
(4)離子交換纖維洗脫
將步驟(3)回收的離子交換纖維，加入質量為2倍離子交換纖維質量的4mol/L NaCL溶液中，攪拌4h，過濾、收集洗脫液；再添加質量為2倍離子交換纖維質量的3mol/LNaCL溶液，攪拌4h，過濾，收集洗脫液；然后用與離子交換纖維質量相等質量的3mol/L NaCL溶液攪拌洗滌一次，收集洗液，用于下批離子交換纖維的洗脫； (5)肝素鈉的沉淀
將步驟(4)中第I次和第2次的洗脫液合并，加入濃度為95%乙醇攪拌，使洗脫液乙醇濃度達到50%，靜置12h，將沉淀肝素鈉的上清液回收，收集肝素鈉沉淀；
(6)肝素鈉的純化
將步驟(5)回收的肝素鈉沉淀用適量2%NaCL溶液溶解，離心分離除去不溶物，加入濃度為95%乙醇攪拌，使肝素鈉溶液乙醇濃度達到50%，靜置14h，過濾、收集肝素鈉沉淀，用濃度為95%乙醇洗滌肝素鈉沉淀2次，過濾，收集肝素鈉沉淀；
(7)干燥將肝素鈉在真空條件下干燥，得產品。離子交換纖維優先選自ZB-2強堿性陰離子交換纖維。肝素純度可達350 I U / m g，提取效率可達I億I U / 1000根豬小腸，與常規肝素鈉提取法(〈豬小腸粘膜中肝素鈉提取與精制工藝研究 >)相比，節鹽40%，節水40%，節能40%，粗蛋白回收率達60%。
實施例7 一種肝素鈉的提取方法，包括以下步驟
(O 100份豬小腸粘膜加入10份石英砂，超微粉碎；
(2)用酶水解粉碎混合物，水解采用的酶制劑是綠色木霉F—U V產纖維素酶堿性β_淀粉酶地霉脂肪酶以(1):(1):(1)的質量份比例混合而成的混合物；
在反應釜中加入100份粉碎混合物，升溫至40°C，保溫lOmin，加水50份，加NaCL I份，加MgCL2 O. 01份，控制溫度300C，用堿液調pH為8，加酶制劑I份，攪拌Ih添加沉淀劑，所述沉淀劑是選至聚合氯化鋁料2份，靜置2h，將上層清液用100目濾布過濾，收集濾液；
(3)D 208大孔徑樹脂吸附
在帶有攪拌裝置的容器內加入100份由步驟(2)獲得的濾液，加入D 208大孔徑樹脂4份，攪拌4h，將D 208大孔徑樹脂濾出，再加D 208大孔徑樹脂4份，攪拌4h，將D 208大孔徑樹脂濾出，將濾出的D 208大孔徑樹脂合并用水清洗I次；
(4)D 208大孔徑樹脂洗脫
將步驟(3)回收的D 208大孔徑樹脂，加入質量為I倍D 208大孔徑樹脂質量的3mol/LNaCL溶液中，攪拌2h，過濾、收集洗脫液；再添加質量為I倍D 208大孔徑樹脂質量的2mol/LNaCL溶液，攪拌2h，過濾，收集洗脫液；然后用與D 208大孔徑樹脂質量相等質量的2mol/L NaCL溶液攪拌洗滌一次，收集洗液，用于下批D 208大孔徑樹脂的洗脫；
(5)肝素鈉的沉淀
將步驟(4)中第I次和第2次的洗脫液合并，加入濃度為85%乙醇攪拌，使洗脫液乙醇濃度達到45%，靜置6h，將沉淀肝素鈉的上清液回收，收集肝素鈉沉淀；
(6)肝素鈉的純化
將步驟(5)回收的肝素鈉沉淀用適量1% NaCL溶液和適量O. I % Na2SO4溶液溶解，離心分離除去不溶物，加入濃度為85%乙醇攪拌，使肝素鈉溶液乙醇濃度達到45%，靜置7h，過濾、收集肝素鈉沉淀，用濃度為85%乙醇洗滌肝素鈉沉淀I次，過濾，收集肝素鈉沉淀；
(7)干燥將肝素鈉在真空條件下干燥，得產品。肝素純度可達420 I U / m g，提取效率可達I億I U / 1000根豬小腸，與常規肝素鈉提取法(〈豬小腸粘膜中肝素鈉提取與精制工藝研究 >)相比，節鹽45%，節水50%，節能40%，粗蛋白回收率達60%。
實施例8
一種肝素鈉的提取方法，包括以下步驟
(O 100份豬小腸粘膜加入10份石英砂，超微粉碎；(2)用酶水解粉碎混合物,水解采用的酶制劑是絲狀真菌菌株fujikuroi產纖維素酶堿性α -淀粉酶解脂假絲酵母脂肪酶以(1):(1):(1)的質量份比例混合而成的混合物；
在反應釜中加入100份粉碎混合物，升溫至40°C，保溫lOmin，加水50份，加NaCL I份，加MgCL2 O. 01份，控制溫度300C，用堿液調pH為8，加酶制劑I份，攪拌Ih添加沉淀劑，所述沉淀劑是選至聚合氯化鋁2份，靜置2h，將上層清液用100目濾布過濾，收集濾液；
(3)D 208大孔徑樹脂吸附
在帶有攪拌裝置的容器內加入100份由步驟(2)獲得的濾液，加入D 208大孔徑樹脂4份，攪拌4h，將D 208大孔徑樹脂濾出，再加D 208大孔徑樹脂4份，攪拌4h，將D 208大孔徑樹脂濾出，將濾出的D 208大孔徑樹脂合并用水清洗I次；
(4)D 208大孔徑樹脂洗脫
將步驟(3)回收的D 208大孔徑樹脂，加入質量為I倍D 208大孔徑樹脂質量的3mol/LNaCL溶液中，攪拌2h，過濾、收集洗脫液；再添加質量為I倍D 208大孔徑樹脂質量的2mol/LNaCL溶液，攪拌2h，過濾，收集洗脫液；然后用與D 208大孔徑樹脂質量相等質量的2mol/L NaCL溶液攪拌洗滌一次，收集洗液，用于下批D 208大孔徑樹脂的洗脫；
(5)肝素鈉的沉淀
將步驟(4)中第I次和第2次的洗脫液合并，加入濃度為85%乙醇攪拌，使洗脫液乙醇濃度達到45%，靜置6h，將沉淀肝素鈉的上清液回收，收集肝素鈉沉淀；
(6)肝素鈉的純化
將步驟(5)回收的肝素鈉沉淀用適量I % NaCL溶液溶解，離心分離除去不溶物，加入濃度為85%乙醇攪拌，使肝素鈉溶液乙醇濃度達到45%，靜置7h，過濾、收集肝素鈉沉淀，用濃度為85%乙醇洗滌肝素鈉沉淀I次，過濾，收集肝素鈉沉淀；
(7)干燥將肝素鈉在真空條件下干燥，得產品。肝素純度可達400 I U / m g，提取效率可達I億I U / 01000根豬小腸，與常規肝素鈉提取法(〈豬小腸粘膜中肝素鈉提取與精制工藝研究 >)相比，節鹽40%，節水40%，節能40%，粗蛋白回收率達60%。
實施例9
一種肝素鈉的提取方法，包括以下步驟
(I ) 200份牛小腸粘膜加入20份石英砂，超微粉碎；
(2)用酶水解粉碎混合物，水解采用的酶制劑是里氏木霉WX112發酵生產纖維素酶堿性α-淀粉酶解脂假絲酵母脂肪酶以(3) : (2) : ( 3)的質量份比例混合而成的混合物；
在反應釜中加入200份粉碎混合物，升溫至50°C，保溫20min，加水80份，加NaCL 2份，加MgCL2 O. 02份，控制溫度37°C，用堿液調pH為9，加酶制劑2份，攪拌2h添加沉淀劑，所述沉淀劑是硫酸鋁5份，靜置4h，將上層清液用200目濾布過濾，收集濾液；
(3)D 208大孔徑樹脂吸附
在帶有攪拌裝置的容器內加入200份由步驟(2)獲得的濾液，加入D 208大孔徑樹脂8份，攪拌8h，將D 208大孔徑樹脂濾出，再加D 208大孔徑樹脂8份，攪拌8h，將D 208大孔徑樹脂濾出，將濾出的D 208大孔徑樹脂合并用水清洗I 2次；
(4)D 208大孔徑樹脂洗脫
將步驟(3)回收的D 208大孔徑樹脂，加入質量為2倍D 208大孔徑樹脂質量的4mol/LNaCL溶液中，攪拌4h，過濾、收集洗脫液；再添加質量為2倍D 208大孔徑樹脂質量的3mol/LNaCL溶液，攪拌4h，過濾，收集洗脫液；然后用與D 208大孔徑樹脂質量相等質量的3mol/L NaCL溶液攪拌洗滌一次，收集洗液，用于下批D 208大孔徑樹脂的洗脫；
(5)肝素鈉的沉淀
將步驟(4)中第I次和第2次的洗脫液合并，加入濃度為95%乙醇攪拌，使洗脫液乙醇 濃度達到50%，靜置12h，將沉淀肝素鈉的上清液回收，收集肝素鈉沉淀；
(6)肝素鈉的純化
將步驟(5)回收的肝素鈉沉淀用適量2% NaCL溶液和適量O. 2% NaHSO4溶液溶解，離心分離除去不溶物，加入濃度為95%乙醇攪拌，使肝素鈉溶液乙醇濃度達到50%，靜置14h，過濾、收集肝素鈉沉淀，用濃度為95%乙醇洗滌肝素鈉沉淀2次，過濾，收集肝素鈉沉淀；
(7)干燥將肝素鈉在真空條件下干燥，得產品。肝素純度可達300 I U / m g，提取效率可達I億I U / 1000根豬小腸，與常規肝素鈉提取法(〈豬小腸粘膜中肝素鈉提取與精制工藝研究 >)相比，節鹽40%，節水40%，節能40%，粗蛋白回收率達60%。
實施例10
一種肝素鈉的提取方法，包括以下步驟
(1)200份牛小腸粘膜加入20份石英砂，超微粉碎，
(2)用酶水解粉碎混合物，水解采用的酶制劑是里氏木霉WX112發酵生產纖維素酶堿性α-淀粉酶解脂假絲酵母脂肪酶以(3) : (2) : ( 3)的質量份比例混合而成的混合物，
在反應釜中加入200份粉碎混合物，升溫至50°C，保溫20min，加水80份，加NaCL 2份，加MgCL2 O. 02份，控制溫度37°C，用堿液調pH為9，加酶制劑2份，攪拌2h添加沉淀劑，所述沉淀劑是硫酸鋁5份，靜置4h，將上層清液用200目濾布過濾，收集濾液；
(3)D 208大孔徑樹脂吸附
在帶有攪拌裝置的容器內加入200份由步驟(2)獲得的濾液，加入D 208大孔徑樹脂8份，攪拌8h，將D 208大孔徑樹脂濾出，再加D 208大孔徑樹脂8份，攪拌8h，將D 208大孔徑樹脂濾出，將濾出的D 208大孔徑樹脂合并用水清洗I 2次；
(4)D 208大孔徑樹脂洗脫
將步驟(3)回收的D 208大孔徑樹脂，加入質量為2倍D 208大孔徑樹脂質量的4mol/LNaCL溶液中，攪拌4h，過濾、收集洗脫液；再添加質量為2倍D 208大孔徑樹脂質量的3mol/LNaCL溶液，攪拌4h，過濾，收集洗脫液；然后用與D 208大孔徑樹脂質量相等質量的3mol/L NaCL溶液攪拌洗滌一次，收集洗液，用于下批D 208大孔徑樹脂的洗脫；
(5)肝素鈉的沉淀
將步驟(4)中第I次和第2次的洗脫液合并，加入濃度為95%乙醇攪拌，使洗脫液乙醇濃度達到50%，靜置12h，將沉淀肝素鈉的上清液回收，收集肝素鈉沉淀；
(6)肝素鈉的純化
將步驟(5)回收的肝素鈉沉淀用適量2% NaCL溶液和適量O. 2% NaHSO4溶液溶解，離心分離除去不溶物，加入濃度為95%乙醇攪拌，使肝素鈉溶液乙醇濃度達到50%，靜置14h，過濾、收集肝素鈉沉淀，用濃度為95%乙醇洗滌肝素鈉沉淀2次，過濾，收集肝素鈉沉淀；
(7)干燥將肝素鈉在真空條件下干燥，得產品。肝素純度可達300 I U / m g，提取效率可達I億I U / 1000根豬小腸，與常規肝素鈉提取法(〈豬小腸粘膜中肝素鈉提取與精制工藝研究 >)相比，節鹽40%，節水40%，節能40%，粗蛋白回收率達60%。
實施例11
以HZSM-5分子篩為基體，用離子交換法制備銅沸石分子篩。將IOg的HZSM-5分子篩放入I升的O. 05mol/L Cu (CL) 2溶液中，用氨水調節pH值至7. 0，在溫度為60°C的水浴中攪拌12h，真空抽濾，然后用去離子水攪拌洗滌，過濾，在80°C下干燥10h，最后在500°C下焙燒6h，制備出銅沸石分子篩，以Cu-HZSM-5表示。實施例12
以HZSM-5分子篩為基體，用離子交換法制備銅沸石分子篩。將30g的HZSM-5分子篩放入I升的O. 03mol/L Cu (CL) 2溶液中，用氨水調節pH值至7. 2，在溫度為100°C的水浴中攪拌18h，真空抽濾，然后用去離子水攪拌洗滌，過濾，在100°C下干燥10h，最后在800°C下焙燒6h，制備出銅沸石分子篩，以Cu-HZSM-5表示。
實施例13
實施例3得到的肝素鈉干燥物lg，加入含1%氯化鈉I升溶液攪拌至充分溶解，用鹽酸調pH3，用氫氧化鈉溶液調pH9. O后，加入O. I毫升過氧化氫和O. Olg實施例11的銅沸石分子篩，15°C保溫2小時，通過5000D的超濾膜濾過后，用無水乙醇沉淀后虹吸出廢濾，沉淀物加入無熱原水(含1%氧化鈉)溶解后，再用通過5000D的超濾膜濾過，沉淀物進行加入無熱原水(含1%氧化鈉)溶解后，再用通過5000D的超濾膜濾過,用無水乙醇沉淀，靜置過夜，濾干沉淀物，用無水乙醇洗滌后，真空冷凍干燥，球磨粉碎后，得低分子量肝素鈉693mg，抗Xa因子效價196iu / mg。 抗IIa因子效價IOiu / mg,重均分子量2785，分子量2000 5000占87.6%,分子量> 6000占1.8%。
實施例14
實施例4得到的肝素鈉粗品干燥物lg，加入含2%氯化鈉I升溶液攪拌至充分溶解，用鹽酸調PH4，用氫氧化鈉溶液調pH8. O后，加入O. 2毫升過氧化氫和O. 04g實施例11的銅沸石分子篩，20°C保溫2. 5小時，通過6000D的超濾膜濾過后，用無水乙醇沉淀后虹吸出廢濾’沉淀物加入無熱原水(含2%氧化鈉)溶解后，再用通過6000D的超濾膜濾過，沉淀物進行加入無熱原水(含2%氧化鈉)溶解后，再用通過6000D的超濾膜濾過，用無水乙醇沉淀，靜置過夜，濾干沉淀物，用無水乙醇洗滌后，真空冷凍干燥，球磨粉碎后，得低分子量肝素鈉587mg，抗Xa因子效價178iu / mg。抗IIa因子效價14iu / mg,重均分子量2596，分子量2000 5000占81.2%,分子量> 6000占3.1%。
實施例15
市場購買得到肝素鈉粗品干燥物lg，加入含3%氯化鈉I升溶液攪拌至充分溶解，用鹽酸調PH3，用氫氧化鈉溶液調pH8. 5后，加入O. 15毫升過氧化氫和O. 05g實施例11的銅沸石分子篩，20°C保溫2小時，通過5000D的超濾膜濾過后，用無 水乙醇沉淀后虹吸出廢濾，沉淀物加入無熱原水(含3%氧化鈉)溶解后，再用通過5000D的超濾膜濾過，沉淀物進行加入無熱原水(含3%氧化鈉)溶解后，再用通過5000D的超濾膜濾過，用無水乙醇沉淀，靜置過夜，濾干沉淀物，用無水乙醇洗滌后，真空冷凍干燥，球磨粉碎后，得低分子量肝素鈉521mg,抗Xa因子效價185iu / mg。抗IIa因子效價8. 9iu / mg,重均分子量3237， 分子量 2000 5000 占 84.1%，分子量> 6000 占 3. 2%。
實施例16
市場購買得到肝素鈉粗品干燥物lg，加入含3%氯化鈉I升溶液攪拌至充分溶解，用鹽酸調PH3，用氫氧化鈉溶液調pH8. 5后，加入O. 15毫升過氧化氫和O. 05g實施例11的銅沸石分子篩和0.05g硼氫化鈉，20°C保溫2小時，通過5000D的超濾膜濾過后，用無水乙醇沉淀后虹吸出廢濾，沉淀物加入無熱原水(含3%氧化鈉)溶解后，再用通過5000D的超濾膜濾過，沉淀物進行加入無熱原水(含3%氧化鈉)溶解后，再用通過5000D的超濾膜濾過，用無水乙醇沉淀，靜置過夜，濾干沉淀物，用無水乙醇洗滌后，真空冷凍干燥，球磨粉碎后，得低分子量肝素鈉514mg，抗Xa因子效價193iu / mg。 抗IIa因子效價10. 3iu /mg,重均分子量3457，分子量2000 5000占81.6%,分子量> 6000占2. 7%。
實施例17
市場購買得到肝素鈉粗品干燥物lg，加入含3%氯化鈉I升溶液攪拌至充分溶解，用鹽酸調PH3，用氫氧化鈉溶液調pH8. 5后，加入O. 15毫升過氧化氫和O. 05g實施例11的銅沸石分子篩和O. 05gEDTA，20°C保溫2小時，通過5000D的超濾膜濾過后，用無水乙醇沉淀后虹吸出廢濾，沉淀物加入無熱原水(含3%氧化鈉)溶解后，再用通過5000D的超濾膜濾過，沉淀物進行加入無熱原水(含3%氧化鈉)溶解后，再用通過5000D的超濾膜濾過，用無水乙醇沉淀，靜置過夜，濾干沉淀物，用無水乙醇洗滌后，真空冷凍干燥，球磨粉碎后，得低分子量肝素鈉521mg,抗Xa因子效價197iu / mg。 抗IIa因子效價9.7iu / mg,重均分子量3539， 分子量2000 5000占82. 6%，分子量> 6000占2. 7%。
權利要求
1.本發明涉及一種從動物器官提取的組合物的衍生物；動物來自于是牛、豬、羊、狗。
2.本發明涉及一種從動物器官提取的組合物的衍生物，動物器官來自肝臟、小腸、大腸、肺；動物來自于是牛、豬、羊、狗。
3.本發明涉及一種從動物器官提取的組合物的衍生物的制備方法；動物來自于是牛、豬、羊、狗。
4.本發明涉及一種從動物器官提取的組合物的衍生物的制備方法，動物器官來自肝臟、小腸、大腸、肺；動物來自于是牛、豬、羊、狗。
5.本發明涉及一種組合物的衍生物的制備方法，包括如下步驟 (1)肝臟、小腸粘膜、大腸、或、肺加入石英砂，粉碎； (2)水解粉碎物； (3)吸附； (4)洗脫； (5)沉淀； (6)純化； (7)干燥； (8)水解干燥物； (9)超濾； (10)洗脫； (11)沉淀； (12)干燥; 動物來自于是牛、豬、羊、狗。
6.本發明涉及一種組合物的衍生物的制備方法，包括如下步驟水解干燥物，采用過氧化氫和銅沸石分子篩，還可以同時加入硼氫化鈉、或、EDTA。
全文摘要
本發明涉及一種來自于動物器官的組合物的衍生物，動物器官來自肝臟、小腸、大腸、肺,動物來自于是牛、豬、羊、狗。
文檔編號A61K35/38GK102961404SQ20121053232
公開日2013年3月13日 申請日期2012年12月12日 優先權日2012年12月12日
發明者曲輝, 張春革 申請人:青島亞博生物科技有限公司